专利名称：核苷酸类似物组合物及制备方法
技术领域：
本发明涉及一类具有治疗预防病毒性疾病、肝炎的化合物，尤其涉及一种核苷酸类似物组合物及制备方法背景技术：
膦酰基甲氧基核苷酸类似物是已知物质。用于多种病毒的感染治疗、预防，参见WO9904774、CN1264387A、CN1347695A，此类物质可与有机或无机酸反应而成各类具有不同性质的组合物，从已公开的文献看出，这类物质主要用于治疗、预防病毒感染，而无保肝、护肝作用，对于病毒性感染患者来说，往往既需要抗病毒治疗，又需要保肝护肝治疗，因而，病人需要同时服用具两种功能的药物，并且，这类药物还有熔点低，易吸湿，固态稳定不太好的缺点，因而开发新一类组合物、增加新的品种、完善和提高其各种性能，是我们医药界当务之急。

发明内容
为了克服上述物质的缺点，增加新的品种，本发明提供一种稳定性好，具有抗病毒、保肝护肝双重作用的核苷酸类似物组合物及制备方法。
本发明的技术方案是以下述方式实现的一种核苷酸类似物组合物，其结构为 R是-CH2-O-C(O)-C(CH3)3或-CH2-O-C(O)-O-CH(CH3)2，R1是-H或-CH3，X是C，当R1为-CH3时，X是手性碳原子。
本发明包括各异构体、对映体混合物或单独的异构体、对映体。也包括各种溶剂化合物。
制备本发明组合物的反应式为 其中II式为腺嘌呤衍生物、III式为齐墩果酸，R是-CH2-O-C(O)-C(CH3)3或-CH2-O-C(O)-O-CH(CH3)2，R1是-H或-CH3，X是C，当R1为-CH3时，X是手性碳原子。
本反应一般在30-50℃之间进行，溶媒为氯仿，也可选择丙酮、异丙醇、乙醇、甲醇。II和III式以等摩尔比例投料。在30-50℃搅拌20-40分钟，减压浓缩，干燥即得本发明化合物。
组合物为固体。
当R1为甲基时，其中含有手性中心碳原子被拆分的化合物，或者富含其中一个异构体。
该组合物含有组合物和可接受的载体，把治疗上有效量的组合物口服给药至感染病毒的患者，也可给药至肝炎患者。齐墩果酸被溶解在氯仿中。本发明的化合物可与填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂，表面活性剂、赋型剂相混合，制成适于口服或非肠胃给药形式。优选的剂量形式是片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、溶液剂。常用的辅料有预胶化淀粉、交联羧甲基纤维素钠、乳糖一水合物、硬酯酸镁、滑石粉、水、乙醇，食用香料。制剂的制备方法是制药技术人员容易解决的。根据现有技术，临床医师可以简单地直接地确定本化合物的正确使用剂量。
该组合物可以是片剂的组合物，片剂含有治疗量的9-[2-[[双(特戊酰氧基)甲氧基]膦酰基]甲氧基]乙基]腺嘌呤·齐墩果酸(1∶1)；片剂含有治疗量的9-[2-(R)-[[双[[(异丙氧基羰基)氧基]甲氧基]膦酰基]甲氧基]丙基]腺嘌呤·齐墩果酸(1∶1)。片剂含有适量的预胶化淀粉、交联羧甲基纤维素钠、乳糖一水合物、硬酯酸镁。
本化合物具有出人意料的优点，熔点高，不易吸湿，固态稳定性好，动物实验证明本组合物既具有抗病毒作用，又具有保肝护肝作用，因而，病人服用同时具有两种功能。
具体实施例方式下面结合实施本发明实施例对本发明作进一步说明。
实施例1取9-[2-[[双(特戊酰氧基)甲氧基]膦酰基]甲氧基]乙基]腺嘌呤1.5g(0.0029mol)于35℃溶于5ml异丙醇，取齐墩果酸1.365g(0.0029mol)加氯仿17ml，加热使溶解，将9-[2-[[双(特戊酰氧基)甲氧基]膦酰基]甲氧基]乙基]腺嘌呤的异丙醇溶液慢慢加入氯仿溶液中，搅拌15分钟，于40-50℃减压蒸出溶剂，取出残留物，在≤50℃，30mmHg柱下干燥至恒重，即得9-[2-[[双(特戊酰氧基)甲氧基]膦酰基]甲氧基]乙基]腺嘌呤·齐墩果酸盐(代号为AD·齐墩果酸盐)。
通过元素分析、红外、NMR谱说明与假设的结构式一致。
熔点未测到元素分析理论值C 62.67H 8.35N 7.33实测值C 62.72H 8.39N 7.28实施例2取9-[2-(R)-[[双[[氧基羰基]氧基]甲氧基]膦酰基]甲氧基]丙基]腺嘌呤1.5g(0.0028mol)溶于5ml异丙醇，取齐墩果酸1.32g(0.0028mol)加氯仿17ml，加热使溶解，将9-[2-(R)-[[双[[氧基羰基]氧基]甲氧基]膦酰基]甲氧基]丙基]腺嘌呤的异丙醇溶液慢慢加入氯仿溶液中，搅拌15分钟，于30-40℃减压蒸出溶剂，取出残留物，在≤50℃，30mmHg柱下干燥至恒重，即得9-[2-(R)-[[双[[氧基羰基]氧基]甲氧基]膦酰基]甲氧基]丙基]腺嘌呤·齐墩果酸盐(代号为TD·齐墩果酸盐)。
通过元素分析、红外、NMR谱说明与假设的结构式一致。
