专利名称：兽用夏枯草注射液及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种兽药制剂，具体涉及一种夏枯草注射液。
背景技术：
夏枯草具有清火、明目、清肝、散结及消肿之功效，在古典书籍中均有记载。《本经》 中描述“主寒热，瘰疬，鼠瘘，头疮，破症，散瘿结气，脚肿湿痹”。《本草纲目》“楼全善云 夏枯草治目珠疼，至夜则甚者，神效；或用苦寒药点之反甚者，亦神效。盖目珠连目本，肝系也，属厥阴之经。夜甚及点苦寒药反甚者，夜与寒亦阴故也。夏枯禀纯阳之气，补厥阴血脉， 故治此如神，以阳治阴也”。夏枯草分布广泛，资源丰富，化学成分复杂，药理作用广泛，有重要的临床应用价值，具有开发利用价值，是一种有潜力的药物资源。其主要含有迷迭香酸、三萜类(熊果酸、 齐墩果酸)、黄酮类(金丝桃苷、芦丁、木樨草素、异荭草素和本樨草苷)、香豆素类、有机酸类、含糖类、挥发油类等成分。其中迷迭香酸是一种水溶性酚类化合物，具有抗氧化、抗菌、 消炎等生物活性。熊果酸是一种三萜类化合物，不溶于水，常规水提醇沉提取得率低，具有镇静、抗炎、抗菌、抗糖尿病、抗溃疡、降低血糖等多种生物学效应，同时还具有明显的抗氧化功能。夏枯草在人药中抗病毒和抗肿瘤研究比较多，临床效果确切，但在兽药中较少应用，具有广阔市场前景。鉴于夏枯草中有效成分化学性质不同，提取方法不同，常规的水提醇沉虽然工艺简单，但存在杂质多，有效成分不能被高效完全提取纯化，甚至流失或被破坏，这严重制约了夏枯草在兽药领域的应用。

发明内容
本发明的目的是提供一种富含迷迭香酸和三萜类活性物质的夏枯草注射液，且工艺合理，有效物质纯度高。常规水提醇沉不仅杂质含量高易沉淀、性质不稳定，且会破坏药材中的有效成分， 本发明采用分级提取方法，先提取水溶性迷迭香酸，再提取难溶物三萜类(熊果酸、齐墩果酸)物质，以充分利用药材，并使产品效果得到稳定提高。为解决上述问题，本发明采用如下技术方案
一种夏枯草注射液，由以下原料配比组成夏枯草1800-2200g、吐温-80 3_6ml、苯甲醇 4-6ml。上述夏枯草注射液，由以下步骤制得
A、取夏枯草1800-2200g粉碎；
B、迷迭香酸的提取纯化
(1)超声提取在200-400W功率下超声波处理15-40min，抽滤将滤液置于55_75°C恒温水浴锅中水浴提取，其中提取溶剂为蒸馏水，夏枯草蒸馏水=1 :10-25 (g/ml)，提取后药渣a用C工艺进行提取；
4(2)微滤除杂提取液用0.2 μ m陶瓷膜进行微滤，除去大部分果胶和蛋白；
(3)萃取纯化滤液用正丁醇萃取2次，萃取液减压回收正丁醇，得迷迭香酸溶液b，其中滤液与正丁醇体积比为1 1-2，提取时间为15-35min ；
C、三萜类的提取纯化
(1)回流提取加药渣a总重量6-12倍60-95%乙醇回流提取2次，每次1_2小时，滤过，合并滤液c，减压回收乙醇；
(2)NKA大孔树脂分离纯化树脂用95%乙醇浸泡Mh，充分溶胀，用乙醇冲洗，至洗出液加水无白色沉淀现象后，用蒸馏水洗涤浸泡，待用。将滤液c加入树脂床层，加蒸馏水洗涤至洗涤液无色，加入洗脱液50-60%乙醇以l-5BV/h的速度由上而下通过树脂床层，由柱底收集洗脱液d，减压回收乙醇；
D、洗脱液d与B(3)中所得迷迭香酸溶液b充分混勻，加吐温-803-6ml，苯甲醇4_6ml， 及300-600ml注射用水，搅拌均勻，静置过滤；
