专利名称：十四肽生长抑素的制备方法
技术领域：
本发明涉及药物的制备方法，具体地说，本发明是一种十四肽生长 抑素的制备方法。
背景技术：
十四肽生长抑素是有十四个氨基酸残基组成的、具有生物活性的多 肽氨基酸产品。适用于急性胃溃疡出血，糜烂和出血性胃炎所致的出血、 严重急性食道静脉曲张出血、胰胆和胃肠娄及急性胰腺炎的治疗以及胰 脉术后并发症的预防。
十四肽生长抑素具有以下的结构式和结构简式
i i Ala-Gly-Cys-Lys-Asn-Phe-Phe-T/p-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys
中国专利申请第03128951.7号(申请日2003年05月29日，公开 日2004年12月08日)公开了一种生长抑素多肽的合成方法，该合成 方法将Wang树脂为起始原料，以Fmoc保护的氨基酸为单体，逐个接 上氨基酸，用切肽试剂(TFA/EDT/H20/TIS)进行切肽，加入乙醚沉淀粗
5肽，在pH7.0-10.0，于15-35。C下，通空气氧化，用C18柱进行分离纯 化。
但目前尚没有发现专门用于提高十四肽生长抑素收率的制备方法 的文献报道。

发明内容
本发明的目的是提供一种十四肽生长抑素的制备方法。
为了实现上述的发明目的，本发明采用以下技术方案 一种十四肽生长抑素的制备方法，采用以下步骤 步骤A.分别制备中间体a、中间体b和中间体C;
Fmoc tBu I I
Boc-Ala-Gly-Cys隱Lys-Asn-OH 中间体a
NH.2
Z-Phe-Phe-Trp-OH 中间体b
tBu tBu Fmoc
I I I
H-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys-OMe 中间体c
I I tBu tBu
6在中间体a的制备中，采用0(30及3- (二乙氧基磷酰基)-1， 2， 3，-苯并三嗪-4-酮作为缩合剂，
在中间体b的制备中，采用DCC作为縮合剂； 步骤B.中间体b，中间体c以叠氮基磷酸二苯脂作为缩合剂进行
缩合，得到下述的中间体d:
tBu tBu Pmoc
I I I
Z-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser國Cys-OMe 中间体d
I I tBu tBu
步骤C.中间体&和中间体(1以3- (二乙氧基磷酰基)-1， 2， 3， 苯并三嗪_4-酮作为縮合剂进行縮合得到十四肽生长抑素。如式1所示,
中间体(a)+中间体(b)-
S---------------------------------------s
H-Ala-Gly-Cys-Lys-Asn—Phe-Phe醒Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys-OH
式1
在本发明中，具体采用以下方法制备中间体a:采用DMF,DCC及3- (二乙氧基磷酰基)-1， 2， 3，-苯并三嗪-4-酮作为縮合剂的条件下， 控制反应温度-20 3(TC ，反应0.5 8小时。反应完成后，加固体NaOH或 10%~30%的液体NaOH进行皂化反应，得到中间体a。如式2所示。
Fmoc tBu I I
Boc-Ala-Gly-OH + Cys-Lys-Asn-OMe__
I
N.H2
Fmoc t:Bu I I
Boc-Ala-Gly-Cys-Lys-Asn-OH 中间体a 式2
I
NH2
在本发明中，具体采用以下方法制备中间体b:采用DCC，乙酸乙
酯或氯甲酸苄脂为溶剂，控制反应温度在0 4(TC，反应0.5 8小时，反
应完成后，加固体NaOH或10%~30%的液体NaOH进行皂化反应，得
到中间体b。如式3所示。
Z-Phe-Phe-OH + Trp-OMe------------------..........
