专利名称：新的含有吡啶和环己烯基的吡咯并苯并二氮杂羧酰胺和其衍生物;保胎催产素受体拮抗剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的三环吡啶基羧酰胺，其用作有竞争力的催产素受体拮抗体，本发明还涉及它们的制备方法、利用这些化合物的治疗方法和药物组合物。
本发明的化合物是对哺乳动物的、特别是人有用的治疗剂。更特别地，它们可用于预防和/或抑制早产、抑制剖腹产分娩之前的足月产、促进对医疗设备的抗分娩输送和治疗痛经。
这些化合物还用于为农畜增强受精率、增强生存率和协调动情期；以及可用于预防和治疗中枢神经系统中催产素系统功能异常，该功能异常包括强迫障碍(OCD)和神经精神病学障碍。
背景技术：
提前分娩是出生时死亡和病态的主要原因。幼儿死亡率引人注目地随胎龄的增加而降低。过早地出生的婴儿的存活率从24周的20％增加到30周的94％。此外，与过早出生的婴儿护理有关的成本极端地高。尽管在近40年来已经开发出用于提前分娩治疗的药剂，未足月产和低出生重量婴儿的发病率保持相对无变化。因此仍然需要用于提前分娩的安全和有效治疗的开发。
当前使用的保胎(子宫松弛)药剂包括β2肾上腺素能受体拮抗剂，如利托君，它适度地有效抑制提前分娩，但与母亲血压过低、心动过速和新陈代谢的副作用有关。几种其它药剂已经用于抑制提前分娩，包括其它β2肾上腺素能拮抗剂(间羟叔丁肾上腺素，舒喘宁)、硫酸镁、NSAIDs(消炎痛)和钙通道阻断剂。一致的是这些药剂没有一种是非常有效的没有临床证据显示这些化合物可延长妊娠超过7天(Johnson，Drugs，45，684-692(1993))。此外，它们的安全情况不理想。副作用包括呼吸抑制和心跳停止(硫酸镁)、血液动力学效应(钙通道阻断剂)、动脉导管的过早闭合和羊水过少(NSAIDs；前列腺素合酶抑制剂)。因此，仍然需要用于治疗提前分娩的更安全和更有效药剂，并且其具有更好的患者可容许性。关于安全的具体要求包括产品没有心动过速或心动过速的速率很低、有限的焦虑、改善的胎儿安全性和几乎没有——如果有的话——有害的心血管效应。
所关心的一个目标是子宫中的催产素受体，已经建议将选择性催产素受体拮抗体作为理想的保胎药剂。尽管还没有清楚地确定催产素(OT)在分娩中的准确作用，有证据强烈地说明它可在人分娩开始和进行中起决定性的作用(Fuchs等人，Science 215，1396-1398(1982)；Maggi等人，J.Clin.Endocrinol.Metab.70，1142-1154(1990)；Akerlund，Reg.Pept.45，187-191(1993)；Akerlund，Int.Congr.Symp.Semin.Ser.Progress inEndocrinology，3，657-660(1993)；Akerlund等人，在Oxytocin，Ed.R.Ivell和J.Russel，Plenum Press，纽约，595-600页(1995))。采用催产素受体拮抗体的初步临床试验支持以下概念OT受体的阻断减少了子宫的子宫肌层活性并延迟了分娩开始(Akerlund等人，Br.J.Obst.Gynaecol.94，1040-1044，(1987)；Andersen等人，Am.J.Perinatal.6，196-199(1989)；Melin，Reg.Pept.45，285-288(1993))。因此，期望选择性催产素拮抗剂阻断在足月时主要施加在子宫上的催产素的主要效果，并期望比现有疗法更有效地治疗提前分娩。依靠在子宫中对受体的直接作用，也期待催产素拮抗剂具有较少的副作用和改善的安全性。
以下现有技术参考文献描述了肽催产素拮抗剂Hruby等，垂体神经部肽的结构-活性相互关系，肽分析，合成和生物学，Udenfriend和Meienhofer著，Academic Press，纽约，卷8，77-207(1987)；Pettibone等，内分泌学，125，217(1989)；Manning等，加压素和催产素的受体特异性激动剂和拮抗剂的合成和一些用途，J.Recept.Res.，13，195-214(1993)；Goodwin等，催产素拮抗剂阿托西班在治疗早产中的剂量范围研究，Obstet.Gynecol.，88，331-336(1996)。由于它们也显示加压素拮抗剂活性，因此肽催产素拮抗剂缺乏口腔活性，许多这些肽是非选择性拮抗剂。Bock等[J.Med.Chem.33，2321(1990)]，Pettibone等.[J.Pharm.Exp.Ther.256，304(1991)]，和Williams等[J.Med.Chem.，35，3905(1992)]报导了有效的六肽催产素拮抗剂，它还在结合到V1和V2受体中显示弱的加压素拮抗活性。
各种非肽催产素拮抗剂和/或催产素/加压素(AVP)拮抗剂近来由如下文献报导Pettibone等，Endocrinology，125，217(1989)；Yamamura等，Science，252，572-574(1991)；Evans等，J.Med.Chem.，35，3919-3927(1992)；Pettibone等，J.Pharmacol.Exp.Ther，264，308-314(1992)；Ohnishi等，J.Clin.Pharmacol.33，230-238，(1993)；Evans等，J.Med.Chem.36，3993-4006(1993)；Pettibone等，Drug Dev.Res.30，129-142(1993)；Freidinger等，在肽模拟设计中的一般策略对催产素拮抗剂的应用，PerspectMed.Chem.，179-193(1993)，Ed.B.Testa，Verlag，Basel，Switzerland；Serradeil-Legal，J.Clin.Invest，92，224-231(1993)；Williams等，J.Med.Chem.37，565-571(1994)；Williams等，Bioorg.Med.Chem.2，971-985(1994)；Yamamura等，Br.J.Pharmacol.，105，546-551(1995)；Pettibone等，实验医学和生物学中的进步395，601-612(1995)；Williams等，J.Med.Chem.38，46344636(1995)；Hobbs等，Biorg.Med.Chem.Lett.5，119(1995)；Williams等，Curr.Pharm.Des.2，41-58(1996)；Freidinger等，MedicinalResearch Reviews，17，1-16(1997)；Pettibone等，Biochem.Soc.Trans.25(3)，1051-1057(1997)；Bell等，J.Med.Chem.41，2146-2163(1998)；Kuo等，Bioorg.Med.Chem.Lett.8，3081-3086(1998)；Williams等，Biorg.Med.Chem.Lett.9，1311-1316(1999)。
某些喹诺酮衍生物和二环氮杂由Ogawa等人在WO94/01113(1994)中公开为催产素和加压素拮抗剂；苯并噁嗪酮由Sparks等人在WO97/25992(1997)中公开为催产素和加压素受体拮抗剂；Williams等人在WO96/22775(1996)中公开了哌啶催产素和加压素受体拮抗剂；Bock等人在U.S.专利5,665,719(1997)中公开了用作催产素和加压素受体拮抗剂的苯并噁嗪酮和苯并嘧啶酮；用作催产素和加压素受体拮抗剂的哌嗪和螺哌啶由Evans等人在U.S.专利5,670,509(1997)和由Bock等人在U.S.专利5,756,504(1998)中公开；Bell等人在UK专利申请，GB2 326 639A(1998)中公开了哌嗪催产素受体拮抗剂；Bell等人在UK专利申请，GB2 326 410A(1998)中公开了苯并噁嗪酮和喹啉酮催产素受体拮抗剂；Bell等人在U.S.专利5,756,497(1998)中公开了苯并噁嗪酮催产素和加压素受体拮抗剂；Matsuhisa等人在WO98/39325(1998)中公开了作为催产素拮抗剂的二氟四氢苯并氮杂衍生物；Ogawa等人在U.S.专利5,753,644(1998))中公开了具有加压素和催产素拮抗剂活性的杂环双酰胺；和Ogawa等人在WO97/22591(1997)and U.S.专利6,096,736(2000)中公开用作加压素拮抗剂，加压素激动剂和催产素拮抗剂的，具有抗加压素活性，催产素拮抗活性和加压素激动剂活性的苯并氮杂衍生物。
Trybulski等人在U.S.专利5,880,122(1999)中公开了具有加压素拮抗剂活性的吡咯并苯并氮杂双酰胺的3-羧酰胺衍生物；具有加压素和催产素受体拮抗剂活性的双环噻吩并氮杂由Albright等人在WO96/22294(1996)和U.S.专利5,654,297(1997)中公开；和具有加压素和催产素受体拮抗剂活性的三环苯并氮杂由Albright等人U.S.专利5,849,735(1998)中公开。
Albright等人明确地在WO96/22282A1(1996)中公开了三环苯并氮杂拮抗剂，它在V1和/或V2受体具有拮抗活性和显示体内加压素拮抗活性，以及在催产素受体的拮抗活性。
Venkatesan等人明白地在U.S.专利5,521,173(1996)、WO96/22292(1996)中，和在U.S.专利5,780,471(1998)中公开了具有加压素和催产素拮抗活性的三环苯并氮杂，它在V1和/或V2受体具有拮抗活性和显示体内加压素拮抗活性，以及在催产素受体的拮抗活性。
通过采用高亲合力和选择性结合到催产素受体上，因此防止催产素结合到它的受体上和在体内发挥它的生物和药物效应，而用作有效催产素拮抗剂的化合物，可用于提前分娩的治疗和/或预防和/或抑制，用于在剖腹分娩之前足孕分娩的抑制，和以促进对医疗设备的抗生输送。它们也可在给定的哺乳动物中产生避孕在于催产素拮抗剂已经显示为抑制催产素刺激成为黄体部分激素(LH)从垂体细胞的释放(Rettori等人，Proc.Nat.Acad.Sci.U.S.A.94，2741-2744(1997)；Evans等人，J.Endocrinol.，122，107-116(1989)；Robinson等人，J.Endocrinol.125，425-432(1990))。
催产素拮抗剂进一步具有缓和由催产素在哺乳动物中诱导的子宫收缩的能力和因此也可用于痛经，以月经期间疼痛为特征的状态的治疗。(Akerlund，Int.Congr.Symp.Semin.Ser.，内分泌学的进展3，657-660(1993)；Akerlund，Reg.Pept.45，187-191(1993)；Melin，Reg.Pept45，285-288(1993))。原发性痛经与排卵周期数有关，和它是妇科病人最通常的抱怨。认为子宫肌层的高收缩性和对子宫的降低血流是原发性痛经症状的病因因素(Akerlund，Acta Obstet.Gynecol.Scand.66，459-461(1987)。特别地，认为由加压素和催产素的小子宫动脉的血管收缩产生组织缺血和疼痛(Jovanovic等人，Br.J.Pharmacol 12，1468-1474(91997)；Chen等人，Eur.J.Pharmacol.376，25-51(1999))。
已经发现在受精后催产素受体拮抗剂对农畜的给药通过阻断导致胚胎死亡的催产素诱导的溶黄体而增强受精率(Hickey等人，WO96/09824 A1(1996)；Sparks等人，WO97/25992 A1(1997)；Sparks等人，U.S.专利5,726,172 A(1998))。因此，催产素受体拮抗剂可用于家畜管理以控制分娩的定时和初生仔畜的分娩，导致增强的存活率。它们也可通过防止催产素诱导的黄体退化和通过延迟动情期而用于发情同步化(Okano，J.Reprod.Dev.42(Suppl.)，67-70(1996))。此外，已经发现催产素受体拮抗剂在乳牛中抑制催产素诱导的排乳方面具有有力的效果(Wellnitz等人，Journal of Dairy Research 66，1-8(1999))。
催产素也在脑中合成和在中枢神经系统中释放。近代研究已经在认知，认同，性和生殖行为中，和在动物中调节饲养，舐毛和对应力的响应中建立起中枢催产素的重要性。催产素也可人的正常行为。在中枢神经系统中结合到它的受体上的催产素的调谐剂可用于催产素系统功能异常的预防和治疗，该功能异常包括强迫性障碍(OCD)和其它神经精神病学障碍。(Kovacs等人，Psychoneuroendocrinology 23，945-962(1998)；McCarthy等人，U.K.Mol.Med.Today 3，269-275(1997)；Bohus，Peptidergic Neuron，[Int.Symp.Neurosecretion]，12th(1996)，267-277，Publ.Birkhauser，Basel，Switz.；Leckman等人，Psychoneuroendocrinology19，723-749(1994))。
用于竞争性抑制加压素结合到它的受体上的化合物用于涉及哺乳动物中加压素紊乱的疾病状态的治疗预防，该疾病包括血管舒张和aquaresis(无水利尿)，治疗高血压和抑制血小板凝聚。它们也用于充血性心力衰竭，硬化与腹水的治疗，和用于抗利尿激素不相称分泌的综合症(SIADH)。此外，已经发现加压素受体拮抗剂用于治疗内耳的干扰和疾病，特别是涉及梅尼埃尔氏疾病的那些(Zenner等人，WO99/24051-A2(1999))；和用于眼睛循环障碍，特别是眼内高血压或青光眼和视觉障碍如近视的预防和治疗(Ogawa等人，WO99/38533-A1(1999))；Ohtake等人，WO99/65525(1999))。
发明概述本发明包括选自那些式(I)的化合物
其中 是 或 R1和R2独立地选自氢、(C1-C6)烷基、卤素、氰基、三氟甲基、羟基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、(C1-C6)烷氧基、-OCF3、(C1-C6烷氧基)羰基、-NHCO[(C1-C6)烷基]、羧基、-CONH2、-CONH(C1-C6)烷基或-CON[(C1-C6)烷基]2；R3是取代基，选自氢、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、羟基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、-CO(C1-C6)烷基或卤素；R4由部分B-C组成；其中B选自基团 或 C定义为
