专利名称：一种延胡索酰胺类化合物提取物及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及医药化学领域，公开了一种延胡索酰胺类化合物提取物及其制备方法和应用。
背景技术：
中药延胡索是I!粟科紫堇属植物延胡索(Corydalis yanhusuo W. T. Wang)的干燥块莖，性味辛、苦、温，归肝、脾经，具有活血、利气、止痛的功效。主要用于胸胁脘腹疼痛、经闭、痛经、产后瘀阻、跌扑肿痛等。关于延胡索的化学成分，文献报道多见为生物碱类化合物，其他成分报道的很少，没有酰胺类化合物的报道。·

发明内容
本发明的一个目的是提供一种延胡索酰胺类化合物提取物。该提取物从传统中药延胡索中提取而得，提取物中酰胺类化合物的含量为50% -90%。在该延胡索酰胺类化合物提取物中，酰胺类化合物的结构通式如式(I)，R为含有羰基，羟基，酯基或氨基的烷基。其中主要的化合物为2-氨基戊酰胺-5-乙酸酯和丁酰胺-4-乙酸酯，结构分别如式(II)和(III)所示。式⑴
0
H2N-~C—R
NH2
0 0
H2 H2 H2 H2N ——C ——C ——C —C —C —0——C——CH3 H
D0
H2 H2 H2 H2N-C-C -C -C -0-C-CH3式(II)式(III)在该延胡索酰胺类化合物提取物中，以重量百分比计算，式(I)化酰胺类合物的含量为50% 55%，其中2-氨基戊酰胺-5-乙酸酯的含量为20% 40%，丁酰胺-4-乙酸酯等的含量为15% 35%。
本发明还提供了上述延胡索酰胺类化合物提取物的制备方法及其在制备治疗冠心病、心绞痛或心肌梗塞的药物中的应用。该延胡索酰胺类化合物提取物的制备方法包括以下步骤(I)将延胡索药材的乙醇提取物过大孔树脂柱，收集纯水洗脱部位；大孔树脂为中等极性和非极性大孔树脂柱，包括D101、HPD100, X-5、DA201、D301和AB-8中的任意一种；延胡索药材与大孔树脂柱用量比为Ikg : 15 20L;所用纯水与大孔树脂柱体积比为3 5;(2)收集步骤⑴洗脱液，浓缩至相对密度为I. I I. 2，用1/4 1/2倍乙酸乙酯萃取2 5次，收集萃取后水层；(3)取步骤2所得的水层溶液，用1/4 1/2倍体积正丁醇萃取2 5次，收集正·丁醇层，浓缩干燥即得酰胺类化合物的组分，其中酰胺类化合物含量为50% -90%。。制备方法的步骤(I)中，延胡索药材的乙醇提取物制备方法为将干燥的10 100目延胡索药材粗粉用5 8倍重量乙醇溶液提取2 4次，浓缩至相对密度I. I I. 2，0 10°C下静置10 48小时，取上清液；乙醇溶液体积浓度为60% 80%。通过该方法制备的延胡索酰胺类化合物提取物得率为0. 06% -0. 2%，经过质谱和核磁共振等光谱技术鉴定，其中酰胺类化合物的含量达到了 50% -90%，并且通过异羟肟酸铁反应显阳性。，对该延胡索酰胺类化合物提取物进一步研究分析，通过硅胶正相柱色谱柱和反相C18柱色谱柱组合进行分离，得到两个高含量的化合物，用核磁共振进行分子检测，证实这两个化合物为2-氨基戊酰胺-5-乙酸酯和丁酰胺-4-乙酸酯，通过对这两个化合物的含量检测，2-氨基戊酰胺-5-乙酸酯在延胡索酰胺类化合物提取物中的含量为20% 40%，丁酰胺-4-乙酸酯等的含量为15% 35%。娃胶正相柱色谱柱条件色谱柱为Hypersil柱(200mmX4. 6mm),流动相为乙腈-醋酸乙酯-甲醇-0. 5M NaH2P04溶液(37 10 10 60，加I %三乙胺，磷酸调pH至3. 5)，柱温室温。反相C18柱色谱柱条件色谱柱为YMC-液相色谱ODS反相柱(C18柱)，流动相为甲醇水乙酸=7 3 0. 1,1 9 0. 1，PH调至6. 5，柱温室温。根据本发明制备的延胡索酰胺类化合物提取物，经动物试验证实具有抗心肌缺血作用，，加入药剂学接受的辅料后，可以制备各种成药学上可接受的药用制剂，如液体制剂(注射剂、口服液)，固体制剂(片、胶囊剂，胶丸剂)等。酰胺类化合物是在延胡索中新发现的胺类化合物，其结构和作用机理都不同于延胡索中已发现的主要有效成分生物碱类化合物。通过对酰胺类化合物的相关研究，发现其同样具有抗心肌缺血的作用，有可能成为续延胡索生物碱类化合物外新的延胡索有效成分，同时为全面阐释延胡索抗心肌缺血作用的物质基础及复杂作用机理提供科学依据。而由于生物碱类化合物作用强烈，并有一定的毒性，而本发明制备的延胡索酰胺类化合物提取物安全性良好，如经深入开发，将能够为企业开发出更加安全、有效和质量可控的有关延胡索相关产品，具有广阔的市场前景。