E、滤液用10%Na0Hi周pH至5.5-7. 5，加0. 1-0. 5%活性炭，80°C加热搅拌20分钟，冷却， 滤过；
F、滤液加注射用水至1000ml，灌封，灭菌，即得。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明做进一步的说明，以助于理解本发明的内容。实施例1 一种夏枯草注射液，由以下原料配比组成夏枯草2000g、吐温-80 5ml、 苯甲醇5ml。上述夏枯草注射液，由以下步骤制得
A、取夏枯草2000g粉碎；
B、迷迭香酸的提取纯化
(1)超声提取在300W功率下超声波处理30min，抽滤将滤液置于65°C恒温水浴锅中水浴提取，其中提取溶剂为蒸馏水，夏枯草蒸馏水=1 15 (g/ml)，提取后药渣a用C工艺进行提取；
(2)微滤除杂提取液用0.2 μ m陶瓷膜进行微滤，除去大部分果胶和蛋白；
(3)萃取纯化滤液用正丁醇萃取2次，萃取液减压回收正丁醇，得迷迭香酸溶液b，其中滤液与正丁醇体积比为1 :1. 5，提取时间为20min ；
C、三萜类的提取纯化
(1)回流提取加药渣a总重量10倍70%乙醇回流提取2次，每次1小时，滤过，合并滤液c，减压回收乙醇；
(2)NKA大孔树脂分离纯化树脂用95%乙醇浸泡Mh，充分溶胀，用乙醇冲洗，至洗出液加水无白色沉淀现象后，用蒸馏水洗涤浸泡，待用。将滤液c加入树脂床层，加蒸馏水洗涤至洗涤液无色，加入洗脱液55%乙醇以!3BV/h的速度由上而下通过树脂床层，由柱底收集洗脱液d，减压回收乙醇；
D、洗脱液d与B(3)中所得迷迭香酸溶液b充分混勻，加吐温-80 5ml，苯甲醇5ml，及 450ml注射用水，搅拌均勻，静置过滤；
E、滤液用10%Na0H调pH至6.5，加0. 2%活性炭，80°C加热搅拌20分钟，冷却，滤过；F、滤液加注射用水至1000ml，灌封，灭菌，即得。实施例2 —种夏枯草注射液，由以下原料配比组成夏枯草2000g、吐温-80 5ml、 苯甲醇5ml
上述夏枯草注射液，由以下步骤制得
A、取夏枯草2000g粉碎；
B、迷迭香酸的提取纯化
(1)超声提取在200W功率下超声波处理40min，抽滤将滤液置于75°C恒温水浴锅中水浴提取，其中提取溶剂为蒸馏水，夏枯草蒸馏水=1 25 (g/ml)，提取后药渣a用C工艺进行提取；
(2)微滤除杂提取液用0.2 μ m陶瓷膜进行微滤，除去大部分果胶和蛋白；
(3)萃取纯化滤液用正丁醇萃取2次，萃取液减压回收正丁醇，得迷迭香酸溶液b，其中滤液与正丁醇体积比为1:2，提取时间为30min ；
C、三萜类的提取纯化
(1)回流提取加药渣a总重量10倍70%乙醇回流提取2次，每次1小时，滤过，合并滤液c，减压回收乙醇；
(2)NKA大孔树脂分离纯化树脂用95%乙醇浸泡Mh，充分溶胀，用乙醇冲洗，至洗出液加水无白色沉淀现象后，用蒸馏水洗涤浸泡，待用。将滤液c加入树脂床层，加蒸馏水洗涤至洗涤液无色，加入洗脱液55%乙醇以!3BV/h的速度由上而下通过树脂床层，由柱底收集洗脱液d，减压回收乙醇；
D、洗脱液d与B(3)中所得迷迭香酸溶液b充分混勻，加吐温-80 5ml，苯甲醇5ml，及 450ml注射用水，搅拌均勻，静置过滤；