或 其中A是CH或N；R5、R6、R7和R8独立地选自氢、(C1-C6)烷基、(C1-C6)-烷氧基、羟基(C1-C6)烷基、低级烷氧基(C1-C6)烷基、(C2-C7)酰氧基(C1-C6)烷基、(C1-C6烷基)羰基、(C2-C6)链烯基、(C2-C6)链炔基、(C3-C8)环烷基、甲酰基、(C3-C8)环烷基羰基、羧基、低级烷氧基羰基、(C3-C8)环烷基氧羰基、(芳基低级烷基)氧羰基、氨基甲酰基、-O-CH2-CH＝CH2、卤素、包括三氟甲基的卤代低级烷基、-OCF3、-S(低级烷基)、-OC(O)N[低级烷基]2、-CONH(低级烷基)、-CON[低级烷基]2、低级烷基氨基、二低级烷基氨基、低级烷基二低级烷基氨基、羟基、氰基、三氟甲基硫基、硝基、氨基、低级烷基磺酰基、氨基磺酰基、低级烷基氨基磺酰基、 苯基或萘基；R9选自氢、低级烷基、羟基(C1-C6)烷基、低级烷氧基(C1-C6)烷基、(C2-C7)酰氧基(C1-C6)烷基、低级烷氧基羰基、-CON[(C1-C6)烷基]2、氰基；或任选被卤素或低级烷氧基取代的芳基；R10表示一至两个独立选择的取代基，其选自氢、低级烷基、羟基(C1-C6)烷基、低级烷氧基(C1-C6)烷基、(C2-C7)酰氧基(C1-C6)烷基、低级烷基羰基、 叠氮基、氨基、-NH[低级烷基]、-N[低级烷基]2、氨基羰基低级烷基、苯二酰亚氨基、氰基、卤素、硫代低级烷基、芳氧基、芳基硫、任选被一个至三个选自(C1-C6)烷基、低级烷氧基或卤素的取代基取代的芳基；羟基、低级烷氧基、-OSO2R17或OP’，其中P’是叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、羰基低级烷基、羰基三氟代低级烷基、芳基低级烷基、芳基羰基、甲氧基甲基或甲硫基甲基；前提条件是当R10表示两个取代基时，所述两个取代基可以和它们所连接的环己烯环一起形成一个C7-C12双环体系，该体系非限制性地包括双环[3.2.1]辛-2-烯或(6，6-二甲基)双环[3.1.1]庚-2-烯；R11选自氢或(C1-C6)烷基；和R选自任何下列基团 其中R12选自氢、(C1-C6)烷基、氰乙基或 R13和R14独立地选自氢或(C1-C6)烷基；R15是一个或两个取代基，其独立地选自氢、(C1-C6)烷基、卤素、三氟甲基、(C1-C6)烷氧基、(C1-C6烷氧基)羰基或 R16表示一至两个取代基，独立地选自氢或(C1-C6)烷基；R17选自氢、(C1-C6)烷基、三氟低级烷基或任选被低级烷基取代的芳基；m是0至2的整数；n是1至2的整数；和
p是0至1的整数；和其可药用盐或其前药形式。
本发明更优选的化合物是下式化合物 其中 是 或 R1和R2独立地选自氢、(C1-C6)烷基、卤素、氰基、三氟甲基、羟基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、(C1-C6)烷氧基、-OCF3、(C1-C6烷氧基)羰基、-NHCO[(C1-C6)烷基]、羧基、-CONH2、-CONH(C1-C6)烷基或-CON[(C1-C6)烷基]2；R3是取代基，选自氢、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、羟基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、-CO(C1-C6)烷基或卤素；R4由部分B-C组成；其中B选自基团 或
和C定义为 或 其中A是CH或N；R5、R6、R7和R8独立选自H、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、羟基(C1-C6)烷基、低级烷氧基(C1-C6)烷基、(C2-C7)酰氧基(C1-C6)烷基、(C1-C6烷基)羰基、(C2-C6)链烯基、(C2-C6)链炔基、(C3-C8)环烷基、甲酰基、(C3-C8)环烷基羰基、羧基、(低级烷氧基)羰基、(C3-C8环烷基)氧基羰基、氨基甲酰基、-O-CH2-CH＝CH2、卤素、卤代低级烷基、三氟甲基、-OCF3、-S(低级烷基)、-OC(O)N[低级烷基]2、-CONH(低级烷基)、-CON[低级烷基]2、低级烷基氨基、二低级烷基氨基、低级烷基二低级烷基氨基、羟基、氰基、三氟甲基硫基、硝基、氨基、低级烷基磺酰基、氨基磺酰基或低级烷基氨基磺酰基；R9选自H、低级烷基、羟基(C1-C6)烷基、低级烷氧基(C1-C6)-烷基、(C2-C7)酰氧基(C1-C6)烷基、低级烷氧基羰基、-CON[(C1-C6)烷基]2或氰基；R10表示一至两个独立选择的取代基，其选自氢、低级烷基、羟基(C1-C6)烷基、低级烷氧基(C1-C6)烷基、(C2-C7)酰氧基(C1-C6)烷基、低级烷基羰基、叠氮基、氨基、-NH[低级烷基]、-N[低级烷基]2、氨基羰基低级烷基、苯二酰亚氨基、氰基、卤素、硫代低级烷基、芳氧基、芳基硫、羟基、低级烷氧基、-OSO2R17，或OP’，其中P’是叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、羰基低级烷基、羰基三氟代低级烷基、甲氧基甲基或甲硫基甲基；R11选自氢或(C1-C6)烷基；和R选自任何下列基团
或 其中R12选自氢或(C1-C6)烷基；R13和R14独立选自氢或(C1-C6)烷基；R15是一个或两个取代基，其独立地选自氢、(C1-C6)烷基、卤素、三氟甲基、(C1-C6)烷氧基、(C1-C6烷氧基)羰基；R16和R16’独立地选自氢或(C1-C6)烷基；m是0至2的整数；和p是0至1的整数；或其可药用盐或其前药形式。
作为一个基团或例如烷氧基或芳烷基的一个基团的一部分，烷基的实例是1至6个碳的碳链的或1-4个碳原子的碳链，诸如甲基、乙基、丙基和丁基。
这里使用的与诸如烷氧基、链炔基、链烯基等碳链有关的术语″低级″理解为提到的那些基团具有最多达6个碳原子，例如1-6、2-6。卤素指的是氟、氯、溴或碘。环烷基，不论独立地使用还是作为一个结合部分的一部分，指的是3至8个碳原子、优选3至6个碳原子的环烷基基团。
术语芳基作为一个基团或一个基团(例如芳基烷基、芳烷基、芳氧基)的一部分包括6至10个碳原子的碳环芳族基，例如苯基或萘基。术语酰基包括2-7碳原子的基团，例如(C1-C6烷基)羰基。
本领域技术人员应该理解，根据R1、R2、R3、R4和R的定义，本发明的一些化合物可能含有一个或多个不对称中心，因此可能产生对映异构体和非对映体。本发明包括所有具有指明的活性的立体异构体，包括单一的非对映体和解析的对映异构纯的R和S立体异构体；以及外消旋物，以及所有其它R和S立体异构体的混合物和其可药用盐。通过本领域技术人员已知的标准方法可得到纯净形式的旋光异构体。还应理解，本发明包括所有可能的具有指明活性的位置异构体、E/Z异构体、内型-、外型异构体和其混合物。通过本领域技术人员已知的标准分离方法可得到纯净形式的这类异构体。本领域技术人员还应理解到，取决于R5、R6、R7、R9和R10的定义，本发明的一些化合物可能由于位阻旋转而呈手性，并由此得到阻转异构体，其可以通过本领域技术人员已知的标准方法解析并得到纯净的形式。本发明还包括所有本发明化合物的多晶型物和水合物。
发明详述本发明包括上述化合物以及药物组合物，所述的药物组合物含有一种或多种制药或治疗有效量的本发明化合物，所述化合物与一种或多种可药用载体或赋形剂组合或结合。本发明尤其提供一种药物组合物，其包括治疗或制药有效量的一种或多种本发明化合物和一种可药用载体或赋形剂。
本发明还包括用于治疗、抑制或预防哺乳动物、优选人的病症的方法，该病症通过催产素拮抗剂活性医治或减轻，其非限制性包括每当哺乳动物、优选人需要的时候治疗或预防早产、痛经和抑制剖腹产分娩前的分娩。所述方法包括给予需要的哺乳动物制药或治疗有效量的一种或多种本发明化合物。
本发明还包括本发明化合物与一种或多种用于治疗诸如早产、痛经病症和在剖腹产分娩前抑制分娩的药剂组合。更具体地说，本发明的化合物可以与有效量的其它的保胎药剂结合有效地给药，这些保胎药剂用于治疗或预防早产、痛经或抑制在剖腹产分娩之前的分娩，包括β-肾上腺素拮抗剂、钙通道阻断剂、前列腺素合成抑制剂、其它的催产素拮抗剂(例如阿托西班)、硫酸镁、乙醇和其它用于治疗所述病症的药剂。应认为本发明包括本发明化合物与其它的保胎药剂的任何组合同可用于治疗哺乳动物早产、痛经和抑制剖腹产分娩前分娩的任何药物组合物的所有同时或交替的治疗。
所述组合物优选适合用于静脉内给药和口服(丸剂和输液)。但是，它们对于需要保胎药剂的人或农畜可以是适合其它给药形式的，包括皮下、腹膜内或肌肉给药。
本发明的化合物可以衍生自药学上可接受的酸或碱的盐的形式使用。这些盐非限制性地包括下列与无机酸形成的盐，无机酸是诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸；以及，视情况而定，与有机酸形成的盐，有机酸是诸如乙酸、草酸、柠檬酸、酒石酸、琥珀酸、马来酸、苯甲酸、苯磺酸、富马酸、苹果酸、甲烷磺酸、双羟萘酸酸和对甲苯磺酸。其它的盐包括与碱金属或碱土金属形成的盐，如钠、钾、钙或镁；或与有机碱形成的盐，包括季铵盐。所述化合物还可以以酯、氨基甲酸酯和其它常规的前药的形式使用，一般说来，其应当是本发明化合物的官能衍生物，在体内可容易地转化为所述的活性片段。这意味着包括用本发明的化合物或用没有具体地说明但是在给药后在体内转变成转变成本发明化合物的化合物治疗在上文描述的各种病症。还包括本发明化合物的代谢产物，其定义为将本发明化合物引入生物系统中产生的活性化合物。
当本发明化合物用于上述用途时，它们可以与一种或多种药物可以接受的赋形剂或载体结合，例如溶剂、稀释剂等，并且可以片剂、胶囊(包括定时释放和持续释放剂型)、药丸、可分散性粉剂、颗粒或含有例如从0.05至5％的助悬剂的悬浮液、含有例如约10至50％的糖的糖浆和酏剂等的形式口服给药，或不经肠道以在等渗介质中的无菌可注射溶液、含有约0.05至5％助悬剂的悬浮液或乳状液的形式给药。这种药物制剂可能含有例如约25至约90％、更通常在约5％和60％wt之间的所述活性成分与载体结合。
使用的活性成分的有效剂量可根据所用的特定化合物或盐、给药形式、患者年龄、体重、性别和医疗条件以及所治疗病症的严重程度而变化。普通的熟练内科医师、兽医或临床医师可以容易地测定和指示预防、对抗或抑制病症发展所需药剂的有效量。但是，一般地，当本发明化合物以约0.5至约500mg/公斤的哺乳动物体重的日剂量给药时可得到令人满意的结果，给药优选分成每天二至四次，或以持续释放的形式给药。对于大多数的哺乳动物，总的日常剂量为约0.5至100mg/公斤，优选0.5至80mg/公斤。适合体内使用的剂型包括约0.05-500mg的所述活性化合物，其与固体或液体药学可以接受载体的充分混合。可以调节这种给药方案得到最佳的治疗应答。例如，若干分开剂量可以每日给药，或所述剂量可以根据治疗情况紧迫性的要求按比例降低。
这些活性化合物可以是口服给药以及通过静脉、肌肉或皮下途径给药。固体载体包括淀粉、乳糖、磷酸二钙、微晶纤维素、蔗糖和高岭土，液体载体包括无菌水、聚乙二醇、甘油、非离子型表面活性剂和食用油——如玉米、花生和芝麻油，它们与活性成分的性质和期望的特定给药形式相适应。通常用于制备药物组合物的助剂可有利地包括诸如增香剂、着色剂、防腐剂和抗氧化剂——如维生素E、抗坏血酸、BHT和BHA。
这些活性化合物还可不经肠道给药或腹膜内给药。这些活性化合物作为游离碱或可药用盐的溶液或悬浮液可以在水中适当地与诸如羟丙基纤维素的表面活性剂混合制备。分散液还可以在甘油、液体聚乙二醇和其在油中的混合物中制备。在普通储存和使用条件下，这些制剂含有防腐剂以阻止微生物的生长。
适合可注射使用的药物形式包括无菌水溶液，或用于临时制备无菌可注射溶液或分散液的分散液和无菌粉末。在任何场合，所述形式必须是无菌的并且必须是容易注射的液体。其必须在制备和储存条件下稳定并且必须防止诸如细菌和真菌的微生物的污染作用。载体可以是溶剂或分散介质，含有例如水、乙醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇)、其合适的混合物和植物油。
此外，本发明的活性化合物可以使用适于鼻内给药的赋形剂鼻内给药，或使用本领域普通技术人员已知的透皮贴片透皮给药。当使用透皮给药体系时，给药剂量应当是连续的而不是单次剂量或每日分次剂量给药。本发明的化合物还可以脂质体释放体系给药，其中脂质体双层脂质由各种磷脂形成。
本发明的化合物还可通过诸如活性化合物偶合的单克隆抗体载体供给。本发明的化合物此外可连接到作为药物载体的可溶性聚合物上或连接到用于实现活性剂控制释放的可生物降解的聚合物上。
此外，根据本发明，提供了用于制备本发明化合物的方法。
本发明的方法本发明的化合物可根据下文概括的一般方法中的一种制备。
通式(I)的化合物，其中 R、R3和R4定义如前，可如流程图I所示方便地制备。
流程图I 根据上述优选的方法，式(1)的三环二氮杂，其中 R3和R4定义如上文，与全卤代烷酰卤，优选三氯乙酰氯，在诸如N，N-二异丙基乙基胺(Hunig碱)的有机碱存在下、在诸如二氯甲烷的非质子有机溶剂中、在-10℃至室温的温度范围反应，得到所需的式(2)三氯乙酰基中间体。随后用碱水溶液，诸如氢氧化钠，在诸如四氢呋喃或丙酮的有机溶剂中、在-10℃至室温的温度范围水解(2)，生成式(3)的中间体酸。可用若干方法活化羧酸(3)用于随后与式(5)的伯或仲胺结合。因此，(3)可以转化为酰卤，优选式(4，J＝COCl或COBr)的氯化物或溴化物，以纯反应物的形式或在诸如碳酸钾的无机碱存在下，或在诸如吡啶、4-(二甲基氨基)吡啶或叔胺，诸如三乙胺的有机碱存在下，在一种非质子溶剂诸如二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺或四氢呋喃中，在-5℃至50℃的温度范围，通过与亚硫酰氯(亚硫酰溴)或草酰氯(草酰溴)或本领域已知的类似反应物反应，得到中间体酰化衍生物(4)。随后酰氯(酰溴)(4，J＝COCl或COBr)与式(5)的适当取代的伯或仲胺在化学计量量的Hunig碱存在下、在诸如二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺或四氢呋喃的非质子溶剂中、在室温至溶剂回流温度的温度范围偶合，得到期望的式(I)化合物，其中 R、R3和R4定义如上。
或者，根据Inanaga等人，Bull.Chem.Soc.Jpn.52，1989(1979)，酰化物可以是相应羧酸的混合酸酐，诸如通过用2，4，6-三氯苯甲酰氯在诸如二氯甲烷的非质子有机溶剂中处理所述式(3)的酸制备的那些。用式(5)适当取代的伯或仲胺在诸如二氯甲烷的非质子溶剂中、在室温至溶剂回流温度的温度范围处理式(4)所述混合酸酐，得到期望的式(I)化合物，其中 R、R3和R4定义如上。
