专利名称：新城疫病毒的用途和制备方法
技术领域：
本发明涉及新城疫病毒用于防治人类疾病的技术领域。
新城疫病毒是副粘液病毒属的代表种，是禽类的一种高度感染的致死性疾病。可侵袭呼吸道胃肠道以及中枢神经系统。在感染禽类的血液、脑、内脏、粪便和口鼻分泌物中可发现本病毒。目前各国都采用预防接种作为控制新城疫毒的主要措施。预防接种的疫苗有弱毒活疫苗和无活疫苗，弱毒活疫苗有弱毒疫苗和中等毒疫苗两类。
本发明的目的是，将新城疫病毒疫苗用于防治人类疾病，使其产生较好的治疗效果，并对人类无害。
本发明采用禽类用的新城疫病毒疫苗，防止人类疾病，采用弱毒活疫苗防治呼吸道病毒感染、病毒性角膜炎、慢性活动性肝炎、巨细胞病毒感染、乙型脑炎、肺炎、腹泻、流行性出血热、成骨肉瘤、肺腺癌、鼻咽癌、肝癌、食道癌、白血病、爱滋病、免疫调节性疾病。
本发明采用的弱毒活疫苗是弱毒株、F株(III系苗)，B1株(II系苗)、Sota株(IV系苗)、中等毒疫苗毒株为I系苗，Rakiu株，Komorov株，Rlertfordshire株(Herts33)和Mukteswer株。
本发明经研究试验得新城疫病毒是干扰素诱异剂、进入机体后，可诱导机体产生干扰素，干扰素作为一种细胞因子具有广泛的生物学功能，如抗病毒、抗肿瘤、免疫调节、调控细胞增殖和分化。当新城疫病毒进入机体就可诱导机体产生干扰素。即内源性干扰素(白动免疫性)。这种自身产生的干扰素比特异性抗体产生要早，持久，有阻止疾病发生的作用。干扰素的主要作用就是对巨噬细胞和自然杀伤细胞的功能有促进作用，可调动机体免疫系统杀伤肿瘤细胞，所以是一种增强免疫、抗肿瘤、抗病毒的较理想制剂。
本发明用于防治人类疾病的新城疫病毒疫苗的制备方法可简述为先取鸡胚，然后进行鸡胚接种之后，收获尿液，再做血凝试验和效力试验，血凝效价要求为10-11，当收集尿液血凝效价达不到10-11者，需要继续传代，使血凝效价提高，或通过超速离心浓缩后，使其效价提高，提取疫苗后，做毒株抗原性试验，免疫原性试验、浓缩、纯化病毒后，抽样进行无菌试验达到通常试验要求后保存。
本发明用于防治人类疾病的新城疫病毒疫苗的制备方法可详述为一、鸡胚购买SPF受精鸡蛋38℃-39℃孵育9-10天，SPF无特定病原鸡(无细菌、霉菌、支原体及外源病毒)。
二、鸡胚接种1、取孵育9-10天鸡胚，在检卵灯上划出气室境界并在绒毛尿囊膜发育良好区和气室端的蛋壳上标记，用碘酒精消毒，锯一注射用小孔。(勿伤及卵膜)。
2、将鸡蛋固定于蛋架上，用无菌注射器抽取毒株尿液，由注射小孔刺入0.5-1cm，注射0.1-0.2ml。
3、注射毕用胶布沾95％酒精火烧消毒或石腊封注射孔。
4、鸡卵放入36℃温箱中孵育，每日检视1-2次，孵育48小时内将死鸡胚丢弃。
三、收获尿液严格无菌操作1、接种孵育48-120小时存活的鸡胚，置2-8℃冷却4-24小时，将气室端用碘酒精消毒。
2、击破气室之卵壳，沿气室周围剪除卵壳，撕去壳膜与绒毛尿囊膜，用吸管吸出尿液置无菌瓶中。
四、血凝试验取收集尿液0、1ml做血凝试验，血凝效价≥1∶160为感染。
五、效力试验计算半数感染量ID50无菌生理盐水10倍稀释尿液分三个浓度尿囊腔接种10日令鸡胚各5只，各只鸡胚接种新收集之尿液0、1ml36℃孵育48-120小时，取出尿液做血凝试验，血凝效价≥1∶160为感染。