E、滤液用10%Na0H调pH至6.5，加0. 2%活性炭，80°C加热搅拌20分钟，冷却，滤过；
F、滤液加注射用水至1000ml，灌封，灭菌，即得。实施例3 —种夏枯草注射液，由以下原料配比组成夏枯草2000g、吐温-80 5ml、 苯甲醇5ml。上述夏枯草注射液，由以下步骤制得
A、取夏枯草2000g粉碎；
B、迷迭香酸的提取纯化
(1)超声提取在400W功率下超声波处理15min，抽滤将滤液置于55°C恒温水浴锅中水浴提取，其中提取溶剂为蒸馏水，夏枯草蒸馏水=1 10 (g/ml)，提取后药渣a用C工艺进行提取；
(2)微滤除杂提取液用0.2 μ m陶瓷膜进行微滤，除去大部分果胶和蛋白；
(3)萃取纯化滤液用正丁醇萃取2次，萃取液减压回收正丁醇，得迷迭香酸溶液b，其中滤液与正丁醇体积比为1 :1，提取时间为15min ；
C、三萜类的提取纯化
(1)回流提取加药渣a总重量10倍70%乙醇回流提取2次，每次1小时，滤过，合并滤液c，减压回收乙醇；
(2)NKA大孔树脂分离纯化树脂用95%乙醇浸泡Mh，充分溶胀，用乙醇冲洗，至洗出液加水无白色沉淀现象后，用蒸馏水洗涤浸泡，待用。将滤液c加入树脂床层，加蒸馏水洗涤至洗涤液无色，加入洗脱液55%乙醇以!3BV/h的速度由上而下通过树脂床层，由柱底收集洗脱液d，减压回收乙醇；
D、洗脱液d与B(3)中所得迷迭香酸溶液b充分混勻，加吐温-80 5ml，苯甲醇5ml，及 450ml注射用水，搅拌均勻，静置过滤；
E、滤液用10%Na0H调pH至6.5，加0. 2%活性炭，80°C加热搅拌20分钟，冷却，滤过；
F、滤液加注射用水至1000ml，灌封，灭菌，即得。实施例4 一种夏枯草注射液，由以下原料配比组成夏枯草2000g、吐温-80 5ml、 苯甲醇5ml。上述夏枯草注射液，由以下步骤制得
A、取夏枯草2000g粉碎；
B、迷迭香酸的提取纯化
(1)超声提取在300W功率下超声波处理30min，抽滤将滤液置于65°C恒温水浴锅中水浴提取，其中提取溶剂为蒸馏水，夏枯草蒸馏水=1 15 (g/ml)，提取后药渣a用C工艺进行提取；
(2)微滤除杂提取液用0.2 μ m陶瓷膜进行微滤，除去大部分果胶和蛋白；
(3)萃取纯化滤液用正丁醇萃取2次，萃取液减压回收正丁醇，得迷迭香酸溶液b，其中滤液与正丁醇体积比为1 :1. 5，提取时间为20min ；
C、三萜类的提取纯化
(1)回流提取加药渣a总重量6倍95%乙醇回流提取2次，每次1.5小时，滤过，合并滤液c，减压回收乙醇；
(2)NKA大孔树脂分离纯化树脂用95%乙醇浸泡Mh，充分溶胀，用乙醇冲洗，至洗出液加水无白色沉淀现象后，用蒸馏水洗涤浸泡，待用。将滤液c加入树脂床层，加蒸馏水洗涤至洗涤液无色，加入洗脱液50%乙醇以lBV/h的速度由上而下通过树脂床层，由柱底收集洗脱液d，减压回收乙醇；
D、洗脱液d与B(3)中所得迷迭香酸溶液b充分混勻，加吐温-80 5ml，苯甲醇5ml，及 450ml注射用水，搅拌均勻，静置过滤；
E、滤液用10%Na0H调pH至6.5，加0. 3%活性炭，80°C加热搅拌20分钟，冷却，滤过；
F、滤液加注射用水至1000ml，灌封，灭菌，即得。实施例5 —种夏枯草注射液，由以下原料配比组成夏枯草1800g、吐温-80 5ml、 苯甲醇5ml。上述夏枯草注射液，由以下步骤制得
