专利名称：：复合磷酸酯酶及其提取方法,和该复合磷酸酯酶胶囊的制作方法
技术领域：
：本发明涉及复合磷酸酯酶，具体地说是涉及一种从大麦芽根须中提取的复合磷酸酯酶，以及这种提取的方法，和使用该纯化的复合磷酸酯酶制得的胶囊。
背景技术：
：复合磷酸酯酶是从制麦的副产物——大麦根须中提取制得的多种酶的混合物，主要由磷酸单酯酶、磷酸二酯酶、核苷酸酶、淀粉酶等组成。这些生物活性物质能催化多种磷酸酯水解，调节人体新陈代谢，服用后可改善机体代谢，增进食欲，增强体质，使某些疾病得以改善或痊愈。因此，在临床上可用于迁延性肝炎、慢性肝炎、早期肝硬化、冠心病、胶原性硬皮病、小儿顽固性牛皮癣、再生障碍性贫血、白血球减少症及矽肺的辅助治疗。传统的方法是将大麦根粉碎，水提取复合磷酸酯酶，将水提液离心弃去杂质沉淀，上清液加入3—4倍乙醇使复合磷酸酯酶沉淀，离心得到复合磷酸酯酶。此方法用到大量乙醇，极大地增加了生产成本。而且，得到的复合磷酸酯酶的活力不是很高。由于复合磷酸酯酶易于在胃中被胃酸破坏，所以为了减少胃内首过效应，现有的复合磷酸酯酶的制剂仅有肠溶片剂，剂型单一。
发明内容乐盈VI本发明的目的在于提供一种具有较高活力的复合磷酸酯酶。本发明的另一目的在于克服现有技术的提取方法会用到大量的乙醇，极大地增加了生产成本的缺点，从而提供一种避免了使用大量乙醇，从麦芽根水提液中可低成本地提取复合磷酸酯酶的方法，本发明的方法成本低廉、适于大规模工业生产。本发明的再一目的在于提供一种上述复合磷酸酯酶的新剂型制剂。为了实现上述发明目的，本发明提供了一种从大麦芽根中提取纯化复合磷酸酯酶的方法，包括如下歩骤1)硫酸铵分级沉淀于25"C，边搅拌，边向大麦芽根水提取液中，加入硫酸铵，使得溶液中的硫酸铵浓度为40—80°/。饱和度(如表l所示)，即按照每1升溶液加固体硫酸铵243—561g的量加入硫酸铵；继续搅拌，充分沉淀后，离心弃去上清；所述的大麦芽根水提取液是将麦芽根粉碎为80目，按lkg:8L的质量体积比加入水，在不高于2(TC的温度下提取20小时，然后以转速4000转/分钟离心25分钟，滤出水相，即为大麦芽根水提取液；2)丙酮-水溶液洗盐在-2(TC下，用丙酮-水溶液清洗歩骤1)得到的沉淀；离心弃去上清；所述的丙酮-水溶液中，丙酮和水的体积比为2:3—7:3，其加入量与歩骤l)中得到的沉淀的质量体积比为1:10—15(g/ml);3)丙酮溶液干燥在-2(TC下，用纯丙酮清洗步骤2)得到的沉淀；离心弃去上清，在室温晾干，粉碎，得到所需的复合磷酸酯酶。在本发明的技术方案中，所述步骤l)中，加入硫酸铵后，继续搅拌的时间为30—50分钟。在本发明的技术方案中，所述歩骤l)中，离心转速为4000转/分钟，时间为25分钟。在本发明的技术方案中，所述步骤2)中，离心时，转速为4000转/分钟，时间为15分钟，温度为4。C。在本发明的技术方案中，所述歩骤2)中的丙酮-水溶液的清洗和离心过程为重复3—4次。表l、在25。C下，硫酸铵溶液由初浓度调到终浓度时，_每升溶液所加固体硫酸铵的克数_硫酸铵终浓度(％饱和度)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>本发明采用硫酸铵分级沉淀、丙酮-水溶液洗盐、丙酮溶液干燥相结合的方法，从大麦芽根水提取液中提取纯化复合磷酸酯酶，并将所有丙酮-水、纯丙酮洗涤复合磷酸酯酶沉淀的操作控制在-2(TC下低温操作，以避免复合磷酸酯酶活性降低。最终获得了符合国家药品标准的要求的复合磷酸酯酶，该复合磷酸酯酶的活力单位可达到39000u/mg。与现有技术相比，本发明解决了原老技术本身技术中所存在的弊病，避免了使用大量的有机溶剂，节约了大量成本，操作简单，适合于工业化大规模生产；而且，可以得到高纯度高生物活性的复合磷酸酯酶。