专利名称：抑制血管生成的化合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及可有效地抑制血管生成的化合物，其因此可代替硫酸化多糖如肝素，用于预防再狭窄，促进伤口愈合，并抑制肿瘤细胞转移。
背景技术：
现有技术中已公开了硫酸化多糖在抑制血管生成和治疗与血管生成有关的病症和疾病中的应用。国际专利申请No．PCT/GB95/00515(WO95/24907)，其内容结合在此作为参考，它讨论了肝素和其他硫酸化多糖如戊聚糖多硫酸酯和葡聚糖硫酸酯在这些病症和疾病的治疗中的应用，还公开了另一种硫酸化多糖，昆布多糖硫酸酯的应用，它在通过抑制血管平滑肌细胞增殖而预防再狭窄，通过激活储存在胞外基质中的活性生长因子的释放而促进伤口愈合，以及通过抑制乙酰肝素酶活性而抑制肿瘤细胞转移方面显示出的抗凝活性仅为肝素的约30％。
国际专利申请No．PCT/AU95/00350(WO95/34595)公开了一类抗病毒化合物，它包含树状聚合物如聚酰氨基胺(polyamidoamine)或具有多个端基的赖氨酸树状聚合物，其中至少有一个端基具有键合或连接其上的含有阴离子或阳离子的部分，特别是含有磺酸、含有羧酸、或含有三甲基铵的部分。
本发明提供了通过将离子基连接到直链非糖类聚合物或树状聚合物上而形成的多离子物质在血管生成的抑制和相关疾病和病症的治疗中的应用。
发明概述按照本发明，它提供了预防性或治疗性抑制人或非人类动物患者血管生成的方法，其包含给予该患者有效量的选自以下种类的化合物(ⅰ)具有多个侧链基团的直链非糖类聚合物，其中所述侧链基团中至少有一个具有键合或连接其上的含有阴离子或阳离子的部分；和
(ⅱ)具有多个端基的树状聚合物，其中所述端基中至少有一个具有键合或连接其上的含有阴离子或阳离子的部分。
特别优选用于本发明方法的化合物是在其侧链基团上连接有含有磺酸的部分、含有羧酸的部分、含有磷酸或膦酸的部分、含有硼酸的部分、含有神经氨酸或唾液酸的部分或含有在其4位或其他位置上有修饰的神经氨酸或唾液酸的部分的直链聚合物，和在其端基上连接有含有磺酸的部分、含有羧酸的部分、含有磷酸或膦酸的部分、含有硼酸的部分、含有神经氨酸或唾液酸的部分或含有在其4位或其他位置上有修饰的神经氨酸或唾液酸的部分的树状聚合物。
在本文中提到的用于本发明方法的化合物分别是直链多离子聚合物或多离子树状聚合物，在整个说明书以及随后的权利要求书中所用的这些术语的含义不仅包括该聚合物或树状聚合物本身，而且包括它们的药学上或兽医可接受的盐，例如碱金属或碱土金属盐如钠、钾或钙盐。
发明详述本发明优选使用的化合物包括(ⅰ)通式Ⅰ的直链多离子聚合物
其中R是形成直链聚合物骨架的非糖类单体单元；X是非必需的单体单元R的侧链基团上的连接基；和A是含有阴离子的部分；和(ⅱ)通式Ⅱ的多离子树状聚合物
其中Ⅰ是起始核心；Z是内部分支单元；n是整数，它表示生成的树状聚合物的数目；和A是含有阴离子的部分，它可以通过非必需的连接基X连接到内部分支单元Z上。
依照本发明，优选的直链多离子聚合物是阴离子部分(A)，非必需地通过连接基(X)，轭合到直链非糖类聚合物骨架(由大量单体单元R组成)上而形成的多阴离子物质。所得多阴离子直链聚合物具有重复单元的重量范围分布，由此得到所期望的分子量分布的中值。所期望的是，分子量分布的中值范围是1,000-1,000,000，优选为10,000-600,000。
单体单元R优选为氨基或酰胺部分，更优选为氨基酸部分。特别优选的单体单元是赖氨酸部分。从Sigma化学公司可购得具有不同分子量范围的聚-L-赖氨酸。
阴离子部分A可直接或经各种官能连接基X而连接到直链聚合物骨架上的活性侧链基团上，官能连接基X诸如但不限于酯，酰胺，醚，硫醚，胺，脲，硫脲，甲氨酸酯和碳酸酯。
非必需的连接基X也可作为聚合物和阴离子部分A之间的间隔基，并可由烷基链(可选为取代的或分支的)，烷氧基、聚烷氧基、烷硫基或聚烷硫基链(可选被取代的)，或链烯基、多链烯基、炔基或多炔基链(可选被取代的)组成。合适的间隔基链包括式-(CH2)n-Z-(CH2)n-基团，其中Z是-CH2-,-CH=CH-,-C≡C-,-O-或-S-，而n是1-15的整数。
树状聚合物是大分子的高度分支的化合物，它是从最初的核心分子开始，通过反复的反应序列，在核心上连续地“生成”连续的层或级，从而形成的一个三维的高度有序的聚合化合物。树状聚合物具有下述特征Ⅰ．起始核心(Ⅰ)可以具有一个或多个反应部位并且是点状的或者是相当大的以便影响该树状聚合物的最终布局；ⅱ．结合在起始核心上的分支的重复单元(Z)形成层；ⅲ．非必需地通过连接基(如上述连接基X)结合在树状聚合物表面上的官能端基(如阴离子部分A)。本发明以树状结构作为附着离子部分的骨架；本发明并不限于本文中详细描述的球形树状聚合物，而是可以基于任何树状结构。形状和结构不同的各种树状聚合物均是本领域技术人员熟知的。
树状聚合物的制备是已知的，例如在美国专利No.4,289,872和4,410,688中描述的(它们描述了基于赖氨酸单元成层的树状聚合物)，以及美国专利No.4,507,466,4,558,120,4,568,737和4,587,329中描述的(它们描述了基于其他单元包括聚酰氨基胺的树状聚合物或PAMAM树状聚合物)。在这些美国专利中公开的树状聚合物，记载它们适合用作如表面改性剂，金属螯合剂，破乳化剂或水包油型乳剂，造纸中的湿强度剂，以及含水制剂如涂料中改良粘度的试剂。在美国专利No.4,289,872和4,410,688中也提出了基于赖氨酸单元的树状聚合物可用作药剂制备的底物。
国际专利公开No.WO88/01178,WO88/01179和WO88/01180中公开了一些共轭物，其中树状聚合物与另一种物质如载带药物或农药的物质轭合或缔合。另外，国际专利申请公开No.WO95/24221公开了由至少一种树状聚合物与载体物质以及非必需的靶导向体缔合而组成的树状聚合物共轭物，载体物质可以是生物反应调节物。这些专利出版物和上面所提到的美国专利一起较全面地公开了各种树状聚合物及其制备方法，这些出版物所公开的内容均结合在此作为参考。
本文中所用的术语“树状聚合物”应理解为其最宽的含义，并且在其范围内包括如专利申请No.WO88/01178,WO88/01179和WO88/01180中公开的这些树状聚合物的所有形式和组合物。该术语还包括如在这些专利申请中公开的连接或桥接树状聚合物。
本发明的优选的树状聚合物包含一个共价键合到至少两个树状分支上的多价核心，并优选通过至少两个生长支而扩展。特别优选的树状聚合物是聚酰氨基胺(PAMAM)树状聚合物，PAMAM(EDA)树状聚合物和聚赖氨酸树状聚合物。
按照本发明，至少有一个、并优选有相当数量的直链聚合物上的侧链基团或树状聚合物表面上的端基具有共价键合其上的含有阴离子或阳离子的部分。该直链聚合物的侧链或该树状聚合物的分支可以氨基或其他官能活性基团如OH、SH或类似基团结尾，它们随后可与阴离子或阳离子部分反应。当直链聚合物的侧链基团或树状聚合物的端基为氨基时，含有阴离子或阳离子的部分可以通过各种官能基包括酰胺和硫脲键而连接到该树状聚合物上。可键合到直链聚合物的侧链基团或树状聚合物的端基上的优选的含有阴离子或阳离子的部分包括含有磺酸的部分，含有羧酸的部分(包括含有神经氨酸和唾液酸的部分和含有修饰的神经氨酸和唾液酸的部分)，含有硼酸的部分，含有磷酸和膦酸的部分(包括含有酯化磷酸和膦酸的部分)以及含有三甲基铵的部分。
合适的可键合或连接到氨基或其他侧链或端基上的含有阴离子或阳离子的部分包括，例如以下基团(其中n为0或正整数，更具体地是n为0或1-20的整数)-NH(CH2)nSO3-(CH2)nSO3-Ar(SO3)n-CH2CH(SO3)COOH-CH(SO3)CH2COOH -ArX(CH2)nSO3X=O,S,NH+ + +-(CH2)nNMe3-Ar(NMe3)n-Ar(CH2NMe3)n
-ArXP(=O)(OR)2X=O,CH2,CHF,CF2R=烷基，芳基H,Na-ArXP(=O)(OR1)(NR2R3)x=O,CH2,CHF,CF2R1=烷基，芳基H,Na R2,R3=烷基，芳基-Ar[P(=O)(OR)2]nR=烷基，芳基H,Na n=1-3-Ar[B(OH)2]nn=1-3 -Ar[COOH]nn=1-3
按照本发明，除了上述基团外，各种含有神经氨酸或唾液酸的部分或含有修饰的神经氨酸或唾液酸的部分也可键合或连接到侧链或端基上。这些部分包括神经氨酸的各种N-和O-取代的衍生物，特别是N-和O-酰基衍生物如N-乙酰基，O-乙酰基和N-羟乙酰基衍生物，以及其中神经氨酸基团被修饰，特别是通过在4-位被氨基、酰胺基、氰基、叠氮基或胍基取代而修饰的部分。
本发明的阴离子或阳离子直链聚合物和树状聚合物可以用本领域技术人员熟知的标准化学方法制备。在下文中的实施例部分利用实施例描述了合适的方法。
如前所述，已发现本发明的阴离子或阳离子直链聚合物和树状聚合物能抑制血管生成。因此，本发明的方法包括患者血管生成的抑制，与新血管的生长有关的疾病诸如慢性炎症、糖尿病性视网膜病、银屑病和类风湿性关节炎的治疗，以及相关疾病和病症的治疗，包括但不限于通过抑制血管平滑肌细胞增殖而预防再狭窄，通过激活储存在胞外基质中的活性生长因子的释放而促进伤口愈合，以及通过抑制血管生成而抑制肿瘤细胞转移。
因此，另一方面本发明提供了用于预防性或治疗性抑制人或非人动物患者血管生成的药物或兽医组合物，它包含上文中已清楚描述的阴离子或阳离子直链聚合物或树状聚合物，以及至少一种药学上或兽医可接受的载体或稀释剂。
