专利名称：一种神香草总黄酮提取物及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及中药材的提取，该方法尤其适用于神香草总黄酮提取及制备。
背景技术：
神香草是维吾尔医常用药材，维吾尔名为“祖发”，是唇形科植物硬尖神香草(Hyssopus cuspidatus Boriss.)或同属植物欧神香草(Hyssopus officinalis L.)的干燥全草，收载于《中华人民共和国卫生部药品标准维吾尔药分册》(乌鲁木齐新疆科技卫生出版社，1999年)、《中华本草 维吾尔药卷》(上海上海科学技术出版社，2005年)、《维吾尔药志》(上册)(乌鲁木齐新疆科技卫生出版社，1999年)。在《中华人民共和国卫生部药品标准维吾尔药分册》中记载神香草成熟及清除异常粘液质，促进机体自然随和，止咳化痰，平喘利肺，用于胸肺粘稠性顽疾，头痛胸痛，气喘气短，胸肋痛疼，久咳痰多。 在《中华本草 维吾尔药卷》中记载神香草生干生热，温肺平喘，祛寒止咳，燥湿祛痰，发汗解毒，消炎退肿，主治湿寒性和粘液质性呼吸器官疾病，如寒性哮喘，咳嗽感冒，湿性痰多，乃孜来毒液流窜胸肺，胸膜炎，气管炎，肺炎及水肿。作为一种重要的芳香植物，据文献报道，神香草全草含挥发油、黄酮类、多糖类等化学成分,具有抑制血糖升高、止咳、祛痰、平喘、抑菌、解痉、抗氧化等作用，前期研究也发现，神香草乙酸乙酯萃取部位具有抗炎、平喘、止咳、祛痰作用，明显抑制哮喘大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数及淋巴细胞(Ly)、嗜酸性粒细胞(Eos)、中性粒细胞(Neu)的百分比、内皮素-I (ET-I)水平及血清中的内皮素-I(ET-1)、白介素-2 (IL-2)、白介素-6 (IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-a )水平(P < 0.05)，并以上作用呈现出剂量依赖性趋势(P < 0. 05)。由此研究认为，神香草乙酸乙酯萃取部位能通过抑制IL-2、IL-6、ET-UTNF-a、Ly、Eos、Neu分泌，减轻哮喘炎症反应。至今，尚未发现有关神香草总黄酮的制备方法、药理活性及其药物用途方面的文献。本发明采用乙醇提取、大孔吸附树脂富集纯化方法，制备的神香草总黄酮含量不低于65%，制备的神香草总黄酮具有抗炎、止咳、祛痰、平喘作用，该制备方法安全简便，可重复性好，无环境污染，适用于规模化生产，具有良好的市场销售前景。

发明内容
本发明的目的在于提供神香草总黄酮提取物具有抗炎、祛痰、止咳和平喘作用，可作为制备治疗感冒、肺炎、支气管炎、哮喘的药物原始材料的用途。本发明目的是这样实现的一种神香草总黄酮提取物及其制备方法和用途，分步骤实施步骤I取干燥、粉碎的神香草，置于IOL圆底烧瓶中，采用体积百分比浓度为50-95%乙醇/水进行提取，乙醇/水是神香草的5-15倍重量，水浴加热至40-80°C，回流提取1-5次，时间为l_3h，提取后的滤液经减压浓缩至0.25-1. Og生药/mL，其压力为-0. 08MPa，温度30-50°C，得神香草提取液备用；步骤2将步骤I神香草提取液，加1-3倍量水稀释、静置12_24h，在-0. 08MPa真空抽虑压力下抽滤，除去不溶性物质,滤液经浓缩至0. 25-1. Og生药/mL时备用；步骤3将步骤2神香草提取液与大孔吸附树脂以1:1-1:5重量比实施吸附，树脂柱径高比为1:1-1:6，上样液黄酮浓度为1.0-5. Omg/mL，上样流速为2_6BV/h ;吸附后先用水洗脱大孔吸附树脂2-8BV，洗脱流速2-6BV/h ;在将水洗脱液弃去后，用体积百分比浓度为30-95%乙醇/水洗脱2-10BV，流速为2-6BV/h ;收集乙醇洗脱液，经RE52-AA旋转蒸发仪浓缩，其压力-0. 08MPa,温度30-35°C，再经DZF-6050B真空干燥箱干燥，经DFY-500摇式高速万能粉粹机粉碎至粉末，即得神香草总黄酮；其中选用的神香草为唇形科植物硬尖神香草或同属植物欧神香草的干燥全草，经粉碎过20目筛后使用；其中使用的大孔吸附树脂为AB-8或D-IOl或HPD-300或HPD-600树脂。所述总黄酮制备方法，所得神香草总黄酮含量不低于65%。