A、取夏枯草ISOOg粉碎；
B、迷迭香酸的提取纯化
(1)超声提取在300W功率下超声波处理30min，抽滤将滤液置于65°C恒温水浴锅中水浴提取，其中提取溶剂为蒸馏水，夏枯草蒸馏水=1 15 (g/ml)，提取后药渣a用C工艺进行提取；
(2)微滤除杂提取液用0.2 μ m陶瓷膜进行微滤，除去大部分果胶和蛋白；
(3)萃取纯化滤液用正丁醇萃取2次，萃取液减压回收正丁醇，得迷迭香酸溶液b，其中滤液与正丁醇体积比为1 :1. 5，提取时间为20min ；C、三萜类的提取纯化
(1)回流提取加药渣a总重量12倍70%乙醇回流提取2次，每次2小时，滤过，合并滤液c，减压回收乙醇；
(2)NKA大孔树脂分离纯化树脂用95%乙醇浸泡Mh，充分溶胀，用乙醇冲洗，至洗出液加水无白色沉淀现象后，用蒸馏水洗涤浸泡，待用。将滤液c加入树脂床层，加蒸馏水洗涤至洗涤液无色，加入洗脱液60%乙醇以5BV/h的速度由上而下通过树脂床层，由柱底收集洗脱液d，减压回收乙醇；
D、洗脱液d与B(3)中所得迷迭香酸溶液b充分混勻，加吐温-80 5ml，苯甲醇5ml，及 400ml注射用水，搅拌均勻，静置过滤；
E、滤液用10%Na0H调pH至6.5，加0. 1%活性炭，80°C加热搅拌20分钟，冷却，滤过；
F、滤液加注射用水至1000ml，灌封，灭菌，即得。实施例6 —种夏枯草注射液，由以下原料配比组成夏枯草2000g、吐温-80 3ml、苯甲醇5ml。上述夏枯草注射液，由以下步骤制得
A、取夏枯草2000g粉碎；
B、迷迭香酸的提取纯化
(1)超声提取在300W功率下超声波处理30min，抽滤将滤液置于65°C恒温水浴锅中水浴提取，其中提取溶剂为蒸馏水，夏枯草蒸馏水=1 15 (g/ml)，提取后药渣a用C工艺进行提取；
(2)微滤除杂提取液用0.2 μ m陶瓷膜进行微滤，除去大部分果胶和蛋白；
(3)萃取纯化滤液用正丁醇萃取2次，萃取液减压回收正丁醇，得迷迭香酸溶液b，其中滤液与正丁醇体积比为1 :1. 5，提取时间为20min ；
C、三萜类的提取纯化
(1)回流提取加药渣a总重量10倍70%乙醇回流提取2次，每次1小时，滤过，合并滤液c，减压回收乙醇；
(2)NKA大孔树脂分离纯化树脂用95%乙醇浸泡Mh，充分溶胀，用乙醇冲洗，至洗出液加水无白色沉淀现象后，用蒸馏水洗涤浸泡，待用。将滤液c加入树脂床层，加蒸馏水洗涤至洗涤液无色，加入洗脱液55%乙醇以!3BV/h的速度由上而下通过树脂床层，由柱底收集洗脱液d，减压回收乙醇；
D、洗脱液d与B(3)中所得迷迭香酸溶液b充分混勻，加吐温-80 :3ml，苯甲醇5ml，及 450ml注射用水，搅拌均勻，静置过滤；
E、滤液用10%Na0H调pH至6.5，加0. 2%活性炭，80°C加热搅拌20分钟，冷却，滤过；
F、滤液加注射用水至1000ml，灌封，灭菌，即得。实施例7 —种夏枯草注射液，由以下原料配比组成夏枯草2000g、吐温-80 6ml、 苯甲醇5ml。上述夏枯草注射液，由以下步骤制得
A、取夏枯草2000g粉碎；
B、迷迭香酸的提取纯化
(1)超声提取在300W功率下超声波处理30min，抽滤将滤液置于65°C恒温水浴锅中水浴提取，其中提取溶剂为蒸馏水，夏枯草蒸馏水=1 15 (g/ml)，提取后药渣a用C工艺进行提取；