或者，式(3)羧酸的酰胺化可通过用三光气在诸如二氯甲烷的非质子溶剂中处理所述的酸、然后使活化的中间体与式(5)适当取代的伯或仲胺在诸如Hunig碱的有机碱存在下、在-10℃到室温的温度范围反应有效地进行。
用于制备其中 R、R3和R4定义如上文的本发明式(I)化合物的另一个优选方法包括用诸如N，N-二环己基碳二亚胺或1-乙基-3-(3-二甲基氨基-丙基)碳二亚胺盐酸盐的活化试剂在1-羟基苯并三唑存在下处理式(3)的酸、随后使活化的中间体与式(5)适当取代的伯或仲胺优选在诸如Hunig碱的有机碱和催化量的4-(二甲基氨基)吡啶存在下、在诸如二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺或四氢呋喃的非质子溶剂中、在-10℃至室温的温度范围反应。
在另一个优选方法中，所述酸(3)的活化可以通过用诸如N，N’-羰二咪唑的其它活性剂在诸如二氯甲烷或四氢呋喃的非质子溶剂中、在-10℃至溶剂回流温度的温度范围处理。随后使中间体活化的咪唑化物与式(5)适当取代的伯或仲胺反应得到期望的式(I)化合物，其中 R、R3和R4定义如上。
或者，式(5)适当取代的伯或仲胺与式(3)所述酸的偶合可通过用羟基苯并三唑四甲基脲鎓六氟磷酸盐作为偶合剂，在诸如Hunig碱的有机碱存在下，在诸如N，N-二甲基甲酰胺的溶剂中，在-10℃至室温的温度范围有效地进行，以好的分离产率和纯度得到期望的式(I)化合物，其中 R、R3和R4定义如上。
相关偶合剂，诸如二苯基磷酰基叠氮化物、氰基膦酸二乙酯、苯并三唑-1-基-氧代-三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐和文献中已知用于在肽合成中形成酰胺键的所有其它试剂也可用于制备式(I)的化合物，其中 R、R3和R4定义如上。
作为替代方案，式(2)的中间体3-三卤代甲酮直接与式(5)的适当取代的伯或仲胺反应，同样得到了期望的式(I)化合物，其中 R、R3和R4定义如上。用于从中间体羧酸(3)制备式(I)化合物的方法的选择最终根据其与R、R3和R4基团的相容性及其与式(1)三环苯并二氮杂的反应性。
用于制备流程图I的(I)的另一个优选方法如流程图II所示。式(1)的三环二氮杂与双光气在诸如二氯甲烷的非质子溶剂中，优选在诸如三乙胺的有机碱存在下反应，然后将得到的酰化了的中间体与式(5)适当取代的伯或仲胺反应，得到期望的式(I)化合物，其中 R、R3和R4定义如上。
流程图II 流程图(I)的式(1)三环二氮杂，其中R4定义如上，可以方便地如流程图III所示制备。
流程图III 因此，式(6)的三环二氮杂用适当取代的酰化剂处理，所述的酰化剂是诸如芳酰卤，优选适当取代的式(7，J＝COCl或COBr)酰氯或酰溴，其中R4根据其与所述反应流程的相容性进行最终选择，反应在诸如碳酸钾的无机碱存在下或在诸如吡啶、4-(二甲基氨基)吡啶或叔胺，诸如三乙胺或N，N-二异丙基乙基胺的有机碱存在下，在诸如二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺或四氢呋喃的非质子溶剂中、在-5℃至50℃的温度范围进行，到得到通式(1)中间体，其中R4定义如上。
或者，式(7)酰化物可以是相应羧酸的混合酸酐，诸如通过用2，4，6-三氯苯甲酰氯在诸如二氯甲烷的非质子有机溶剂中根据Inanaga等人，Bull.Chem.Soc.Jpn.，52，1989(1979)的方法处理所述酸制备的那些。用式(6)三环二氮杂在诸如二氯甲烷的溶剂中，在诸如4-(二甲基氨基)吡啶的有机碱存在下，在0℃至溶剂回流温度的温度范围处理通式(7)所述的混合酸酐，得到流程图III的中间体酰化衍生物(1)。
式(7)的酰化中间体最终的选择是根据其与R4基团的相容性、与式(6)三环二氮杂的反应性。
通过流程图IV所示的方法可方便地制备期望的流程图III的式(7)中间体，其中R4由部分B-C组成，其中B是(a)和C是(c)。因此，式(8)的适当取代的芳基(杂芳基)碘化物(溴化物、氯化物或三氟甲烷磺酸酯)，其中P是羧酸保护基，优选P＝烷基或苄基，M＝I、Br、Cl或OTf，A、R5、R6和R7定义如上，与式(9，W＝Sn(三烷基)3，优选锡(n-Bu)3)三(烷基)锡(IV)衍生物在Pd(0)催化剂存在下、有或没有无机盐(例如LiCl)存在、在诸如二噁烷或N-甲基吡咯烷酮的非质子溶剂中反应，其中R9、R10的最终选择是根据它们与本反应流程的相容性，得到所述中间体酯(10)。随后，通过水解、氢解或本领域已知的类似方法脱去羧基官能的保护，随后活化中间体酸(11)，得到所期望的式(19)化合物，其中A、R5、R6、R7、R8、R9和R10定义如上，其适合与所述式(6)三环二氮杂偶合。
流程图IV 流程图III所期望的式(7)中间体，其中R4由部分B-C组成，其中B是(a)和C是(d)，或B是(b)和C是(c)或者(d)，可以通过用适当取代的萘基、二氢萘基或二氢喹啉中间体替代式(8和9)中间体，以类似于流程图IV举例说明的方法制备。
或者，流程图IV所述期望的式(10)中间体，其中R4由部分B-C组成，其中B是(a)和C是(c)，可以通过Suzuki偶合从碘化物(溴化物、氯化物或三氟甲烷磺酸酯)(8，M＝I、Br、Cl或OTf)和式(9，优选W＝B(OH)2)的适当取代的硼衍生物在诸如钯(II)乙酸盐或四(三苯基膦)钯(0)的钯催化剂和诸如三乙胺的有机碱或碳酸钠(钾或铯)的无机碱存在下，加入或不加入诸如钠(钾或铯)碳酸盐，加入或不加入四丁铵溴化物(碘化物)，在诸如甲苯-乙醇-水、丙酮-水、水或水-乙腈的溶剂混合物中，在室温至溶剂回流温度的温度范围制备(Suzuki，Pure &Appl.Chem.66，213222(1994)，Badone等人，J.Org.Chem.62，7170-7173(1997)；Wolfe等人J.Am.Chem.Soc.121，9559(1999)；Shen，Tetr.Letters 38，5575(1997))。对于卤化物和硼酸中间体的Suzuki偶合，根据作用物和取代基的性质选择确切的条件。流程图IV的所期望式(10)中间体可类似地从溴化物(8，M＝溴)和硼酸(9)在诸如二噁烷、N，N-二甲基甲酰胺或二甲亚砜的溶剂中，在磷酸钾和Pd(0)催化剂存在下制备。
或者，式(9，W＝Br、I、OTf)的碘化物(溴化物或三氟甲烷磺酸酯)与式(8， B(OH)2，或SnBu3)的双(频那醇合)二硼[硼酸、或三烷基锡(IV)]衍生物交叉偶合反应，生成所期望的式(10)中间体，其用流程图IV的方法转化为(I)。
流程图III所期望的式(10)中间体，其中R4由部分B-C组成，其B是(a)和C是(d)，或B是(b)和C是(c)或者(d)，可以通过用适当取代的萘基、二氢萘基或二氢喹啉中间体替代式(8和9)中间体，以类似的方法制备。
流程图IV所需的式(8，M＝Br或I)的适当取代的芳基(杂芳基)卤化物可以从市场购买，或在本领域中已知，或可容易地通过重氮化相应的取代苯胺(8，P＝H、烷基或苄基，M＝NH2)，然后基本上根据Street等人，J.Med.Chem.36，1529(1993)和Coffen等人，J.Org.Chem.49，296(1984)的方法在含水酸性介质中使中间体重氮盐分别与碘和碘化钾反应或与溴化铜(I)反应(March，Advanced Organic Chemistry，3rd Edn.，p.647-648，John Wiley & Sons，New York(1985))，定量地高纯度地得到。
或者，流程图IV所期望的式(11，A＝CH)中间体，其中R4由部分B-C组成，其中B是(a)、A＝CH和C是(c)，可以方便地如流程图V所示制备，即，式(13)适当取代的频那醇合硼烷——其中R9、R10根据它们与本反应流程的相容性最终选择——与式(14、Y＝OTf)的芳基三氟甲磺酸酯或芳基卤(14，Y＝Br、I)根据Ishiyama等人，Tetr.Lett.38，3447-3450(1997)和Giroux等人Tetr.Lett.38，3841-3844(1997)的一般方法交叉偶合反应，其中R5、R6和R7定义如上，随后碱性水解或酸性水解式(15)中间体腈(参考March，Advanced Organic Chemistry，3rd Edn.，JohnWiley & Sons，New York，p.788(1985))。
流程图V 或者，式(12，X＝Br、I、或OTf)的碘化物(溴化物或三氟甲烷磺酸酯)与式(14， B(OH)2或SnBu3)的双(频那醇合)二硼衍生物反应，生成所期望的式(15)中间体，其用流程图V的方法转化为(11)。
流程图IV所期望的式(11)中间体，其中R4由部分B-C组成，B是(a，A＝CH)和C是(d)，或B是(b)和C是(c)或者(d，A＝CH)，可以通过用适当取代的萘基或者二氢萘基中间体替代式(13和14)中间体，以类似的方法制备。
流程图V的所期望的式(13)硼酸酯可以方便地根据Ishiyama等人，J.Org.Chem.60，7508-7510(1995)和Giroux等人，Tetr.Lett.38，3841-3844(1997)描述的方法，使二硼酸的频哪醇酯(16)与适当取代的卤代烯烃——优选溴化物或碘化物(12，X＝Br、I)——或链烯基三氟甲烷磺酸酯(12，X＝OTf)进行钯催化的交叉偶合反应制备。
或者，用流程图VI所示的方法制备流程图IV所期望的式(1)化合物，其中R4由部分B-C组成，其中B是(a)和C是(c)。
流程图VI 因此，式(6)的三环二氮杂用适当取代的酰化剂——诸如卤代芳酰基(杂芳酰基)卤，优选式(17，J＝COCl或COBr；X＝I、Br)碘代(溴代)芳酰基(杂芳酰基)氯化物(溴化物)，其中A、R5、R6和R7定义如上——使用在上文描述的任何方法处理，得到流程图VI通式(18)的酰化了的中间体。
或者，式(17)的酰化物可以是相应羧酸的混合酸酐。用式(6)的三环二氮杂根据在上文描述的方法处理通式(17)的所述混合酸酐，得到中间体酰化了的衍生物(18)。
式(17)酰化的中间体最终的选择是根据其与A和R5、R6和R7基团的相容性和其与式(6)三环二氮杂的反应性。
(18，X＝I)与适当取代的有机锡试剂进行斯蒂勒(Stille)偶合反应，有机锡试剂是诸如三烷基锡(IV)衍生物，优选式(9，W＝SnBu3)的三正丁基锡(IV)，其中R9和R10根据它们与反应流程的相容性最终选择，反应在诸如四(三苯基膦)钯(0)的催化剂存在下，在诸如甲苯或N，N-二甲基甲酰胺的非质子有机溶剂中，在从室温到150℃的温度范围进行(参见Farina等人，J.Org.Chem，59，5905(1994)和其中引用的参考文献)，提供所述期望的式(1)化合物，其中 A、R3、R5、R6、R7、R7、R9和R10定义如上。
或者，式(18，X＝Cl、Br或I)的化合物与式(9，W＝B(OH)2)的适当取代的环己烯硼酸反应，其中R9和R10根据它们与所述反应流程的相容性选择，反应在诸如甲苯-乙醇-水的溶剂混合物中，在Pd(0)催化剂和诸如碳酸钠的碱存在下，在从室温到溶剂回流温度的温度范围进行，得到所期望的式(1)化合物，其中 A、R3、R5、R6、R7、R9和R10定义如上。
或者，式(18，X＝Br或I)的化合物与式(16)双(频那醇合)二硼在诸如二氯-[1，1’-双(二苯基膦基)二茂铁]钯(II)二氯甲烷加合物和乙酸钾的催化剂存在下，在诸如二甲亚砜的非质子溶剂中，在从室温到100℃的温度范围进行交叉偶合反应，得到式(18， )的中间体。随后，(18)与式(9，W＝OTf)适当取代的三氟甲烷磺酸酯在诸如碳酸钠水溶液的碱存在下，在诸如N，N-二甲基甲酰胺的非质子溶剂中，在在从室温到溶剂回流温度的温度范围反应，得到所期望的式(1)化合物，其中 A、R3、R5、R6、R7、R9和R10定义如上。
流程图VI的式(17)优选的取代的芳酰基(杂芳酰基)氯化物(溴化物)(X＝I、Br；J＝COCl或COBr)，其中A、R5、R6和R7定义如上，可从市场购买，或是本领域已知的，或可通过类似于文献中已知化合物的制备方法容易地制备。
流程图VI式(9，W＝Sn(烷基)3，烷基＝正丁基)的中间体可从市场购买，或可如流程图VII所示的方法从相应的式(20)溴代原料方便地制备，其中R9、R10根据它们与所述反应流程的相容性最终选择，首先使原料与正丁基锂反应，随后锂化的中间体化合物与三烷基(优选三甲基或者三正丁基)锡(IV)氯化物反应。
流程图VII 式(9，W＝B(OH)2)的优选的取代硼酸可从市场购买，或是本领域已知的，或可以类似于文献中已知化合物的制备方法容易的制备。
流程图VI所期望的式(1)化合物，其中R4由部分B-C组成，B是(a)和C是(d)，或B是(b)和C是(c)或者(d)，可以通过用适当取代的萘基、二氢萘基或二氢喹啉基中间体替代式(l7和9)中间体，以类似的方法制备。
或者，如流程图VIII所示，适当取代的芳酰基(杂芳酰基)卤化物，优选式(21，J＝COCl)的芳酰基(杂芳酰基)氯化物，其中A、R5、R6和R7定义如上，与式(6)三环二氮杂反应，得到式(22)所述中间体溴化物。随后(22)与一种双烷基锡试剂(优选双(三正丁基)锡(IV))在诸如四(三苯基膦)钯(0)的Pd(0)催化剂和氯化锂存在下反应，得到所述式(23)氢化锡中间体。三正丁基锡(IV)衍生物(23)与式(24，M＝Br或I)适当取代的卤代烯烃进一步反应，其中R9、R10根据它们与本反应流程的相容性最终选择，反应在诸如四(三苯基膦)钯(0)的Pd(0)催化剂存在下进行，得到所期望的式(1)化合物，其中R4由部分B-C组成，其中B是(a)和C是(c)， 和R5、R6、R7、R9和R10定义如上。
流程图VIII
流程图VIII所期望的式(1)化合物，其中R4由部分B-C组成，B是(a)和C是(d)，或B是(b)和C是(c)或者(d)，可以通过用适当取代的萘基、二氢萘基或二氢喹啉基中间体替代式(21和24)中间体，以类似的方法制备。
流程图IX表示了制备流程图I式(1)化合物的优选方法，其中 、R3、R5、R6和R7定义如上，R4由部分B-C组成，其中B是(a，A＝CH)和C是(c)，R10是羟基、烷氧基、OP’、叠氮基、苯二酰亚氨基、氰基、苯氧基、苯硫基、烷硫基和相关的亲核基团。
流程图IX
根据所述优选方法，式(25)适当取代的二氮杂环己烯酮通过用优选硼氢化钠的金属氢化物在氯化铈(III)存在下，在诸如甲醇的羟基溶剂中，在-78℃至室温的温度范围还原，转化为相应的环己烯醇(26)。(26)的羟基官能通过转化成离去基团(27，L＝离去基团)活化，离去基团优选是对甲苯磺酸酯、甲烷磺酸酯、三氟甲烷磺酸酯、磷酸酯等。
