专利名称：含有羟肟酸衍生物的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及适用于保护线粒体基因组和/或线粒体免受损伤或治疗与这种损伤相关联的疾病的药物组合物，所说的组合物含有作为活性成分的下列式(I)的羟肟酸衍生物，或其药学上可接受的酸加成盐
其中R1代表氢或C1-5烷基，R2代表氢、C1-5烷基、C3-8环烷基或可被羟基或苯基取代的苯基；或者R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成5至8元环，该环还可另外含一个或多个氮、氧或硫原子，并且所说的环可与另一个脂环或杂环缩合，优选与苯、萘、喹啉、异喹啉、吡啶或吡唑啉环，如果需要且化学上可能时，氮和/或硫杂原子以氧化物或二氧化物的形式存在，R3代表氢、苯基、萘基或吡啶基，其中所说的基团可以被一个或多个卤原子或C1-4烷氧基取代，Y是氢、羟基、可被氨基取代的C1-24烷氧基、含有1至6个双键的C2-24多烯氧基、C1-25烷酰基、C3-9烯酰基或式R7-COO-的基团，其中R7代表含有1至6个双键的C2-30多烯基，X代表卤素、氨基、C1-4烷氧基，或者X与B形成氧原子，或者X和Y与它们所连接的碳原子以及所说碳原子之间的-NR-O-CH2基团一起形成有下列结构式的环
其中Z代表氧或氮，R代表氢或R与B形成化学键，A是C1-4亚烷基或化学键或有下列结构式的基团
其中R4代表氢、C1-5烷基、C3-8环烷基或可被卤素、C1-4烷氧基或C1-5烷基取代的苯基，R5代表氢、C1-4烷基或苯基，m为0、1或2，n为0、1或2。
匈牙利专利HU-P No.177578和其等同的美国专利No.4,308,399描述了适于治疗糖尿病性血管病的式I化合物中的羟肟酸衍生物。
匈牙利专利HU-P No.207 988和其等同的欧洲专利EP No.417210也描述了式I化合物中具有选择性β阻滞作用，因而适于治疗糖尿病性血管病的羟肟酸卤化物。
匈牙利专利申请No.2385/92(公开号No.T/66350)描述了式I化合物中的另外一些羟肟酸衍生物。这些已知的化合物可用于治疗血管变形，主要是治疗糖尿病。
已知人细胞的核基因组编码大约100,000个基因，但细胞浆中也有小的独立的线粒体基团组(Wellace，D.C.，科学(Science)256，628-632(1992))。
线粒体基因组只编码13个基因(Clayton，D.A.，细胞(Cell)28，693-705(1982))，但如果没有它们细胞就不能消耗氧，因而在线粒体基因组受损时便使细胞处于无氧状态。与核基因组不同的是，线粒体基因组并没有DNA修复能力，而且线粒体DNA(mt DNA)没有组蛋白包绕，从而使线粒体基因比核编码的基因更易受损伤(Tzagoloff，A，Myer，A.M.，生化年鉴(Annu.Rev.Biochem.)，55，249-285(1986))。细胞耗氧的90％以上发生在线粒体内膜中，其中除正常氧化作用外还形成氧游离基(Stryer，L.，生物化学(Biochemistry)，第四版，W.H.Freeman and Co.，New York，1995)。这些游离基很容易改变在其形成处附近的线粒体DNA。例如局部缺血后的再氧化(reoxigenation)期间，反应性氧游离基的形成显著增加，这种游离基浓度增加会导致对线粒体DNA的明显地和不可逆地损伤(Marklund，S.L.，J.Mol.Cell.Cardiol.20(增刊II)，23-30(1988))。即使在正常环境下，游离基也可对mtDNA造成小的但累加的损伤。因此可以理解到，对mtDNA的损伤将随年令增大而增加(Wellace，DC.，生化年鉴，61，1175-1212(1992))，但这种损伤还因个体而异，而且可在年长者体内造成心肌病和神经退化性疾病(Cortopassi，G.A.，Arndeim，N.，核酸研究(NucleicAcid Res.)，18，6027-6033(1990))。
