专利名称：一种用于治疗耳聋耳鸣的响铃草提取物、制备方法及应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种用于治疗耳聋耳鸣的中药提取物，更具体的说涉及一种用于治疗耳聋耳鸣的响铃草提取物、制备方法及应用。
背景技术：
响铃草是四川省广安地区民间草药，药用历史悠久，性味微酸、寒，归肺、肝、肾经，主要用于治疗耳聋耳鸣，肾虚及疗毒恶疮等，疗效确切；经我们鉴定响铃草为豆科猪屎豆属植物假地蓝的全草或带根全草。主产于云南、四川、贵州等地。响铃草始载于《滇南本草》“敛肺气，止咳，消痰，定喘。”《滇南本草图说》“治石淋内结，捣烂敷疮。”《本草便方》“补中益气，疗耳鸣，头目眩晕，崩淋。又泻火清热，平肝风，消肿痛。”《分类草药性》“(治)耳聋肾虚，补脾肾。”《四川中药志》“补中益气，治耳聋耳鸣，头目眩晕，肾亏遗精及妇女干血疥。”中药辞海第二卷中记载其功效主要为养肝滋肾，止咳平喘，利水通淋， 调经；主治头晕目眩，耳聋耳鸣，肾炎，肝炎，支气管炎，哮喘，膀耽炎，扁桃体炎，腮腺炎，淋巴结炎，月经不调，白带，疗毒，恶疮。民间临床大量应用治疗耳聋耳鸣，肾虚及疗毒恶疮等。现代对响铃草末见研究报道，有关于同属植物猪屎豆的研究资料显示该属植物主要含有生物碱和黄酮类成分，有-定的抗肿瘤活性。耳聋耳鸣是常见病和多发病，患者中57. 7% 分布于老年人群，近年来，儿童及青少年耳聋，尤其儿童因病毒感染及氨基糖普类抗生素的应用，使发病率更有增加的趋势，自身免疫性耳聋亦受到国内外医学界的重视。耳聋耳鸣为-类多发的疑难病，耳聋耳鸣药物治疗历来是世界医学界的难题。中医有“肾主耳”，“肾虚则耳聋”的理论，以补肾填精，活血通窍，延缓衰老为治则进行药物预防和治疗是-条可行的途径。因此，治疗耳聋耳鸣的中药新药具有标本兼治的优势和特点。但是，治疗耳聋的中西药物极少，几无新药上市，满足不了临床患者的需求，因此耳聋耳鸣药物的开发具有现实性和前瞻性产品投放市场后，可获得重大的经济效益和社会效益。响铃草养肝滋肾等作用， 在民间广泛应用治疗各种原因引起的耳聋耳鸣以及疗毒恶疮等己有上百年历史，有极其显著的疗效141，起到标本兼治之功，据笔者初步统计，在报道的治疗耳聋耳鸣的单方验方中含有响铃草的达50%之多，且有多是以单味药响铃草来治疗，但大多是煎汤服用，未形成有服用方便、疗效确切、有市场竞争力的产品。

发明内容
为解决上述问题本发明提供了一种用于治疗耳聋耳鸣的响铃草提取物的制备方法，包括以下步骤
1)将响铃草药材粉碎，用药材3倍体积石油醚或汽油回流3次，过滤得到响铃草的固体残渣，挥去有固体残渣的有机溶剂，得到脱脂响铃草；
2)将脱脂响铃草加入乙醇提取溶剂浸泡超声预处理，乙醇提取溶剂温浸提取3次；
3)过滤合并步骤2)中温浸提取液，回收至无乙醇，静置冷却，离心除去固体杂质，得到响铃草提取液；4)将响铃草提取液上聚酰胺柱进行分离纯化，得到用于治疗耳聋耳鸣的响铃草提取物。步骤2)所述超声提取的条件为频率20KHz 25HKz，每次10秒，间隔10秒，超声总时长20分钟。步骤2)所述的温浸条件为提取温度55 65°C，固液比为1 2，乙醇浓度为40 60%。步骤4)所述的聚酰胺柱分离条件为聚酰胺柱黄酮最大吸附量为20. 15mg/g,上样流速3BV/h，乙醇洗脱的浓度依次为30%、40%、50%。上述方法制备得到用于治疗耳聋耳鸣的响铃草提取物，其中，响铃草提取物含有黄酮类、黄酮醇类、二氢黄酮类、二氢黄酮醇类、异黄酮类、花色素类等黄酮化合物及其与糖类形成的苷。所述的用于治疗耳聋耳鸣的响铃草提取物在制备治疗耳聋耳鸣药物中的应用。本发明的有益技术效果是药理实验证明本发明提供的治疗耳聋耳鸣的响铃草提取物能抑制硫酸庆大霉素进一步造成的听力下降，能预防庆大霉素注射后引起的动物听力下降作用；在临床运用中，对于轻度耳聋的有效率为100%，对于中、重度耳聋的有效率也高于 50%O
具体实施例方式实施例1响铃草提取物的制备
