一种鲜松茸活性物质的制备方法
【专利摘要】一种鲜松茸活性物质的制备方法，它涉及一种松茸活性物质的制备方法。本发明的方法为：一、原料预处理；二、超声波辅助水提取；三、弱碱盐溶液提取；四、醇溶液提取；五、合并超声提取液、弱碱盐溶液提取液和醇溶液提取液，经过滤，旋转蒸发，蒸馏后，即得。本发明打破了松茸活性物质利用率低的局限性，利用多种提取方式综合提取，大大提高了松茸活性成分的得率，增加了松茸浓缩液的有效成分含量，提取的水溶性多糖、维生素C、黄酮、碱性蛋白质、多酚和三萜等活性成分具有可以增强免疫调节、抗氧化和抗疲劳的功效，更有利于人体吸收，并结合口服液使用简单、方便，便于保藏等优势，大大提高了松茸的利用价值与经济效益。
【专利说明】_种鲜松昔活性物质的制备方法

【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及一种松茸活性物质的制备方法。

【背景技术】
[0002] 松茸作为一种珍贵稀有的食药用真菌，其含有丰富的营养活性物质，具有重要的 保健功能和药用价值，其应用已经得到广泛的关注。松茸的商业价值，一直深受日本、美国 和欧洲等国家消费者的青睐。由于松茸的生长、采集受季节、地域、气候等因素的限制，难以 保鲜贮存，致使松茸价格昂贵，浮动频繁，国内外只有极少数人能够食用到，大多数人很难 品尝到松茸制品，享受松茸制品的美味与保健作用。目前国内外对松茸的研宄比较少，栽培 方面还仅限于人工促丰产技术，加工方面也只是简单的保鲜技术，市场上松茸加工产品较 少，国内外尚无对松茸功能性有效成分提取与产品开发。
[0003] 进行松茸功能性浓缩饮品开发，可以在实现松茸资源持续高效利用前提下，为松 茸保健品市场开拓新的思路。此外，作为前瞻性的基础研宄，还可为今后陆续开发姬松茸、 灵芝等食用菌类功能性浓缩饮品提供依据。
[0004] 但受季节、地域、气候等因素的限制，其难以保鲜贮存，导致大量活性物质流失，营 养价值降低。松茸保鲜一度是世界性难题。如何在最大程度上保全松茸营养成分并可长期 储存是亟待解决的问题，也是未来研宄的必然趋势。更重要的是目前的方法不能将松茸等 外品和边角料加以利用，不能减少资源的浪费，变废为宝，增收节支，为综合有效利用松茸 资源创造新途径。