本发明还提供了一种复合磷酸酯酶胶囊，其中含有作为有效成分的上述复合磷酸酯酶，和药用辅料。所述的药用辅料包括固体制剂中常用的填充剂和润滑剂；所述的润滑剂，可以是硬脂酸镁、滑石粉和微粉硅胶中的一种或多种；所述的填充剂可以是淀粉、乳糖、糖粉、可压性淀粉中的一种或多种；其中，润滑剂占总药量的重量比为0-5%;填充剂占总药量的重量比为40-85%;余量为上述复合磷酸酯酶。本发明提供的复合磷酸酯酶胶囊，是先将上述提取得到的复合磷酸酯酶提取物粉碎，过100目筛，然后将此粉末和所需比例的填充剂和润滑剂混匀，加入润湿剂和粘合剂制软材，制颗粒，整粒，干燥，装胶囊。所述的湿润剂和粘合剂为选自蒸馏水、淀粉浆、3%-5%聚乙烯吡咯烷酮水或醇溶液。所用胶囊为肠溶胶囊，为4号或5号胶囊。与现有的肠溶片剂相比，该复合磷酸酯酶胶囊的优点在于l.服用量小，每粒胶囊装量0.2至0.4g，每次服用l-2粒，每日3次。3.制剂辅料少，仅加入适量的润滑剂和填充剂。4.制剂成本低，节约资源和能源。5.胶囊剂方便储存，运输，掩盖了药物异味，更加方便患者服用。该复合磷酸酯酶胶囊可用于肝炎辅助治疗的药物。具体实施例方式实施例l:从大麦芽根须水提液中提取复合磷酸酯酶将3kg麦芽根粉碎为80目，按l:8的质量体积比加入24L水，在不高于2(TC的温度下提取20小时，然后以转速4000转/分钟离心25分钟，滤出水相，得到大麦芽根水提取液。取上述大麦芽根水提取液20L，于25"C，边搅拌，边将11.22公斤硫酸铵缓慢加入到该大麦芽根水提液中，继续搅拌30分钟，充分沉淀后，于室温在离心机中离心25分钟，转速4000转/分钟，弃去上清。于-2(TC，采用800ml丙酮-水溶液(其中，丙酮水的体积比为3:2)充分洗涤磷酸二酯酶沉淀，然后于4"C，在离心机中离心15分钟，转速4000转/分钟，弃去上清。重复此洗涤一离心过程3次。于-20。C，用800ml纯丙酮清洗沉淀，然后于4。C在离心机中离心25分钟，转速4000转/分钟，弃去上清。重复此洗涤一离心过程2次。然后将得到的沉淀物在室温晾干，粉碎，即得到所需的复合磷酸酯酶65g，产品酶活效价为38000u/mg。实施例2:从大麦芽根须水提液中提取复合磷酸酯酶取实施例1中的大麦芽根水提取液20L，于25。C，边搅拌，边将9.44公斤硫酸铵缓慢加入到该大麦芽根水提液中，继续搅拌45分钟，充分沉淀后，于室温在离心机中离心25分钟，转速4000转/分钟，弃去上清。于-20"C，采用1000ml丙酮-水溶液(其中，丙酮水的体积比为3:2)充分洗涤磷酸二酯酶沉淀，然后于《C,在离心机中离心15分钟，转速4000转/分钟，弃去上清。重复此洗涤一离心过程4次。于-2(TC，用800ml纯丙酮清洗沉淀，然后于4"C在离心机中离心25分钟，转速4000转/分钟，弃去上清。重复此洗涤一离心过程2次。然后将得到的沉淀物在室温晾干，粉碎，即得到所需的复合磷酸酯酶70g，产品酶活效价为39000u/mg。实施例3:从大麦芽根须水提液中提取复合磷酸酯酶取实施例1中的大麦芽根水提取液20L，于25"C，边搅拌，边将4.86公斤硫酸铵缓慢加入到该大麦芽根水提液中，继续搅拌50分钟，充分沉淀后，于室温在离心机中离心25分钟，转速4000转/分钟，弃去上清，得到沉淀物謂g。于-2(TC，采用1000ml丙酮-水溶液(其中，丙酮水的体积比为7:3)充分洗涤磷酸二酯酶沉淀，然后于fC，在离心机中离心15分钟，转速4000转/分钟，弃去上清。重复此洗涤一离心过程4次。于-20'C，用800ml纯丙酮清洗沉淀，然后于4'C在离心机中离心25分钟，转速4000转/分钟，弃去上清。重复此洗涤一离心过程3次。然后将得到的沉淀物在室温晾干，粉碎，即得到所需的复合磷酸酯酶80g，产品酶活效价为838500u/mg。