这种组合物的制剂是本领域技术人员熟知的。合适的药学上可接受的载体和/或稀释剂包括所有任意的常规溶剂，分散介质，填充剂，固体载体，水溶液，包衣剂，抗细菌和抗真菌剂，等渗和吸收延迟剂等。这些介质和试剂对药物活性物质的作用是本领域中熟知的，例如，在Remington’s药物科学，第18版，Mack出版公司，宾西法尼亚州，美国中对它们进行了描述。除了与活性成分不相容的任何常规介质或试剂以外，其他均可考虑用于本发明的药物组合物中。也可在该组合物中加入附加的活性成分。
为了易于给药和使剂量均匀，尤为有利的是以剂量单位形式配制这些组合物。本文中所用的剂量单位形式是指适合作为单位剂量而用于要进行治疗的病人的物理分散单位；每个单位含有计算好能产生预期治疗效果的预定量的活性成分和所需的药物载体和/或稀释剂。本发明的新的剂量单位形式的规格取决并直接依赖于(a)活性成分的特有性能和要达到的特定治疗效果，和(b)用于特定治疗的活性成分的配制领域中的固有限制。
另一方面，本发明提供了如上文中已清楚描述的有效量的阴离子或阳离子直链聚合物或树状聚合物通过抑制血管生成而在人或非人动物患者的预防或治疗中，或在用于预防或治疗人或非人动物患者的药剂的制备中的应用。
可使用各种给药途径。当然，所选择的特定方式将依据要治疗的特定病情和治疗效果所需的剂量而定。一般来说，本发明的方法可利用医学上可接受的任何给药方式，也就是说能产生本发明活性成分的治疗浓度而不会导致临床上不可接受的负作用的任何方式来实施。这样的给药方式包括口服，直肠，局部，鼻，吸入，经皮或胃肠外(例如皮下，肌内和静脉内)途径。用于口服给药的制剂包括诸如胶囊，片剂，锭剂等分散单元。其他途径包括直接鞘内给药到脊髓液中，利用诸如本领域普通技术人员熟知的各种导管和气囊血管成形术设备直接加入，和实质组织内注射到靶向区域。
该组合物可方便地以单位剂型存在并可用制药领域中熟知的任何方法制备。这样的方法包括将活性成分加入相关的构成一种或多种辅助成分的载体中的步骤。一般说来，通过将活性成分均匀而紧密地掺入相关的液体载体、精细分离的固体载体、或二者中而制得该组合物，然后如果需要，将该产物成形。
适于口服给药的本发明的组合物可以作为分散单元如胶囊，扁囊剂，片剂或锭剂存在，每个单元含有预定量的活性成分，在脂质体中或作为在含水液体或非含水液体中的悬液如糖浆，酏剂，或乳剂。
适于胃肠外给药的组合物方便地包含活性成分的无菌含水制剂，其优选与接受者的血液等渗。该含水制剂可以按照已知方法，利用那些合适的分散或湿润剂和悬浮剂来配制。无菌注射制剂也可以是在无毒的胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液或悬液，例如在聚乙二醇中的溶液。可以应用的可接受的赋形剂和溶剂是水，Ringer’s溶液和等渗氯化钠溶液。另外，无菌固定油类可方便地用作溶剂或悬浮介质。出于这一目的，可应用任何温和固定油包括合成的单甘油酯或二甘油酯。另外，可注射制剂中可应用脂肪酸如油酸。
该活性成分也可配制成用于将活性成分鼻内或通过吸入给药的释放系统，例如含有活性成分的精细分散的气雾喷剂。
其他释放系统可包括缓释系统。优选的缓释系统是可使本发明的活性成分以缓释的小丸或胶囊形式释放的那些。可使用许多类型的缓释系统。这些包括但不限于(a)浸蚀系统，其中活性成分包含在基质中，和(b)扩散系统，其中活性成分以可控速率渗透通过聚合物。另外，也可使用基于泵的硬件释放系统，它们中的某些适于埋植。
活性成分以预防或治疗有效量给药。预防或治疗有效量是指至少部分达到预期效果、或延迟所治疗的特定疾病的发作、或抑制其发展、或完全终止其发作或发展所需的量。当然，这样的量将依据所治疗的特定疾病，该疾病的严重程度和患者个体状况包括年龄、体质、大小、重量和并行的治疗等而定。这些因素是本领域普通技术人员熟知的并可仅仅通过例行试验确定。一般优选使用最大剂量，也就是说，根据充分的医学鉴定判断出的最高安全剂量。不过，本领域普通技术人员将理解，出于医学原因、心理原因或实际上任何其他原因，可以较低的剂量或容许的剂量给药。
一般说来，活性成分的日口服剂量将是约0.01mg/kg/天到1000mg/kg/天。一开始可给予小剂量(0.01-1mg)，接着增加剂量到最多约1000mg/kg/天。如果这样的剂量不能使患者产生足够的应答，甚至可以使用更高的剂量(或者可以通过不同的更局限的释放途径使用有效的更高剂量)直到患者的容限。也可考虑每天多次给药来达到化合物的合适的系统浓度。
按照本发明的活性成分也可以兽用组合物的形式存在，例如，它可用该领域中的常规方法制备。这样的兽用组合物的实例包括适于以下给药途径的那些(a)口头给药，外用，例如兽用顿服药(例如含水或非含水溶液或悬液)；片剂或大丸剂；用于与饲料混合的粉末、颗粒或小丸；用于舌头的糊剂；(b)胃肠外给药例如通过皮下、肌内或静脉内注射，例如作为无菌溶液或悬液；或(合适时)通过乳房内注射给药，由此悬液或溶剂经乳头加入到乳房中；(c)局部应用，例如作为皮肤用的霜剂，油膏或喷雾剂；或(d)阴道内给药，例如作为阴道栓剂，霜剂或泡沫。
除非在上下文中另有要求，否则在整个说明书以及后面的权利要求书中，词语“包含”将理解为包括所宣称的整数或整数组而不包括任何其他整数或整数组。
从以下实施例中将明显看出本发明的其他特征，这些实施例是为了阐述而不是限制本发明的。在下述实施例中，PAMAM树状聚合物是指如美国专利No.4,507,466,4,558,120,4,568,737和4,587,329中详细描述的基于氨核心的聚酰氨基胺树状聚合物；PAMAM(EDA)树状聚合物是指基于乙二胺核心的聚酰氨基胺树状聚合物；而BHAlysxlysylysz树状聚合物是指如美国专利No.4,289,872和4,410,688中描述的基于二苯甲基胺核心和赖氨酸分支单元的聚赖氨酸不对称树状聚合物。如美国专利No.4289872,4410688,4507466,4558120,4568737和4578639以及国际专利申请No.WO88/01178,WO88/01179,WO88/01180和WO95/24221中所述制得的聚酰氨基胺树状聚合物PAMAM1.0,PAMAM2.0,PAMAM3.0,PAMAM4.0,PAMAM5.0或更高代产物，PAMAM4.0(EDA)，以及聚赖氨酸树状聚合物BHAlyslys2,BHAlyslys2lys4,BHAlyslys2lys4lys8和BHAlyslys2lys4lys8lys16,BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32,BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32lys64，或更高代产物分别相应于上述树状聚合物。
实施例1树状聚合物与2-丙烯酰氨基-2-甲基丙磺酸反应得到以磺酸结尾的树状聚合物。A．PAMAM1.0将固体碳酸钠(0.13g；1.0mmol)缓慢加入2-丙烯酰氨基-2-甲基丙磺酸(0.41g；2.0mmol)的搅拌的水(3ml)溶液中。当停止放出气体后，该溶液的pH为8.0。然后向该溶液中加入PAMAM1.0(0.12g；0.33mmol)的水溶液(1ml)，接着加入四滴氢氧化苄基三甲铵的40％水溶液。然后在氮气下在60℃加热该溶液三天后将其浓缩。残余物用凝胶过滤法(交联葡聚糖G10；水)纯化，之后冷冻干燥得到磺化PAMAM1.0树状聚合物，为米色固体(0.51g)。1H和13C核磁共振谱显示出二烷基化和一烷基化PAMAM1.0树状聚合物的混合物(约70∶30)。13C nmr(D2O):δ31.0,31.1,37.1,37.7,41.3,48.6,51.5,53.1,53.4,55.6,56.2,61.2,61.5,178.3,179.0,179.8。B．PAMAM2.0PAMAM2.0如上所述与2-丙烯酰氨基-2-甲基丙磺酸反应。粗产物用凝胶过滤法(交联葡聚糖G10；水)纯化，之后冷冻干燥得到米色固体。1H和13C核磁共振谱显示出二烷基化和一烷基化PAMAM2.0树状聚合物的混合物(约65∶35)。13C nmr(D2O):δ31.0,31.1,37.1,37.7,41.3,48.7,51.5,53.4,55.6,56.2,61.2,61.5,178.4,179.0,179.1,179.6。
当重复上述反应但略去氢氧化苄基三甲铵时，会得到类似结果。C．PAMAM3.0 BRI2783PAMAM3.0如上所述与2-丙烯酰氨基-2-甲基丙磺酸反应，只是使用稍微过量的碳酸钠并略去氢氧化苄基三甲铵。1H和13C核磁共振谱显示出二烷基化和一烷基化PAMAM3.0树状聚合物的混合物(约50∶50)。13C nmr(D2O):δ31.0,31.1,36.9,37.4,41.1,48.6,51.5,53.4,55.7,56.2,61.1,61.5,178.2,178.9,179.0,179.8。D．PAMAM4.0 BRI2784PAMAM4.0如PAMAM3.0中所述与2-丙烯酰氨基-2-甲基丙磺酸反应。1H和13C核磁共振谱显示出二烷基化和一烷基化PAMAM4.0树状聚合物的混合物(约35∶65)。13C nmr(D2O):δ31.0,31.1,36.9,37.3,41.1,48.5,51.5,53.5,55.7,56.2,61.1,61.5,178.1,178.9,179.0,179.8。