【发明内容】

[0005] 本发明的目的是为了解决上述存在的问题，而采超声波辅助水提取、弱碱盐溶液 提取、醇溶液提取，提取出松茸中营养和功能性成分，得到了一种鲜松茸活性物质的制备方 法。
[0006] 本发明的一种鲜松茸活性物质的制备方法，它是按照以下步骤进行的：
[0007] -、选择新鲜、无病残、无虫蛀的松茸，于清水中洗净，沥水；将松茸子实体进行切 片处理；加入其20倍体积无菌蒸馏水，将切片后的松茸减压浸渍在含有质量百分含量为 0. 03%的柠檬酸、质量百分含量为0. 02%正丁醇与质量百分含量为0. 02%肉豆蔻酯的混 合溶液中，减压浸渍IOmin后，加入质量百分含量为0. 02% EDTA和质量百分含量为0. 2% 柠檬酸钠，然后捣碎松茸组织，再按体积比为I: I: (1?2)的比例加入6?7g/L的纤维素 酶、6?7g/L的果胶酶和6?7g/L的木瓜蛋白酶进行酶解反应得松茸处理原料；其中，酶 解反应条件为pH = 5、温度为50°C、酶解时间为I. 5h、酶与底物浓度比为1:3. 3 ;
[0008] 二、超声波辅助水提取：将步骤一得到的松茸处理原料置于20倍松茸处理原料 体积的水中进行超声提取，收集松茸超声提取液和残渣；其中，超声处理条件为：声波功率 5?150w，提取时间5?25min，超声波工作时间1?5s，间隔时间1?5s ;
[0009] 三、弱碱盐溶液提取：向步骤二收集的残渣中加入20倍残渣体积的弱碱溶液进行 提取，其中，弱碱溶液含有质量百分含量为0. 1?0. 5%的碳酸氢钠溶液和质量百分含量 为0. 5?2. 5%氯化钠溶液，收集松茸弱碱盐溶液提取液和残渣；其中，提取时间为30? 150min，提取温度为50?90°C ;
[0010] 四、醇溶液提取：将步骤三收集残渣置于20倍残渣体积的体积百分含量为50? 90%的乙醇中，然后在水浴温度为50?90°C的条件下提取30?150min，得松茸醇溶液提 取液；
[0011] 五、收集步骤二得到的松茸超声提取液、步骤三得到的松茸弱碱盐溶液提取液和 步骤四得到的松茸醇溶液提取液，混合后，用100目的尼龙66滤层过滤，利用旋转蒸发装 置以50°C、60r/min的条件对上述混合溶液进行蒸馏浓缩，蒸馏浓缩至原混合溶液体积的 1/10,即完成所述的松茸活性物质提取。
[0012] 本发明包含以下有益效果：
[0013] 本发明打破了松茸活性物质利用率低的局限性，通过改变提取方式，增加了松茸 浓缩液的提取率，并结合口服液使用简单、方便，便于保藏等优势，大大提高了松茸的利用 价值与经济效益。
[0014] 目前，松茸的研宄大部分还只局限于对松茸单一成分的提取与利用，而忽略了其 他营养成分及各成分间的相互作用。普通的热水浸提法、水煮醇沉法只能提取少量的营养 物质，要将所有的营养成分提取出来是极其困难的，这对松茸的利用造成了浪费。本发明为 了提高松茸的利用率及松茸整体营养价值，采用分步提取法对松茸中的成分进行全面有效 的提取，既能最大限度的提取出松茸中的各种营养成分，又能保持营养价值不受损失，也有 利于松茸的应用。
[0015] 本发明的超声波辅助水提取的最佳工艺为：超声波功率125w，提取时间lOmin，超 声波工作时间4s，间隔时间Is ;弱碱盐溶液提取的最佳工艺为：碳酸氢钠浓度0. 3%，氯化 钠浓度0. 5%，提取时间120min，提取温度80°C;醇溶液提取的最佳工艺为：乙醇浓度80%， 提取时间30min，提取温度70°C。在最佳工艺条件下测得的超声波辅助水提取中松茸水溶 性多糖的得率为〇. 52g/100g，维生素 C的得率为3. 0mg/100g，黄酮的得率为7. lmg/100g ; 弱碱盐溶液提取出的碱性蛋白质的得率为I. 16g/100g ;醇溶液提取出的多酚和三萜的得 率分别为 I. 16mg/100g 和 0· 23g/100g。
[0016] 本发明对松茸浓缩口服液的品质进行评价，及对其感观、相对密度、pH值、卫生学 指标和营养成分含量进行检测。结果表明，松茸浓缩口服液呈澄明的黄褐色液体，无浑浊 和沉淀，味甘，相对密度为I. l〇±〇. 05g/mL，pH值为7. 50±0. 05,每支装量为10mL，棕色瓶 包装，卫生学检测符合标准，IOOmL中含有多糖86. 7±0. 2mg、维生素 C 0. 50±0. 04mg、黄酮 I. 18±0.04mg、蛋白质 193.3±0.3mg、多酚 0· 19±0.02mg、三萜 38·3±0· lmg，检测出 17 种 氨基酸，其品质良好。
[0017] 以小鼠的免疫调节能力、抗氧化性及抗疲劳能力作为检测指标对本发明方法制备 的松茸浓缩口服液进行检测，以灌胃生理盐水小鼠作为对照，检验了灌胃松茸浓缩口服液 后小鼠的各项指标的变化情况。结果表明：灌胃松茸浓缩口服液21d后免疫调节能力中胸 腺指数提高26%，脾脏指数提高9. 1%，血清IgG含量提高11%，巨噬细胞吞噬能力提高 51 %，与对照组相比差异显著（P< 0.05);在抗氧化能力检测中，试验组灌胃21d后MDA含 量降低57%，SOD含量提高11 %，与对照组相比差异显著（P < 0. 05);在抗疲劳能力检测 中，灌胃21d后，力竭游泳时间提高39%，无显著性差异；血乳酸含量和血清尿素氮分别降 低了 29 %和49 %，与对照组相比差异显著（P < 0. 05)。