用诸如叠氮化物、酞酰亚胺、氰化物、卤化物、苯酚、碳或硫亲核基团SN2置换离去基团，得到所期望的化合物(1)，其中 和R3定义如上，R4由部分B-C组成，其中B是(a，A＝CH)和C是(c)，R5、R6、R7、R9和R10定义如上。
或者，根据流程图X，式(26)的对映异构环己烯醇通过手性HPLC分离成式(28)和(39)的各个对映异构体。各个对映异构体可以逐一地活化并用流程图IX的方法用亲核基团进行SN2置换。
流程图X
或者，式(28)和(29)的对映异构环己烯醇分别通过不对称还原式(25)环己烯酮得到，反应使用硼烷四氢呋喃络合物，在诸如四氢呋喃的非质子溶剂中在手性助剂存在下在室温进行，手性助剂是诸如(S)-四氢-1-甲基-3，3-二苯基-1H，3H-吡咯并[1，2-c][1，3，2]硼杂噁唑(oxazaborole)或(R)-四氢-1-甲基-3，3-二苯基-1H，3H-吡咯并[1，2-c][1，3，2]oxazaborole。
流程图XI表示了用于制备流程

图1式(I)化合物的优选方法，其中R4由部分B-C组成，其中B是(a)和C是(d)，或B是(b)或(c)，和 A、R、R3、R5、R6、R7定义如上，其中R9和R10根据它们与所述反应流程的相容性最终选择，并且用流程图VI式(17)酰化剂酰化酰胺中间体(30)。
流程图XI
或者，流程图XII表示了用于制备流程图1式(I)化合物的优选方法，其中R4由部分B-C组成，其中B是(a)，C是(c)，并且 A、R、R3、R5、R6、R7定义如上，其中R9和R10根据它们与所述反应流程的相容性最终选择，所述方法可使用流程图VIII的方法，用式(21)的酰化剂酰化流程图XI的酰胺中间体(30)。
流程图XII 根据下列方法检验本发明化合物的生物活性。
在表达人加压素V1a亚类受体的中国仓鼠卵巢细胞膜中加压素的结合受体源由人加压素V1a亚类受体稳定转染的中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)从BioSignal Inc.，1744 rue Williams，蒙特利尔，魁北克，加拿大获得或从M.Thibonnier，Case Western Reserve University School ofMedicine，Cleveland，OH获得。
A.细胞的传代和扩增在T-150烧瓶中在无菌条件下，在F-12营养素混合物(HAM)与L-谷氨酰胺(Gibco Cat.#11765-054)的细胞培养介质中，该介质包含15mMHEPES(Gibco Cat.#15630-080)、1％抗生素/抗霉菌素(每500mLF-12加入5mL 100×，Gibco Cat.#15240-062)、250μg/mL Zeocin(每500mLF-12加入1.25mL的100mg/mL Invitrogen R-250-01)和10％胎儿牛血清(合格的，热失活的，Gibco Cat.#16140-063)，使从M.Thibonnier获得的由人加压素V1a亚类受体转染的CHO细胞(pZeoSV载体)生长到融合(大约＞90％)。由吸出而除去介质和将细胞用10mLHank平衡盐液(GibcoCat.#14175-095)洗涤。将所述盐溶液吸出而除去和将细胞用5mL胰蛋白酶-EDTA(0.05％胰蛋白酶，0.53mM EDTA-4Na，Gibco Cat.#25300-070)消化1分钟。将胰蛋白酶吸出而除去和将细胞由放液而取出。将细胞培养介质(如对于1∶30分裂的加30mL)立即加入和充分混合以使胰蛋白酶失活。将1mL分离的细胞加入到包含新鲜细胞培养介质的新培养瓶中(如每个T-150烧瓶加入25ml)，并温和地混合。将细胞在37℃下在5％CO2中培育。以3-4天间隔(或适当地)改变介质。细胞在7-8天内生长到融合(大约＞75％-95％)。所有步骤在无菌条件下进行。
B.膜制备将该细胞用Hank平衡盐液温和地洗涤两次(如每个T-150烧瓶使用10mL)。将过量溶液除去和将细胞在无酶细胞解离缓冲剂(如每个T-150烧瓶使用8mLHank基，Gibco Cat.#13150-016)洗涤15-30分钟，直到细胞松散。将内容物转移到保持在冰浴中的离心管(50mL)中。所有随后的步骤在4℃下进行。将离心管在300×g下离心15min(在SORVAL，型号RT 6000 D，1380rpm，使用50ml离心管的转子)。将上清液抛弃和在均化缓冲剂(包含0.25M蔗糖和1mM EDTA的10mHTris-HCl，pH7.4)中悬浮细胞，保证缓冲剂的体积为细胞小球体积的约十倍。将该细胞倾入离心管(50mL)和用Polytron在第6档均化10秒。将匀浆转移至Potter-Elvjehm均化器和用3冲程均化。将匀浆在1500×g下在4℃离心10min(使用SORVAL，型号RT 6000 D，3100rpm，使用50mL离心管的转子)。抛弃小球。将上清液在100,000×g下在4℃离心60min(Beckman L 8-80M超速离心机；对于50mL离心管使用70Ti型转子，以37,500rpm旋转；对于15mL离心管使用80Ti型转子，38,000rpm，或用45Ti型转子，35,800rpm)。将上清液抛弃和将小球在3-4mL三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液(50mM TRIS-HCl，pH7.4)中悬浮。由Bradford或Lowry方法测定蛋白质含量。将膜悬浮液的体积用膜缓冲剂(包含0.1％BSA和0.1mM PMSF的50mM Tris-HCl)调节，以得到3.0mg/mL(或适当的)蛋白质。将该膜在-70℃下等分和贮存。
C.放射性配体结合试验在96孔格式的微量滴定板的孔中，加入90、110或130μL(以组成200μL的最终体积)测定缓冲剂，该缓冲剂包含50mM的Tris-HCl(pH7.4)、BSA(热失活的，无蛋白酶)、0.1％的5mM MgCl2、1mg％抑肽酶、1mg％亮肽素、2mg％1，10-菲咯啉、10mg％胰蛋白酶抑制剂和0.1mM PMSF。在实验日加入抑制剂。将各组分在室温下混合，然后保持在冰浴中，随后调节pH到7.4。
向每个孔中加入20μL未标记的Manning配体(以得到用于标准曲线的0.1-10nM和用于非特异性结合的1000nM的最终浓度)或在50％DMSO中的试验化合物(如0.1-1000nM的最终浓度或适当地)或作为载体对照物的50％DMSO。加入20μL的50％DMSO用于Manning和其它肽配体和因此调节测试缓冲液的体积。
向每个孔中加入50μL冷冻的膜悬浮液，该悬浮液应在使用之前即刻解冻和在测定缓冲液中稀释到要求的浓度(如需要相当于25-50μg蛋白质/孔)。将在测定缓冲液中的20μL 8nM[3H]Manning配体加入，该配体在使用之前制备，和在室温下培育60min，在机械振动机上先摇动该板15min。通过板内容物的快速过滤使孵化停止，随后使用细胞收集器(Tomtek and Printed滤垫-B滤纸)，用冰冷缓冲剂(50mM Tris-HCl，pH7.4)洗涤。将滤纸彻底地干燥(7-12min，在微波炉中)和用MeltiLexB/H熔融闪烁蜡板浸渍，和在β-板闪烁计数器中对放射性计数。
在表达人加压素V2亚类受体的中国仓鼠卵巢细胞膜中加压素的结合受体源由人加压素V2亚类受体稳定转染的中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)从M.Thibonnier，Case Western Reserve University School ofMedicine，Cleveland，OH获得。
A.细胞的传代和扩增在T-150烧瓶中在无菌条件下，在F-12营养素混合物(HAM)与L-谷氨酰胺(Gibco Cat.#11765-054)的细胞培养介质中，该介质包含15mMHEPES(Gibco Cat.#15630-080)、1％抗生素/抗霉菌素(每500mLF-12加入5mL 100×，Gibco Cat.#15240-062)、250μg/mL Zeocin(每500mLF-12加入1.25mL的100mg/mL Invitrogen R-250-01)和10％胎儿牛血清(合格的，热失活的，Gibco Cat.#16140-063)，使从M.Thibonnier获得的由人加压素V2亚类受体转染的CHO细胞(pZeoSV载体)生长到融合(大约＞90％)。由吸出而除去介质和将细胞用10mLHank平衡盐液(GibcoCat.#14175-095)洗涤。将该盐溶液吸出而除去和将细胞用5mL胰蛋白酶-EDTA(0.05％胰蛋白酶，0.53mM EDTA-4Na，Gibco Cat.#25300-070)消化1min。将胰蛋白酶吸出而除去和将细胞由放液而取出。将细胞培养介质(如对于1∶30分裂的加入30mL)立即加入和充分混合以使胰蛋白酶失活。将1mL分离的细胞加入到包含新鲜细胞培养介质的新培养瓶中(如每个T-150烧瓶加入25ml)，并温和地混合。将细胞在37℃下在5％CO2中培育。以3-4天间隔(或适当地)更换介质。细胞在7-8天内生长到融合(大约＞75％-95％)。所有步骤在无菌条件下进行。
B.膜制备将所述细胞用Hank平衡盐液温和地洗涤两次(如每个T-150烧瓶使用10mL)。将过量溶液除去和将细胞在无酶细胞解离缓冲剂(如每个T-150烧瓶使用8mLHank基，Gibco Cat.#13150-016)洗涤15-30分钟，直到细胞松散。将内容物转移到保持在冰浴中的离心管(50mL)中。所有随后的步骤在4℃下进行。将离心管在300×g下离心15min(SORVAL，型号RT 6000 D，1380rpm，使用50ml离心管用的转子)。将上清液抛弃和在均化缓冲剂(包含0.25M蔗糖和1mM EDTA的10mH Tris-HCl，pH7.4)中悬浮细胞，以确保缓冲剂的体积为细胞小球体积的约十倍。将所述细胞倾入离心管(50mL)和用Polytron在第6档均化10sec。将匀浆转移至Potter-Elvjehm均化器和用3冲程均化。将匀浆在1500×g下在4℃离心10min(使用SORVAL，型号RT 6000 D，3100rpm，使用50mL离心管的转子)。抛弃小球。将上清液在100,000×g下在4℃离心60min(Beckman L 8-80M超速离心机；对于50mL离心管使用70Ti型转子，以37,500rpm旋转；对于15mL离心管使用80Ti型转子，38,000rpm，或用45Ti型转子，35,800rpm)。将上清液抛弃和将小球在3-4Ml Tris缓冲液(50mM TRIS-HCl，pH7.4)中悬浮。由Bradford或Lowry方法测定蛋白质含量。将膜悬浮液的体积用膜缓冲剂(包含0.1％BSA和0.1mM PMSF的50mM Tris-HCl)调节，以得到3.0mg/mL(或适当的)蛋白质。将该膜在-70℃下等分和贮存。
C.放射性配体结合试验在96孔格式的微量滴定板的孔中，加入90、110或130μL(以组成200μL的最终体积)测定缓冲剂，该缓冲剂包含50mM的Tris-HCl(pH7.4)、BSA(热失效的，无蛋白酶)、0.1％的5mM MgCl2、1mg％抑肽酶、1mg％亮肽素、2mg％1，10-菲咯啉、10mg％胰蛋白酶抑制剂和0.1mM PMSF。在实验日加入抑制剂。将各组分在室温下混合，和然后保持在冰浴中，随后调节pH到7.4。
向每个孔中加入20μL未标记的精氨酸加压素(AVP)(以得到用于标准曲线的0.1-10nM和用于非特异性结合的1000nM的最终浓度)或在50％DMSO中的试验化合物(如0.1-1000nM的最终浓度或适当地)或作为载体对照物的50％DMSO。对于加压素和其它肽配体，加入20μL的50％DMSO和相应调节测试缓冲液的体积。
向每个孔中加入50μL冷冻的所述膜悬浮液，该悬浮液应在使用之前即刻解冻和在测定缓冲液中稀释到要求的浓度(如需要相当于25-50μg蛋白质/孔)。加入在测定缓冲液中的20μL 8nM[3H]精氨酸加压素配体，该配体在使用之前制备，和在室温下培育60min，在机械振动机上先摇动该板15min。通过该板内容物的快速过滤使孵化停止，随后使用细胞收集器(Tomtek and Printed滤垫-B滤纸)，用冰冷缓冲剂(50mM Tris-HCl，pH7.4)洗涤。将滤纸彻底地干燥(7-12min，在微波炉中)和用MeltiLex B/H熔融闪烁蜡板浸渍，和在β-板闪烁计数器上计数放射性。
在表达人催产素受体的中国仓鼠卵巢细胞膜中催产素的结合受体源由人催产素受体稳定地转染的中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)(参见Rohto Pharmaceutical Co.Ltd.，大阪，日本的Tanizawa等人，U.S.专利5,466,584(1995))从M.Thibonnier，Case Western Reserve UniversitySchool of Medicine，Cleveland，OH获得。
A.细胞的传代与扩增在T-150烧瓶中在无菌条件下，在F-12营养素混合物(HAM)与L-谷氨酰胺(Gibco Cat.#11765-054)的细胞培养介质中，该介质包含15mMHEPES(Gibco Cat.#15630-080)、1％抗生素/抗霉菌素(每500mLF-12加入5mL 100×，Gibco Cat.#1 5240-062)，400μg/mL Geneticin(每500mL F-12加入4mL的50mg/mL)和10％胎儿牛血清(合格的，热失活的，Gibco Cat.#16140-063)，使从M.Thibonnier获得的由人催产素受体转染的CHO细胞(pcDNA3.1载体)生长到融合(大约＞90％)。吸出而除去介质和将所述细胞用10mLHank平衡盐液(Gibco Cat.#14175-095)洗涤。将该盐溶液吸出而除去和将细胞用5mL胰蛋白酶-EDTA(0.05％胰蛋白酶，0.53mM EDTA-4Na，Gibco Cat.#25300-070)消化1min。将胰蛋白酶吸出而除去和将所述细胞由放液而取出。立即加入细胞培养介质(如对于1∶30分裂的加30mL)并充分混合以使胰蛋白酶失活。将1mL分离的细胞加入到包含新鲜细胞培养介质的新培养瓶中(如每个T-150烧瓶加入25m1)，和温和地混合。将细胞在37℃在5％CO2中培育。以3-4天间隔(或适当地)更换介质。细胞在7-8天内生长到融合(大约＞75％-95％)。所有步骤在无菌条件下进行。