实施例2以磺乙酰胺钠结尾的树状聚合物的制备。A．PAMAM1.0将4-硝基苯基溴乙酸酯(0.40g；1.5mmol)的无水DMF(1ml)溶液加入PAMAM1.0(0.18g；0.5mmol)的搅拌的DMF(3ml)溶液中。当茚三酮试验为阴性时，所得黄色溶液在室温下搅拌20小时。浓缩该溶液(30°/0.1mmHg)得到黄色油。该油在水和氯仿之间分配，分离水层并用氯仿洗涤(2×)，最后用乙酸乙酯洗涤。浓缩该水溶液(35°/25mmHg)得到溴乙酰化PAMAM1.0树状聚合物，为黄色油(0.36g；100％)。13C nmr(D2O):δ32.8,33.3,43.0,43.5,54.4,174.5,176.4。
将亚硫酸钠(0.2g；1.6mmol)的水溶液(1ml)加入上述溴乙酰化PAMAM1.0树状聚合物(0.36g；0.5mmol)的水(5ml)溶液中,并将该溶液在室温下放置11天。浓缩该黄色溶液得到黄色固体(0.60g)。13C nmr(D2O):δ34.4,43.1,43.4,54.0,61.7,171.3,177.2。
上述反应也可不分离溴乙酰化树状聚合物，而是通过简单地将亚硫酸钠溶液加入到第一个反应中得到的粗水提取物中而进行。B．PAMAM2.0方法1将4-硝基苯基溴乙酸酯(0.18g；0.7mmol)的无水DMF(1ml)溶液加入PAMAM2.0(0.10g；0.1mmol)的搅拌的DMF(3ml)溶液中。当茚三酮试验为阴性时，所得黄色溶液在室温下搅拌20小时。然后边打旋边将该溶液加入水(150ml)中，该混合物用氯仿(3X)和乙酸乙酯萃取。将亚硫酸钠(0.1g；0.8mmol)的水(1ml)溶液加入粗溴乙酰化树状聚合物溶液中并使该混合物在室温下放置三天。然后浓缩该黄色溶液得到黄色固体残余物，其用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化得到以磺乙酰胺钠结尾的PAMAM2.0树状聚合物(103mg)。13C nmr(D2O):δ33.0,35.7，36.0,37.7,40.3,43.0,43.2,53.4,53.7,56.0,61.6,171.2,174.6,178.5。方法2将固体乙酰基硫代乙酸琥珀酰亚氨酯(67mg；0.33mmol)加入PAMAM2.0(52mg；0.05mmol)的无水DMF(2ml)溶液中，所得溶液在室温下搅拌2天。然后将该混合物浓缩(30°/10-3mmHg)得到油状残余物。该残余物在水和氯仿之间分配，分离水层并浓缩得到粘性油(117mg)。1H和13C核磁共振谱显示该油为乙酰化树状聚合物和N-羟基琥珀酰亚胺的混合物。凝胶过滤法(交联葡聚糖G10；水)得到以乙酰基硫代乙酰胺结尾的PAMAM2.0树状聚合物的纯样品(29mg)。13C nmr(D2O):δ34.0,34.2,37.3,43.0,43.1,43.3,53.5,54.0,56.3,175.4,177.2,177.5。
然后将上述官能化树状聚合物在40％甲酸水溶液(7ml)中的溶液加入冰冷的新鲜制备的过甲酸(1.6mmol)的甲酸溶液(2ml)中。该混合物在0℃搅拌1小时，然后在室温下搅拌20小时。加入小量活性碳以分解任何过量的过酸，该混合物搅拌30分钟后过滤并浓缩得到粘性油。
将粗产物溶于水，用碳酸氢钠水溶液将pH调节到9.0，该物质通过交联葡聚糖G10柱而脱盐。冷冻干燥后得到白色固体(20mg)，其光谱表明其与用方法1得到的物质本质上相同。13C nmr (D2O):δ33.0,38.7,42.9,43.0,43.1,53.9,54.3,56.5,61.6,171.2,176.4,177.0。
实施例3以磺基琥珀酰胺酸钠结尾的树状聚合物的制备。A．PAMAM1.0将固体马来酐(0.11g；1.1mmol)加入PAMAM1.0(0.12g；0.33mmol)的搅拌的无水DMF(3ml)溶液中.当该酐溶解时该混合物变成棕色并轻微发热，将所得溶液在室温下搅拌过夜。然后将该溶液浓缩(30°/10-4mmHg)得到粘性油。1H和13C(D2O)核磁共振谱(D2O)显示PAMAM1.0完全转化为三酰胺和一些马来酸。13C nmr(D2O):δ33.1,42.8,43.1,54.3,135.0,137.1,169.1,171.9,173.3。
然后将粗三酰胺溶于水(4ml)并加入固体亚硫酸钠(0.20g；1.6mmol)。使所得溶液在室温下放置4天，然后浓缩。1H和13C(D2O)核磁共振谱显示为以区域异构的磺基琥珀酰胺酸钠结尾的PAMAM1.0树状聚合物与一些磺基琥珀酸的1∶1混合物。该粗产物用凝胶过滤法(交联葡聚糖G10；水)纯化得到以磺基琥珀酰胺酸钠结尾的PAMAM1.0树状聚合物的样品(107mg)。13C nmr(D2O):δ33.3.39.6,40.0,42.9,43.1,54.0,67.9,69.4,173.8,176.3,177.6,181.8。B．PAMAM2.0如上所述制备以区域异构的磺基琥珀酰胺酸钠结尾的PAMAM2.0树状聚合物的混合物。13C nmr PAMAM2.0马来酰胺酸衍生物(D2O):δ32.8,33.0,38.7,42.9,53.8,54.3,56.5,135.2,136.8,169.2,171.9,173.5,174.6。13C nmr PAMAM2.0磺基琥珀酰胺酸钠衍生物(D2O):δ37.0,40.1,41.1,43.0,43.2,43.9,53.0,53.3,55.5,68.0,69.4,173.8.177.6,179.1,179.5,179.8.182.3。C．PAMAM4.0 BRI6038将固体马来酐(60mg；0.6mmol)加入PAMAM4.0(51mg；0.01mmol)的搅拌的无水DMF(2ml)溶液中。一开始该混合物变得混浊但很快得到澄清溶液，将其在室温下搅拌过夜。然后将该溶液浓缩(35°/10-4mmHg)得到粘性油。1H和13C(D2O)核磁共振谱显示PAMAM4.0完全转化为聚酰胺和一些马来酸。然后将该粗聚酰胺溶于水(2ml)并加入亚硫酸钠(126mg；1.0mmol)水(2ml)溶液。使所得溶液在室温下放置2天，然后浓缩。1H和13C(D2O)核磁共振谱显示为以区域异构的磺基琥珀酰胺酸钠结尾的PAMAM4.0树状聚合物与一些磺基琥珀酸的混合物。该粗产物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化得到以24个区域异构的磺基琥珀酰胺酸基团结尾的PAMAM4.0的样品(90mg)。1H nmr(D2O):δ2.4-2.6；2.7-3.1；3.2-3.4；3.9-4.0。13C nmr(D2O):δ36.2；39.8；40.5；43.0；43.2；53.5；55.8；68.1；69.5；173.8；177.4；177.6；178.7；182.3。
实施例4以N-(2-磺乙基)琥珀酰胺钠结尾的树状聚合物的制备。a．N-(2-磺乙基)琥珀酰胺酸四丁基铵的制备将固体琥珀酐(0.5g；5.0mmol)加入2-氨乙基磺酸四丁基铵(1.83g；5.0mmol)的搅拌的无水二氯甲烷(30ml)溶液中。该琥珀酐缓慢溶解，并将所得混浊溶液在室温下搅拌过夜。将该混合物过滤并浓缩滤液得到粘性油(2.41g)。13C核磁共振谱显示完全转化为预期的一酰胺和小量琥珀酸。通过将二氯甲烷溶液逐滴加入到大大过量的二乙醚中而使该产物重复沉淀，从而得到N-(2-磺乙基)琥珀酰胺酸四丁基铵(1.762g；76％)，为白色固体，mp125-127℃。1H nmr(CDCl3):δ0.86(t,12h,4×CH3),1.28(m,8H,4×CH2),1.50(m,8H,4×CH2),2.33(m,2H,CH2COOH),2.44(m,2H,CH2CONH),2.76(m,2H,CH2NHCO),3.12(m,8H,4×CH2N),3.50(m,2H,CH2SO3),7.53(br t,1H,NH)。13C nmr(CDCl3):δ13.5,19.5,23.8,30.1,30.9,35.6,50.0,58.5,172.0,174.1。b．4-硝苯基N-(2-磺乙基)琥珀酰胺酸四丁铵的制备将二环己基碳化二亚胺(45mg；0.22mmol)的无水二氯甲烷(1ml)溶液加入N-(2-磺乙基)琥珀酰胺酸四丁铵(94mg；0.20mmol)的搅拌的二氯甲烷(2ml)溶液中，该混合物在室温下搅拌过夜。将所得悬液过滤并浓缩滤液得到粗的活性酯，其不必进一步纯化即可使用。A．以N-(2-磺乙基)琥珀酰胺钠结尾的PAMAM树状聚合物的制备PAMAM4.0 BRI2786将粗4-硝苯基N-(2-磺乙基)琥珀酰胺酸四丁铵(0.30mmol)的无水DMF(1ml)溶液加入搅拌的PAMAM4.0(51.5mg；0.01mmol)的50％DMF水溶液(3ml)中，并将所得黄色溶液在室温下搅拌过夜。然后浓缩该混合物(35°/10-5mmHg)，且黄色残余物在水和氯仿之间分配。分离水层，用氯仿(2×)和乙酸乙酯洗涤，然后浓缩得到黄色油(134mg)。将该粗产物通过离子交换树脂Amberlite IR120(Na)柱而将其转化为85mg钠盐。将该物质通过凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)进一步纯化得到以N-(2-磺乙基)琥珀酰胺钠结尾的PAMAM4.0树状聚合物(45mg)。13C nmr(D2O):δ33.2,33.6,35.5,39.0,39.5,42.8,43.2,53.8,54.1,54.4,56.6,176.5,176.9,177.2,178.9,179.4。