对线粒体基因组的损伤可通过对细胞能量代谢的损害引起例如肌病(Luft，R.，美国科学院学报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)，91，8731-8738(1994))，扩张性或肥厚性心肌病(Ozawa，T.等，生物化学和生物物理学研究通讯(Biochem.Biophys.Res.Commun.)，170，830-836(1990))等严重疾病；另外这种损伤在许多神经退化性疾病(如巴金森氏病、杭延顿氏病、阿尔茨海默氏病)及重症糖尿病随年令增长而恶化过程中可能起作用(Luft.R.，文献出处同上)。
已应用抗氧剂治疗(如用辅酶Q和维生素C)治疗上述多种疾病(如肌病)(Shoffner，J.M.，Wallace，D.C.，Adv.Hum.Genet.，19，267-330(1990))。但这些治疗方法只是偶而有效。另外使用硫辛酰胺，以抗氧剂和代谢疗法进行试验治疗，以避免局部缺血后的再氧化损伤。硫辛酰胺一方面通过其抗氧剂作用，另一方面借助其对线粒体代谢的积极影响来纠正因局部缺血所致的心脏损伤(Sumegi，Balazs等，生物化学杂志(Biochem.J.)，297，109-113(1994))。由于没有关于损伤过程的深入了解，因而尚没有治疗方法上的突破性进展。
基于上述事实，有必要开发一种可保护线粒体基因组免受损伤或者进一步阻止这些损伤的医药产品。
已发现结构式I的化合物能够保护线粒体基因组免受损伤，因而适于保护线粒体基因组和/或线粒体免受损伤，或适用于治疗与这些损伤相关的疾病。线粒体起源的疾病包括KSS(Kechs-Sayre氏综合症)MERRF(肌阵挛性癫痫和流行性红纤维综合症)LHON(莱伯氏家族遗传性视神经萎缩)MELAS(线粒体性肌病、脑病、乳酸中毒和中风样发作)赖氏病CPEO(慢性进行性外phthalmophegia)Alper氏综合症。
线粒体基因组受损的年令依赖性退化性疾病的例子有神经退化性疾病阿尔茨海默氏病，帕金森氏病ALS(肌萎缩性侧索硬化)，HD(杭廷顿氏病)，心肌病及其他肌病。
因此，本发明涉及含有0.1％至95％(质量)作为活成分的式I羟肟酸衍生物或其药上可接受的酸加成盐，并混有一种或多种常规载体的药物组合物。
在说明书和权利要求中，C1-5烷基例如可以是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基或正戊基，优选的是甲基或乙基。
C3-8环烷基例如是环丙基、环戊基、环己基、环庚基或环辛基，优选的是环戊基或环己基。
含有一个或多个杂原子的5至8元环例如可以是吡咯、吡唑、咪唑、恶唑、噻唑、吡啶、哒嗪、嘧啶、哌嗪、吗啉、吲哚、喹啉环等。
C1-24烷氧基例如可以是甲氧基、乙氧基、正丙氧基、叔丁氧基、正戊氧基、癸氧基、十二烷氧基、十八烷氧基等。
C1-25烷酰基例如是甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、己酰基、十六酰基、硬脂酰基等。
C3-9烯酰基例如是丙烯酰、戊烯酰、己烯酰、庚烯酰、辛烯酰等。
Cl-4亚烷基例如是亚甲基、亚乙基、亚丙基或亚丁基。
卤原子例如是氟、氯、溴或碘原子，较好是氯或溴原子。
如果Y代表式R7-COO-的基团，其可代表例如亚麻酰、亚油酰、二十二碳六烯酰、二十碳五烯酰、花生四烯酰等基团。
式I化合物的药学上可接受的酸加成盐是与药学上可接受的无机酸例如盐酸、硫酸等，或与药学上可接受的有机酸例如乙酸、富马酸、乳酸等形成的酸加成盐。
优选的式I化合物亚组由下列结构式的羟肟酸衍生物组成
其中R1、R2、R3、R4、R5、m和n具有如式I中指出的定义，X代表卤原子或氨基，X代表羟基。