B.膜制备将所述细胞用Hank平衡盐液温和地洗涤两次(如每个T-150烧瓶使用10mL)。将过量溶液除去和将细胞在无酶细胞解离缓冲剂(如每个T-150烧瓶使用8mLHank基，Gibco Cat.#13150-016)洗涤15-30分钟直到细胞松散。将内容物转移到保持在冰浴中的离心管(50mL)中。所有随后的步骤在4℃下进行。将离心管在300×g下离心15min(SORVAL，型号RT 6000 D，1380rpm，使用50ml离心管的转子)。将上清液抛弃和在均化缓冲剂(包含0.25M蔗糖和1mM EDTA的10mH Tris-HCl，pH7.4)中悬浮细胞，以确保缓冲剂的体积为细胞小球体积的约十倍。将该细胞倾入离心管(50mL)和用Polytron在设定第6档均化10sec。将匀浆转移至Potter-Elvjehm均化器和用3冲程均化。将匀浆在1500×g下在4℃离心10min(使用SORVAL，型号RT 6000 D，3100rpm，使用50mL离心管的转子)。抛弃小球。将上清液在100,000×g下在4℃下离心60min(Beckman L 8-80M超速离心机；对于50mL离心管使用70Ti型转子，以37,500rpm旋转；对于15mL离心管使用80Ti型转子，38,000rpm，或用45Ti型转子，35,800rpm)。将上清液抛弃和将小球在3-4mL Tris缓冲液(50mM TRIS-HCl，pH7.4)中悬浮。由Bradford或Lowry方法预计蛋白质含量。将膜悬浮液的体积用膜缓冲剂(包含0.1％BSA和0.1mM PMSF的50mM Tris-HCl)调节，以得到3.0mg/mL(或适当的)蛋白质。将膜在-70℃下等分和贮存。
C.放射性配体结合测定在96孔格式的微量滴定板的孔中，加入90、110或130μL(以组成200μL的最终体积)测定缓冲剂，该缓冲剂包含50mM的Tris-HCl(pH7.4)、BSA(热失活的，无蛋白酶)、0.1％的5mM MgCl2、1mg％抑肽酶、1mg％亮肽素、2mg％1，10-菲咯啉、10mg％胰蛋白酶抑制剂和0.1mM PMSF。在实验日加入抑制剂。将各组分在室温下混合，然后保持在冰浴中，随后调节pH到7.4。
向每个孔中加入20μL未标记的催产素(以得到用于标准曲线的0.1-10nM和用于非特异性结合的1000nM的最终浓度)或在50％DMSO中的试验化合物(如0.1-1000nM的最终浓度或适当地)或作为载体对照物的50％DMSO。对于催产素和其它肽配体，加入20μL 50％DMSO，和相应调节测试缓冲液的体积。
向每个孔中加入50μL冷冻的所述膜悬浮液，该悬浮液应在使用之前即刻解冻和在测定缓冲液中稀释到要求的浓度(如需要相当于25-50μg蛋白质/孔)。加入在测定缓冲液中的20μL 8nM[3H]催产素，该测定缓冲液在使用之前制备，和在室温下培育60min，在机械振动机上先摇动该板15min。通过该板内容物的快速过滤使孵化停止，随后使用细胞收集器(Tomtek and Printed滤垫-B滤纸)，用冰冷缓冲剂(50mMTris-HCl，pH7.4)洗涤。将滤纸彻底地干燥(7-12min，在微波炉中)和用MeltiLex B/H熔融闪烁蜡板浸渍，和在β-板闪烁计数器中计数放射性。
结合数据报导为在确定浓度下的抑制百分比，或如果计算IC50的话，报导为纳摩尔浓度。
关于本发明典型化合物的这些试验的结果列于表1。
表1与用人加压素V1a受体亚型、人加压素V2受体亚型和人催产素受体稳定转染的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系膜的结合
*在表达人加压素V1a和V2亚型受体和人催产素受体的中国仓鼠卵巢细胞膜中的结合下列实施例用于非限制性地说明本发明。
实施例110-(5-氯-4-环己-1-烯-1-基-2-甲氧基苯甲酰基)-N-甲基-N-(吡啶-3-基甲基)-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-羧酰胺步骤A.4-氨基-5-氯-2-甲氧基苯甲酸甲酯4-氨基-5-氯-2-甲氧基苯甲酸(50.0g、248mmol)悬浮在甲醇(500ml)中，所述浆液冷却至0℃。然后用20分钟滴加亚硫酰氯(54.3ml、744mmol)。开始形成透明溶液，随后变成白色悬浮液。反应升温至室温并且搅拌3小时。蒸发甲醇，所得淤浆悬浮在乙醚(1L)中。滤过固体，用乙醚充分清洗，得到标题化合物盐酸盐(50.9g)。所述盐悬浮在1NNaOH水溶液中，剧烈搅拌30分钟。过滤并用水彻底清洗，得到标题化合物游离碱白色固体，m.p.136-137℃。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.57(s，1H)，6.43(s，1H)，6.14(s，2H)，3.71(s，3H)，3.67(s，3H)。
C9H10ClNO3元素分析计算值C 50.13，H 4.67，N 6.50，测量值C49.85，H 4.46，N 6.65。
MS[(+)-APCI，m/z]216[M+H]+。C9H11ClNO3分子量计算值216.0428。
步骤B.5-氯-4-碘代-2-甲氧基苯甲酸甲酯步骤A的4-氨基-5-氯-2-甲氧基苯甲酸甲酯(5.00g、23.2mmol)悬浮在水(52ml)中，然后加入浓硫酸(13ml)。所得悬浮液冷却至-1℃，以保持温度低于0℃的速度加入亚硝酸钠(1.76g、25.5mmol)水(10ml)中的溶液，形成清澈的黄色溶液。然后滴加碘化钾(4.23g、25.5mmol)和碘(3.24g、12.8mmol)中水(50ml)中的混合物，反应在0℃搅拌1.5小时。反应混合物升温至室温然后用乙酸乙酯(200ml)萃取。合并萃取液，顺序用1M硫代硫酸钠水溶液、1N氢氧化钠和盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥，过滤然后浓缩，于是产物结晶。所得橙色晶体悬浮在石油醚中，过滤然后在真空中干燥，得到标题化合物(6.38g)，m.p.72-73℃。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.72(s，1H)，7.66(s，1H)，3.83(s，3H)，3.77(s，3H)。
C9H8ClIO3分析计算值C 33.11，H 2.47；测量值C 33.21，H 2.23。
MS[(+)-APCI，m/z]327[M]+。C9H9ClIO3计算值326.9285。
步骤C.5-氯-4-碘代-2-甲氧基苯甲酸甲酯步骤B的5-氯-4-碘代-2-甲氧基苯甲酸甲酯(3.00g，9.19mmol)和氢氧化钠(1.10g，27.6mmol)在甲醇(92ml)中的混合物回流12小时。所述反应冷却到室温，然后蒸发溶剂。残余物溶于1N氢氧化钠(75ml)，溶液用乙醚洗涤，除去有机洗涤液。用2N HCl酸化水相，用乙醚萃取。合并的萃取液用无水硫酸钠干燥，过滤然后浓缩，得到所述标题羧酸(2.64g)橙色晶体，m.p.150-151℃。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ13.03(bs，1H)，7.70(s，1H)，7.63(s，1H)，3.82(s，3H)。
C8H6ClIO3分析计算值C 30.75，H 1.94，测量值C 31.28，H 1.78。
MS[(-)-APCI，m/z]311[M-H]-。C8H5ClIO3计算值310.8972。
步骤D.(10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-10-基)-(2-甲氧基-4-碘代-5-氯苯基)-甲酮向步骤C的5-氯-4-碘代-2-甲氧基苯甲酸(0.900g，2.88mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(6.7μl，86.4μmol)在无水二氯甲烷(14.4ml)中的混合物滴加草酰氯(0.263ml，3.02mmol)。所述混合物加热回流1小时，然后冷却至室温，然后蒸干。加入新鲜的无水二氯甲烷(25ml)，浓缩所得溶液，残余物在真空中干燥。由此得到的粗酰氯和10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂(0.584g，3.17mmol)中无水二氯甲烷(14.4ml)中结合，随后加入N，N-二异丙基乙基胺(0.447ml，3.46mmol)。在室温下搅拌18小时以后，所述反应混合物用二氯甲烷(15ml)稀释，顺序用1N盐酸、1N氢氧化钠和盐水洗涤。有机相用无水硫酸镁干燥，过滤然后浓缩，得到粗标题酰胺，从乙醚重结晶得到1.23g微橙色晶体，m.p.91-192℃。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.60-7.28(m，3H)，7.14-7.01(m，3H)，6.79(s，1H)，5.95(s，1H)，5.89(t，J＝3.1，1H)，5.15(bs，4H)，3.56(s，3H)。
C20H16ClIN2O2分析计算值C 50.18，H 3.37，N 5.85，测量值C50.47，H 3.28，N 5.74。
MS(EI，m/z)478[M]+。C20H16ClIN2O2计算值477.9946。
步骤E.(10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-10-基)-[5-氯-2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧硼杂环戊烷(dioxaborolan)-2-基)-苯基]-甲酮步骤D的(10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-10-基)-(2-甲氧基-4-碘代-5-氯苯基)-甲酮(0.500g，1.04mmol)、双(频那醇合)二硼(0.289g，1.14mmol)、乙酸钾(0.306g，3.12mmol)和二氯-[1，1’-双(二苯基膦基)二茂铁]钯(II)二氯甲烷加合物(0.025g，0.0312mmol)中无水二甲亚砜(5.2ml)中合并，然后加热到80℃过夜。反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯稀释，然后用水以及盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥有机相，用己烷稀释，通过二氧化硅胶体塞过滤。滤液浓缩成油，从乙醚/石油醚(-20℃)结晶，得到标题化合物(0.430g)白色结晶固体，m.p.92-98℃。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)57.48-7.36(m，2H)，7.12-7.03(m，4H)，6.79(s，1H)，5.95(m，1H)，5.89(t，1H)，5.20(br，4H)，3.48(br，3H)，1.26(s，12H)。
C26H28BClN2O4分析计算值C 56.22，H 5.89，N 5.85，测量值C56.23，H 5.63，N 6.24。
MS[(+)-ESI，m/z]479[M+H]+.C26H29BClN2O4计算值479.1910。
步骤F.10-(5-氯-4-环己-1-烯-1-基-2-甲氧基苯甲酰基)-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂步骤E的(10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-10-基)-[5-氯-2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-苯基]-甲酮(0.220g，0.459mmol)、环己-1-烯-1-基三氟甲烷磺酸酯(0.116g，0.505mmol)和二氯[1，1’-双(二苯基膦基)二茂铁]钯(II)二氯甲烷加合物(0.0110g，0.0138mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(2.3ml)中合并。加入碳酸钠水溶液(2M，1.15ml，2.30mmol)，反应加热至60℃保持2小时。冷却至室温之后，用乙酸乙酯(50ml)稀释反应混合物，用水和盐水洗涤。用无水硫酸镁干燥有机相，过滤然后浓缩。在硅胶上使用在己烷中溶剂梯度30至40％的乙酸乙酯进行快速色谱，得到标题化合物(0.140g)的油。所述油溶于乙醚/石油醚，然后浓缩得到无定形的白色固体。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.38(d，2H)，7.11(t，1H)，7.06-7.00(m，2H)，6.79(s，1H)，6.57(s，1H)，5.95(s，1H)，5.89(t，1H)，5.55(s，1H)，5.24-4.60(m，4H)，3.52(s，3H)，2.13-2.09(m，4H)，1.68-1.57(m，4H)。
C26H25ClN2O2+0.03C4H10O的分析计算值C 71.76，H 5.79，N6.44。测量值C 71.66，H 5.59，N 6.10。
MS[(+)-APCI，m/z]433[M+H]+.C26H26ClN2O2计算值433.1684。
步骤G.10-(5-氯-4-环己-1-烯-1-基-2-甲氧基苯甲酰基)-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-羧酸步骤F的10-(5-氯-4-环己-1-烯-1-基-2-甲氧基苯甲酰基)-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1c][1，4]苯并二氮杂(0.300g，0.693mmol)和N，N-二异丙基乙基胺(0.127ml，0.728mmol)溶于无水二氯甲烷(2.8ml)。滴加三氯乙酰基氯化物(0.116ml，1.04mmol)，反应在室温下搅拌3小时。用乙酸乙酯稀释混合物，用1N HCl、1N NaOH和盐水洗涤。用无水硫酸镁干燥有机相，用己烷稀释，在室温下搅拌4小时，然后用1N盐酸(50ml)稀释，用乙醚萃取。有机相用使用在己烷中的30％乙酸乙酯滤过硅胶的1N钠萃取。浓缩滤液得到粗三氯乙酸酯(0.360g)。该物质溶于丙酮(4.2ml)，加入2.5N氢氧化钠(0.750ml)。与氢氧化物反应，合并的碱性萃取液用2N盐酸酸化。水相用乙醚萃取，用无水硫酸钠干燥萃取液，过滤然后浓缩，得到标题化合物(0.280g)白色固体，m.p.192℃(分解)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ12.34(br，1H)，7.42(br，1H)，7.25(d，1H)，7.07(t，1H)，6.98(t，1H)，6.93(d，1H)，6.72(d，1H)，6.54(br，1H)，6.10(d，1H)，5.90-4.60(m，5H)，3.47(br，3H)，2.14-2.09(m，4H)，1.65-1.57(m，4H)。