将响铃草干燥粉碎过10目筛，每份称取干燥的响铃草10 g，加入-定量的提取溶剂，进行超声波预处理。超声波处理条件为频率20KHZ 25KHZ，功率100W，每次10s，间隔10s， 超声波输出总时间20 min。超声波处理后，以-定体积浓度的乙醇为溶剂进行温浸提取。以乙醇浓度、固液比、提取温度、提取时间、提取次数为考察因素，做单因素试验。根据单因素试验结果，选择乙醇浓度、提取时间、提取温度3个因素，进行L9(34)的正交试验，对响铃草总黄酮提取条件进行优化。选取乙醇浓度30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%，固液比 1:30，提取时间 2 h，提取温度60°C，提取次数1次进行提取。随着乙醇浓度的升高，总黄酮提取率也逐渐增大，当乙醇浓度达到50%时，提取率达到最大，为1.78%，随着乙醇浓度的继续增加，提取率开始下降，如表1所示。表1乙醇浓度对总黄酮转移率的影响
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所以，选择正交试验中乙醇浓度的3个水平为40%，50%，60%。选取固液比1:2，1:3，1:4，1:5，1:6 (g/mL)，乙醇浓度50%，提取时间2 h，提取温度60°C，提取次数1次进行提取。随着固液比的增加，提取率变化不大。如果固液比过大，会给后续的过滤、浓缩等工作带来不便，从节约溶剂的角度考虑，确定固液比为l:2(g/ mL) ο选取提取时间0. 5、1、1.5、2、2. 5、3 h，乙醇浓度50%，固液比1 2 (g/mL)，提取温度60°C，提取次数1次进行提取，如表2所示。表2提取固液比对总黄酮转移率的影响
权利要求
1.一种用于治疗耳聋耳鸣的响铃草提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤1)将响铃草药材粉碎，用药材3倍体积石油醚或汽油回流3次，过滤得到响铃草的固体残渣，挥去有固体残渣的有机溶剂，得到脱脂响铃草；2)将脱脂响铃草加入乙醇提取溶剂浸泡超声预处理，乙醇提取溶剂温浸提取3次；3)过滤合并步骤2)中温浸提取液，回收至无乙醇，静置冷却，离心除去固体杂质，得到响铃草提取液；4)将响铃草提取液上聚酰胺柱进行分离纯化，得到用于治疗耳聋耳鸣的响铃草提取物。
2.根据权利要求1所述的用于治疗耳聋耳鸣的响铃草提取物的制备方法，其特征在于步骤2)所述超声提取的条件为频率20KHz 25HKz，每次10秒，间隔10秒，超声总时长20分钟。
3.根据权利要求1所述的用于治疗耳聋耳鸣的响铃草提取物的制备方法，其特征在于步骤2)所述的温浸条件为提取温度55 65°C，固液比为1:2，乙醇浓度为40 60%。
4.根据权利要求1所述的用于治疗耳聋耳鸣的响铃草提取物的制备方法，其特征在于步骤4)所述的聚酰胺柱分离条件为聚酰胺柱黄酮最大吸附量为20. 15mg/g,上样流速!3BV/h，乙醇洗脱的浓度依次为30%、40%、50%。
5.一种用于治疗耳聋耳鸣的响铃草提取物，其特征在于采用权利要求1、2、3、4所述方法制备得到用于治疗耳聋耳鸣的响铃草提取物，其中，响铃草提取物含有黄酮类、黄酮醇类、二氢黄酮类、二氢黄酮醇类、异黄酮类、花色素类等黄酮化合物及其与糖类形成的苷。
6.根据权利要求1-5之一所述的用于治疗耳聋耳鸣的响铃草提取物在制备治疗耳聋耳鸣药物中的应用。
全文摘要
本发明提供了一种用于治疗耳聋耳鸣的响铃草提取物、制备方法及应用；药理实验证明本发明提供的治疗耳聋耳鸣的响铃草提取物能抑制硫酸庆大霉素进一步造成的听力下降，能预防庆大霉素注射后引起的动物听力下降作用；在临床运用中，对于轻度耳聋的有效率为100%，对于中、重度耳聋的有效率也高于50%。
文档编号A61K36/48GK102335226SQ201110328268
公开日2012年2月1日 申请日期2011年10月26日 优先权日2011年10月26日
发明者刘筱琴, 唐倩, 张雪, 曾雪, 杨元娟, 杨宗发, 杨宪, 杨水平, 陈竹 申请人:重庆医药高等专科学校