特别优选的式II化合物是其中R1和R2连同它们所连接的氮原子一起形成哌啶子基，R3代表吡啶基、m和n为0、X定义同上的化合物。这些化合物中，优选的是O-(3-哌啶子基-2-羟基-1-丙基)吡啶-3-基羟肟酸氯化物(化合物“A”)，和O-(3-哌啶子基-2-羟基-1-丙基)烟酸偕胺肟(化合物“B”)。
更优选的式I羟肟酸衍生物亚组由下列结构式的化合物组成
其中R1、R2、R3和A定义如式I中所述。另一个式I羟肟酸衍生物的优选亚组由下列结构式的化合物组成
其中R1、R2、R3和A具有如式I中指出的定义，Z代表氧或氮原子。
再一个式I羟肟酸衍生物的优选亚组由下列结构式的化合物组成
其中R1、R2、R3和A定义同式I化合物所述，R6代表C1-4烷基。
可按照匈牙利专利No.177578和207988以及匈牙利专利申请No.T/66350中所述方法制备式I的化合物。
本发明的药物组合物包含作为活性成分的0.1％至95％(质量)，较好1至50％(质量)，最好5至30％(质量)的式I羟肟酸衍生物或其药学上可接受的酸加成盐及一种或多种常规载体。
本发明的药物组合物适于口服、胃肠道外或直肠给药，或用于局部治疗，并且可以是固体或液体的。
适于口服给药的固体药物组合物可以是粉末、胶囊、片剂、包膜片剂、微胶囊等，并可包含作为载体的诸如明胶、山梨醇、聚(乙烯吡咯烷酮)等粘结剂；诸如乳糖、葡萄糖、淀粉、磷酸钙等填充剂；硬脂酸镁、滑石粉、聚(乙二醇)、二氧化硅等压片辅助物质；十二烷基硫酸钠等润湿剂。
适于口服给药的液体药物组合物可以是溶液、悬液或乳液，并可包含作为载体的明胶、羧甲基纤维素等悬浮剂；脱水山梨醇单油酸酯等乳化剂；水、油、丙二醇、乙醇等溶剂；对羟基甲酸甲酯等防腐剂。
适于胃肠道外给药的药物组合物一般由活性成分的无菌溶液组成。
上述剂型及其他一些剂型都是已知的，例如参见Remington’sPharmaceutical Science，第18版，Mack出版公司，美国Easton(1990)。
本发明的药物组合物一般含有单位剂量。成年病人每日剂量一般为0.1至1000mg式I化合物或其药学上可接受的酸加成盐。上述剂量可分一次或几次给药。实际剂量将取决于许多因素并可由医生来决定。
为制备本发明的药物组合物，可将式I的化合物或其药学上可接受的酸加成盐与一种或多种载体相混合，并将所得到的混合物按已知方式转化成药物组合物。适用的方法例如可参见Ramington’s PharmaceuticalSciences。
本发明的另一个实施方案包括式I化合物(其中R、R1、R2、R3、X、Y、A和B具有式I中指出的定义)或药学上可接受的酸加成盐，及任选与之混合的一种或多种药物组合物中常用的载体，在制备用于保护线粒体基因组和/或线粒体免受损伤的药物组合物中的用途。
本发明的再一个实施方案包括式I化合物(其中R、R1、R2、R3、X、Y、A和B具有式I中指出之定义)或其药学上可接受的酸加成盐，及比窝与之混合的一种或多种药物组合物中常用的载体，在制备用于治疗与线粒体基因组和/或线粒体损伤相关联之疾病的药物组合物中的用途。这些疾病特别包括肌病、心肌病及神经退化性疾病，例如阿尔茨海默氏病、帕金森氏病或杭廷顿氏病。
根据本发明的优选方案，使用其中R1、R2、R3、R4、R5、X、Y、m和n具有式II所述定义的式II的羟肟酸衍生物，或其药学上可接受的酸加成盐。
根据本发明的另一个优选方案，使用其中R1和R2连同它们所连接的氮原子形成哌啶子基，m和n为0，X和Y具有式II所述定义的式II的化合物，或其药学上可接受的酸加成盐。
根据本发明的一个特别优选的方案，使用O-(3-哌啶子基-2-羟基-1-丙基)吡啶-3-基羟肟酸氯化物或O-(3-哌啶子基-2-羟基-1-丙基)烟酸偕胺肟或其药学上可接受的酸加成盐。
体外试验根据式I的羟肟酸衍生物体外保护氧化磷酸化的能力来检验它们的线粒体基因组保护作用。试验的理论基础是细胞所需的能量是由在线粒体中合成的三磷酸腺苷(ATP)产生的。底物运输、柠檬酸代谢途径的异常改变、呼吸复合物的缺陷及氧化磷酸化的中断使细胞的能量供应紊乱。试验中，对酿酒酵母细胞和K562人红白血病细胞进行热休克处理以损伤其氧化磷酸化作用，并检测化合物“B”的保护效果。
