专利名称：一种从黄芪中提取黄芪皂苷的新方法
技术领域：
:本发明属于天然有机化学领域，涉及一种黄芪皂苷的纯化方法，特别是涉及一种利用水蒸汽回流提取与膜分离技术和大孔吸附树脂耦合法富集纯化黄芪中黄芪皂苷的方法。
背景技术：
:黄芪:又名黄耆，为植物和中药材的统称。植物黄芪产于内蒙古、山西、甘肃、黑龙江等地，为国家三级保护植物。中药材黄芪为豆科草本植物蒙古黄芪、膜荚黄芪的根，具有补气固表、利水退肿、托毒排脓、生肌等功效。黄芪的药用迄今已有2000多年的历史，现代研究，黄芪含皂甙、蔗糖、多糖、多种氨基酸、叶酸及硒、锌、铜等多种微量元素。有增强机体免疫功能、保肝、利尿、抗衰老、抗应激、降压和较广泛的抗菌作用。但表实邪盛，气滞湿阳，食积停滞，痈疽初起或溃后热毒尚盛等实证，以及阴虚阳亢者，均须禁服。黄芪皂苷是一种对人类健康有显著保健作用的天然活性物质，已引起国际社会的普遍关注。经科学研究及临床应用证明，黄芪皂苷调节机体免疫功能，有促进骨髓造血机能，使骨髓生长旺盛的作用，对肾实质细胞代谢有明显改善作用。近年来，人们发现天然植物黄芪中含有大量的黄芪皂苷，由于其原料黄芪为中药，来源较广，从中提取黄芪皂苷并且取得了可喜进展。名称为“黄芪总皂苷的制备方法”的专利申请中便公开了将黄芪经水提树脂吸附后脱糖脱色得黄芪皂苷工艺流程。上述专利文献中的黄芪皂苷提取工艺主要是经过水提、脱糖、脱色纯化等步骤提取而成，其工艺复杂且分离效果远远不如利用水蒸汽回流提取与膜分离技术和大孔 吸附树脂耦合法处理后在进行硅胶柱层析分离的效果
发明内容
:本发明的目的在于克服常规技术提取率相对较低、提取纯度低等缺点，提供一种利用水蒸汽回流提取与膜分离技术和大孔吸附树脂耦合法富集纯化黄芪中黄芪皂苷的方法。为实现上述目的，本发明采用的技术方案是:一种利用水蒸汽回流提取与膜分离技术和大孔吸附树脂耦合法富集纯化黄芪中黄芪皂苷的方法，其步骤如下:(I)将干黄芪粉碎，加入体积为黄芪粉碎体积的10 20倍的纯化水，进行水蒸汽回流提取，提取2 3次，提取时间2 3小时；(2)将经(I)处理后的黄芪提取液合并，经过微滤，孔径范围在0.1 I微米，压力控制在01 0.7MPa，得过滤液；(3)将经微滤的过滤液再经过超滤，温度控制在20 40°C，压力控制在0.1
0.6MPa，得黄芪皂苷粗提物；(4)将所得黄芪皂苷粗提物用人孔吸附树脂进行吸附，吸附为静态吸附或动态吸附；
(5)用40% 80%不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集黄芪皂苷各阶段洗脱液；(6)将黄芪皂苷各阶段洗脱液浓缩，回收乙醇，得黄芪皂苷半成品，其含量在30%以上；(7)将所得黄芪皂苷半成品上硅胶层析柱，并以甲醇与浓缩液的体积比为I 7: I的比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集黄芪皂苷各阶段洗脱液；(8)将所收集的黄芪皂苷洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得黄芪皂苷，其含量在95%以上。所述的步骤(I)中，干黄芪粉碎后过40 80目筛。所述的步骤(4)中，所用的大孔吸附树脂为天津南开大学所产生的X-5、NKA-9、S-8、D3520、D4006、H103、D4020、AB-8H 和 NKA-1I 型树脂中的一种。本发明应用水蒸汽回流提取与膜分离技术和大孔吸附树脂耦合法分离纯化黄芪皂苷，对黄芪皂苷提取完全，没有污染，分离效果好，纯度高，大孔树脂吸附选择性良好，吸附快解析也快，吸附容量较大，分离效果明显，提取纯度高，可以得到含量30%以上的黄芪皂苷半成品和含量95%以上的黄芪皂苷终产品，克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的缺点。
具体实施方式
:实施例1:一种利用水蒸汽回流提取与膜分离技术和大孔吸附树脂耦合法富集纯化黄芪中黄芪皂苷的方法，其步骤如下:(I)将IOOg干黄芪粉碎后过60目筛，加入体积为黄芪粉碎体积的10倍的纯化水，进行水蒸汽回流提取，提取2次，提取时间2小时；(2)将经(I)处理后的黄芪提取液合并，经过微滤，孔径范围在0.1 I微米，压力控制在0.1MPa，得过滤液；(3)将经微滤的过滤液再经过超滤，超滤截留分子量在3000 