类似地制备相应的以N-(2-磺乙基)琥珀酰胺钠基团结尾的PAMAM1.0和PAMAM3.0(BRI2785)树状聚合物。13C nmr PAMAM3.0衍生物(D2O):δ33.4,35.5,39.0,39.5,42.9,43.2,53.8,54.1,54.3,56.5,176.4,176.9,177.4,178.9,179.4。13C nmr PAMAM1.0衍生物(D2O):δ34.9,35.5,39.5,42.9,43.1,53.7,54.1,179.0,179.1,179.3。B．以N-(2-磺乙基)琥珀酰胺钠结尾的聚赖氨酸树状聚合物的制备BHAlyslys2lys4lys8lys16BRI2789将三氟乙酸(1ml)加入BHAlyslys2lys4lys8DBL16(36.5mg；5.0μmol)的无水二氯甲烷(1ml)悬液中，并将所得溶液在氮气下在室温下搅拌2小时，然后浓缩。将残余物溶于干燥DMSO(2ml)并用三乙胺将pH调节到8.5。然后滴加粗4-硝苯基N-(2-磺乙基)琥珀酰胺酸四丁铵(约0.2mmol)的DMSO溶液(1ml)并将该混合物在室温下搅拌过夜。浓缩该黄色溶液(50°/10-5mmHg)，且黄色残余物在水和氯仿之间分配。分离水层，用氯仿(3×)和乙酸乙酯洗涤，然后浓缩得到油(99mg)。将该粗产物通过离子交换树脂AmberliteIR120(Na)柱而将其转化为81mg钠盐。将该物质通过凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)进一步纯化得到以N-(2-磺乙基)琥珀酰胺钠结尾的BHAlyslys2lys4lys8lys16树状聚合物(39mg)。13C nmr(D2O):δ27.0,32.3,35.2,35.3,35.6,35.7,39.5,43.5,54.1,58.5,131.5,132.0,133.3,145.1,177.8,178.0,178.4,178.8,178.9,179.2,179.7,179.8。
类似地制备相应的以N-(2-磺乙基)琥珀酰胺钠基团结尾的BHAlyslys2,BHAlyslys2lys4(BRI2787)和BHAlyslys2lys4lys8(BRI2788)树状聚合物。13C nmr BHAlyslys2lys4lys8衍生物(D2O):δ26.9,32.3,35.1,35.3,35.6,35.7,39.5,43.5,54.1,58.5,131.6,131.9,132.2,132.3,133.2,133.3,145.0,145.2,177.2,177.8,177.9,178.0,178.2,178.3,178.6,178.7,178.8,178.9,179.2,179.3,179.7,179.8。13C nmr BHAlyslys21ys4衍生物(D2O):δ26.9,32.3,35.1,35.4,35.7,35.8,39.5,43.5,54.1,58.5,61.8,131.7,132.0,132.2,132.3,133.2,133.3,145.0,145.1,177.3,178.0,178.3,178.4,178.7,178.9,179.0,179.3,179.7,179.8。13C nmr BHAlyslys2衍生物(D2O):δ26.9,27.1,32.2,32.3,34.7,34.8,35.1,35.3,35.6,35.7,39.5,43.4,54.1,58.6,61.8,131.7,131.9,132.2,132.3,133.3,144.9,145.0,177.7,178.4,178.8,179.0,179.3,180.0。
实施例5以4-磺苯基硫脲钠结尾的树状聚合物的制备A．PAMAM4.0 BRI2791将固体4-磺苯基异硫氰酸钠一水合物(500mg；1.96mmol)加入PAMAM4.0(300mg；0.0582mmol)的水(10ml)溶液中，并将所得溶液在氮气下在53℃加热2小时，然后冷却。浓缩该溶液，黄色固体残余物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化。合并纯的级分并冷冻干燥得到以4-磺苯基硫脲钠结尾的PAMAM4.0树状聚合物，为松散的白色固体(370mg)。1H nmr(D2O):δ2.28；2.52；2.69；3.15；3.27；3.60；7.32(d,J=9Hz)；7.72(d,J=9Hz)。13C nmr(D2O):δ36.9；41.1；43.1；48.3；53.6；55.8；129.0；131.1；144.4；178.5；179.1；184.4。
类似地制备相应的分别以3、6、12和48个4-磺苯基硫脲钠基团结尾的PAMAM1.0,PAMAM2.0(BRI2790),PAMAM3.0和PAMAM5.0(BRI2991)树状聚合物。B．PAMAM4.0(EDA)BRI6045将固体4-磺苯基异硫氰酸钠一水合物(130mg；0.5mmol)加入PAMAM4.0(EDA)(69mg；0.01mmo1)的水(4ml)溶液中，并将所得溶液在氮气下在53℃加热2小时，然后冷却。浓缩该溶液，固体残余物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化。合并纯的级分并冷冻干燥得到以32个4-磺苯基硫脲钠基团结尾的PAMAM4.0，为松散的白色固体(136mg)。1H nmr(D2O):δ2.30；2.50；2.70；3.18；3.62；7.35(d,J=9Hz)；7.72(d,J=9Hz)。13C nmr(D2O):δ36.8；41.0；43.1；48.4；53.6；55.7；128.9；131.0；144.3；178.5；179.0；184.5。C．BHAlyslys2lys4lys8lys16BRI2792在氮气下，将三氟乙酸(4ml)加入BHAlyslys2lys4lys8DBL16(0.73g；0.1mmol)的无水二氯甲烷(4ml)悬液中。观察到在短时间内有大量气体放出，将所得溶液在室温下搅拌2小时，然后浓缩。将残余糊浆溶于水(5ml)，让该溶液通过Amberlite IRA-401(OH)柱并将滤液浓缩得到BHAlyslys2lys4lys8lys16，为粘性油(0.49g)。将该油再次溶于水(5ml)并加入N,N-二甲基-N-烯丙胺缓冲液(pH9.5；3ml)。然后加入固体4-磺苯基异硫氰酸钠一水合物(1.30g；5.1mmol)并将所得溶液在氮气下在53℃加热2小时，然后冷却。浓缩该溶液，棕色固体残余物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化。合并纯的级分，通过Amberlite IR 120(Na)柱并冷冻干燥得到以4-磺苯基硫脲钠结尾的BHAlyslys2lys4lys8lys16树状聚合物，为松散的白色固体(374mg)。1H nmr(D2O):δ1.40；1.72；3.08；3.42；4.24；4.60；7.30；7.40(d,J=9Hz)；7.78(d,J=9Hz)。13C nmr(D2O):δ27.3；32.5；35.9；43.7；48.9；58.6；63.3；128.8；131.0；143.7；144.7；145.1；177.7；178.1；183.8；185.2。
类似地制备相应的分别以16、64和128个4-磺苯基硫脲钠基团结尾的BHAlyslys2lys4lys8,BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32(BRI2992)和BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32lys64(BRI2993)树状聚合物。
实施例6以3,6-二磺萘基硫脲钠结尾的树状聚合物的制备A．PAMAM4.0 RRI2923
将固体3,6-二磺萘基异硫氰酸钠(160mg；0.41mmol)加入PAMAM4.0(51mg；0.01mmol)的水(3ml)溶液中，并将所得溶液在氮气下在53℃加热2小时，然后冷却。浓缩该溶液，棕色固体残余物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化。合并纯的级分并浓缩得到以3,6-二磺萘基硫脲钠结尾的PAMAM4.0树状聚合物，为棕色固体(73mg)。
1H nmr(D2O):δ2.30；2.60；2.74；3.20；3.57；7.75；7.86；8.28。13C nmr(D2O):δ35.0；39.9；43.1；48.1；53.8；56.1；128.4；128.6；129.3；131.0；131.3；136.0；136.8；138.2；145.5；146.0；177.2；177.8；185.5。
类似地制备相应的以3,6-二磺萘基硫脲钠基团结尾的PAMAM2.0树状聚合物。B．PAMAM4.0(EDA)BRI6046将固体3,6-二磺萘基异硫氰酸钠(220mg；0.57mmol)加入PAMAM4.0(EDA)(74mg；0.01mmol)的水(4ml)溶液中，并将所得溶液在氮气下在53℃加热2小时，然后冷却。浓缩该溶液，棕色固体残余物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化。合并纯的级分并浓缩得到以32个3,6-二磺萘基硫脲钠基团结尾的PAMAM4.0，为黄褐色固体(148mg)。