已知热休克的一种损伤作用是立刻即在几分钟内产生的，通过中断氧化磷酸化的呼吸链而影响线粒体。使用化学解偶联剂所作的试验显示，在电子传递期间，由呼吸链的酶复合物泵入线粒体内膜和外膜之间的质子，由于受到解偶联剂的作用而又回到内部空间，因而不能合成ATP。由于热休克，发生了一个导致细胞能量供应迅速减少的相似过程。
试验中使用的材料酿酒酵母细胞培养物。将S288C单倍体野生型细胞系培养于含有1％酵母提取物、2％蛋白胨和3％甘油的YPG培养基中。于有氧条件下，在25℃水浴中振荡液体培养基中的培养物。
K562培养物将人慢性髓样白血病来源的K562红白血病型细胞系培养在37℃和含95％空气和5％ CO2的湿混合气体环境下，含10％小牛血清的RPMI1640液体培养基中。
寡霉素(Olig)氰化羰基间氯苯基腙(C-CCP，美国圣路易丝Sigma化学公司生产)。
按下述方法检测氧耗量在细胞处于指数生长期时离心细胞，在使用酿酒酵母时，将细胞悬浮在10倍量含1％甘露糖而不是2％甘油的YPG培养基中。在使用K562细胞时，分离后在含20mM HEPES的RPMI 1640培养基中制成浓度为4×106细胞/ml的悬液。在2ml恒温小杯中用Clare氏电极测定氧耗量。详细方法参见Patriarca，E.J.和Maresca，B.实验细胞研究(ExperimentalCell Resarch)，196，57-64(1990)。使用下列公式计算对呼吸速率的刺激作用[(VC1-CCP/VOlig)-1]×100在分离后热休克前一小时分别向培养基内加入10-5、2.5×10-5、5×10-5M化合物“B”和溶剂(含有磷酸盐缓冲剂的生理氯化钠溶液)。将培养物于42℃下而不是原来的25℃下保持5分钟进行热休克处理。对于K562细胞，则将培养物置于48℃下而不是原来的37℃保持10分钟。
实验期间已注意到，对于酿酒酵母和K562细胞，热休克都明显地解除了电子传递链与ATP合成间的偶联。
所得结果示于表1和2中，其中给出了处理方法及百分刺激作用和所得到的百分保护率。
表1对酿酒酵母的氧化磷酸化的保护作用处理刺激作用(％)保护作用(％)25℃ 99±1342℃+溶剂 8±2 042℃+1×10-5M33±527化合物“B”42℃+2.5×10-5M 47±443化合物“B”42℃+5×10-5M43±538化合物“B”
表2对K562的氧化磷酸化的保护作用处理 刺激作用(％)保护作用(％)37℃ 117±2248℃+溶剂 27±3048℃+1×10-5M 70±836化合物“B”48℃+2.5×10-5M 95±11 57化合物“B”48℃+5×10-5M 97±11 58化合物“B”表1和2所示的数据证明，应用化合物“B”可阻止线粒体呼吸复合物解偶联，进而增加对细胞的保护作用。
在试验范围内，化合物“B”的最适浓度为25μM。除了维持适当的细胞功能外，其最可能的直接作用是阻止氧游离基的形成。据此我们可以认为，化合物“B”提供了抗线粒体基因组损伤的保护作用。
防止线粒体遭受热诱导的解偶联正常情况下，在NADH氧化期间呼吸复合物泵出的质子在线粒体内膜两侧造成质子梯度。该质子梯度为从ADP和无机磷酸合成ATP提供能量。质子只能利用从ADP和无机磷酸(Pi)合成ATP所需的质子梯度能量，通过F1F0ATP酶重新进入内膜空间。在没有ADP或Pi的情况下，质子梯度增加，并抑制呼吸复合物和线粒体氧耗量。然而，如果线粒体内膜有损伤，则质子可能通过受损伤区域重新进入内膜间隙，质子梯度的能量未被F1F0ATP酶利用，从而线粒氧化即变得不再依赖于ADP(线粒体解偶联)。
已经知道，热应激可诱导线粒体氧化作用与线粒体能量(ATP)产生之间的解偶联，这是热应激诱导线粒体内膜损伤的结果。在受损的膜区域，质子从膜间间隙漏失到膜内部分，从而使成粒体氧化成为不依赖ADP的过程。