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所述所得神香草总黄酮具有抗炎、止咳、祛痰、平喘作用。所述所得神香草总黄酮用于制备治疗感冒、肺炎、支气管炎、哮喘的药物。本发明选用神香草为唇形科植物硬尖神香草(Hyssopus cuspidatus Boriss.)或同属植物欧神香草(Hyssopus officinalis L.)的干燥全草,经粉碎,采用浓度为50 80%乙醇/水进行提取，采用50 80%乙醇/水洗脱2 10BV，采用非极性或弱极性大孔树脂，获取神香草总黄酮含量不低于65%,所述的神香草总黄酮可作为制备治疗感冒、肺炎、支气管炎、哮喘的药物的原始材料，提取方法安全简便，可重复性好，无环境污染，适用于规模化生产，彰显技术进步。
具体实施例方式本发明结合实施例作进一步说明。实施例I选用的神香草药材为干燥全草，经粉碎过20目筛后使用；将过筛的神香草置于IOL圆底烧瓶中，采用体积百分比浓度为60%乙醇/水进行提取，乙醇/水是神香草药材的6倍重量，水浴加热至70°C，回流提取I次，提取时间为2h，提取液过滤，滤液减压浓缩至
I.Og生药/mL，得到神香草提取液；将上样神香草提取液，加I倍量水稀释、静置12h，抽滤除去不溶性物质，滤液浓缩至I. Og生药/mL ;将中样神香草提取液，经HPD-300大孔吸附树脂进行吸附，神香草与大孔吸附树脂重量比为1:1，上样液黄酮浓度为1.28mg/mL，上样流速为3BV/h，树脂柱径高比为1:4 ;吸附后先用水洗脱大孔吸附树脂4BV，洗脱流速4BV/h，水洗脱液弃去；然后用体积百分比浓度为60%乙醇/水洗脱6BV，流速为3BV/h，收集乙醇洗脱液，经RE52-AA旋转蒸发仪浓缩，其压力-0.08MPa，温度35° C，再经DZF-6050B真空干燥箱干燥，经DFY-500摇式高速万能粉粹机粉碎至粉末，即得神香草总黄酮，其总黄酮含量为65. 6%。实施例2选用的神香草药材为干燥全草，经粉碎过20目筛后使用；将过筛的神香草置于IOL圆底烧瓶中，采用体积百分比浓度为70%乙醇/水进行提取，乙醇/水是神香草药材的8倍重量，水浴加热至80°C，回流提取3次，提取时间为I小时，提取液过滤，滤液减压浓缩至0. 25g生药/mL，得到神香草提取液；将上样神香草提取液，加3倍量水稀释、静置18h，抽滤除去不溶性物质，滤液浓缩至0. 25g生药/mL ;将中样神香草提取液，经AB-8大孔吸附树脂进行吸附，神香草与大孔吸附树脂重量比为1:4，上样液黄酮浓度为2. 56mg/mL，上样流速为4BV/h，树脂柱径高比为1:5 ;吸附后先用水洗脱大孔吸附树脂5BV，洗脱流速5BV/h，水洗脱液弃去；然后用体积百分比浓度为70%乙醇/水洗脱8BV，流速为4BV/h，收集乙醇洗脱液，经RE52-AA旋转蒸发仪浓缩，其压力-0. 08MPa,温度32° C，再经DZF-6050B真空干燥箱干燥，，经DFY-500摇式高速万能粉粹机粉碎至粉末，即得神香草总黄酮，其总黄酮含量为 66. 7%o实施例3选用的神香草药材为干燥全草，经粉碎过20目筛后使用；将过筛的神香草置于IOL圆底烧瓶中，采用体积百分比浓度为75%乙醇/水进行提取，乙醇/水是神香草药材的10倍重量，水浴加热至60°C，回流提取2次，提取时间为3小时，提取液过滤，滤液减压浓缩至0. 5g生药/mL，得到神香草提取液；将上样神香草提取液，加2倍量水稀释、静置24h，抽 滤除去不溶性物质，滤液浓缩至0. 5g生药/mL ;将中样神香草提取液，经HPD-600大孔吸附树脂进行吸附，神香草与大孔吸附树脂重量比为1:6，上样液黄酮浓度为3. 84mg/mL，上样流速为5BV/h，树脂柱径高比为1:6 ;吸附后先用水洗脱大孔吸附树脂6BV，洗脱流速6BV/h，水洗脱液弃去；然后用体积百分比浓度为75%乙醇/水洗脱9BV，流速为5BV/h，收集乙醇洗脱液，经RE52-AA旋转蒸发仪浓缩，其压力-0. 08MPa,温度30° C，再经DZF-6050B真空干燥箱干燥，，经DFY-500摇式高速万能粉粹机粉碎至粉末，即得神香草总黄酮，所得的神香草总黄酮含量为65. 2%。本方法选用的AB-8、D-IOI大孔吸附树脂由南开大学化工厂生产；HDP_300、HDP-600由沧州宝恩化工有限公司提供；DTC-221真空抽虑装置由日本VLVAC公司提供；RE52-AA旋转蒸发仪由上海本波仪器有限公司提供；DZF-6050B真空干燥箱由上海齐欣科学仪器有限公司提供；DFY-500摇式高速万能粉粹机由温岭市林大机械有限公司提供。