【专利附图】

【附图说明】
[0018] 图1为的葡萄糖标准曲线；
[0019] 图2为维生素 C标准曲线；
[0020] 图3为黄酮标准曲线；
[0021] 图4为蛋白质标准曲线；
[0022] 图5为多酚标准曲线；
[0023] 图6为三萜标准曲线。

【具体实施方式】

【具体实施方式】 [0024] 一：本实施方式的一种鲜松茸活性物质的制备方法，它是按照以下 步骤进彳丁的：
[0025] 一、选择新鲜、无病残、无虫蛀的松茸，于清水中洗净，沥水；将松茸子实体进行切 片处理；加入其20倍体积无菌蒸馏水，将切片后的松茸减压浸渍在含有质量百分含量为 0. 03%的柠檬酸、质量百分含量为0. 02%正丁醇与质量百分含量为0. 02%肉豆蔻酯的混 合溶液中，减压浸渍IOmin后，加入质量百分含量为0. 02% EDTA和质量百分含量为0. 2% 柠檬酸钠，然后捣碎松茸组织，再按体积比为I: I: (1?2)的比例加入6?7g/L的纤维素 酶、6?7g/L的果胶酶和6?7g/L的木瓜蛋白酶进行酶解反应得松茸处理原料；其中，酶 解反应条件为pH = 5、温度为50°C、酶解时间为I. 5h、酶与底物浓度比为1:3. 3 ;
[0026] 二、超声波辅助水提取：将步骤一得到的松茸处理原料置于20倍松茸处理原料 体积的水中进行超声提取，收集松茸超声提取液和残渣；其中，超声处理条件为：声波功率 5?150w，提取时间5?25min，超声波工作时间1?5s，间隔时间1?5s ;
[0027] 三、弱碱盐溶液提取：向步骤二收集的残渣中加入20倍残渣体积的弱碱溶液进行 提取，其中，弱碱溶液含有质量百分含量为〇. 1?〇. 5%的碳酸氢钠溶液和质量百分含量 为0. 5?2. 5%氯化钠溶液，收集松茸弱碱盐溶液提取液和残渣；其中，提取时间为30? 150min，提取温度为50?90°C ;
[0028] 四、醇溶液提取：将步骤三收集残渣置于20倍残渣体积的体积百分含量为50? 90%的乙醇中，然后在水浴温度为50?90°C的条件下提取30?150min，得松茸醇溶液提 取液；
[0029] 五、收集步骤二得到的松茸超声提取液、步骤三得到的松茸弱碱盐溶液提取液和 步骤四得到的松茸醇溶液提取液，混合后，用100目的尼龙66滤层过滤，利用旋转蒸发装 置以50°C、60r/min的条件对上述混合溶液进行蒸馏浓缩，蒸馏浓缩至原混合溶液体积的 1/10,即完成所述的松茸活性物质提取。
[0030] 本实施方式超声波辅助水提取中松茸水溶性多糖的得率为0. 52g/100g :维生素 C 的得率为3. 0mg/100g :黄酮的得率为7. lmg/100g ;
[0031] 弱碱盐溶液提取出的碱性蛋白质的得率为I. 16g/100g ;
[0032] 醇溶液提取出的多酚和三萜的得率分别为I. 16mg/100g和0. 23g/100g。