为进行试验，从对照大鼠或预先用40mg/kg化合物“B”处理6小时的大鼠细胞中分离线粒体(制备方法参见Sumegi等，生物化学杂志，259，8748(1984))。在37℃小室中用Clark电极测定氧耗量。测定有5mM ADP和没有ADP存在下的氧耗量比例，并将对未处理的线粒体和于42℃预处理8分钟的线粒体的检测结果示于表3中。
表3抗线粒体的热诱导解偶联的保护作用处理线粒体无 43℃下8分钟存在ADP对不存在条件下的线粒体氧耗量比例对照物6±0.82.7±1.1化合物“B”处理的动物 6.2±1.0 5.0±1.2所示数据为三次实验的平均值±标准差。
从表3中可以看出，在正常条件下，有ADP存在时比在无ADP培养基中的线粒体氧化作用大约快6倍，表明线粒体氧化与ATP合成之间有很好的偶联关系。但热应激显著地降低了线粒体的偶联，并且在对照组中该值也有所降低(2.7)，但用化合物“B”预处理之动物的线粒体中则仍保持相对较高的偶联比例(5.1)。这些数据表明，式I的化合物，特别是化合物“B”可保护线粒体能量产生(ATP合成)免于遭受热应激引起的损伤。
保护胆碱能神经元免受过氧化氢诱导的细胞退化已知过氧化氢通过在细胞中产生氧相关游离基引起氧化性细胞损伤。因此，可使用过氧化氢诱导的细胞损伤作为神经元退化的通用模型。使用SN6.10.2.2杂种，N18TG2+ED15间隔神经元细胞系(Hammond等，科学234，1237(1986))研究式I化合物对抗氧相关游离基引起之细胞损伤(其为大多数神经退化性疾病的主要途径)的保护作用。
为此，将细胞在96孔平板上分成两组。一组维持在含化合物“B”的培养基中，另一组则维持在基础培养基中。分组后24小时开始处理。两组均用其含有不同浓度过氧化氢的培养基处理。处理48小时后进行存活试验。
存活试验从小孔中除去培养基，用无菌PBS洗细胞，然后向各孔内加入溶于150μg新鲜二乙胺缓冲液(pH9.8)中的150μg碱性磷酸酶底物。于30℃下保温平板，并向各孔内加入50μl氢氧化钠以终止反应。用DynatechELISA读数器测出405nm处吸光值，并将只含有培养基的各平板外围孔作为进行本底检测的空白对照。
结果示于表4中。
表4化合物“B”保护胆碱能神经元免受过氧化氢诱导的细胞溶解作用培养基含化合物“B”培养基对照组 100％100％60mM H2O211±2％ 63±4％120mM H2O28±3％ 52±5％表4显示，所试验的式I化合物可有效地保护胆碱能神经元免于遭受过氧化氢诱导的细胞溶解作用。因为过氧化氢通过产生大量氧相关游离基杀死细胞，所以化合物“B”可保护那些与氧相关游离基有关的神经元损伤性疾病中的神经元。因此，式I的化合物可能对于帕金森氏病、肌萎缩性侧索硬化(ALS)、杭廷顿氏病及混合来源的痴呆(生命科学(Life Science)56，1151-1171(1995))有利。
体内试验还在处理的大鼠体内试验了式I的羟肟酸衍生物的线粒体基因组保护作用。以50mg/kg的剂量每天用AZT(3’-叠氮胸苷，Sigma化学公司生产)处理Vistar大鼠，共14天。某些试验组合用AZT和化合物“A”(每天20mg/kg)或化合物“B”(每天40mg/kg)处理动物。处理期间和处理后进行各种检测。
1)在动物的所有四肢上用Schiller AT-6 ECG监测其心脏功能。使用技术文献中描述的标准方法估计ECG参数(Kawai C.，Takatsu，T.，新英格兰医学杂志(New Engl.J.Med.)，293，592(1975)；Augelakos，E.T.，Bernardini，P.J. Appl.Physiol.，18，261-262(1963))。我们已确定了RR、PR和TQ间隔区及J点降低。结果示于表5中，数值为5次检测的平均值±标准差。