实施例4、复合磷酸酯酶胶囊的制备将实施例1中制得的复合磷酸酯酶，粉碎成100目，取70g备用；取乳糖(填充剂)300g，粉碎过IOO目筛；将复合磷酸酯酶与乳糖混匀，将4g聚乙烯吡咯垸酮(PVP)加入到60%乙醇中，制得4%聚乙烯吡咯烷酮的乙醇溶液，作粘合剂，制软材，过18目筛，整粒烘干，加入1.85g硬脂酸镁，作润滑剂，装入4号胶囊，套合胶囊帽。实施例5、复合磷酸酯酶胶囊的制备将实施例2中制得的的复合磷酸酯酶，粉碎成100目，取70g备用；取淀粉(填充剂)300g，过100目筛；取适当干淀粉制淀粉浆作粘合剂，将复合磷酸酯酶与剩余淀粉混匀，加粘合剂，制软材，过18目筛，整粒烘干，加入7.5g滑石粉，作润滑剂，装入5号胶囊，套合胶囊帽。权利要求1.一种复合磷酸酯酶，其为通过下述方法制得1)硫酸铵分级沉淀于25℃，边搅拌，边向大麦芽根水提取液中，加入硫酸铵，使得溶液中的硫酸铵浓度为饱和浓度的40—80％；继续搅拌，然后离心弃去上清；2)丙酮-水溶液洗盐在-20℃下，用丙酮-水溶液清洗步骤1)得到的沉淀；离心弃去上清；所述的丙酮-水溶液中，丙酮和水的体积比为23—73，其加入量与步骤1)中得到的沉淀的质量体积比为110—15；3)丙酮溶液干燥在-20℃下，用丙酮清洗步骤2)得到的沉淀；离心弃去上清，在室温晾干，粉碎，得到所需的复合磷酸酯酶。2.根据权利要求1所述的复合磷酸酯酶，其特征在于所述步骤l)中，加入硫酸铵后，继续搅拌的时间为30—50分钟。3.根据权利要求1所述的复合磷酸酯酶，其特征在于所述歩骤2)中的丙酮-水溶液的清洗和离心过程为重复3—4次。4.一种复合磷酸酯酶的提取方法，包括如下的步骤1)硫酸铵分级沉淀于25'C，边搅拌，边向大麦芽根水提取液中，加入硫酸铵，使得溶液中的硫酸铵浓度为饱和浓度的40—80%;继续搅拌，然后离心弃去上清；2)丙酮-水溶液洗盐在-20。C下，用丙酮-水溶液清洗步骤1)得到的沉淀；离心弃去上清；所述的丙酮-水溶液中，丙酮和水的体积比为2:3—7:3，其加入量与步骤l)中得到的沉淀的质量体积比为1:10—15;3)丙酮溶液干燥在-2(TC下，用丙酮清洗步骤2)得到的沉淀；离心弃去上清，在室温晾干，粉碎，得到所需的复合磷酸酯酶。5.根据权利要求4所述的复合磷酸酯酶的提取方法，其特征在于所述步骤l)中，加入硫酸铵后，继续搅拌的时间为30—50分钟。6.根据权利要求4所述的复合磷酸酯酶的提取方法，其特征在于所述步骤2)中的丙酮-水溶液的清洗和离心过程为重复3—4次。7.—种复合磷酸酯酶胶囊，其特征在于包括权利要求1至3之一所述的复合磷酸酯酶，还包括，占总药量的重量比为40-85%填充剂和占总药量的重量比为0-5%润滑剂；余量为所述的复合磷酸酯酶。8.根据权利要求7所述的复合磷酸酯酶胶囊，其特征在于所述的润滑剂为硬脂酸镁、滑石粉和微粉硅胶中的一种或多种。9.根据权利要求7所述的复合磷酸酯酶胶囊，其特征在于所述的填充剂为淀粉、乳糖、糖粉、可压性淀粉中的一种或多种。10.根据权利要求7至9之一所述的复合磷酸酯酶胶囊在制备肝炎辅助治疗的药物中的应用。全文摘要本发明涉及一种复合磷酸酯酶，及其提取方法，和一种复合磷酸酯酶胶囊。该复合磷酸酯酶是通过大麦芽根须水提取、硫酸铵沉淀和丙酮干燥，分离纯化得到的高活性的复合磷酸酯酶。将该纯化的复合磷酸酯酶，加入填充剂、润滑剂，制软材，整粒，装胶囊，制备本发明的复合磷酸酯酶胶囊。本发明复合磷酸酯酶制备成本低廉，适合规模化生产，胶囊制剂工艺简单，稳定性高。文档编号A61K38/46GK101368176SQ20071012037公开日2009年2月18日申请日期2007年8月16日优先权日2007年8月16日发明者王庭健,骉马申请人:北京赛生药业有限公司