1H nmr(D2O):δ2.30；2.80；3.20；3.54；7.74；7.85；8.25。13C nmr(D2O):δ36.0；40.8；43.1；48.3；53.6；55.9；128.5；129.4；131.0；131.3；136.0；136.8；138.3；145.5；146.0；178.2；185.6。C．BHAlyslys2lys4lys8lys16BRI2999在氮气下，将三氟乙酸(2ml)加入BHAlyslys2lys4lys8DBL16(73mg；0.01mmol)的无水二氯甲烷(2ml)悬液中。观察到在短时间内有大量气体放出，将所得溶液在室温下搅拌2小时，然后浓缩。将残余糊浆溶于水(5ml)，让该溶液通过Amberlite IRA-401(OH)柱并将滤液浓缩得到BHAlyslys2lys4lys8lys16，为粘性油。将该油再次溶于水(5ml)并加入N,N-二甲基-N-烯丙胺缓冲液(pH9.5；3ml)。然后加入固体3,6-二磺萘基异硫氰酸钠(234mg；0.60mmol)并将所得溶液在氮气下在53℃加热2小时，然后冷却。浓缩该溶液，棕色固体残余物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化。合并纯的级分，通过Amberlite IR 120(Na)柱并冷冻干燥得到以32个3,6-二磺萘基硫脲钠基团结尾的BHAlyslys2lys4lys8lys16树状聚合物，为松散的米色固体(119mg)。1H nmr(D2O):δ1.0-2.0；3.18；3.43；4.31；7.22；7.80；7.89；8.25。13C nmr(D2O):δ27.2；32.4；35.3；43.7；49.0；58.5；63.6；128.4；129.1；131.4；136.1；136.6；138.6；139.0；145.1；145.6；178.4；184.8；186.7。
实施例7以4-磺萘基硫脲钠结尾的树状聚合物的制备PAMAM4.0 BRI2997将固体4-磺萘基异硫氰酸钠(180mg；0.5mmol)加入PAMAM4.0(51mg；0.01mmol)的水(5ml)溶液中，并将该混合物在氮气下在53℃加热2小时，然后冷却。从所得悬液中减压馏去水，米色固体残余物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化。合并纯的级分并冷冻干燥得到以4-磺萘基硫脲钠结尾的PAMAM4.0树状聚合物，为松散的白色固体(60mg)。1Hnmr(D2O):δ2.20；2.60；3.14；3.48；7.23；7.47；7.56；7.77；7.93(d,J=6Hz)；8.56(d,J=6Hz)。13C nmr(D2O):δ 35.8；40.5；43.1；48.4；53.6；55.9；127.6；128.6；130.3；131.9；132.5；133.5；134.7；140.5；142.7；177.8；178.0；185.4。
实施例8以3,5-二磺苯基硫脲钠结尾的树状聚合物的制备PAMAM4.0 BRI6039将固体3,5-二磺苯基异硫氰酸钠(110mg；0.32mmol)加入PAMAM4.0(63mg；0.012mmol)的水(3ml)溶液中，并将所得溶液在氮气下在53℃加热2小时，然后冷却。浓缩该溶液，棕色固体残余物用凝胶过滤法(交联葡聚糖G25；水)纯化。合并纯的级分并浓缩得到以24个3,5-二磺苯基硫脲钠基团结尾的PAMAM4.0，为米色固体(110mg)。1H nmr(D2O):δ2.53；3.08；3.36；3.66；7.90；7.95。13C nmr(D2O):δ 34.8；41.0；43.1；48.0；53.7；56.2；124.1；128.6；143.5；148.8；177.6；185.0。
实施例9以3,6,8-三磺萘基硫脲钠结尾的树状聚合物的制备PAMAM4.0 BRI2998将固体3,6,8-三磺萘基异硫氰酸钠(250mg；0.5mmol)加入PAMAM4.0(51mg；0.01mmol)和N,N-二甲基-N-烯丙胺缓冲液(pH9.5；1ml)的水(2ml)溶液中，并将该混合物在氮气下在53℃加热2小时，然后冷却。将该混合物减压浓缩得到橙色固体。将残余固体溶于水(2ml)并通过Amberlite IR-120(Na)短柱。然后浓缩滤液，残余物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化。合并纯的级分并冷冻干燥得到以3,6,8-三磺萘基硫脲钠结尾的PAMAM4.0树状聚合物，为米色固体(102mg)。1H nmr(D2O):δ2.65；3.02；3.30；3.66；8.05；8.42；8.59；8.67。13C nmr(D2O):δ33.2；38.7；43.2；43.7；47.8；54.0；54.3；56.7；131.0；131.3；131.9；135.9；138.0；139.6；143.8；144.1；145.6；176.2；176.5；186.0。
实施例10以4-(磺甲基)苯甲酰胺钠结尾的树状聚合物的制备PAMAM4.0 BRI6040将固体4-硝苯基4-(氯甲基)苯甲酸酯(200mg；0.68mmol)加入PAMAM4.0(70mg；0.014mmol)的搅拌的无水DMSO(4ml)溶液中，并将所得黄色溶液在室温下搅拌2小时。然后浓缩(10-4mmHg；40℃)该溶液，残余物用水和二氯甲烷(1∶1)的混合物萃取。将剩下的固体物质溶于DMSO(5ml)并加入亚硫酸钠(130mg；1mmol)的水(3ml)溶液。将所得到的微混浊的混合物放置4天，之后加入水(2ml)，由此形成澄清的均质的黄色溶液。然后浓缩该溶液，首先在25mmHg和40℃条件下，然后在10-4mmHg和50℃条件下浓缩得到粗产物。粗产物用凝胶过滤法(交联葡聚糖G25；水)纯化得到以24个4-(磺甲基)苯甲酰胺钠基团结尾的PAMAM4.0(24mg)。1H nmr(D2O):δ2.25；2.66；3.08；3.20；3.33；3.38；4.01；7.40(br d)；7.62(br d)。13C nmr(D2O):δ 36.7；40.9；43.0；43.6；53.5；55.5；61.0；131.6；135.0；137.2；140.4；174.5；178.6；179.2。
实施例11以4-磺基苯甲酰胺结尾的树状聚合物的制备PAMAM4.0(EDA)BRI6116将固体N-羟基琥珀酰亚氨基4-磺基苯甲酸钾(100mg；0.3mmol)加入PAMAM4.0(EDA)(35mg；0.005mmol)的0.1M pH8.5硼酸盐缓冲溶液(5ml)中，并将该溶液在室温下搅拌2小时。在此阶段所得奶状溶液的pH为4.5。然后加入1M碳酸钠溶液(1ml)得到澄清溶液，将其浓缩得到白色固体粗产物。该粗产物用凝胶过滤法(交联葡聚糖G25；水)纯化得到以32个4-磺基苯甲酰胺钠基团结尾的PAMAM4.0(EDA)(47mg)。1H nmr(D2O):δ2.25；2.42；2.63；3.05；3.18；3.31；3.38；7.72(d,J=8Hz)；7.78(d,J=8Hz)。13C nmr(D2O):δ36.0；40.4；43.0；43.7；53.7；55.8；130.2；132.2；140.4；150.1；173.6；178.0；178.5。
实施例12以N-(4-磺苯基)丙酰胺钠结尾的树状聚合物的制备PAMAM4.0(EDA)BRI6117将固体N-(4-磺苯基)丙烯酰胺钠(250mg；1mmol)和固体碳酸钠(106mg；1mmol)依次加入PAMAM4.0(EDA)(78mg；0.011mmol)的搅拌的水(4ml)溶液中。所得溶液在氮气下搅拌4天，然后冷冻干燥得到松散的白色固体。该粗产物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化得到以64个N-(4-磺苯基)丙酰胺钠基团结尾的PAMAM4.0(EDA)(206mg)。13C核磁共振谱显示有一烷基化末端氨基的弱痕迹。1H nmr(D2O):δ2.10；2.48；2.58；2.79；3.20；7.42(d,J=7Hz)；7.65(d,J=7Hz)。13C nmr(D2O):δ 36.5；37.9；41.1；53.4；55.6；124.8；130.9；143.0；144.2；177.4；178.5。
实施例13以4-磺苯基脲钠结尾的树状聚合物的制备PAMAM4.0(EDA)BRI6115将磺胺酸钠(195mg；1mmol)的无水DMSO(3ml)溶液滴加到N,N’-二琥珀酰亚胺碳酸酯(530mg；2mmol)的无水DMSO溶液(4ml)中，并将所得棕色溶液在室温下搅拌20小时。加入PAMAM4.0(EDA)(75mg；0.011mmol)的无水DMSO(1ml)溶液并将该溶液再搅拌18小时。然后在高真空下浓缩该溶液(10-5mmHg；35℃)得到黄色半固体。将该粗产物溶于DMSO(4ml)并将该溶液加入到200ml充分搅拌的乙酸乙酯中。通过过滤收集沉淀出的白色固体并用乙酸乙酯(2×)和乙醚(2×)洗涤，然后干燥得到白色粉末(275mg)。该物质进一步用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化得到以32个4-磺苯基脲钠基团结尾的PAMAM4.0(EDA)(106mg)。1H nmr(D2O):δ2.31；2.55；2.75；3.19；7.32(d,J=9Hz)；7.63(d,J=9Hz)。13C nmr(D2O):δ36.3；40.7；43.3；43.8；53.7；55.7；123.3；130.9；140.9；146.0；161.4；178.2；178.6。