C27H25ClN2O4分析计算值C 67.99，H 5.28，N 5.87。测量值C67.71，H 5.23，N 5.49。
MS[(-)-APCI，m/z]475[M-H]-.C27H24ClN2O4计算值475.1426。
步骤H.10-(5-氯-4-环己-1-烯-1-基-2-甲氧基苯甲酰基)-N-甲基-N-(吡啶-3-基甲基)-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-羧酰胺步骤G的10-(5-氯-4-环己-1-烯-1-基-2-甲氧基苯甲酰)-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-羧酸(0.125g，0.262mmol)、3-(甲基氨基甲基)吡啶(0.038g，0.314mmol)、1-羟基苯并三唑(0.039g，0.288mmol)和1-[(3-二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.055g，0.288mmol)在不含胺的N，N-二甲基甲酰胺(1.1ml)中合并，随后加入N，N-二异丙基乙基胺(0.068ml，0.393mmol)。反应在室温下搅拌16小时，然后用乙酸乙酯稀释，用水、饱和的碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤。合并的含水洗涤液用氯化钠饱和，用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用无水硫酸镁干燥，过滤然后浓缩。残余物通过在硅胶上的快速色谱提纯，使用在氯仿中5％的甲醇洗脱，从乙醚/戊烷重结晶，得到0.140g的标题化合物白色结晶固体，m.p.178-179℃，通过分析HPLC(PrimesphereC-18，2.0×150mm，45％乙腈/水，0.2ml/分钟)得到98.0％纯度。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.53-8.50(m，2H)，7.71(d，1H)，7.45-7.41(m，2H)，7.31(d，1H)，7.08(t，1H)，6.98(t，1H)，6.94(d，1H)，6.54(s，1H)，6.33(s，1H)，6.05(d，1H)，5.56(s，1H)，5.37(s，2H)，5.35-4.80(br，2H)，4.74(s，2H)，3.48(br，3H)，3.03(s，3H)，2.14-2.09(m，4H)，1.65-1.57(m，4H)。
C34H33ClN4O3分析计算值C 70.27，H 5.72，N 9.64。测量值C69.95，H 5.77，N 9.31。
MS[(+)-APCI，m/z]581.0[M+H]+.C34H33ClN4O3计算值581.2321。
实施例210-(5-氯-4-环己-1-烯-1-基-2-甲氧基苯甲酰基)-N-甲基-N-(吡啶-3-基甲基)-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-羧酰胺L-(+)-酒石酸盐半水合物实施例1的10-(5-氯-4-环己-1-烯-1-基-2-甲氧基苯甲酰基)-N-甲基-N-(吡啶-3-基-甲基)-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-羧酰胺(0.200g，0.344mmol)溶于沸腾的乙醚。加入L-(+)-酒石酸(0.0520g，0.344mmol)在热甲醇(1ml)中的溶液，冷却所述混合物，然后蒸发溶剂。将乙醚加入到所述残余物中，形成白色固体，过滤然后在真空中干燥，得到0.252g标题化合物酒石酸盐，m.p.138-177℃。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ12.66(br，2H)，8.53-8.50(m，2H)，7.71(d，1H)，7.43-7.40(m，2H)，7.31(d1H)，7.08(t，1H)，6.98(t，1H)，6.93(d，1H)，6.54(s，1H)，6.33(s，1H)，6.05(d，1H)，5.57(s，1H)，5.37(s，2H)，5.35-4.80(br，4H)，4.74(s，2H)，4.30(s，2H)，3.48(br，3H)，3.03(s，3H)，2.14-2.09(m，4H)，1.65-1.57(m，4H)。
C34H33ClN4O3+1.00C4H6O6+0.50H2O分析计算值C 61.66，H 5.45，N 7.57。
测量值C 61.73，H 5.44，N 7.17。
MS[EI，m/z]580[M]+.C34H33ClN4O3计算值580.2243。
实施例310-[4-((3R)-3-羟基-2-甲基-环己-1-烯-1-基)-3-甲基苯甲酰基]-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-羧酸甲基-吡啶-3-基甲基酰胺步骤A.(10，1-二氢-5H-吡咯并[2，1q-c][1，4]苯并二氮杂-10-基)-[(3-氧代-2-甲基环己-1-烯-1-基)-3-甲基苯基]甲酮实施例5步骤B的(10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-10-基)-[3-甲基4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-苯基]-甲酮(6.75g，15.8mmol)、3-氧代-2-甲基环己-1-烯-1-基三氟甲烷磺酸酯(4.49g，17.4mmol)和二氯[1，1’-双(二苯基膦基)二茂铁]钯(II)二氯甲烷加合物(0.387g，0.474mmol)在二甲亚砜(79ml)中合并。加入碳酸钠水溶液(2M，39.5ml，79.0mmol)，所述反应加热至60℃保持3小时。冷却至室温后，反应混合物用水稀释，然后用乙酸乙酯洗涤。合并的萃取液用水和盐水洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，通过硅胶过滤然后浓缩。残余物用在硅胶上的快速色谱提纯，用在己烷中50％的乙酸乙酯洗脱，得到3.55g标题化合物淡橙色泡沫。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.45(dd，1H)，7.24(s，1H)，7.17(t，1H)，7.07(t，1H)，7.05(d，1H)，6.91(d，1H)，6.85(d，1H)，6.82(t，1H)，5.94(s，1H)，5.91(t，1H)，5.34-4.65(br，4H)，2.42-2.32(m，4H)，2.02(s，3H)，2.00-1.93(m，2H)，1.25(s，3H)。
C27H26N2O2+0.50H2O+0.05C6H14分析计算值C 77.37，H 6.59，N 6.60。测量值C 77.40，H 6.76，N 6.51。
MS[(+)-APCI，m/z]411.1[M+H]+.C27H27N2O2计算值411.2078。
步骤B.(10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-10-基)-[4-((3R)-3-羟基-2-甲基-环己-1-烯-1-基)-3-甲基苯基]-甲酮(S)-(-)-四氢-1-甲基-3，3-二苯基-1H，3H-吡咯并[1，2-c][1，3，2]硼杂噁唑(oxazaborole)[(S)-(-)-CBS-硼杂噁唑烷(oxazaborolidine)](在THF中1.0M，1.06ml，1.06mmol)溶于无水四氢呋喃(53.1ml，从钠/二苯甲酮羰游基蒸馏)。向该溶液中同时通过注射器泵送(1.6ml/分钟)加入步骤A的(10，1-二氢-5H-吡咯并[2，1q-c][1，4]苯并二氮杂-10-基)-[(3-氧代-2-甲基环己-1-烯-1-基)-3-甲基苯基]甲酮(2.18g，5.31mmol)在无水四氢呋喃(20ml)中的溶液和硼烷-四氢呋喃络合物(在四氢呋喃中1.0M，3.19ml，3.19mmol)，采用的泵送速率使得在加入大约2/3的硼烷-四氢呋喃络合物后结束烯酮加成。加入硼烷-四氢呋喃络合物结束后，反应混合物用水稀释，用乙酸乙酯萃取。合并的萃取液用1N氢氧化钠、1N盐酸和盐水洗涤，然后用无水硫酸镁干燥，过滤然后浓缩。残余物通过在硅胶上的快速色谱提纯，用在己烷中的50％乙酸乙酯洗脱，随后从乙醚中通过加入石油醚沉淀，得到2.02g标题化合物白色固体。分析HPLC(Chiralpak AD，4.6×250mm，50％乙醇/己烷，0.5mL/分钟)显示对映异构过量(enantiomeric excess)96.4％，[α]589＝+34.30(c＝1.0，氯仿)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.45(dd，1H)，7.18-7.14(m，2H)，7.07(t，1H)，6.95(t，1H)，6.88(d，1H)，6.81(t，1H)，6.73(t，1H)，5.93(s，1H)，5.91(t，1H)，5.27(br，2H)，5.25-4.80(br，2H)，3.90-3.84(m，1H)，1.99(d，3H)，1.90(br，2H)，1.75-1.59(m，3H)，1.541.49(m，1H)，1.24(s，3H)。
C27H28N2O2+0.50H2O+0.10C4H10O分析计算值C 75.60，H 6.81，N 6.53。测量值C 75.52，H 6.92，N 6.54。
MS[(+)-APCI，m/z]413.2[M+H]+.C27H29N2O2计算值413.2230。
步骤C.10-[4-((3R)-3-羟基-2-甲基-环己-1-烯-1-基)-3-甲基苯甲酰基]-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-羧酸步骤B的(10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-10-基)-[4-((3R)-3-羟基-2-甲基环己-1-烯-1-基)-3-甲基苯基]-甲酮(0.500g，1.21mmol)和N，N-二异丙基乙基胺(0.442ml，2.54mmol)溶于无水二氯甲烷(12.1ml)。然后滴加三氯乙酰基氯化物(0.297ml，2.66mmol)，所述反应在室温下搅拌3.5小时，用乙酸乙酯稀释，用1N盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥有机相，过滤然后浓缩。残余物通过硅胶塞过滤，用在己烷中30％的乙酸乙酯洗脱，然后浓缩滤液，得到粗双-三氯乙酸酯棕色泡沫。该物质溶于丙酮(8.1ml)，用2.5N氢氧化钠(1.94ml，4.84mmol)处理。在室温下搅拌2.5小时之后，反应混合物用1N盐酸(50ml)酸化，然后用乙醚萃取。合并的有机萃取液用1N氢氧化钠萃取，合并碱性萃取液，用2N盐酸酸化。通过酸化，形成沉淀物，过滤然后干燥，得到0.510g标题化合物棕色固体，[α]589＝+17.84(c＝1.0，氯仿)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ12.33(br，1H)，7.33(dd，1H)，7.14-7.11(m，2H)，7.02(t，1H)，6.94(t，1H)，6.82(d，1H)，6.76-6.71(m，2H)，6.09(d，1H)，6.04-5.76(br，2H)，5.44-4.90(br，2H)，4.63(t，1H)，3.89-3.83(m，1H)，1.99(dd，3H)，1.90(br，2H)，1.72-1.59(m，3H)，1.53-1.49(m，1H)，1.25(s，3H)。
C28H28N2O4分析计算值C 73.66，H 6.18，N 6.14。测量值C 66.75，H 5.97，N 5.04。
MS[(-)-ESI，m/z]455.4[M-H]-.C28H27N2O4计算值455.1972。
步骤D.10-[4-((3R)-3-羟基-2-甲基-环己-1-烯-1-基)-3-甲基苯甲酰基]-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-羧酸甲基-吡啶-3-基甲基酰胺步骤C的10-[4-((3R)-3-羟基-2-甲基环己-1-烯-1-基)-3-甲基苯甲酰基]-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-羧酸(0.250g，0.548mmol)、3-(甲基氨基甲基)吡啶(0.080ml，0.658mmol)、1-羟基苯并三唑(0.081g，0.603mmol)和1-[(3-二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.116g，0.603mmol)在不含胺的N，N-二甲基甲酰胺(2.2ml)中合并，随后加入N，N-二异丙基乙基胺(0.143ml，0.822mmol)。反应在室温下搅拌18小时，然后用乙酸乙酯稀释，用水、饱和的碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤。合并的含水洗涤液用氯化钠饱和，然后用乙酸乙酯萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤然后浓缩。残余物通过在硅胶上快速色谱提纯，用在氯仿中0至8％溶剂梯度的甲醇洗脱，得到0.270g标题化合物油，其溶于乙醚然后用石油醚沉淀，得到白色固体，m.p.100-144℃，[α]589＝+18.49(c＝1.0，氯仿)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.54(s，1H)，8.51(dd，1H)，7.72(d，1H)，7.42(dd，1H)，7.37(d，1H)，7.15-7.11(m，2H)，7.02(dt，1H)，6.94(t，1H)，6.83(d，1H)，6.73(t，1H)，6.35(br，1H)，6.04(d，1H)，5.45(s，2H)，5.35-4.85(br，2H)，4.75(s，2H)，4.62(t，1H)，3.89-3.84(m，1H)，3.04(s，3H)，1.99(d，3H)，1.90(br，2H)，1.76-1.60(m，3H)，1.54-1.51(m，1H)，1.25(s，3H)。