本发明治疗用血凝效价要求10-11，凡收集尿液血凝效价达不到10-11者需要继续传代，使血凝效价提高，或通过超速离心浓缩后，使其效价提高，提取疫苗完毕，然后再进行以下操作。
六、毒株之抗原性免疫大白鼠后采血取血清做血凝抑制试验。
七、免疫原性接种小白鼠后采血进行细胞免疫试验。
八、浓缩、纯化病毒将收集之尿液效价在10-11者，经差速离心即低速、中速、超速、最后取沉淀物(病毒)加入适量无菌生理盐水，计算浓缩倍数。
九、保存-30℃以下保存或按需要生理盐水稀释分装后-30℃保存备用，或稀释液用1640(内有酚红指示剂)稀释分装。
口服滴鼻用可用10-11尿液分装冰冻保存。
肌肉注射用严格无菌操作将浓缩之病毒按需要用无菌生理盐水分装安瓿冰冻保存或冻干保存。
如用死疫苗，应将病毒尿液或浓缩的病毒采用紫外线或甲醛灭活。
十、抽样进行无菌试验，达到通常的试验要求后保存。
采用本发明的制备方法，将新城疫病毒苗用于防治人类疾病，已初步做了癌症患者的临床，抑制病情的发展效果较好，未有任何不良反应。同时动物试验，小白鼠100多只肌肉注射，静脉注射，小白鼠无反应和致死现象。
1、免疫调节及生物反应调节剂的动物试验
①巨噬细胞吞噬红血球试验计算吞噬百分率和吞噬指数。
②天然杀伤细胞(NK)测定。
③淋巴细胞转化试验(T细胞试验)。
④细胞激活因子的测定——干扰素测定。
⑤其他细胞免疫测定方法——LAK细胞活性测定。
⑥影响特异性体液免疫功能的实验方法。
2、体内抗癌试验肉瘤180试验检测肿瘤抑制率已初步得出结果；腹水癌及白血病动物试验检测生命延长率。
3、鸡胚尿液的生化变化4、动物用药后的生理变化、体温、脉搏、心电图、血压等。
5、致畸试验用药后母鼠15只均已繁殖一代，无畸形。
经初步试验和临床应用得出新城疫病毒疫苗用于防治本发明所述的人类疾病，无害，效果较好，与现在临床上使用的干扰素相比，具有制备简单，价格低廉的优点，与现有治疗本发明所述防治的疾病所用药物相比，疗效有显著提高。
权利要求
1.用于防治人类疾病的新城疫病毒的用途，其特征在于用于防治呼吸道病毒感染、病毒性角膜炎、慢性活动性肝炎、巨细胞病毒感染、乙型脑炎、肺炎、腹泻、流行性出血热、成骨肉瘤、肺腺癌、鼻咽癌、肝癌、食道癌、白血病、爱滋病、免疫调节性疾病。
2.用于防治人类疾病的新城疫病毒的制备方法，先取鸡胚，然后进行鸡胚接种之后，收获尿液，再做血凝试验和效力试验，其特征在于血凝效价要求为10-11，当收集尿液血凝效价达不到10-11者，需要继续传代，使血凝效价提高，或通过超速离心浓缩后，使其效价提高，提取疫苗后，做毒株抗原性试验，免疫原性试验，浓缩、纯化病毒后，抽样进行无菌试验，达到通常试验要求后保存。
全文摘要
本发明涉及新城疫病毒用于防治人类疾病的技术领域。本发明采用禽类用的新城疫病毒疫苗，防治呼吸道病毒感染、病毒性角膜炎、慢性活动性肝炎、巨细胞病毒感染、乙型脑炎、肺炎、腹泻、流行性出血热、成骨肉瘤、肺腺癌、鼻咽癌、肝癌、食道癌等。经初步试验和临床应用得知，治疗效果较好、无害。与现在临床上使用的干扰素相比，具有制备简单、价格低廉的优点。
文档编号A61K39/155GK1138485SQ9511049
公开日1996年12月25日 申请日期1995年6月16日 优先权日1995年6月16日
发明者秦民德, 董仲甫, 郭文茂, 郭恒 申请人:秦民德