专利名称：一种能降解多种中药材的醋酸杆菌的制作方法
技术领域：
本发明涉及微生物，具体是一种能降解多种中药材的醋酸杆菌及其应用。
背景技术：
中医中药起源于中国。几千年来中药为我国人们的健康做出了重要的贡献，并经过积累，形成了系统的中医药理论和大量的经过实践检验的成药验方。它是中华民族的瑰宝，在预防和治疗疾病方面发挥着重要的作用。随着国际交流的加深，中药作为天然药物的优势逐渐显现，引起了世界的关注。作为天然药物的有效成分，是中药发挥药效的基础；有效成分含量低，结构复杂， 不易合成，在野生植物中分离难以达到工业生产的要求；含有有效成分的中药材人工培育成本高，周期长，无法保证市场的需求。传统中药材炮制工艺是通过熬制，把中药材中的有效成分用水煮的方法提取出来。这种方法有以下缺点1、由于熬制时间、温度、压力不能统一，中药材中的有效成分难以完全被提取出来；2、熬制过程中温度很高，有可能破坏了那些热敏感性的有效成分；3、通过单纯熬制浸提出的中药成分大多是有效成分的中间体，须经人体内的益生菌转化，最终成为起作用的有效成分，进入血液，由于人体益生菌状况不同，从而产生见效慢或不见效等情况。目前，中药材发酵已引起广泛关注，在微生物的生长繁殖过程中产生的各种酶，将中药材的有效成分释放、转化出来，将中药材成分转化为活性成分或将毒性成分分解从而降低药物的毒副作用。且中药材发酵是在常温常压下进行生物转化过程，最大限度的保护了中药材中的活性成分。研究表明，中药材有效成分大多是微生物次生代谢产物，利用微生物发酵转化的方法可大大提高中药材中活性成分的含量。但是，以往常见的醋酸杆菌繁殖、生长常常被本申请提及的中药材有效成分所抑制。

发明内容
本发明的目的是要提供一种能降解多种中药材的醋酸杆菌及其应用。本发明采用的醋酸杆菌为一种新型的醋酸杆菌，经鉴定，为厚壁菌门，梭菌纲，梭菌目，真杆菌科，醋酸杆菌属(Acetobacter sp.)。我们命名为GLYSM66,已于2011年7月5日保藏在武汉大学中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO:M2011238，该菌株形态特征细胞呈杆状，细胞的长度和直径比列约为2-5:1，暂未发现该菌株对人、动物和植物有害，并且该微生物对环境没有污染。本醋酸杆菌GLYSM66是本专利申请人从普通醋酸杆菌中分离、筛选得到，其筛选方法包括如下步骤
(O取向阳花、荞麦根、千斤拨、一朵云叶、七叶一枝花五种中药材，粉碎、过100目筛，之后分别高压灭菌30分钟，五种中药材等量混合或单独成粉备用；
(2)取米醋用温火煮开后自然冷却至室温；(3)用米醋浸泡药材，药材与米醋的质量体积比(公斤升)为I: 5，浸泡温度20-35°C，浸泡时间10天，备用；
(4)用中药发酵液中的一般的醋酸杆菌使用LB培养基培养扩大；
(5)将步骤(4)培养扩大的醋酸杆菌接种到步骤(3)的浸泡液中；
(6)接种后放在阴凉处，20-35°C发酵；
(7)取不同发酵时间的发酵液，测定一般的有效成分一总黄酮和总皂苷，同时经过1000倍显微镜镜检，比较五种中药材等量混合的样品与五种中药材单一的样品，结果发现前者不但总黄酮和总皂苷含量高，而且发酵液中存有单一的微生物；后者液体中的微生物种类比较多。对前者的微生物进行分离筛选，继代培养，最终得到一种能降解多种复配中药的醋酸杆菌，经鉴定，我们命名为GLYSM66，于2011年7月5日保藏在武汉大学中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO :M2011238。
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所述的LB培养基由氯化钠IOg,蛋白胨IOg,酵母膏5g加水定容至IL制成。本发明的积极意义是本发明分离筛选出了一种能降解多种中药材或其复配的混合料的醋酸杆菌，这种醋酸杆菌使中药中的有效成分最大程度地释放出来，为提高中药有效成分的含量、降低中药的毒副作用、增强中药的疗效创出了一条新路。