C35H36N4O3+0.15C4H10O分析计算值C 73.52，H 6.35，N 9.80；测量值C 73.68，H 6.67，N 9.42。
MS[(+)-ESI，m/z]561.3[M+H]+.C35H37N4O3计算值561.2867。
实施例410-[4-((3R)-3-羟基-2-甲基-环己-1-烯-1-基)-3-甲基苯甲酰基]-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-羧酸甲基-吡啶-3-基甲基酰胺L-(+)-酒石酸盐实施例3的10-[4-((3R)-3-羟基-2-甲基-环己-1-烯-1-基)-3-甲基苯甲酰基]-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-羧酸甲基-吡啶-3-基甲基酰胺(0.120g，0.214mmol)溶于沸腾的乙醚。加入L-(+)-酒石酸(0.0320g，0.214mmol)在热甲醇(1ml)中的溶液，冷却混合物然后蒸发溶剂。将乙醚加入所述残余物，形成白色固体，其过滤然后在真空中干燥，得到0.152g标题化合物酒石酸盐。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ12.67(br，2H)，8.54(s，1H)，8.51(dd，1H)，7.72(d，1H)，7.42(dd，1H)，7.37(d，1H)，7.13-7.11(m，2H)，7.02(t，1H)，6.94(t，1H)，6.83(d，J1H)，6.73(t，1H)，6.35(br，1H)，6.05(d，1H)，5.46(s，2H)，5.07(br，4H)，4.75(s，2H)，4.63(br，1H)，4.30(s，2H)，3.86(d，1H)，3.04(s，3H)，1.99(d，3H)，1.90(bs，2H)，1.77-1.60(m，3H)，1.56-1.50(m，1H)，1.24(s，3H)。
C35H36N4O3+1.00C4H6O6+0.33C4H10O分析计算值C 63.71，H5.76，N 7.62。测量值C 63.00，H 6.14，N 6.91。
MS[(+)-ESI，m/z]561.2[M+H]+.C35H37N4O3计算值561.2867。
实施例510-[4-(1-环己-1-烯-1-基)-3-甲基苯甲酰基]-N-(2-吡啶基甲基)-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-羧酰胺步骤A.(10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-10-基)-(4-溴-3-甲基-苯基)-甲酮向4-溴-3-甲基苯甲酸(21.5g，100mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(0.251ml，3.00mmol)在无水二氯甲烷(200ml)的搅拌的混合物中滴加草酰氯(9.16ml，105mmol)。加热混合物至回流1.5小时，然后冷却至室温，蒸发溶剂。加入新鲜的无水二氯甲烷(200ml)，浓缩所得溶液，残余物在真空中干燥。由此得到的粗酰氯和10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂(17.5g，95.0mmol)在无水二氯甲烷(200ml)中合并，随后加入N，N-二异丙基乙基胺(19.2ml，3.46mmol)。在室温下搅拌18小时之后，反应混合物用1N盐酸、1N氢氧化钠和盐水洗涤。用无水硫酸镁干燥有机相，过滤然后浓缩，得到粗酰胺，其从乙酸乙酯重结晶，得到标题化合物淡橙色晶体(34.8g)，m.p.175-176℃。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.45(dd，1H)，7.38(d，1H)，7.33(d，1H)，7.18(dt，1H)，7.10(t，1H)，6.92(s，1H)，6.90(s，1H)，6.82(t，1H)，5.94(s，1H)，5.91(t，1H)，5.27-4.80(br，4H)，2.22(s，3H)。
C20H17BrN2O+0.20H2O分析计算值C 62.42，H 4.56，N 7.28。测量值C 62.43，H 4.60，N 7.24。
MS[(+)-ESI，m/z]381[M+H]+.C20H18BrN2O计算值381.0598。
步骤B.(10，11-二氢-3H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-10-基)-[3-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-苯基]-甲酮步骤A的(10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-10-基)-(2-溴-3-甲基苯基)-甲酮(20.0g，52.5mmol)、双(频那醇合)二硼(14.7g，57.8mmol)、乙酸钾(15.5g，158mmol)和二氯-[1，1’-双(二苯基膦基)二茂铁]钯(II)二氯甲烷加合物(1.29g，1.58mmol)中无水二甲亚砜(263ml)中合并，然后加热到80℃保持18小时。反应冷却至室温，然后加入另外的催化剂(1.29g，1.58mmol)和双(频那醇合)二硼(3.33g，13.1mmol)。重新在80℃开始加热另外18小时。冷却反应混合物至室温，用乙酸乙酯(500ml)稀释，通过硅胶过滤。用水和盐水洗涤滤液。用无水硫酸钠干燥有机相，用己烷稀释，通过二氧化硅凝胶塞过滤。浓缩滤液得到油，加入戊烷使产物结晶。过滤黄白色晶体，在真空中干燥，得到18.4g标题化合物，m.p.190-193℃。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.45(dd，1H)，7.39(d，1H)，7.18-7.06(m，3H)，6.98(d，1H)，6.91(br，1H)，6.81(t，1H)，5.94(br，1H)，5.91(t，1H)，5.33-4.60(br，4H)，2.32(s，3H)，1.25(s，12H).
C26H29BN2O3+0.12C4H8O2分析计算值C 72.46，H 6.88，N 6.38。测量值C 70.80，H 6.83，N 6.06。
MS[(+)-ESI，m/z]429[M+H]+.C26H30BN2O3计算值429.2348。
步骤C.(10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-10-基)-(4-环己-1-烯-1-基-3-甲基-苯基)-甲酮步骤B的(10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-10-基)-[3-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-苯基]-甲酮(3.50g，8.17mmol)、环己-1-烯-1-基三氟甲烷磺酸酯(2.26g，9.80mmol)和二氯[1，1’双(二苯基膦基)二茂铁]钯(II)二氯甲烷加合物(0.200g，0.245mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(40.9ml)中合并。加入碳酸钠水溶液(2M，20.5ml，40.9mmol)，反应加热至60℃过夜。冷却至室温后，所述反应混合物用乙酸乙酯洗涤，有机层用水和盐水洗涤。用无水硫酸镁干燥有机相，过滤然后浓缩。残余物溶于热乙酸乙酯/石油醚(1∶1)然后过滤。浓缩滤液然后从石油醚重结晶残余物，得到2.52g标题化合物浅棕色晶体，m.p.182-183℃。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.47(dd，1H)，7.21-7.10(m，3H)，6.93(d，2H)，6.83(d，1H)，6.81(t，1H)，5.93-5.91(m，2H)，5.43(m，1H)，5.26(br，2H)，5.20-4.80(br，2H)，2.11(s，3H)，2.09-2.05(m，4H)，1.67-1.56(m，4H)。
C26H26N2O+0.15H2O分析计算值C 81.07，H 6.88，N 7.27。测量值C 81.03，H 6.86，N 7.24。
MS[(+)-ESI，m/z]383[M+H]+.C26H27N2O计算值383.2128。
步骤D.2，2，2-三氯-1-[10-(4-环己-1-烯-1-基-3-甲基苯甲酰基)-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-基]-甲酮步骤C的(10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-10-基)-(4-环己-1-烯基-3-甲基苯基)-甲酮(1.03g，2.69mmol)和N，N-二异丙基乙基胺(0.937ml 5.38mmol)溶于无水二氯甲烷(13.5ml)，然后滴加三氯乙酰基氯化物(0.901ml，8.07mmol)。反应在室温下搅拌3小时，然后蒸发溶剂。残余物用乙酸乙酯稀释然后通过硅胶塞过滤。滤液用0.1N盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥，过滤然后浓缩。残余物从乙酸乙酯/己烷结晶，得到1.41g标题化合物白色晶体，m.p.149-150℃。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.46-7.43(m，2H)，7.21-7.16(m，2H)，7.12(dt，1H)，6.95-6.90(m，2H)，6.85(d，1H)，6.34(d，1H)，5.95(br，2H)，5.44(m，1H)，5.27(br，2H)，2.12(s，3H)，2.10-2.05(m，4H)，1.68-1.55(m，4H)。
C28H25Cl3N2O2分析计算值C 63.71，H 4.77，N 5.31。测量值C63.35，H 4.62，N 5.24。
MS[(+)-ESI，m/z]527.2[M+H]+.C28H26Cl3N2O2计算值527.1058。
步骤E.10-(4-环己-1-烯-1-基-3-甲基苯甲酰基)-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-羧酸步骤D的2，2，2-三氯-1-[10-(4-环己-1-烯-1-基-3-甲基苯甲酰基)-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-基]-甲酮(0.700g、1.33mmol)溶于丙酮(8.9ml)，随后加入2.5N氢氧化钠(1.60ml、3.99mmol)。反应在室温下搅拌3小时，用2N盐酸酸化。用乙醚萃取酸性混合物，用1N氢氧化钠萃取有机相。合并的碱性萃取液用2N盐酸酸化，用乙醚萃取。萃取液用无水硫酸钠干燥，过滤然后浓缩。残余物从乙醚重结晶，得到0.450g标题化合物白色晶体，193℃(分解)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ12.31(s，1H)，7.35(dd，1H)，7.17-7.13(m，2H)，7.07(dt，1H)，6.91(dd，1H)，6.85(t，2H)，6.75(d，1H)，6.08(d，1H)，5.92(br，2H)，5.43(m，1H)，5.14(br，2H)，2.11(s，3H)，2.10-2.05(m，4H)，1.67-1.55(m，4H)。
C27H26N2O3的分析计算值C 76.03，H 6.14，N 6.57。测量值C75.71，H 6.16，N 6.48。
MS[(-)-ESI，m/z]425.2[M-H]-.C27H25N2O3计算值425.1862。
步骤F.10-[4-(1-环己-1-烯-1-基)-3-甲基苯甲酰基]-N-(2-吡啶基甲基)-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-羧酰胺按实施例3步骤D的方法，通过将实施例5步骤E的10-(4-环己-1-烯-1-基-3-甲基苯甲酰基)-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-羧酸用[(2-吡啶基)甲基]胺酰化制备。
HRMS[(+)-ESI，m/z]517.25972[M+H]+.C33H33N4O2计算值517.25981实施例610-[4-(1-环己-1-烯-1-基)-3-甲基苯甲酰基]-N-(3-吡啶基甲基)-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-羧酰胺按实施例3步骤D的方法，通过将实施例5步骤E的10-(4-环己-1-烯-1-基-3-甲基苯甲酰基)-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-羧酸用[(3-吡啶基)甲基]胺酰化制备。
HRMS[(+)-ESI，m/z]517.25943[M+H]+.C33H33N4O2计算值517.25981实施例710-[4-(1-环己-1-烯-1-基)-3-甲基苯甲酰基]-N-(2-(2-吡啶基)乙基)-10，1 1-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-羧酰胺按实施例3步骤D的方法，通过将实施例5步骤E的10-(4-环己-1-烯-1-基-3-甲基苯甲酰基)-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-羧酸用[(2-吡啶基)乙基]胺酰化制备。
HRMS[(+)-ESI，m/z]531.27522[M+H]+.C34H35N4O2计算值531.27546。
实施例810-[4-(1-环己-1-烯-1-基)-3-甲基苯甲酰基]-N-甲基-N-[2-(2-吡啶基)乙基]-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-羧酰胺按实施例3步骤D的方法，通过将实施例5步骤E的10-(4-环己-1-烯-1-基-3-甲基苯甲酰基)-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-羧酸用N-甲基-N-[2-(2-吡啶基)乙基]胺酰化制备。