Z-Phe-Phe-Trp-OH 中间体b
式3
8在本发明中，具体采用以下方法制备中间体C:采用DMF， DCM 或乙酸乙酯为溶剂，反应温度在0 3(TC，反应0.5 8小时，以下述两种 化合物进行縮合反应，得中间体c。如式4所示。
<formula>formula see original document page 9</formula>
在本发明中，具体采用以下方法制备中间体d:中间体b和中间体 c以叠氮基磷酸二苯脂作为縮合剂；在DMF, DPPA, 二氧六环和DCM 存在的条件下反应，反应温度为-20 40。C之间，反应2 40小时，-10 30 。C结晶，得中间体d。
在上述的步骤C中，中间体3和中间体(1以3- (二乙氧基磷酰基) -1， 2， 3，-苯并三嗪-4-酮或叠氮基磷酸二苯脂作为縮合剂，在DMF、 二氧六环、乙醚、DCM、 DFA、 40%溴化氢乙酸溶液或哌啶存在的条件下，在-20 3(TC反应，用双氧水或空气氧化，经真空干燥除去反应体系
中的溶剂，得十四肽生长抑素。叠氮基磷酸二苯脂作为縮合剂时，是把
R-COOH进行叠氮化(R-CON3)，然后再进行縮合反应。
在本发明所指明的流程中，所使用的保护基、縮合剂为
Fmoc:芴甲氧羰基，作为氨基酸保护基，巯基保护基。
BOC:叔丁氧羰基，作为氨基酸保护基，羟基保护基。 Z:苄氧羰基，作为氨基酸保护基。
OMe:甲酯基团，作为羧基保护基。
DPPA:叠氮基磷酸二苯脂，作为新型縮合剂。
DEPBT: 3- (二乙氧基磷酰基)-1， 2, 3，-苯并三嗪-4-酮，作为
新型缩合剂。
在本发明所指明的流程中，所使用的溶剂或试剂为
DMF: N.N-二甲基甲酰胺；
二氧六环；
TFA:三氟乙酸；(浓度为0—50%);
DCM: 二氯甲烷；
乙酸乙脂；
哌啶20—607。的DMF溶液。 本发明具有以下的优点
本发明具有肽链接完全、纯化简单易行、收率高、目标产物十四肽 生长抑素光学活性高及化学纯度高的优点。目标产物十四肽生长抑素收
率为8—10% (按酪氨酸甲酯计)。
具体实施例方式
制备中间体a:采用DMF，DCC及3- (二乙氧基磷酰基)-1， 2， 3，
10-苯并三嗪-4-酮作为縮合剂的条件下，控制反应温度25。C，反应5小时。 反应完成后，加20wt。/。的液体NaOH进行皂化反应，得到中间体a。
采用DCC，乙酸乙酯或氯甲酸苄脂为溶剂，控制反应温度在20。C， 反应5小时，反应完成后，加20wtM的液体NaOH进行皂化反应，得 到中间体b。
采用DMF， DCM或乙酸乙酯为溶剂，反应温度在15°C，反应5 小时，以下述两种化合物做加成反应，得中间体c。
Fmoc-Cys-Ome 化合物1
.tBu tBu
I I Z-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OH 化合物2
I I tBu tBu
中间体b和中间体c以叠氮基磷酸二苯脂作为縮合剂，在DMF, DPPA， 二氧六环和DCM存在的条件下反应，反应温度为20°C，反应 IO小时，-l(TC结晶，得中间体d。
中间体3和中间体(1以3- (二乙氧基磷酰基)-1， 2， 3，-苯并三嗪 -4-酮作为縮合剂，在DMF存在的条件下，在2(TC反应，用双氧水氧化， 经真空干燥除去反应体系中的溶剂，得十四肽生长抑素。
实施例2
制备中间体a:采用DMF,DCC及3- (二乙氧基磷酰基)-1， 2， 3，-苯并三嗪-4-酮作为縮合剂的条件下，控制反应温度25。C，反应2小时。 反应完成后，加20wt。/o的液体NaOH进行皂化反应，得到中间体a。
采用DCC，乙酸乙酯或氯甲酸苄脂为溶剂，控制反应温度在2(TC， 反应2小时，反应完成后，加20wt。/。的液体NaOH进行皂化反应，得 到中间体b。
采用DMF， DCM或乙酸乙酯为溶剂，反应温度在3(TC，反应0.5 小时，以下述两种化合物做加成反应，得中间体c。
Fmoc-Cys-Ome 化合物1
.tBu tBu
I I Z-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OH 化合物2
I I tBu tBu
中间体b和中间体c以叠氮基磷酸二苯脂作为縮合剂，在DMF, DPPA， 二氧六环和DCM存在的条件下反应，反应温度为20°C,反应 IO小时，-l(TC结晶，得中间体d。
中间体3和中间体(1以3- (二乙氧基磷酰基)-1， 2， 3，-苯并三嗪 -4-酮作为縮合剂，在DMF存在的条件下，在2(TC反应，用双氧水氧化， 经真空干燥除去反应体系中的溶剂，得十四肽生长抑素。
实施例3
制备中间体a:采用DMF，DCC及3- (二乙氧基磷酰基)-1， 2， 3，
12-苯并三嗪-4-酮作为縮合剂的条件下，控制反应温度25。C，反应8小时。 反应完成后，加20wty。的液体NaOH进行皂化反应，得到中间体a。