【具体实施方式】 [0033] 二：本实施方式与一不同的是：步骤一中的按体积比 为1:1:1. 4的比例加入6. 8g/L的纤维素酶、6. 8g/L的果胶酶和6. 8g/L的木瓜蛋白酶进行 酶解反应。其它与一相同。

【具体实施方式】 [0034] 三：本实施方式与一不同的是：步骤二中超声处理条 件为：声波功率100?150w，提取时间5?lOmin，超声波工作时间2?4s，间隔时间1? 3s。其它与一相同。

【具体实施方式】 [0035] 四：本实施方式与一不同的是：步骤二中超声处理条 件为：声波功率125w，提取时间lOmin，超声波工作时间4s，间隔时间Is。其它与具体实施 方式一相同。

【具体实施方式】 [0036] 五：本实施方式与一不同的是：步骤三中弱碱溶液含 有质量百分含量为〇. 3%的碳酸氢钠溶液和质量百分含量为0. 5%氯化钠溶液。其它与具 体实施方式一相同。

【具体实施方式】 [0037] 六：本实施方式与一不同的是：步骤三中提取时间为 90?150min，提取温度为70?90°C。其它与一相同。

【具体实施方式】 [0038] 七：本实施方式与一不同的是：步骤三中提取时间为 120min，提取温度为80°C。其它与一相同。

【具体实施方式】 [0039] 八：本实施方式与一不同的是：步骤四中乙醇的体积 百分含量为80%。其它与一相同。

【具体实施方式】 [0040] 九：本实施方式与一不同的是：步骤四中在水浴温度 为60?80°C的条件下提取30?90min。其它与一相同。
[0041]