300000，温度控制在20°C，压力控制在0.1MPa，得黄芪皂苷粗提物；(4)将所得黄芪皂苷粗提物用大孔吸附树脂进行吸附，所用的大孔树脂为天津南开大学所生产的NKA-1I型树脂，吸附为静态吸附或动态吸附；(5)用用40%、50%、60%、70%、80%的乙醇在大孔吸附树脂层柱中依次进行梯度洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集黄芪皂苷各阶段洗脱液；(6)将黄芪皂苷备阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量为306%黄芪皂苷半成品；(7)将所得黄芪皂苷半成品上硅胶层析柱，并用甲醇与浓缩液的体积比依次为1: 1、2: 1、3: 1、4: 1、5: 1、6: 1、7: I进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集黄芪皂苷各阶段洗脱液:(8)将所收集的黄芪皂苷洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量
95.4%黄芪皂苷实施案例2:—种利用水蒸汽回流提取与膜分离技术和大孔吸附树脂耦合法富集纯化黄芪中黄芪皂苷的方法，其步骤如下:(I)将IOOg干黄芪粉碎后过40目筛，加入体积为黄芪粉碎体积的15倍的纯化水，进行水蒸汽回流提取，提取2次，提取时间2小时；(2)将经(I)处理后的黄芪提取液合并，经过微滤，孔径范围在0.1 I微米，压力控制在0.2MPa，得过滤液；(3)将经微滤的过滤液再经过超站，超滤截留分子量在3000 300000，温度控制在30°C，压力控制在0.2MPa，得黄芪皂苷粗提物；(4)将所得黄芪皂苷粗提物用大孔吸附树脂进行吸附，所用的大孔树脂为天津南开大学所生产的D4006型树脂，吸附为静态吸附或动态吸附；(5)用40%、50%、60%、70%、80%的乙醇在大孔吸附树脂层柱中依次进行梯度洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集黄芪皂苷各阶段洗脱液；(6)将黄芪皂苷各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量为31.2%的黄芪皂苷半成品;(7)将所得黄芪皂苷半成品上硅胶层析柱，并用甲醇与浓缩液的体积比依次为1: 1、2: 1、3: 1、4: 1、5: 1、6: 1、7: I进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集黄芪皂苷各阶段洗脱液；(8)将所收集的黄芪皂苷洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量
96.6%的黄芪皂苷。实施案例3:—种利用水蒸汽回流提取与膜分离技术和大孔吸附树脂耦合法富集纯化黄芪中黄芪皂苷的方法，其步骤如下:(1)将IOOg干黄芪粉碎后过80目筛，加入体积为黄芪粉碎体积的20倍的纯化水，进行水蒸汽回流提取，提取3次，提取时间2小时；(2)将经(I)处理后的黄芪提取液合并，经过微滤，孔径范围在0.1 I微米，压力控制在0.2MPa，得过滤液；(3)将经微滤的过滤液再经过超滤，超滤截留分子量在3000 300000，温度控制在40°C，压力控制在0.2MPa，得黄芪皂苷粗提物；(4)将所得黄芪皂苷粗提物用大孔吸附树脂进行吸附，所用的大孔树脂为天津南开大学所生产的NKA-9型树脂，吸附为静态吸附或动态吸附；(5)用40%、50%、60%、70%、80%的乙醇在大孔吸附树脂层柱中依次进行梯度洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集黄芪皂苷各阶段洗脱液；(6)将黄芪皂苷各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量为31.7%的黄芪皂苷半成品;(7)将所得黄芪皂苷半成品上硅胶层析柱，并用甲醇与浓缩液的体积比依次为1: 1、2: 1、3: 1、4: 1、5: 1、6: 1、7: I进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集黄芪皂苷各阶段洗脱液；(8)将所收集的黄芪皂苷洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量
97.8%的黄芪皂苷。实施案例4:一种利用水蒸汽回流提取与膜分离技术和人孔吸附树脂耦合法富集纯化黄芪中黄芪皂苷的方法，其步骤如下:(1)将IOOg干黄芪粉碎后过50目筛，加入体积为黄芪粉碎体积的12倍的纯化水，进行水蒸汽回流提取，提取3次，提取时间2小时；