采用DCC，乙酸乙酯或氯甲酸苄脂为溶剂，控制反应温度在2(TC， 反应8小时，反应完成后，加20wty。的液体NaOH进行皂化反应，得 到中间体b。
采用DMF, DCM或乙酸乙酯为溶剂，反应温度在0。C，反应8小 时，以下述两种化合物做加成反应，得中间体c。
Fmoc-Cys-Ome 化合物1
.tBu tBu
I I Z-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OH 化合物2
I I tBu tBu
中间体b和中间体c以叠氮基磷酸二苯脂作为縮合剂，在DMF， DPPA， 二氧六环和DCM存在的条件下反应，反应温度为30°C,反应 IO小时，-l(TC结晶，得中间体d。
中间体￡1和中间体(1以3- (二乙氧基磷酰基)-1， 2， 3，-苯并三嗪 _4-酮作为縮合剂，在DMF存在的条件下，在2(TC反应，用双氧水氧化， 经真空干燥除去反应体系中的溶剂，得十四肽生长抑素。
以上对本发明所提供的十四肽生长抑素的制备方法进行了详细介 绍，本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以
13上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想；同时， 对于本领域的一般技术人员，依据本发明的思想，在具体实施方式
及应 用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发 明的限制。
权利要求
1. 一种十四肽生长抑素的制备方法，其特征在于，采用以下步骤A. 分别制备中间体a、中间体b和中间体c； 中间体aZ-Phe-Phe-Trp-OH中间体b 中间体c在中间体a的制备中，采用DCC及3-(二乙氧基磷酰基)-1，2，3，-苯并三嗪-4-酮作为缩合剂，在中间体b的制备中，采用DCC作为缩合剂；在中间体c的制备中，采用叠氮基磷酸二苯脂作为缩合剂；B. 中间体b，中间体c以叠氮基磷酸二苯脂作为缩合剂进行缩合，得到下述的中间体d中间体dC. 中间体a和中间体d以3-(二乙氧基磷酰基)-1，2，3，-苯并三嗪-4-酮作为缩合剂进行缩合得到十四肽生长抑素。
2. 根据权利要求1所述的十四肽生长抑素的制备方法，其特征在 于，采用以下方法制备中间体a:采用DMF,DCC及3- (二乙氧基磷酰 基)-l， 2， 3，-苯并三嗪-4-酮作为縮合剂的条件下，控制反应温度-20 30 °C，反应0.5 8小时，得到中间体a。
3. 根据权利要求1所述的十四肽生长抑素的制备方法，其特征在 于，采用以下方法制备中间体b:采用DCC，乙酸乙酯或氯甲酸苄脂为 溶剂，控制反应温度在0 4(TC，反应0.5 8小时，得到中间体b。
4. 根据权利要求1所述的十四肽生长抑素的制备方法，其特征在 于，采用以下方法制备中间体c:采用DMF， DCM或乙酸乙酯为溶齐iJ， 反应温度在0 30°C，反应0.5 8小时，以下述两种化合物进行縮合反应， 得中间体c。Fmoc-Cys-Ome 化合物1<formula>formula see original document page 4</formula>化合物2 。
5. 根据权利要求1所述的十四肽生长抑素的制备方法，其特征在于，采用以下方法制备中间体d:中间体b和中间体C以叠氮基磷酸二苯脂作为縮合剂;在DMF, DPPA, 二氧六环和DCM存在的条件下反应， 反应温度为-20 4(TC之间，反应2 40小时，-10~30°0结晶，得中间体d。
6. 根据权利要求1所述的十四肽生长抑素的制备方法，其特征在 于所述的步骤C中，中间体a和中间体d以3-(二乙氧基磷酰基)-l， 2， 3，-苯并三嗪-4-酮或叠氮基磷酸二苯脂作为縮合剂，在DMF、 二氧 六环、乙醚、DCM、 DFA、 40%溴化氢乙酸溶液或哌啶存在的条件下， 在-20 3(TC反应，用双氧水或空气氧化，经真空干燥除去反应体系中的 溶剂，得十四肽生长抑素。
全文摘要
本发明公开了一种十四肽生长抑素的制备方法。采用DCC及3-(二乙氧基磷酰基)-1，2，3，-苯并三嗪-4-酮作为缩合剂制备中间体a，采用DCC为缩合剂制备中间体b；中间体b和中间体c以叠氮基磷酸二苯脂作为缩合剂进行缩合，得到中间体d；中间体a和中间体d缩合得到十四肽生长抑素。本发明具有肽链接完全、操作条件温和、纯化简单易行、收率高、目标产物十四肽生长抑素光学活性高及化学纯度高的优点。按酪氨酸甲酯计，目标产物十四肽生长抑素收率为8～10％。
文档编号A61P1/18GK101508724SQ20091013120
公开日2009年8月19日 申请日期2009年4月9日 优先权日2009年4月9日
发明者留 刘, 纯 刘, 吴永平, 王思回 申请人:吴永平