HRMS[(+)-ESI，m/z]545.29048[M+H]+.C35H37N4O2计算值545.29111实施例9{10-[4-(1-环己-1-烯-1-基)-3-甲基苯甲酰基]-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-基}[4-(2-吡啶基)-1-哌嗪基]甲酮按实施例3步骤D的方法，通过将实施例5步骤E的10-(4-环己-1-烯-1-基-2-甲基苯甲酰基)-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-2-羧酸用4-(2-吡啶基)-1-哌嗪酰化制备。
HRMS[(+)-ESI，m/z]572.30182[M+H]+.C36H38N5O2计算值572.30201。
实施例1010-[4-(1-环己-1-烯-1-基)-3-甲基苯甲酰基]-N-(4-吡啶基甲基)-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-羧酰胺按实施例3步骤D的方法，通过将实施例5步骤E的10-(4-环己-1-烯-1-基-3-甲基苯甲酰基)-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-4-羧酸用[(4-吡啶基)甲基]胺酰化制备。
HRMS[(+)-ESI，m/z]517.25954[M+H]+.C33H33N4O2计算值517.25981。
实施例1110-[4-(1-环己-1-烯-1-基)-3-甲基苯甲酰基]-N-甲基-N-(3-吡啶基甲基)-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-羧酰胺按实施例3步骤D的方法，通过将实施例5步骤E的10-(4-环己-1-烯-1-基-3-甲基苯甲酰基)-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-羧酸用N-甲基-N-[(3-吡啶基)甲基]胺酰化制备。
HRMS[(+)-ESI，m/z]531.27554[M+H]+.C34H35N4O2计算值531.27546。
实施例12{10-[4-(1-环己-1-烯-1-基)-3-甲基苯甲酰基]-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-基}[4-(4-吡啶基)-1-哌嗪基]甲酮按实施例3步骤D的方法，通过将实施例5步骤E的10-(4-环己-1-烯-1-基-3-甲基苯甲酰基)-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-羧酸用4-(4-吡啶基)-1-哌嗪酰化制备。
HRMS[(+)-ESI，m/z]572.30113[M+H]+.C36H38N5O2计算值572.30201。
实施例1310-[4-(1-环己-1-烯-1-基)-3-甲基苯甲酰基]-N-甲基-N-[2-(4-吡啶基)乙基]-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-羧酰胺按照实施例3步骤D的方法，通过将实施例5步骤E的10-(4-环己-1-烯基-3-甲基苯甲酰基)-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-羧酸用N-甲基-N-[2-(4-吡啶基)乙基]胺酰化制备。
HRMS[(+)-ESI，m/z]545.29081[M+H]+.C35H37N4O2计算值545.2911权利要求
1.通式(I)的化合物 其中 是 或 R1和R2独立地选自氢、(C1-C6)烷基、卤素、氰基、三氟甲基、羟基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、(C1-C6)烷氧基、-OCF3、(C1-C6烷氧基)羰基、-NHCO[(C1-C6)烷基]、羧基、-CONH2、-CONH(C1-C6)烷基或-CON[(C1-C6)烷基]2；R3是取代基，选自氢、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、羟基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、-CO(C1-C6)烷基或卤素；R4由部分B-C组成；其中B选自基团 或 C定义为 或 其中A是CH或N；R5、R6、R7和R8独立地选自氢、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、羟基(C1-C6)烷基、低级烷氧基(C1-C6)烷基、(C2-C7)酰氧基(C1-C6)烷基、(C1-C6烷基)羰基、(C2-C6)链烯基、(C2-C6)链炔基、(C3-C8)环烷基、甲酰基、(C3-C8)环烷基羰基、羧基、低级烷氧基羰基、(C3-C8)环烷基氧羰基、(芳基低级烷基)氧羰基、氨基甲酰基、-O-CH2-CH＝CH2、卤素、包括三氟甲基的卤代低级烷基、-OCF3、-S(低级烷基)、-OC(O)N[低级烷基]2、-CONH(低级烷基)、-CON[低级烷基]2、低级烷基氨基、二低级烷基-氨基、二低级烷基氨基低级烷基、羟基、氰基、三氟甲基硫基、硝基、氨基、低级烷基磺酰基、氨基磺酰基、低级烷基氨基磺酰基、 苯基或萘基；R9选自氢、低级烷基、羟基(C1-C6)烷基、低级烷氧基(C1-C6)烷基、(C2-C7)酰氧基(C1-C6)烷基、(低级烷氧基)羰基、-CON[(C1-C6)烷基]2、氰基；或任选被卤素或低级烷氧基取代的芳基；R10表示一至两个独立选择的取代基，其选自氢、低级烷基、低级烷基羰基、 叠氮基、氨基、-NH[低级烷基]、-N[低级烷基]2、氨基羰基低级烷基、苯二酰亚氨基、氰基、卤素、硫代低级烷基、芳氧基、芳基硫、任选被一个至三个选自(C1-C6)烷基、低级烷氧基或卤素的取代基取代的芳基；羟基、低级烷氧基、-OSO2R17或OP’，其中P’是叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、羰基低级烷基、羰基三氟代低级烷基、芳基低级烷基、芳基羰基、甲氧基甲基或甲硫基甲基；前提条件是当R10表示两个取代基时，所述两个取代基可以和它们所连接的环己烯环一起形成一个C7-C12双环体系；R11选自氢或(C1-C6)烷基；和R选自任何下列基团 其中R12选自氢、(C1-C6)烷基、氰乙基或 R13和R14独立地选自氢或(C1-C6)烷基；R15是一个或两个取代基，其独立地选自氢、(C1-C6)烷基、卤素、三氟甲基、(C1-C6)烷氧基、(C1-C6烷氧基)羰基或 R16表示一至两个取代基，独立地选自氢或(C1-C6)烷基；R17选自氢、(C1-C6)烷基、三氟低级烷基或任选被低级烷基取代的芳基；m是0至2的整数；n是1至2的整数；和p是0至1的整数；和其可药用盐或其前药形式。
2.下式的权利要求1的化合物 其中 是 或 R1和R2独立地选自氢、(C1-C6)烷基、卤素、氰基、三氟甲基、羟基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、(C1-C6)烷氧基、-OCF3、(C1-C6烷氧基)羰基、-NHCO[(C1-C6)烷基]、羧基、-CONH2、-CONH(C1-C6)烷基或-CON[(C1-C6)烷基]2；R3是取代基，选自氢、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、羟基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、-CO(C1-C6)烷基或卤素；R4由部分B-C组成；其中B选自基团 或 和C定义为 或 其中A是CH或N；R5、R6、R7和R8独立选自H、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、羟基(C1-C6)烷基、低级烷氧基(C1-C6)烷基、(C2-C7)酰氧基(C1-C6)烷基、(C1-C6烷基)羰基、(C2-C6)链烯基、(C2-C6)链炔基、(C3-C8)环烷基、甲酰基、(C3-C8环烷基)羰基、羧基、(低级烷氧基)羰基、(C3-C8环烷基)氧基羰基、氨基甲酰基、-O-CH2-CH＝CH2、卤素、包括三氟甲基的卤代低级烷基、-OCF3、-S(低级烷基)、-OC(O)N[低级烷基]2、-CONH(低级烷基)、-CON[低级烷基]2、低级烷基氨基、二低级烷基氨基、低级烷基二低级烷基氨基、羟基、氰基、三氟甲基硫基、硝基、氨基、低级烷基磺酰基、氨基磺酰基或低级烷基氨基磺酰基；R9选自H、低级烷基、羟基(C1-C6)烷基、烷氧基(C1-C6)烷基、(C2-C7)酰氧基(C1-C6)烷基、(低级烷氧基)羰基、-CON[(C1-C6)烷基]2或氰基；R10表示一至两个独立选择的取代基，其选自氢、低级烷基、羟基(C1-C6)烷基、低级烷氧基(C1-C6)烷基、(C2-C7)酰氧基(C1-C6)烷基、低级烷基羰基、叠氮基、氨基、-NH[低级烷基]、-N[低级烷基]2、氨基羰基低级烷基、苯二酰亚氨基、氰基、卤素、硫代低级烷基、芳氧基、芳基硫、羟基、低级烷氧基、-OSO2R17，或OP’，其中P’是叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、羰基低级烷基、羰基三氟代低级烷基、甲氧基甲基或甲硫基甲基；R11选自氢或(C1-C6)烷基；和R选自任何下列基团 或 其中R12选自氢、(C1-C6)烷基或氰乙基；R13和R14独立选自氢或(C1-C6)烷基；R15是一个或两个取代基，其独立地选自氢、(C1-C6)烷基、卤素、三氟甲基、(C1-C6)烷氧基、(C1-C6烷氧基)羰基；R16和R16’独立地选自氢或(C1-C6)烷基；m是0至2的整数；和p是0至1的整数；或其可药用盐或其前药形式。
3.权利要求书1的化合物，选自a)10-(5-氯-4-环己-1-烯-1-基-2-甲氧基苯甲酰基)-N-甲基-N-(吡啶-3-基甲基)-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-羧酰胺；b)10-(5-氯-4-环己-1-烯-1-基-2-甲氧基苯甲酰基)-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-羧酸；c)10-[4-((3R)-3-羟基-2-甲基-环己-1-烯-1-基)-3-甲基-苯甲酰基]-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-羧酸甲基-吡啶-3-基甲基酰胺；d)10-[4-(1-环己-1-烯-1-基)-3-甲基苯甲酰基)-N-(2-吡啶基甲基)-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-羧酰胺；或e)2，2，2-三氯-1-[10-(4-环己-1-烯-1-基-3-甲基苯甲酰基)-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-基]-甲酮；或其可药用盐。
4.权利要求1的化合物，选自a)10-(4-环己-1-烯-1-基-3-甲基苯甲酰基)-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-羧酸；b)10-[4-(1-环己-1-烯-1-基)-3-甲基苯甲酰基)-N-(3-吡啶基甲基)-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-羧酰胺；c)10-[4-(1-环己-1-烯-1-基)-3-甲基苯甲酰基)-N-[2-(2-吡啶基)乙基]-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-羧酰胺；d)10-[4-(1-环己-1-烯-1-基)-3-甲基苯甲酰基)-N-甲基-N-[2-(2-吡啶基)乙基]-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-d][1，4]苯并二氮杂-3-羧酰胺；或e){10-[4-(1-环己-1-烯-1-基)-3-甲基苯甲酰基]-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-基}[4-(2-吡啶基)-1-哌嗪基]甲酮；或其可药用盐。
5.权利要求1的化合物，选自a)10-[4-(1-环己-1-烯-1-基)-3-甲基苯甲酰基)-N-(4-吡啶基甲基)-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-羧酰胺；b)10-[4-(1-环己-1-烯-1-基)-3-甲基苯甲酰基)-N-甲基-N-(3-吡啶基甲基)-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-羧酰胺；c){10-[4-(1-环己-1-烯-1-基)-3-甲基苯甲酰基)-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，4]苯并二氮杂-3-基}[4-(4-吡啶基)-1-哌嗪基]甲酮；或d)10-[4-(1-环己-1-烯-1-基)-3-甲基苯甲酰基)-N-甲基-N-[2-(4-吡啶基)乙基]-10，11-二氢-5H-吡咯并[2，1-d][1，4]苯并二氮杂-3-羧酰胺；或其可药用盐。
6.一种药物组合物，含有权利要求1至5任一项所述的化合物或其可药用盐或其前药，以及可药用载体或赋形剂。
7.一种用于抑制或防止早产、痛经、子宫内膜炎以及用于抑制哺乳动物剖腹产分娩前分娩的方法，所述方法包括给予需要的哺乳动物制药有效量的权利要求1-5任一项所述的化合物和其可药用盐或其前药。
全文摘要
本发明提供新的三环吡啶基羧酰胺以及方法和利用它们的药物组合物，其用于处理和/或预防和/或抑制病症，这些病症可以通过催产素拮抗剂活性医治或减轻，包括预防和/或抑制早产、抑制剖腹产分娩前的足月分娩以及用于治疗痛经。这些化合物还用于为农畜提高受胎率、提高生存率和协调动情期；可以用于预防和医治中枢神经系统内催产素体系的机能失调，包括强迫症(OCD)和神经精神病学障碍。
文档编号A61P5/24GK1501930SQ02808033
公开日2004年6月2日 申请日期2002年4月11日 优先权日2001年4月12日
发明者阿米德·阿图罗·法伊利, 威廉·詹宁斯·桑德斯, 尤金·约翰·特雷布尔斯基, 约翰 特雷布尔斯基, 詹宁斯 桑德斯, 阿米德 阿图罗 法伊利 申请人:惠氏公司