表5化合物“B”对AZT诱导的心功能失常(心肌病)的影响处理 RR PR QT(ms) J(mm)处理前 174±12 53±2 70±2 -0.1±0.1每天50mg/kg AZT284±16 82±3 112±9 -1.1±0.1处理14天每天50mg/kg AZT161±24 47±6 76±5 -0.2±0.14和40mg/kg化合物“B”处理14天表5所示的数据证明，与对照组相比，AZT处理使动物的心率明显延长(RR)，而且使PQ间隔增加。此外，发现QT值显著增加，并且在代表左心室主要肌肉质量的I和VL导程中出现有意义的J点下降(超过0.1mV)。这些参数表明了心肌缺血和缺陷性氧消耗的特征。但在除了使用AZT外，同时还给大鼠每天投用40mg/kg剂量的化合物“B”时，可见动物心电图参数恢复正常，这表明该化合物可保护心脏免于遭受AZT诱发的功能异常。
2)检测动物的呼吸活动。如此确定NADH的活生使用技术文献中描述的方法(Sumegi，Balazs，Clin.Chim.Acta.，192，9-18(1990))测定细胞色素C氧化还原酶、细胞色素氧化酶和柠檬酸合成酶。(NADH烟酸腺嘌呤二核苷酸，还原态)。结果示于表6中。
表6化合物“A”和“B”对AZT诱导的呼吸活动降低的影响处理 细胞色素氧化酶 NADH细胞色素 柠檬酸合成氧化还原酶 酶(单位/克湿组织)对照组 14.7±1.611.6±±0.7 292±28AZT8.7±2 9.5±0.2242±19AZT+化合物“A”10.3±1.211.3±0.5 262±47AZT+化合物“B”11.8±1.310.5±1 271±11表6所示数据充分证明，AZT处理显著降低心脏线粒体中呼吸复合物的活性。这样，AZT显著地降低心脏中的氧化能量产生，致使心脏处于不能彻底完成其基本功能的状态(参见表5，ECG数据)。此外，线粒体呼吸能力的降低可导致异常的线粒体代谢，进而可引起心脏损伤。
当给动物联合投用AZT和化合物“A”或“B”时，其呼吸活动降低效应几乎消失，而且呼吸活动值接近于正常。即式I的被试化合物通过保护呼吸复合物而明显降低了AZT诱导的线粒体膜损伤。
3)检查对线粒体基因组的损伤。应用PCR(聚合酶链反应)方法检测对线粒体基因组的损伤。经扩增从细胞色素氧化酶成分I到细胞色素B范围的序列来选择引物，以寻找缺失(引物购自Ransonhill BioscienceCo.)。在Sunegi，Balazs等人的出版物(B.B.A.(1996))中描述了所使用的方法。使用扩增线粒体基因组的4929至16298区域的PCR引物，显示AZT处理的大鼠中0.5和1.5kb范围被显著扩增。同时，在对照组动物则没有看到这种短范围的扩增。可以理解到，未受损伤的基因组并不扩增短的DNA区域，因为在这些试验中引物相互间都在11.3kb以上。在AZT处理的大鼠中扩增了这种短的DNA范围这一事实表明，由于AZT处理，使线粒体基因组中缺失10kb区域，而且在受损伤的基因且中引物彼此逐渐接近到0.5-1.5kb。因此，这样的DNA范围可被扩增。这样的DNA范围的扩增表明对线粒体基因组的损伤，即编码细胞色素氧化酶之亚组I、II和III的基因、编码ATP 6和8的基因、编码复合物I或HADH辅酶Q氧化还原酶2、4、4L、5和6的基因、以及编码细胞色素B的基因部分或全部缺失。
当给动物联合投用AZT和化合物“B”时，上述短DNA范围的扩增已显著减少并且不能检测到某些DNA片段。
这就意味着化合物“B”保护了上述DNA免于遭受AZT诱导的损伤，或至少显著降低了那些损伤。应提到的是，AZT诱导的对上述基因的人工损伤也可能因局部缺血性心肌病或年长病人的心肌病而发生。
式I化合物对遗传性线粒体心肌病的影响。
使用遗传性线粒体心肌病大鼠进行试验，每天以40mg/kg剂量的化合物“B”处理14天。以ECG监测大鼠的心脏功能。表7中显示了对照组和用化合物“B”处理组动物的ECG数据。其中数值是作为3次检测的平均值±标准差给出的。