【具体实施方式】十：本实施方式与【具体实施方式】一不同的是：步骤四中在水浴温度 为70°C的条件下提取30min。其它与【具体实施方式】一相同。
[0042] 本
【发明内容】
不仅限于上述各实施方式的内容，其中一个或几个【具体实施方式】的组 合同样也可以实现发明的目的。
[0043] 通过以下实施例验证本发明的有益效果：
[0044] 实施例一
[0045] 松茸中含有大量的营养及功能性成分，特别是新鲜松茸对人体健康有益，但是新 鲜松茸存在不易保藏、有效成分利用率低等缺点。
[0046] 针对上述问题，本实施例为了最大限度的提取出松茸中的营养物质与功能性成 分，根据其性质，采超声波辅助水提取、弱碱盐溶液提取、醇溶液提取，提取出松茸中营养和 功能性成分，同时考虑了提取工艺的复杂程度、稳定性及生产成本，得到了鲜松茸浓活性物 质的制备工艺。
[0047] 以下实施例所需松茸来源黑龙江省牡丹江市东宁县的新鲜松茸。
[0048] 1、具体方法
[0049] 2、原材料预处理
[0050] 选择新鲜、无病残、无虫蛀的松茸，于清水中洗净，沥水。将松茸子实体进行切片 处理；用电子天平称量重量，加入20倍体积无菌蒸馏水，将切片后的松茸减压浸渍在含有 0. 03%的柠檬酸、0. 02%正丁醇与0. 02%肉豆蔻酯的混合溶液中，减压浸渍lOmin。加入 0. 02% EDTA、0. 2%柠檬酸钠，用组织捣碎器将组织破坏。加入纤维素酶、果胶酶、木瓜蛋白 酶，按6. 8g/L加入进行酶解反应，三种酶的比例为I: I: I. 4。
[0051] 3、对预处理后的原料，以此进行超声波辅助水提取一弱碱盐溶液提取一醇溶液提 取：
[0052] -、超声波辅助水提取：将步骤一得到的松茸处理原料置于水中进行超声提取 (松茸原料与水的用量比例关系是1:30)，收集松茸超声提取液和残渣；其中，超声处理条 件为：声波功率125w，提取时间lOmin，超声波工作时间4s，间隔时间Is ;
[0053] 二、弱碱盐溶液提取：向步骤二收集的残渣中加入20倍残渣体积的弱碱溶液进行 提取，其中，弱碱溶液含有质量百分含量为〇. 3%的碳酸氢钠溶液和质量百分含量为0. 5% 氯化钠溶液，收集松茸弱碱盐溶液提取液和残渣；其中，提取时间为120min，提取温度为 80 0C ；
[0054] 三、醇溶液提取：将步骤三收集残渣置于20倍残渣体积的体积百分含量为80%的 乙醇中，在醇溶液的温度为70°C的条件下提取30min，得松茸醇溶液提取液。
[0055] 对松茸经超声波辅助水提取一弱碱盐溶液提取一醇溶液提取过程后，测得的超声 波辅助水提取中松茸水溶性多糖的得率为〇. 52g/100g，维生素 C的得率为3. 0mg/100g，黄 酮的得率为7. lmg/100g ;弱碱盐溶液提取出的碱性蛋白质的得率为I. 16g/100g ;醇溶液提 取出的多酚和三萜的得率分别为I. 16mg/100g和0. 23g/100g。
[0056] 实施例二
[0057] 1、制备松茸浓缩口服液
[0058] (1)将新鲜松茸进行原料预处理（同第2部分的原料预处理）；
[0059] (2)超声波辅助水提取：将上经预处理后的松茸在超声波细胞破碎仪中进行超声 提取，调节超声功率125w、超声时间10min、工作时间4s、间隔时间ls，用4000r/min的离心 机分离l〇min，得到提取液1和残渣1 ;
[0060] (3)弱碱盐溶液提取：将残渣1浸渍在松茸质量20倍体积含有0. 3%碳酸氢钠、 0. 5%氯化钠溶液中，80°C恒温提取120min。然后用4000r/min速度离心分离10min，得到 提取液2和残渣2 ;
[0061 ] (4)乙醇溶液提取：将残渣2浸渍在松茸质量20倍体积含有80%乙醇溶液中70°C 恒温水浴锅中提取30min，得到提取液3 ;