实施例14以N,N,N-三甲基氯化甘氨酰胺结尾的树状聚合物的制备BHAlyslys2lys4lys8lys16BRI2922将三氟乙酸(4ml)加入BHAlyslys2lys4lys8DBL16(220mg；30μmol)的无水二氯甲烷(2ml)悬液中，并将所得溶液在氮气下在室温搅拌2小时，然后浓缩。将残余物溶于干燥DMSO(5ml)并用三乙胺将pH调节到85。然后加入固体4-硝苯基N,N,N-三甲基氯化甘氨酸酯(0.50g；1.8mmol)并将该混合物在室温下搅拌过夜。然后浓缩该混浊溶液(50°/10-5mmHg)，残余物在水和二氯甲烷之间分配。分离水层，用二氯甲烷(3×)和乙酸乙酯洗涤，然后浓缩得到油(1.128g)。该粗产物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化得到以N,N,N-三甲基甘氨酰胺结尾的BHAlyslys2lys4lys8lys16树状聚合物(116mg)。13C nmr(D2O):δ25.5,30.5,30.8,33.4,42.1,56.5,57.1,67.5,68.1,166.7,167.0,167.1,176.0,176.2。
实施例15以4-三甲铵苯甲酰胺结尾的树状聚合物的制备PAMAM4.0 BRI6043将1,1’-羰基二咪唑(85mg；0.52mmol)加入4-三甲铵苯甲酸碘化物(154mg；0.5mmol)的无水DMF(4ml)溶液中并将该混合物在氩气下在室温搅拌2小时。在此期间有白色固体与该溶液分离。然后加入PAMAM4.0(58mg；0.011mmol)的无水DMF(2ml)溶液并将该混合物在室温下搅拌过夜。这一阶段后大部分沉淀已溶解,且该溶液的茚三酮试验为阴性。浓缩该混合物(10-4mmHg；30℃)得到白色固体残余物。粗产物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；10％AcOH)纯化得到以24个4-三甲铵苯甲酰胺基团结尾的PAMAM4.0,为乙酸盐(89mg)。1H nmr(D2O):δ1.96；2.65-2.85；3.25-3.55；3.64；7.92。13C nmr(D2O):δ25.8；33.1；33.5；38.7；43.1；43.5；53.5；54.1；56.4；61.2；124.8；133.6；139.9；153.2；173.2；176.3；176.8；182.6。
类似地制备以6个4-三甲铵苯甲酰胺基团结尾的相应的PAMAM2.0树状聚合物。
实施例16以4-(三甲铵甲基)苯甲酰胺结尾的树状聚合物的制备PAMAM4.0 BRI6044将固体4-硝苯基4-(氯甲基)苯甲酸酯(150mg；0.5mmol)加入搅拌的PAMAM4.0(52mg；0.01mmol)的无水DMSO(3ml)溶液中。当茚三酮试验为阴性(pH约8.5)时，将所得黄色溶液在室温下搅拌20小时。然后浓缩该溶液(10-5mmHg；40℃)，残余物用水和二氯甲烷的混合物(1∶1)振摇。通过过滤收集不溶的凝胶样物质，用水(2×)和二氯甲烷(2×)洗涤，然后空气干燥。将粗的以4-(氯甲基)苯甲酰胺结尾的树状聚合物溶于25％三甲胺水溶液(20ml)中并将该黄色溶液放置过夜。然后浓缩该溶液，残余物溶于水(5ml)并让该溶液通过Amberlite IRA-401(OH)柱。将无色的滤液浓缩得到粘性油，其用凝胶过滤法(交联葡聚糖G10；10％AcOH)纯化得到以24个4-(三甲铵甲基)苯甲酰胺基团结尾的PAMAM4.0(90mg)。
1H nmr(D2O):δ1.88；2.65-2.80；2.98；3.10-3.60；7.52(br d,J=9Hz)；7.72(br d,J=9Hz)。13C nmr(D2O):δ26.6；33.4；38.8；43.2；43.5；53.6；53.6；54.1；56.8；62.8；73.0；132.1；135.3；137.5；140.0；176.4；176.9；183.6。
实施例17以N-(2-乙酰氧基乙基)-N,N-(二甲铵)甲基羧酰胺结尾的树状聚合物的制备PAMAM4.0将固体1,1'-羰基二咪唑(85mg；0.52mmol)加入N-(2-乙酰氧基乙基)-N-(羧甲基)-N,N-二甲基溴化铵(135mg；0.5mmol)的无水DMF(3ml)溶液中并将所得溶液在氮气下搅拌2小时。然后加入PAMAM4.0(60mg；0.012mmol)的DMF(2ml)溶液，这使得立即形成了絮状沉淀，随后又缓慢溶解。将该混合物搅拌2天，然后浓缩(10-4mmHg；40℃)得到粘性油。粗产物用凝胶过滤法(交联葡聚糖G10；10％AcOH)纯化得到以24个N-(2-乙酰氧基乙基)-N,N-(二甲铵)甲基羧酰胺基团结尾的PAMAM4.0(64mg)。1Hnmr(D2O):δ1.93；2.05；2.70；3.10-3.60；3.28；3.93(m)；4.14；4.48(m)。13C nmr(D2O):δ24.6；26.2；33.2；38.7；42.8；42.9；53.9；57.4；62.6；67.3；67.5；168.9；176.4；176.8；177.3；183.2。
实施例18以胍基结尾的树状聚合物的制备PAMAM4.0 BRI6042将PAMAM4.0(63mg；0.012mmol)和甲基硫代硫酸假脲(170mg；0.61mmol)的水(5ml)溶液(pH 10.5)在氮气下在80℃加热2小时。然后浓缩该溶液，残余物用凝胶过滤法(交联葡聚糖G10；10％AcOH)纯化得到以24个胍基结尾的PAMAM4.0，为乙酸盐(107mg)。1H nmr(D2O):δ2.00；2.80(brt)；3.09(brt)；3.32,3.45(brt)；3.60(brt)。13C nmr(D2O):δ25.2；33.2；33.4；38.7；41.2；42.6；43.4；44.7；53.5；54.0；56.3；176.5；176.7；176.9；181.6。
类似地制备相应的以6个胍基结尾的PAMAM 2.0树状聚合物。
实施例19以4-([1,4,8,11-四氮杂环十四烷]甲基)苯甲酰胺结尾的树状聚合物的制备PAMAM4.0 BRI6041将1-(4-羧苯基)甲基-1,4,8,11-四氮杂环十四烷四盐酸化物(120mg；0.25mmol),N-羟基琥珀酰亚胺(60mg；0.52mmol)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸化物(250mg；1.3mmol)在pH7磷酸盐缓冲液(10ml)中的溶液在室温下放置1小时，然后加入PAMAM4.0(32mg；0.006mmol)在pH7磷酸盐缓冲液(10ml)中的溶液。将该混合物放置2天，然后浓缩。残余物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；10％AcOH)纯化得到用1H和13C核磁共振谱确定的以约12个4-([1,4,8,11-四氮杂环十四烷]甲基)苯甲酰胺基团结尾的PAMAM4.0(80mg)。然后将该产物溶于水并通过Amberlite IRA-401(Cl)树脂柱，之后浓缩。将残余物溶于水(1ml)，加入浓盐酸(1ml)，该溶液用乙醇(30ml)稀释以沉淀出白色固体。通过过滤收集该固体(68mg)。再次进行1H和13C核磁共振测定显示了末端氨基的约50％官能化。1H nmr(D2O):δ2.17；2.36；2.50；2.78；2.85；3.25；3.40；3.50；3.60,3.62；4.49；7.63(br d)；7.78(br d)。13C nmr(D2O):δ22.7；23.1；33.2；38.8；39.9；40.2；40.3；41.0；41.2；42.0；42.9；43.2；43.6；45.5；46.1；49.1；52.2；53.9；54.3；56.6；62.7；132.5；135.7；137.1；139.7；174.3；176.2；176.3；176.7；177.0；178.2；178.5。
实施例20以4-羧基-3-羟基苄胺结尾的树状聚合物的制备PAMAM4.0(EDA)BRI6119将氰基硼氢化钠(32mg；0.5mmol)加入PAMAM4.0(EDA)(69mg；0.01mmol),4-甲酰-2-羟基苯甲酸(83mg；0.5mmol)和碳酸氢钠(42mg；0.5mmol)在水(4ml)中的混合物中。将该非均质的橙色混合物在室温下搅拌4小时，在此期间其变为均质的。然后浓缩该橙色溶液，残余物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化得到以约32个4-羧基-3-羟基苄胺基团结尾的PAMAM4.0(EDA)(91mg)。1H和13C(D2O)核磁共振谱显示末端氨基多数为一烷基化，但有一些表现为二烷基化，两个谱均显示为宽峰。13C nmr(D2O):δ37.0；41.1；50.9；53.4；55.5；55.8；61.5；120.9；122.2；122.4；132.3；132.7；135.0；135.8；163.5；163.7；169.0；178.6；179.3。1H nmr(D2O):δ 2.20；2.35；2.60；3.15；3.30；3.55；4.25；6.68；7.12；7.55。
实施例21以4-羧苯基酰胺结尾的树状聚合物的制备PAMAM4.0(EDA)将固体4-羧苯基异硫氰酸盐(86mg；0.48mmol)加入PAMAM4.0(EDA)(69mg；0.01mmol)的水(20ml)溶液中。用饱和碳酸氢钠溶液将所得混浊溶液的pH调节到9，然后在室温下搅拌24小时。将该反应混合物过滤，滤液浓缩得到白色固体残余物，其用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化，然后冷冻干燥得到白色松散固体产物(68mg)。