表7化合物“B”对遗传性线粒体心肌病大鼠的心脏功能的影响处理 RR PR QT(ms) J(mm)对照组 204±2054±592±8-1.0±0.1化合物“B”169±2143±771±7-0.3±-0.1对心脏功能异常的患遗传性心肌病大鼠进行试验。从表7中可以很容易地看到这一事实。这些心肌病大鼠可以作为局部缺血性心肌病和年长者心肌病的理想模型。由于因化合物“B”进行14天处理的作用，使动物的心脏功能明显改善，并且ECG参数也回复到正常范围。
上述这些试验显示，式I的羟肟酸衍生物能够保护线粒体基因组对抗各种损伤。就所使用的动物模型来说，它们最后消除了AZT诱导的心脏损伤，考虑到目前全世界有上百万用AZT治疗的病人，因而它们可以在人类医学中发挥重大作用。
这些化合物的再一个重要特点是，在显现心肌病的病例中(其中线粒体损伤相似于局部缺血性心肌病和年长者心肌病的线粒体损伤)，它们可消除心脏功能异常并恢复正常ECG参数。
基于上述试验，可以说本发明的含有式I化合物(作为活性成分)的药物组合物可保护线粒体基因组或线粒体免受损伤，进而可用于治疗已显现了这种类型损伤的疾病。
权利要求
1.用于保护线粒体基因组和/或线粒体免受损伤或治疗与这些损伤相关联的疾病的药物组合物，该组合物含有0.1至95％(质量)与一种或多种常规载体混合的作为活性成分的下式的羟肟酸衍生物或其药学上可接受的酸加成盐
其中R1代表氢或C1-5烷基，R2代表氢、C1-5烷基、C3-8环烷基或可被羟基或苯基取代的苯基；或者R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成5至8元环，该环还可另外含一个或多个氮、氧或硫原子，并且所说的环可与另一个脂环或杂环缩合，优选与苯、萘、喹啉、异喹啉、吡啶或吡唑啉环，如果需要且化学上可能时，氮和/或硫杂原子以氧化物或二氧化物的形式存在，R3代表氢、苯基、萘基或吡啶基，其中所说的基团可以被一个或多个卤原子或C1-4烷氧基取代，Y是氢、羟基、可被氨基取代的C1-24烷氧基、含有1至6个双键的C2-24多烯氧基、C1-25烷酰基、C3-9烯酰基或式R7-COO-的基团，其中R7代表含有1至6个双键的C2-30多烯基，X代表卤素、氨基、C1-4烷氧基，或者X与B形成氧原子，或者X和Y与它们所连接的碳原子以及所说碳原子之间的-NR-O-CH2基团一起形成有下列结构式的环
其中Z代表氧或氮，R代表氢或R与B形成化学键，A是C1-4亚烷基或化学键或有下列结构式的基团
其中R4代表氢、C1-5烷基、C3-8环烷基或可被卤素、C1-4烷氧基或C1-5烷基取代的苯基，R5代表氢、C1-4烷基或苯基，m为0、1或2，n为0、1或2。
2.权利要求1的药物组合物，其中活性成分是具有下列结构式的化合物或其药学上可接受的酸加成盐
其中R1、R2、R3、R4、R5、m和n具有权利要求1中指出的定义，X代表卤素或氨基，Y代表羟基。
3.权利要求1的药物组合物，其中活性成分是具有下列结构式的化合物或其药学上可接受的酸加成盐
其中R1、R2、R3和A具有权利要求1中指出的定义。
4.权利要求1的药物组合物，其中活性成分是具有下列结构式的化合物，或其药学上可接受的酸加成盐
其中R1、R2、R3和A具有权利要求1中指出的定义，Z代表氧或氮原子。
5.权利要求1的药物组合物，其中活性成分是具有下列结构式的化合物或其医学上可接受的盐
其中R1、R2、R3和A具有权利要求1中指出的定义，R6代表C1-4烷基。
6.权利要求1或2的药物组合物，其中活性成分是结构式II的化合物或其药学上可接受的酸加成盐，该式中R1和R2连同它们所连接的氮原子一起形成哌啶子基，m和n为0，X和Y具有权利要求2中指定的定义。
7.权利要求1、2或6的药物组合物，其中活性成分是O-(3-哌啶子基-2-羟基-1-丙基)吡啶-3-基羟肟酸氯化物或其药学上可接受的酸加成盐。
8.权利要求1、2或6的药物组合物，其中活性成分是O-(3-哌啶子基-2-羟基-1-丙基)烟酸偕胺肟或其药学上可接受的酸加成盐。