图I为实施例I中延胡索酰胺类化合物提取物的HPLC色谱图。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明做进一步详细、完整地说明实施例I(I)干燥的延胡索药材粗粉(10 100目)Ikg,加入6kg 80% (v/v)乙醇提取三次，浓缩至25°C下相对密度为115 ；4°C下静置24小时，上清液过20L DA201大孔树脂柱；用80L纯水洗脱并收集纯水洗脱部位，浓缩至25°C下相对密度为I. I I. 2。(2)水洗脱部位浓缩液加三分之一体积的乙酸乙酯萃取，连续萃取三次。(3)乙酸乙酯萃取后水层加三分之一体积的正丁醇，连续萃取三次。收集正丁醇萃取液，浓缩干燥，即得延胡索酰胺类化合物提取物，其得率为0. 19%。(4)异羟肟酸比色法测定延胡索酰胺类化合物提取物中酰胺类化合物的含量为85%。实施例2按照实施例I步骤，其中步骤I中DA201大孔树脂柱用HPD100、X_5、DA201、D301或AB-8代替。结果延胡索酰胺类化合物提取物得率及酰胺类化合物的含量分别见下表
权利要求
1.一种延胡索酰胺类化合物，其特征在于，具有式(I)结构，
2.权利要求I所述延胡索酰胺类化合物，其特征在于，该化合物为2-氨基戊酰胺-5-乙酸酯或丁酰胺-4-乙酸酯。
3.—种延胡索酰胺类化合物提取物，其特征在于，含有50% 55%具有式(I)结构的化合物，
4.权利要求3所述延胡索酰胺类化合物提取物，其特征在于，其中2-氨基戊酰胺-5-乙酸酯含量为20 % 25 %，丁酰胺-4-乙酸酯含量为15 % 20 %。
5.权利要求3或4所述延胡索酰胺类化合物提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤 (1)将延胡索药材的乙醇提取物过大孔树脂柱，收集纯水洗脱部位；所述大孔树脂为中等极性和非极性大孔树脂柱； (2)收集步骤(I)洗脱液，浓缩至相对密度为I.I I. 2，用乙酸乙酯萃取2 5次； (3)收集步骤(2)的萃取后水层，用正丁醇萃取，收集正丁醇层，浓缩干燥即得酰胺类化合物的组分。
6.权利要求5所述延胡索酰胺类化合物提取物的制备方法，其特征在于，延胡索药材的乙醇提取物制备方法为，将干燥的10 100目延胡索药材粗粉用5 8倍重量乙醇溶液提取2 4次，浓缩至相对密度I. I I. 2，0 10°C下静置10 48小时，取上清液；乙醇溶液体积浓度为60 % 80 %。
7.权利要求5所述延胡索酰胺类化合物提取物的制备方法，其特征在于，步骤(2)中用正丁醇萃取2 5次，每次使用的正丁醇体积为萃取后水层的1/4 1/2 ;步骤(3)中用乙酸乙酯萃取2 5次，每次使用体积为洗脱液的1/4 1/2。
8.权利要求I或2所述延胡索酰胺类化合物的制备方法，其特征在于，将权利要求3或4所述延胡索酰胺类化合物提取物用硅胶正相柱色谱和反相柱色谱层析分离。
9.权利要求I或2所述延胡索酰胺类化合物在制备治疗冠心病、心绞痛或心肌梗塞的药物中的应用。
10.权利要求3或4所述延胡索酰胺类化合物提取物在制备治疗冠心病、心绞痛或心肌梗塞的药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及医药化学领域，公开了一种延胡索酰胺类化合物提取物、化合物及其制备方法和应用。这种延胡索酰胺类化合物提取物中含有50％～55％式(I)结构的化合物，其中主要的化合物为2-氨基戊酰胺-5-乙酸酯和丁酰胺-4-乙酸酯。上述延胡索酰胺类化合物提取物可用于制备治疗冠心病、心绞痛或心肌梗塞的药物。
文档编号A61K31/221GK102786433SQ20121006858
公开日2012年11月21日 申请日期2012年3月15日 优先权日2012年3月15日
发明者刘振华, 叶剑锋, 方玲, 王如伟, 章江生, 胡江宁 申请人:浙江康恩贝制药股份有限公司