本发明方法获取神香草总黄酮的药效学实验验证，具有良好的抗炎、止咳、祛痰、平喘作用，能明显降低哮喘模型大鼠肺泡灌洗液(BLAF)TFG-P I水平、细胞总数及Ly、Eos、Neu百分率，明显改善肺组织病理学改变。I)神香草总黄酮对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响(抗炎作用)取昆明种小鼠50只，体重(20 士 2)g，雌雄各半，随机分成5组空白对照组(0. 9%生理盐水)，阳性对照组(急支糖浆,5. Og/kg)、神香草总黄酮高剂量组(0. 8g/kg)、神香草总黄酮中剂量组(0. 4g/kg)、神香草总黄酮低剂量组(0. 2g/kg);灌胃给药I次/日，连续7d，灌胃体积均为0. 2mL/10g，末次给药后30min，各组小鼠均在小鼠右耳前、后面均匀涂二甲苯20 y L致炎，Ih后颈椎脱白处死小鼠，沿耳廓基线剪下两耳，用直径9_打孔器分别在两耳的同一部位打下圆耳片，精密称重，以左右耳重量差为肿胀度，以此判断神香草总黄酮对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响；耳肿胀度(mg)=右耳片重一左耳片重；肿胀抑制率(％)=(空白对照组平均肿胀度一给药组平均肿胀度)/空白对照组平均肿胀度X 100% ；实验结果，致炎后各组小鼠右耳立刻出现高度红肿现象，阳性对照组和三个不同剂量的神香草总黄酮给药组对二甲苯所致的小鼠耳肿胀均有明显抑制作用(P〈0. 05)，三个不同剂量的神香草总黄酮给药组肿胀抑制率呈明显的剂量依赖关系，抑制作用随剂量的增加而增加(p〈0. 05)，见表I。表I神香草总黄酮对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响( + * )
权利要求
1.一种神香草总黄酮提取物及其制备方法和用途，其特征在于分步骤实施 步骤I取干燥、粉碎的神香草，置于IOL圆底烧瓶中，采用体积百分比浓度为50-95%乙醇/水进行提取，乙醇/水是神香草的5-15倍重量，水浴加热至40-80°C，回流提取1-5次，时间为l_3h，提取后的滤液经减压浓缩至0. 25-1. Og生药/mL，其压力为-0. 08MPa，温度30-50°C，得神香草提取液备用； 步骤2将步骤I神香草提取液，加1-3倍量水稀释、静置12-24h，在-0. 08MPa真空抽虑压力下抽滤，除去不溶性物质,滤液经浓缩至0. 25-1. Og生药/mL时备用； 步骤3将步骤2神香草提取液与大孔吸附树脂以1:1-1:5重量比实施吸附，树脂柱径高比为1:1-1:6，上样液黄酮浓度为I. 0-5. Omg/mL，上样流速为2_6BV/h ;吸附后先用水洗脱大孔吸附树脂2-8BV，洗脱流速2-6BV/h ;在将水洗脱液弃去后，用体积百分比浓度为30-95%乙醇/水洗脱2-10BV，流速为2-6BV/h ;收集乙醇洗脱液，经RE52-AA旋转蒸发仪浓 缩，其压力-0. 08MPa,温度30-35°C，再经DZF-6050B真空干燥箱干燥，经DFY-500摇式高速万能粉粹机粉碎至粉末，即得神香草总黄酮； 其中选用的神香草为唇形科植物硬尖神香草或同属植物欧神香草的干燥全草，经粉碎过20目筛后使用； 其中使用的大孔吸附树脂为AB-8或D-IOl或HPD-300或HPD-600树脂。
2.根据权利要求I所述总黄酮制备方法，其特征在于所得神香草总黄酮含量不低于65%。
3.根据权利要求I所述总黄酮用途，其特征在于所得神香草总黄酮具有抗炎、止咳、祛痰、平喘作用。
4.根据权利要求I所述总黄酮用途，其特征在于所得神香草总黄酮用于制备治疗感冒、肺炎、支气管炎、哮喘的药物。
全文摘要
本发明提供了一种神香草总黄酮提取物及其制备方法和用途，它是将维吾尔药神香草全草经含水乙醇提取，再经大孔树脂富集得到神香草总黄酮，其神香草总黄酮提取物中总黄酮含量不低于65%。本方法提供的神香草总黄酮具有抗炎、止咳、祛痰、平喘等作用，以神香草总黄酮为原料，添加不同药物赋形剂制备的制剂可以作为治疗感冒、肺炎、支气管炎、哮喘的药物。本制备方法安全简便，可重复性好，无环境污染，适用于规模化生产。
文档编号A61P29/00GK102961439SQ20121039911
公开日2013年3月13日 申请日期2012年10月18日 优先权日2012年10月18日
发明者阿不都热依木·玉苏甫, 哈木拉提·吾甫尔, 麦合苏木·艾克木, 安尼瓦尔·托乎提 申请人:新疆医科大学