(2)微滤除杂提取液用0.2 μ m陶瓷膜进行微滤，除去大部分果胶和蛋白；
(3)萃取纯化滤液用正丁醇萃取2次，萃取液减压回收正丁醇，得迷迭香酸溶液b，其中滤液与正丁醇体积比为1 :1. 5，提取时间为20min ；
C、三萜类的提取纯化
(1)回流提取加药渣a总重量10倍70%乙醇回流提取2次，每次1小时，滤过，合并滤液c，减压回收乙醇；
(2)NKA大孔树脂分离纯化树脂用95%乙醇浸泡Mh，充分溶胀，用乙醇冲洗，至洗出液加水无白色沉淀现象后，用蒸馏水洗涤浸泡，待用。将滤液c加入树脂床层，加蒸馏水洗涤至洗涤液无色，加入洗脱液55%乙醇以!3BV/h的速度由上而下通过树脂床层，由柱底收集洗脱液d，减压回收乙醇；
D、洗脱液d与B(3)中所得迷迭香酸溶液b充分混勻，加吐温-80 6ml，苯甲醇5ml，及 450ml注射用水，搅拌均勻，静置过滤；
E、滤液用10%Na0H调pH至6.5，加0. 2%活性炭，80°C加热搅拌20分钟，冷却，滤过；
F、滤液加注射用水至1000ml，灌封，灭菌，即得。对比例1 一种夏枯草注射液，由以下原料配比组成夏枯草2000g、吐温-80 5ml、 苯甲醇5ml。上述夏枯草注射液，由以下步骤制得
A、取夏枯草2000g粉碎；
B、加药材总重量10倍70%乙醇回流提取2次，每次1小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇；
C、加吐温-805ml，苯甲醇5ml，及450ml注射用水，搅拌均勻，静置过滤；
D、滤液用10%Na0H调pH至6.5，加0. 2%活性炭，80°C加热搅拌20分钟，冷却，滤过；
E、滤液加注射用水至1000ml，灌封，灭菌，即得。对比例2 —种夏枯草注射液，由以下原料配比组成夏枯草2000g、吐温-80 5ml、 苯甲醇5ml。上述夏枯草注射液，由以下步骤制得
A、取夏枯草2000g粉碎；
B、加药材总重量10倍70%乙醇回流提取2次，每次1小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇；
C、加苯甲醇5ml，及450ml注射用水，搅拌均勻，静置过滤；
D、滤液用10%Na0H调pH至6.5，加0. 2%活性炭，80°C加热搅拌20分钟，冷却，滤过；
E、滤液加注射用水至1000ml，灌封，灭菌，即得。试验例
试验例1 迷迭香酸含量测定。准确称取夏枯草粗粉9份，每份50g，分别按实施例1-7和对比例方法制得夏枯草注射液，用HPLC法测定产品中迷迭香酸含量。结果见表1
表1迷迭香酸含量比较
权利要求
1.一种兽用夏枯草注射液，其特征在于，由以下原料配比组成夏枯草1800-2200g、吐温-80 3-6ml、苯甲醇 4-6ml。
2.根据权利要求1所述兽用夏枯草注射液的制备方法，其特征在于，由以下步骤制得A、取夏枯草1800-2200g粉碎；B、迷迭香酸的提取纯化(1)超声提取在200-400W功率下超声波处理15-40min，抽滤将滤液置于55-75°C 恒温水浴锅中水浴提取，其中提取溶剂为蒸馏水，夏枯草蒸馏水=1:10-25 (g/ml)，提取后药渣a用C工艺进行提取；(2)微滤除杂提取液用0.2 μ m陶瓷膜进行微滤，除去大部分果胶和蛋白；(3)萃取纯化滤液用正丁醇萃取2次，萃取液减压回收正丁醇，得迷迭香酸溶液b，其中滤液与正丁醇体积比为1:1-2，提取时间为15-35min ；C、三萜类的提取纯化(1)回流提取加药渣a总重量6-12倍60-95%乙醇回流提取2次，每次1_2小时，滤过，合并滤液c，减压回收乙醇；(2)NKA大孔树脂分离纯化树脂用95%乙醇浸泡Mh，充分溶胀，用乙醇冲洗，至洗出液加水无白色沉淀现象后，用蒸馏水洗涤浸泡，待用；将滤液c加入树脂床层，加蒸馏水洗涤至洗涤液无色，加入洗脱液50-60%乙醇以 l-5BV/h的速度由上而下通过树脂床层，由柱底收集洗脱液d，减压回收乙醇；D、洗脱液d与B(3)中所得迷迭香酸溶液b充分混勻，加吐温-803-6ml，苯甲醇4_6ml， 及300-600ml注射用水，搅拌均勻，静置过滤；E、滤液用10%Na0H调pH至5.5-7. 5，加0. 1-0. 5%活性炭，80°C加热搅拌20分钟，冷却， 滤过；F、滤液加注射用水至1000ml，灌封，灭菌，即得。
3.根据权利要求1所述兽用夏枯草注射液的制备方法，其特征在于，由以下步骤制得A、取夏枯草2000g粉碎；B、迷迭香酸的提取纯化(1)超声提取在300W功率下超声波处理30min，抽滤将滤液置于65°C恒温水浴锅中水浴提取，其中提取溶剂为蒸馏水，夏枯草蒸馏水=1 15( g/ml )，提取后药渣a用C工艺进行提取；(2)微滤除杂提取液用0.2 μ m陶瓷膜进行微滤，除去大部分果胶和蛋白；(3)萃取纯化滤液用正丁醇萃取2次，萃取液减压回收正丁醇，得迷迭香酸溶液b，其中滤液与正丁醇体积比为1:1. 5，提取时间为20min ；C、三萜类的提取纯化(1)回流提取加药渣a总重量10倍70%乙醇回流提取2次，每次1小时，滤过，合并滤液c，减压回收乙醇；(2)NKA大孔树脂分离纯化树脂用95%乙醇浸泡Mh，充分溶胀，用乙醇冲洗，至洗出液加水无白色沉淀现象后，用蒸馏水洗涤浸泡，待用；将滤液c加入树脂床层，加蒸馏水洗涤至洗涤液无色，加入洗脱液55%乙醇以!3BV/h的速度由上而下通过树脂床层，由柱底收集洗脱液d，减压回收乙醇；D、洗脱液d与B(3)中所得迷迭香酸溶液b充分混勻，加吐温-80 5ml，苯甲醇5ml，及 450ml注射用水，搅拌均勻，静置过滤；E、滤液用10%Na0H调pH至6.5，加0. 2%活性炭，80°C加热搅拌20分钟，冷却，滤过；F、滤液加注射用水至1000ml，灌封，灭菌，即得。
全文摘要
本发明是一种兽用夏枯草注射液，其制备方法为将粉碎后的夏枯草于200-400W功率下超声波处理15-40min，经微滤萃取得迷迭香酸溶液；超声提取后的药渣再加药渣总重量6-12倍60-95%乙醇回流水提2次，合并滤液并经NKA大孔树脂，以50-60%乙醇洗脱分离纯化，洗脱液与迷迭香酸溶液充分混匀后，加吐温-80、苯甲醇混匀，调PH，加0.1-0.5%活性炭，80℃加热搅拌，冷却过滤，最后加注射用水至1000ml，灌封，灭菌即得。本发明具有如下优点高纯度低毒的有效成分，具有抗菌、抗炎、抗病毒等功效，作为兽药抗病毒产品，疗效确切，可替代抗生素，有效改善药残和耐药性问题。
文档编号A61K9/08GK102552393SQ201210022080
公开日2012年7月11日 申请日期2012年2月1日 优先权日2012年2月1日
发明者晏永新 申请人:江西新世纪民星动物保健品有限公司