熔点未测到。
元素分析理论值C 60.28H 8.05N 7.18实测值C 60.21H 8.01N 7.16保肝作用实验选用180-220g健康大白鼠，分成三组，每组8只，第一组为正常对照组，第二组为肝损伤模型组，第三组为9-[2-[[双(特戊酰氧基)甲氧基]膦酰基]甲氧基]乙基]腺嘌呤·齐墩果酸治疗组。第二组、第三组于实验的第一、第五两天分别皮下注射纯四氯化碳5ml/Kg，第三组与第一至第六天皮下注射9-[2-[[双(特戊酰氧基)甲氧基]膦酰基]甲氧基]乙基]腺嘌呤·齐墩果酸80mg/Kg(用20％吐温80做成乳剂)，第一组于第一至第六天注射与药物相同体积的2％吐温80生理盐水。于第七天将全部动物断头处死取血测定血清谷、丙转氨酶，并取肝脏作病理切片检查。
结果表明，9-[2-[[双(特戊酰氧基)甲氧基]膦酰基]甲氧基]乙基]腺嘌呤·齐墩果酸80mg/Kg剂量水平能明显地抑制由四氯化碳所引起的血清谷、丙转氨酶活力的升高。第一组SGPT为130.8±21.8ц/100ml，第二组SGPT为431.1±30.6ц/100ml，第三组SGPT为241.3±18.8ц/100ml，第二组与第三组相比较有显著差异(P＜0.01)。
病理切片镜检观察，表明9-[2-[[双(特戊酰氧基)甲氧基]膦酰基]甲氧基]乙基]腺嘌呤·齐墩果酸对肝细胞空泡变性、灾性浸润、坏死等指标有明显的改善作用。
体外抗乙肝病毒实验如下将HBV DNA转染的HePG22.2.15细胞株在10％的胎牛血清培养液中进行培养，分成治疗组和对照组，当生长达到70％培养瓶面积(25cm2)时，改用2％的胎牛血清培养液，并开始对治疗组给予28ug.ml-1的AD·齐墩果酸盐进行治疗，每2天换培养液一次，治疗组补充新的相同浓度的AD·齐墩果酸盐，共培养10天。培养过程中测定两组培养液中HBsAg含量，见下表。
表 培养液中HBsAg的浓度(ug.ml-1) 表中可见，治疗组培养液中的HBsAg在治疗的第2天开始下降，而对照组培养液的HBsAg随培养时间的进展，稳定、持续地增加，统计学处理表明，两组之间在第6天开始有显著性差异(P＜0.05，n＝6)，表明AD·齐墩果酸有抗HBV作用。
权利要求
1.一种核苷酸类似物组合物，其结构式为式I R是-CH2-O-C(O)-C(CH3)3或-CH2-O-C(O)-O-CH(CH3)2，R1是-H或-CH3，X是C。
2.根据权利要求1所述的核苷酸类似物组合物，其特征在于组合物为固体。
3.根据权利要求1所述的核苷酸类似物组合物，其特征在于当R1为甲基时，X是手性碳原子。
4.根据权利要求3的核苷酸类似物组合物，其特征在于当R1为甲基时，其中含有手性中心碳原子被拆分的化合物，或者富含其中一个异构体。
5.根据权利要求2的核苷酸类似物组合物，其特征在于它含有组合物和可接受的载体。
6.一种如权利要求1-5所述的核苷酸类似物组合物，其特征在于是以治疗上有效量的组合物口服给药至感染病毒的患者或给药至肝炎患者。
7.根据权利要求1-5所述的核苷酸类似物组合物的制备方法，其特征在于反应式如下
8.根据权利要求7所述的核苷酸类似物组合物的制备方法，其特征在于II式为腺嘌呤衍生物、III式为齐墩果酸，R是-CH2-O-C(O)-C(CH3)3或-CH2-O-C(O)-O-CH(CH3)2，R1是-H或-CH3，X是C，当R1为-CH3时，X是手性碳原子；本反应一般在30-50℃之间进行，溶媒可选择氯仿、丙酮、异丙醇、乙醇、甲醇；II和III式以等摩尔比例投料；反应在30-50℃进行，减压浓缩，干燥即可。
9.根据权利要求1所述的核苷酸类似物组合物用于片剂药物的制备，片剂含有9-[2-[[双(特戊酰氧基)甲氧基]膦酰基]甲氧基]乙基]腺嘌呤·齐墩果酸或片剂含有9-[2-(R)-[[双[[(异丙氧基羰基)氧基]甲氧基]膦酰基]甲氧基]丙基]腺嘌呤·齐墩果酸。
10.根据权利要求9所述的核苷酸类似物组合物，其特征在于片剂含有治疗量的9-[2-[[双(特戊酰氧基)甲氧基]膦酰基]甲氧基]乙基]腺嘌呤·齐墩果酸或治疗量的9-[2-(R-[[双[[(异丙氧基羰基)氧基]甲氧基]膦酰基]甲氧基]丙基]腺嘌呤·齐墩果酸，适量的预胶化淀粉、交联羧甲基纤维素钠、乳糖一水合物、硬酯酸镁。
全文摘要
本发明提供了膦酰基甲氧基核苷酸类似物组合物的齐墩果酸盐及其制备方法。该组合物用于患者来进行抗病毒治疗、预防，也可用于肝炎治疗。本发明的组合物同时具有抗病毒和保肝护肝双重作用，且熔点高、不易吸湿、固态稳定性好，其合成方法收率高，可用于规模合成制造。
文档编号A61P1/16GK1425680SQ02154160
公开日2003年6月25日 申请日期2002年12月27日 优先权日2002年12月27日
发明者李志海 申请人:李志海