具体实施例方式本发明醋酸杆菌(Acetobactersp. ) GLYSM66. CCTCC NO M2011238 的筛选方法是将一般的醋酸杆菌经LB培养基活化培养后，接种到向阳花、荞麦根、千斤拨、一朵云叶、七叶一枝花等多种中药材或其复配的混合料的浸泡液中，置于阴凉处20-35°C发酵，选取发酵液中黄酮和皂苷含量高的菌株进行分离、筛选、继代培养得到。我们推测该菌株是对环境适应被诱变出的醋酸杆菌。实施例I
应用本发明醋酸杆菌降解向阳花、荞麦根、千斤拨、一朵云叶和七叶一枝花五种复配中药材的方法是
(1)将本发明醋酸杆菌使用LB培养基培养繁殖，LB培养基的组成氯化钠10g，蛋白胨IOg,酵母膏5g，加水定容到1L，溶液pH7. O,培养温度30°C，不添加抗生素；
(2)取经粉碎、过100目筛的向阳花、荞麦根、千斤拨、一朵云叶和七叶一枝花各I千克混合，之后常规高压灭菌30分钟；
(3)将米醋用温火煮开后自然冷却至室温；
(4)用米醋浸泡药材，药材与米醋的质量体积比(公斤升)=1 (5-10)，浸泡温度20-35°C，浸泡时间10天;
(5)将步骤(I)培养扩大的醋酸杆菌接种到步骤(4)的浸泡液中；
(6)置于在阴凉处，20-35°C发酵一年，使药材中的活性成分被降解释放出来。经过比较发酵后的液体和发酵前的液体总黄酮、总皂苷等有效成分的含量，发现前者总黄酮和总皂苷等有效成分的含量都高出后者20倍以上；同时推测前者由于在酸性环境下，绝大多数黄酮和皂苷分子处在还原态。表明本发明提供的菌株在加入到上述复合中药中后，通过自身的生长繁殖代谢，可促进复合中草药材的发酵，使中药材有效成分彻底地释放出来。
实施例2
应用本发明的醋酸杆菌分别降解向阳花、荞麦根、千斤拨、一朵云叶和七叶一枝花的方 法是 按实施例I的方法步骤制备，不同的是将向阳花、荞麦根、千斤拨、一朵云叶和七叶一枝花分别与米醋浸泡。
权利要求
1.一种能降解多种中药材的醋酸杆菌(Acetobacter sp. ) GLYSM66 CCTCC NO:M2011238。
2.权利要求I所述醋酸杆菌在降解多种中药材中的应用，其特征是该醋酸杆菌是通过包括如下步骤的筛选方法得到的(1)将本发明醋酸杆菌使用LB培养基培养繁殖，不添加抗生素，繁殖培养温度30°C； (2)选用向阳花、荞麦根、千斤拨、一朵云叶和七叶一枝花五种中药材，分别粉碎、过100目筛，之后常规高压灭菌30分钟，单独或等量混合备用； (3)将米醋用温火煮开后自然冷却至室温； (4)用米醋浸泡药材，药材与米醋的质量体积比(公斤升)=1 (5-10)，浸泡温度20-35°C，浸泡时间10天; (5)将步骤(I)培养扩大的醋酸杆菌接种到步骤(4)的浸泡液中； (6)置于在阴凉处，20-35°C发酵一年。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征是所述的LB培养基的组成氯化钠10g，蛋白胨10g，酵母膏5g加水定容到1L，溶液的pH为7.0。
全文摘要
本发明公开了一种能降解多种中药材的醋酸杆菌及其应用，其特征是醋酸杆菌为厚壁菌门，梭菌纲，梭菌目，真杆菌科，醋酸杆菌属(Acetobactersp.)，名称为GLYSM66，已于2011年7月5日保藏在武汉大学中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，保藏编号为CCTCCNOM2011238。本发明的积极意义是本发明分离筛选出了一种能降解多种复配中药的醋酸杆菌，这种醋酸杆菌能使中药中的一般有效成分最大程序释放出来，为提高中药有效成分含量、降低中药的毒副作用、增强中药的疗效创出了一条新路。
文档编号A61K36/896GK102816722SQ20121029094
公开日2012年12月12日 申请日期2012年8月16日 优先权日2011年10月2日
发明者莫寿科, 郝再彬 申请人:莫寿科