实施例22以3,5-二羧苯基酰胺结尾的树状聚合物的制备PAMAM4.0(EDA)将固体3,5-二羧苯基异硫氰酸盐(112mg；0.5mmol)加入PAMAM4.0(EDA)(70mg；0.01mmol)的水(5ml)溶液中。用1MNa2CO3溶液将所得混浊溶液的pH调节到10，然后在氮气下在53℃加热2小时。将该反应混合物过滤，滤液浓缩得到棕色固体残余物，其用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化，然后冷冻干燥得到淡棕色固体产物(112mg)。
实施例23以4-膦酰氧基苯基硫脲钠结尾的树状聚合物的制备PAMAM4.0(EDA)将固体4-膦酰氧基苯基异硫氰酸钠(251mg)加入PAMAM4.0(EDA)(69mg；0.01mmol)的水(20ml)溶液中。将所得溶液(pH9)在氮气下在室温搅拌24小时。将该反应混合物浓缩得到白色固体残余物，其用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化，然后冷冻干燥得到松散的白色固体产物(86mg)。
实施例24以4-(膦酰甲基)苯基硫脲钠结尾的树状聚合物的制备PAMAM4.0(EDA)将固体4-(膦酰甲基)苯基异硫氰酸钠(97mg)加入PAMAM4.0(EDA)(69mg；0.01mmol)的水(30ml)溶液中。所得溶液在氮气下在室温搅拌3天，定期加入饱和碳酸氢钠溶液以维持pH为8。将该反应混合物浓缩得到白色固体残余物，其用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化，然后冷冻干燥得到松散的白色固体产物(102mg)。
实施例25以4-(膦酰甲基)苯基硫脲乙酯钠结尾的树状聚合物的制备PAMAM4.0(EDA)将固体4-(膦酰甲基)苯基异硫氰酸乙酯钠(109mg)加入PAMAM4.0(EDA)(69mg；0.01mmol)的DMF(30ml)溶液中。所得溶液在氮气下在室温搅拌17小时，定期加入饱和碳酸氢钠溶液以维持pH为8。将该反应混合物浓缩得到白色固体残余物，其用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化，然后冷冻干燥得到松散的白色固体产物(30mg)。
实施例26以4-磺苯基硫脲钠结尾的聚赖氨酸的制备将固体4-磺苯基异硫氰酸钠一水合物(2.55g；10mmol)加入聚-L-赖氨酸(15-30K)(Sigma化学公司)(1.0g)在水(20ml)和N,N-二甲基-N-烯丙胺缓冲液(pH9.5；15ml)的混合物中的溶液中。当茚三酮试验为阴性时，将所得混合物在氮气下在53℃加热3小时。将冷却后的混合物过滤，滤液浓缩得到灰色固体残余物。将该固体残余物再溶于水并通过离子交换树脂Amberlite IR 120(Na)柱，然后浓缩。粗产物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化并冷冻干燥得到以4-磺苯基硫脲钠结尾的聚-L-赖氨酸BRI2995，为白色松散固体(1.25g)。
类似地制备分子量级分1-4K BRI2994、4-15K BRI2967、150-300K BRI2996的以4-磺苯基硫脲钠结尾的聚赖氨酸。
实施例27以3,6-二磺萘基硫脲钠结尾的聚赖氨酸的制备。
将固体3,6-二磺萘基异硫氰酸钠(200mg；0.51mmol)加入聚-L-赖氨酸(15-30K)(50mg)在水(2ml)和N,N-二甲基-N-烯丙胺缓冲液(pH9.5；2ml)的混合物中的溶液中。当茚三酮试验为阴性时，将所得混合物在氮气下在53℃加热3小时。将冷却后的混合物过滤，滤液浓缩得到棕色固体残余物。将该固体残余物再溶于水并通过离子交换树脂Amberlite IR 120(Na)柱，然后浓缩。粗产物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化并冷冻干燥得到以3,6-二磺萘基硫脲钠结尾的聚-L-赖氨酸BRI6047，为白色松散固体(87mg)。
实施例28以Cn-烷基连接的2-硫代唾液糖苷(thiosialoside)结尾的树状聚合物和直链聚合物的制备用下述方法制备[(8-辛酸N-羟基琥珀酰亚胺酯)5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙酰基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]甲酯。
向5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙酰基-2-S-乙酰基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖酸甲酯(Hasegawa等人，1986)(100mg)的无水二甲基甲酰胺(1ml)溶液中加入8-溴辛酸(41mg)和二乙胺(280mg)，该溶液在20℃搅拌17小时。真空除去溶剂，残余物在乙酸乙酯和冰冷的5％盐酸之间分配。有机层用水洗涤，用硫酸钠干燥，并蒸发得到残余物(130mg)。将其溶于乙酸乙酯(5ml)中并加入N-羟基琥珀酰亚胺(26mg)和二环己基碳化二亚胺(46mg)。该混合物在20℃搅拌17小时，然后滤除白色沉淀。将滤液浓缩并用快速硅胶色谱法纯化，用乙酸乙酯洗脱。将含有产物的洗脱级分合并，蒸发得到白色泡沫97mg。71％。
类似地制备[(11-十一烷酸N-羟基琥珀酰亚胺酯)5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙酰基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]甲酯。甲酯。甲酯。甲酯。A．PAMAM[EDA]4.0[[(8-辛酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]32BRI6112在惰性气氛下，向PAMAM[EDA]4.0(50mg)的无水二甲亚砜溶液(4ml)中加入[(8-辛酸N-羟基琥珀酰亚胺酯)5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙酰基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]甲酯(300mg)，并将该溶液在20℃搅拌60小时。真空除去溶剂，将残余物溶于甲醇(2ml)。该溶液用交联葡聚糖LH20进行体积排阻色谱，用甲醇洗脱。蒸发溶剂得到产物PAMAM[EDA]4.0[(8-辛酰氨基)5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙酰基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]甲酯]32，为白色粉末。182mg。93％用下述方法将其转化为游离的唾液糖苷(sialoside)在氨气下在20℃，向PAMAM[EDA]4.0[[(8-辛酰氨基)5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙酰基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]甲酯]32(182mg)的无水甲醇(3ml)溶液中加入新鲜制备的0.19M甲醇钠的甲醇溶液(7ml)并将该混合物搅拌2.5小时。蒸除溶剂，将残余物溶于水(10ml)并搅拌3小时。该溶液用交联葡聚糖LH20进行体积排阻色谱，用水洗脱。冷冻干燥后得到产物PAMAM[EDA]4.0[(8-辛酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]32，为淡柠檬色粉末110mg。77％用类似方法制备PAMAM[EDA]4.0[(11-十一酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]32BRI6147PAMAM[EDA]4.0[(乙酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]32BRI6121PAMAM[EDA]4.0[(4-甲基苯甲酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]32BRI6120B．BHAlyslys2lys4lys8lys16[(8-辛酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]32BRI6169将BHAlyslys2lys4lys8lys16(t-Boc)32(20.3mg)在三氟乙酸(2ml)和二氯甲烷(2ml)的混合物中的溶液在20℃下搅拌2小时，然后真空除去溶剂。将残余物溶于干燥的二甲亚砜(1ml)并加入二-异丙基乙胺(25mg)和[(8-辛酸N-羟基琥珀酰亚胺酯)5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙酰基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]甲酯(78mg)。