9.式I化合物-其中R1、R2、R3、X、Y、A和B具有权利要求1中所述定义-或其药学上可接受的酸加成盐可与常规用于药物组合物中的一种或多种载体混合用于制备具有保护线粒体基因组和/或线粒体免受损伤之活性的药物。
10.根据权利要求9的应用，其中使用式II的化合物-其中R1、R2、R3、R4、R5、X、Y、m和n具有如权利要求2中指出的定义-或其药学上可接受的酸加成盐。
11.根据权利要求9的应用，其中使用式III的化合物-其中R1、R2、R3和A具有如权利要求3中指出的定义-或其药学上可接受的酸加成盐。
12.根据权利要求9的应用，其中使用式IV的化合物-其中R1、R2、R3、A和Z具有如权利要求4中指出的定义-或其药学上可接受的酸加成盐。
13.根据权利要求9的应用，其中使用式V的化合物-其中R1、R2、R3、R6和A具有如权利要求5中指出的定义-或其药学上可接受的酸加成盐。
14.根据权利要求9或10的应用，其中，式II化合物或其药学上可接受的酸加成盐的取代基R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成哌啶子基，m和n的值为0，而X和Y具有如权利要求2中指出的定义。
15.根据权利要求9、10或14的应用，其中式I或II的化合物是O-(3-哌啶子基-2-羟基-1-丙基)吡啶-3-基羟肟酸氯化物或其药学上可接受的酸加成盐。
16.根据权利要求9、10或14的应用，其中式I或II的化合物是O-(3-哌啶子基-2-羟基-1-丙基)烟酸偕胺肟或其药学上可接受的酸加成盐。
17.结构式I的化合物-其中R1、R2、R3、X、Y、A和B具有权利要求1中所述定义-或其药学上可接受的酸加成盐可与常规用于药物组合物中的一种或多种载体混合于制备治疗与线粒体基因组和/或线粒体损伤相关联之疾病的药物。
18.根据权利要求17的应用，其中所说的药物用于治疗肌病和/或心肌病。
19.根据权利要求17的应用，其中所说的药物用于治疗神经退化性疾病，特别是阿次茨海默氏病，帕金森氏病或杭廷顿氏病。
20.根据权利要求17至19中任一项的应用，其中使用式II的化合物-其中R1、R2R3、R4、R5、X、Y、m和n具有如权利要求2中指出的定义-或其药学上可接受的盐。
21.根据权利要求17至19中任一项的应用，其中使用式III的化合物-其中R1、R2、R3和A具有如权利要求3中指出的定义-或其药学上可接受的酸加成盐。
22.根据权利要求17至19中任一项的应用，其中使用式IV的化合物-其中R1、R2、R3、A和Z具有如权利要求4中指出的定义-或其药学上可接受的酸加成盐。
23.根据权利要求17至19中任一项的应用，其中使用式V的化合物-其中R1、R2、R3、R6和A为权利要求5中指出的相同的取代基-或其药学上可接受的酸加成盐。
24.根据权利要求17至20中任一项的应用，其中式II化合物或其药学上可接受的酸加成盐的取代基R1和R2与它们所连接的氮原子一起形成哌啶子基，m和n的值为0，而X和Y为权利要求2中指出的基团。
25.根据权利要求17至20和24中任一项的应用，其中式I或II的化合物是O-(3-哌啶子基-2-羟基-1-丙基)吡啶-3-基羟肟酸氯化物或其药学上可接受的酸加成盐。
26.根据权利要求17至20和24中任一项的应用，其中式I或II的化合物是O-(3-哌啶子基-2-羟基-1-丙基)烟酸偕胺肟或其药学上可接受的酸加成盐。
全文摘要
本发明涉及适于保护线粒体基因组和/或线粒体免受损伤或治疗与这种损伤相关联的疾病的药物组合物,所说的组合物含有式(Ⅰ)的羟肟酸衍生物或其药学上可接受的酸加成盐。
文档编号A61P25/28GK1200670SQ9619780
公开日1998年12月2日 申请日期1996年9月26日 优先权日1995年9月29日
发明者P·利特蒂纳吉, B·素米吉, L·维格, B·马里斯卡 申请人:梅德根有限公司