(2)将经(I)处理后的黄芪提取液合并，经过微滤，孔径范围在0.1 I微米，压力控制在0.4MPa，得过滤液；(3)将经微滤的过滤液再经过超站，超滤截留分子量在3000 300000，温度控制在20°C，压力控制在0.4MPa，得黄芪皂苷粗提物；(4)将所得黄芪皂苷粗提物用大孔吸附树脂进行吸附，所用的大孔树脂为天津南开大学所生产的H103型树脂，吸附为静态吸附或动态吸附；(5)用40%、50%、60%、70%、80%的乙醇在大孔吸附树脂层柱中依次进行梯度洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集黄芪皂苷各阶段洗脱液；(6)将黄芪皂苷各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量为30.4%的黄芪皂苷半成品;(7)将所得黄芪皂苷半成品上硅胶层析柱，并用甲醇与浓缩液的体积比依次为1: 1、2: 1、3: 1、4: 1、5: 1、6: 1、7: I进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集黄芪皂苷各阶段洗脱液:(8)将所收集的黄芪皂苷洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量90.9%的黄芪皂 苷。
权利要求
1.一种利用水蒸汽回流提取与膜分离技术和大孔吸附树脂耦合法富集纯化黄芪中黄芪皂苷的方法，其步骤如下: (1)将干黄芪粉碎，加入纯化水，进行水蒸汽回流提取，提取2 3次，提取时间2 3小时； (2)将经(1)处理后的黄芪提取液合并，经过微滤，孔径范围在0.1 I微米，压力控制在0.1 07MPa，得过滤液； (3)将经微滤的过滤液再经过超滤，温度控制在20 40°C，压力控制在01 0.6MPa，得黄芪皂苷粗提物； (4)将所得黄芪皂苷粗提物用大孔吸附树脂进行吸附，吸附为静态吸附或动态吸附； (5)用40% 80%不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集黄芪皂苷各阶段洗脱液； (6)将黄芪皂苷各阶段洗脱液浓缩，回收乙醇，得黄芪皂苷半成品，其含量在30%以上。
(7)将所得黄芪皂苷半成品上硅胶层析柱，并以甲醇与浓缩液的体积比为1 7: 1的比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集黄芪皂苷各阶段洗脱液； (8)将所收集的黄芪皂苷洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得黄芪皂苷，其含量在95%以上。
2.根据权利要求1所述的利用水蒸汽回流提取与膜分离技术和大孔吸附树脂耦合法富集纯化黄芪中黄芪皂苷的方法，其特征是:所述的步骤(1)中，黄芪粉碎后过40 80目筛。
3.根据权利要求2所述的利用水蒸汽回流提取与膜分离技术和大孔吸附树脂耦合法富集纯化黄芪中黄芪皂苷的方法，其特征是:所述的步骤(1)中，加入纯化水的体积为黄芪体积的10 20倍。
4.根据权利要求3所述的利用水蒸汽回流提取与膜分离技术和大孔吸附树脂耦合法富集纯化黄芪中黄芪皂苷的方法，其特征是:所述的步骤(3)中，超滤截留分子量在3000 30000。
5.根据权利要求4所述的利用水蒸汽回流提取与膜分离技术和大孔吸附树脂耦合法富集纯化黄芪中黄芪皂苷的方法，其特征是:所述的步骤(4)中，大孔吸附树脂型号为X-5、NKA-9、S-8、D3520、D4006、H103、D4020、AB-8H 和 NKA-1I 型树脂中的一种。
全文摘要
本发明的目的在于克服常规技术提取率相对较低、提取纯度低等缺点，提供一种利用水蒸汽回流提取与膜分离技术和大孔吸附树脂耦合法富集纯化黄芪中黄芪皂苷的方法。本发明优点应用水蒸汽回流提取与膜分离技术和大孔吸附树脂耦合法分离纯化黄芪皂苷，对黄芪皂苷提取完全，没有污染，分离效果好，纯度高；大孔树脂吸附选择性良好，吸附快解析也快，吸附容量较大，分离效果明显，提取纯度高，可以得到含量30％以上的黄芪皂苷半成品和含量95％以上的黄芪皂苷终产品，克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的缺点。
文档编号A61K36/481GK103110689SQ20121059562
公开日2013年5月22日 申请日期2012年12月13日 优先权日2012年12月13日
发明者万莉, 姚德坤, 张亚红, 姚德利 申请人:大兴安岭林格贝有机食品有限责任公司