[0062] (5)浓缩蒸馏：将三次提取液混合，然后进行过滤，用100筛眼的尼龙66滤层过 滤。利用旋转蒸发装置以50°C、60r/min对上述混合溶液进行蒸馏浓缩，蒸馏浓缩至总体积 的1/10,灭菌灌装。得到黄褐色澄清透明口服液。
[0063] 2、制得的松茸浓缩口服液进行品质评价分析
[0064] 2. 1品质评价指标
[0065] (1)感观评价
[0066] 取3批松茸浓缩口服液，由10位专业人士对其色泽、香味及组织状态进行评分，取 平均值进行评价。
[0067] (2)相对密度检查
[0068] 分别取3批松茸浓缩口服液样品用比重计测定其相对密度，每批样品重复测定3 次，取平均值。
[0069] (3) pH 值检查
[0070] 分别取3批松茸浓缩口服液样品，参照2010版国家药典附录W G pH值测定法，用 酸度计进行测定，测定前用硼砂标准缓冲溶液校正，每批样品重复测定3次，取平均值。
[0071] (4)卫生学检查
[0072] 参照《中国药典》（2010版一部）附录IG合剂的微生物限度有关规定，依据附MC 微生物限度检测法所述步骤，分别对松茸浓缩口服液中细菌数、霉菌和大肠埃希菌数进行 了检测。
[0073] (5)营养成分含量测定
[0074] 1)多糖
[0075] (1)水溶性多糖的得率测定
[0076] ①葡萄糖标准曲线的绘制
[0077] 采用苯酚硫酸法测定松茸多糖含量。准确称取葡糖标准品100mg，蒸馏水定容至 100mL，得到浓度为I. Omg/mL的标准溶液。精密吸取葡萄糖标准液0. lmL、0. 2mL、0. 4mL、 0. 6mL、0. 8mL、I. OmL，补水至2. OmL。加入50g/L的苯酚溶液I. OmL，浓硫酸5. OmL，混匀，沸 水浴2min。冷却后在495nm处测吸光值，以多糖浓度（mg/mL)为横坐标，以吸光值（OD495) 为纵坐标，如图1所示。
[0078] ②水溶性多糖得率的计算
[0079] 取ImL提取液，按照上述标准曲线方法测定吸光值，根据标准曲线求出提取液中 多糖的浓度，可计算：
[0080] 水溶性多糖得率=提取液中水溶性多糖质量/松茸质量X 100%。
[0081] 2)维生素 C
[0082] 维生素 C的得率
[0083] ①维生素 C标准曲线的绘制
[0084] 精确称取草酸6. 30g，EDTA0. 0584g，充分溶解后定容至100mL，准确称取干燥的维 生素 C 5mg，用草酸-EDTA 溶液定容至 500mL，分别吸取 0· 8mL、l. 2mL、l. 6mL、2. 0mL、2. 4mL、 2. 8mL、3. 2mL的标准抗坏血酸溶液于50mL的容量瓶中，然后加人草酸-EDTA溶液，使总体积 达到10mL。再加入I. OmL的偏磷酸一醋酸溶液和5 %的硫酸2. OmL，摇匀加人4. OmL的铝酸 铵，在705nm下测定吸光值，以维生素 C浓度（μ g/mL)为横坐标，以吸光值（OD7tl5)为纵坐 标，如图2所示。
[0085] ②维生素 C得率的计算
[0086] 取ImL提取液，按照上述标准曲线方法测定吸光值，根据标准曲线求出提取液中 维生素 C的浓度，可计算：
[0087] 维生素 C得率=提取液中维生素 C质量/松茸质量X 100%。
[0088] ③黄酮
[0089] 3)黄酮的得率
[0090] ①黄酮标准曲线的绘制
[0091] 精确称取20mg芦丁标准品，用50%乙醇溶液定容至100mL，得0. 2mg/mL芦丁标准 溶液，量取标准溶液 I. 0mL、3. 0mL、5. 0mL、7. 0mL、13. 0mL、17. 0mL、23. OmL。分别置于 IOOmL 容量瓶中，每个容量瓶中加入5%亚硝酸钠溶液I. OmL，放置6min后，再分别加入10%硝酸 铝溶液I. 0mL，静置6min后分别加入4%氢氧化钠溶液10mL，使用50%乙醇溶液定容，静置 IOmin后，于508nm处测吸光值，以芦丁浓度（μ g/mL)为横坐标，以吸光值（OD5tl8)为纵坐 标，如图3所示。
[0092] ②黄酮得率的计算
[0093] 取ImL提取液，按照上述标准曲线方法测定吸光值，根据标准曲线求出提取液中 黄酮的浓度，可计算：
[0094] 黄酮得率=提取液中黄酮质量/松茸质量X 100%。
[0095] 4)蛋白质
[0096] 碱溶性蛋白质的得率
[0097] ①蛋白质标准曲线的绘制
[0098] 首先将牛血清白蛋白用0. 15mol/mL的氯化钠溶液配成I. Omg/mL的标准蛋白质溶 液。再准确称取1〇〇呢考马斯亮蓝6-250，溶于5〇1^95%的乙醇后，加入12〇11^85%的磷 酸，用蒸馏水稀释至1L。取6支试管分别加入I. Omg/mL的标准蛋白质溶液0. lmL、0. 2mL、 0. 3mL、0. 4mL、0. 5mL、0. 6mL，然后用0. 15mol/mL氯化钠溶液补充到lmL，最后个试管分别加 入5. OmL考马斯亮蓝G-250试剂。每加完一管，立即在旋涡混合器上混匀。加完试剂2-5min 后，于595nm处测吸光值。以牛血清白蛋白浓度（mg/mL)为横坐标，以吸光值（OD595)为纵 坐标，如图4所示。
[0099] ②碱溶性蛋白质得率的计算
[0100] 取ImL提取液，按照上述标准曲线方法测定吸光值，根据标准曲线求出提取液中 碱溶性蛋白质的浓度，可计算：
[0101] 碱溶性蛋白质得率=提取液中碱溶性蛋白质量/松茸质量X 1〇〇%。
[0102] 5)多酚
[0103] 多酚的得率
[0104] ①多酚标准曲线的绘制
[0105] 精确称取没食子酸标准品25mg，用水溶解并定容至250mL，得到0. lmg/mL的标准 溶液。精密吸取标准溶液〇. lmL、0. 2mL、0. 3mL、0. 4mL、0. 5mL、0. 6mL于IOOmL容量瓶中，加 入ImL福林酷显色剂，摇勾后再加入2mL15%碳酸钠溶液，定容至100mL，室温下反应2h后 于760nm处测吸光值，以没食子酸浓度（μ g/mL)为横坐标，以吸光值（OD76tl)为纵坐标，如 图5所示。
[0106] ②多酚得率的计算
[0107] 取ImL提取液，按照上述标准曲线方法测定吸光值，根据标准曲线求出提取液中 多酚的浓度，可计算
[0108] 多酚得率=提取液中多酚质量/松茸质量X 100%。
[0109] 6)三萜
[0110] 二猫得率的计算
[0111] ①三萜标准曲线的绘制
[0112] 精确称取熊果酸标准品I. 150mg，溶于IOmL无水乙醇中，得0. 115mg/mL标准溶液。 精确吸取 〇. lmL、0. 2mL、0. 4mL、0. 6mL、0. 8mL、I. OmL、I. 2mL 标准溶液于 IOmL 试管中，水浴蒸 干溶剂。分别向每支试管中加入5%香草醛-冰醋酸0. 5mL、高氯酸lmL，密封。60°C水浴加 热15min，取出置于冰水中冷却。再向每支试管中加入5mL冰醋酸溶液，摇匀。于548nm处 测吸光值，以熊果酸质量（μg)为横坐标，以吸光值（OD548)为纵坐标，如图6所示。
[0113] ②三萜得率的计算
[0114] 取ImL提取液，按照上述标准曲线方法测定吸光值，根据标准曲线求出提取液中 多糖的浓度，可计算
[0115] 三萜得率=提取液中三萜质量/松茸质量X 100%。
[0116] ⑦氨基酸
[0117] 利用氨基酸分析仪测定。
[0118] 3、结果与分析
[0119] 3.1感观评价
[0120] 口服液的感观是消费者对于口服液的第一认识与评价，所以口服液的感观直接影 响了其品质的好坏，本试验由10位经专业训练人士对松茸浓缩口服液的感观进行评价，结 果如表1所示。
[0121] 表1松茸浓缩口服液性状感官评价
[0122]

【权利要求】
1. 一种鲜松茸活性物质的制备方法，其特征在于它是按照以下步骤进行的： 一、 选择新鲜、无病残、无虫蛀的松茸，于清水中洗净，沥水；将松茸子实体进行切片处 理；加入其20倍体积无菌蒸馏水，将切片后的松茸减压浸渍在含有质量百分含量为0. 03% 的柠檬酸、质量百分含量为〇. 02%正丁醇与质量百分含量为0. 02%肉豆蔻酯的混合溶液 中，减压浸渍lOmin后，加入质量百分含量为0. 02% EDTA和质量百分含量为0. 2%朽1檬酸 钠，然后捣碎松茸组织，再按体积比为1:1: (1?2)的比例加入6?7g/L的纤维素酶、6? 7g/L的果胶酶和6?7g/L的木瓜蛋白酶进行酶解反应得松茸处理原料；其中，酶解反应条 件为pH = 5、温度为50°C、酶解时间为1. 5h、酶与底物浓度比为1:3. 3 ; 二、 超声波辅助水提取：将步骤一得到的松茸处理原料置于20倍松茸处理原料体积 的水中进行超声提取，收集松茸超声提取液和残渣；其中，超声处理条件为：声波功率5? 150w，提取时间5?25min，超声波工作时间1?5s，间隔时间1?5s ; 三、 弱碱盐溶液提取：向步骤二收集的残渣中加入20倍残渣体积的弱碱溶液进行提 取，其中，弱碱溶液含有质量百分含量为〇. 1?〇. 5%的碳酸氢钠溶液和质量百分含量 为0. 5?2. 5%氯化钠溶液，收集松茸弱碱盐溶液提取液和残渣；其中，提取时间为30? 150min，提取温度为50?90°C ; 四、 醇溶液提取：将步骤三收集残渣置于20倍残渣体积的体积百分含量为50?90% 的乙醇中，然后在水浴温度为50?90°C的条件下提取30?150min，得松茸醇溶液提取液； 五、 收集步骤二得到的松茸超声提取液、步骤三得到的松茸弱碱盐溶液提取液和步骤 四得到的松茸醇溶液提取液，混合后，用100目的尼龙66滤层过滤，利用旋转蒸发装置以 50°C、60r/min的条件对上述混合溶液进行蒸馏浓缩，蒸馏浓缩至原混合溶液体积的1/10， 即完成所述的松茸活性物质提取。
2. 根据权利要求1所述的一种鲜松茸活性物质的制备方法，其特征在于步骤一中的按 体积比为1:1:1. 4的比例加入6. 8g/L的纤维素酶、6. 8g/L的果胶酶和6. 8g/L的木瓜蛋白 酶进行酶解反应。
3. 根据权利要求1所述的一种鲜松茸活性物质的制备方法，其特征在于步骤二中超声 处理条件为：声波功率100?150w，提取时间5?lOmin，超声波工作时间2?4s，间隔时 间1?3s。
4. 根据权利要求3所述的一种鲜松茸活性物质的制备方法，其特征在于步骤二中超声 处理条件为：声波功率125w，提取时间lOmin，超声波工作时间4s，间隔时间Is。
5. 根据权利要求1所述的一种鲜松茸活性物质的制备方法，其特征在于步骤三中弱碱 溶液含有质量百分含量为〇. 3%的碳酸氢钠溶液和质量百分含量为0. 5%氯化钠溶液。
6. 根据权利要求1所述的一种鲜松茸活性物质的制备方法，其特征在于步骤三中提取 时间为90?150min，提取温度为70?90°C。
7. 根据权利要求6所述的一种鲜松茸活性物质的制备方法，其特征在于步骤三中提取 时间为120min，提取温度为80°C。
8. 根据权利要求1所述的一种鲜松茸活性物质的制备方法，其特征在于步骤四中乙醇 的体积百分含量为80%。
9. 根据权利要求1所述的一种鲜松茸活性物质的制备方法，其特征在于步骤四中在水 浴温度为60?80°C的条件下提取30?90min。
10.根据权利要求1所述的一种鲜松茸活性物质的制备方法，其特征在于步骤四中在 水浴温度为70°c的条件下提取30min。
【文档编号】A61P39/00GK104431995SQ201510018428
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2015年1月14日 优先权日:2015年1月14日
【发明者】佟立君, 么宏伟, 雷虹, 付婷婷, 胡伟, 范永鹏, 冯磊, 谢晨阳, 赵凤臣, 吴洪军, 张学义 申请人:佟立君