将该混合物在氩气下在20℃搅拌60小时，然后真空除去溶剂。将残余物溶于新鲜制备的甲醇钠的0.1M甲醇溶液(2.5ml)并将该混合物在氩气下在20℃搅拌3小时。蒸除溶剂，将残余物溶于水(1ml)并搅拌17小时。该溶液用交联葡聚糖LH20进行体积排阻色谱，用水洗脱。冷冻干燥后得到产物BHAlyslys2lys4lys8lys16[(8-辛酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]32，为白色粉末44mg。86％。C．聚-L-赖氨酰[(8-辛酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]nBRI6150向聚-L-赖氨酸．HBr MW 150-300Kd(22mg)的无水二甲亚砜(1ml)溶液中加入二异丙基乙胺(15mg)和[(8-辛酸N-羟基琥珀酰亚胺酯)5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙酰基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]甲酯(90mg)。该混合物在氩气下在20℃搅拌60小时，然后真空除去溶剂。将残余物溶于新鲜配制的甲醇钠的0.5M甲醇溶液(4ml)并将该混合物在氢气下在20℃搅拌48小时。蒸除溶剂，将残余物溶于水(1.5ml)并搅拌24小时。该溶液用交联葡聚糖LH20进行体积排阻色谱，用水洗脱。冷冻干燥后得到产物聚赖氨酰[(8-辛酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]n，为白色粉末49mg。94％。
实施例29在唾液酸的4位有修饰的树状唾液糖苷的制备用下述方法制备4-叠氮基-5-乙酰氨基-7,8,9-三-O-乙酰基-2-S-乙酰基-3,4,5-三脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖酸甲酯。向4-叠氮基-5-乙酰氨基-7,8,9-三-O-乙酰基-2-氯-3,4,5-三脱氧-D-甘油基-β-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖酸甲酯(Sabesan,1994)(5g)的无水二氯甲烷溶液(150ml)中加入精细粉碎的硫羟乙酸钾(5.8g)，并将该悬液在20℃用力搅拌48小时。将该混合物过滤并蒸发得到浅棕色泡沫(5.2g)。用制备型反相HPLC[C18,30％乙腈/水]分离出所需产物，为白色泡沫3.9g。72％用下述方法制备[(8-辛酸N-羟基琥珀酰亚胺酯)4-叠氮基-5-乙酰氨基-7,8,9-三-O-乙酰基-3,4,5-三脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]甲酯。
向4-叠氮基-5-乙酰氨基-7,8,9-三-O-乙酰基-2-S-乙酰基-3,4,5-三脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖酸甲酯(300mg)的无水二甲基甲酰胺(3.5ml)溶液中加入8-溴辛酸(115mg)和二乙胺(1.26ml)，该溶液在20℃搅拌17小时。真空除去溶剂，残余物在乙酸乙酯和冰冷的10％盐酸之间分配。有机层用水洗涤，用硫酸钠干燥，并蒸发得到黄色泡沫(385mg)。将其溶于乙酸乙酯(20ml)中并加入N-羟基琥珀酰亚胺(95mg)和二环己基碳化二亚胺(175mg)。该混合物在20℃搅拌17小时，然后滤除白色沉淀。将滤液浓缩并用制备型反相HPLC[C18,30％乙腈/水]纯化，得到白色泡沫340mg。83％。A．PAMAM[EDA]4.0[(8-辛酰氨基)-4-叠氮基-5-乙酰氨基-3,4,5-三脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]32BRI6146在惰性气氛下，向PAMAM[EDA] 4.0(72mg)的无水二甲亚砜溶液(5ml)中加入[(8-辛酸N-羟基琥珀酰亚胺酯)4-叠氮基-5-乙酰氨基-7,8,9-三-O-乙酰基-3,4,5-三脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]甲酯(318mg)，并将该溶液在20℃搅拌60小时。真空除去溶剂，将残余物溶于甲醇(2ml)。该溶液用交联葡聚糖LH20进行体积排阻色谱，用甲醇洗脱。蒸发溶剂得到产物PAMAM[EDA]4.0[[(8-辛酰氨基)4-叠氮基-5-乙酰氨基-7,8,9-三-O-乙酰基-3,4,5-三脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]甲酯]32，为白色泡沫。225mg。81％用下述方法得到游离的唾液糖苷在氩气下在20℃，向PAMAM[EDA] 4.0[[(8-辛酰氨基)4-叠氮基-5-乙酰氨基-7,8,9-三-O-乙酰基-3,4,5-三脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]甲酯]32(215mg)的无水甲醇溶液(1ml)中加入新鲜制备的甲醇钠的1M甲醇溶液(1ml)并将该混合物搅拌3小时。蒸除溶剂，将残余物溶于水(2ml)并搅拌17小时。该溶液用交联葡聚糖LH20进行体积排阻色谱，用水洗脱。冷冻干燥后得到产物PAMAM[EDA]4.0[(8-辛酰氨基)-4-叠氮基-5-乙酰氨基-3,4,5-三脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]32，为松散的白色粉末160mg。90％B．PAMAM[EDA]4.0[(8-辛酰氨基)-4-氨基-5-乙酰氨基-3,4,5-三脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]32BRI6149在20℃下，将硫化氢气流缓慢通入PAMAM[EDA]4.0[(8-辛酰氨基)-4-叠氮基-5-乙酰氨基-3,4,5-三脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]32(25mg)在吡啶(40ml)和水(20ml)的混合物中的溶液中，持续5天。然后向该溶液中通入氮气2小时以除去过量的硫化氢。将该溶液蒸发至干，残余物溶于水(5ml)并通过0.45μm膜滤器过滤以除去硫。冷冻干燥后得到产物PAMAM[EDA]4.0[(8-辛酰氨基)-4-氨基-5-乙酰氨基-3,4,5-三脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]32，为松散的白色粉末23mg。96％实施例30以硼酸结尾的树状聚合物的制备。4-羧苯基硼酸N-羟基琥珀酰亚胺酯向4-羧苯基硼酸(500mg)的无水二甲基甲酰胺(5ml)溶液中加入N-羟基琥珀酰亚胺(380mg)和二环己基碳化二亚胺(680mg)，并将该混合物在20℃搅拌64小时，然后滤除白色沉淀。真空除去溶剂，残余物溶于乙酸乙酯(100ml)。该溶液用水洗涤，用硫酸钠干燥并蒸发得到白色固体，将其从乙腈/水中结晶，得到细针状体730mg。92％PAMAM[EDA]4.0[4-苯甲酰氨基硼酸]32BRI6160在惰性气氛下，向PAMAM[EDA]4.0(69mg)的无水二甲亚砜(5ml)溶液中加入4-羧苯基硼酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(130mg)，并将该溶液在20℃搅拌65小时。向该稠密的淤浆中加入1M碳酸钠溶液(1ml)并将该澄清溶液再搅拌24小时。真空除去溶剂，将残余物溶于10％氨溶液(5ml)。该溶液用交联葡聚糖LH20进行体积排阻色谱，用10％氨溶液洗脱。蒸发溶剂得到产物PAMAM[EDA]4.0[4-苯甲酰氨基硼酸]32，为白色松散固体。110mg。94％实施例31以3,6-二磺萘基硫脲钠结尾的树状聚合物的制备。BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32将三氟乙酸(2ml)加入BHAlyslys2lys4lys8lys16DBL32(147mg)的搅拌的无水二氯甲烷(2ml)悬液中，并将所得溶液在氮气下在室温搅拌2小时，然后浓缩。将残余物溶于N,N-二甲基-N-烯丙胺缓冲液(pH9.5；5ml)中，然后加入固体3,6-二磺萘基异硫氰酸盐(400mg)。加入1M碳酸钠将该混合物的pH调节到9.5，并将该溶液在氮气下在53℃加热3小时。浓缩该反应混合物，将残余物再次溶于水并将该溶液通过Amberlite IR 120(Na)柱。将滤液浓缩得到粗产物，其用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化得到有64个3,6-二磺萘基脲钠基团的BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32，为白色松散固体(175mg)。
实施例32以3,5-二磺苯基硫脲钠结尾的树状聚合物的制备BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32将三氟乙酸(3ml)加入BHAlyslys2lys4lys8lys16DBL32(300mg；0.02mmol)的搅拌的无水二氯甲烷(3ml)悬液中，并将所得溶液在氮气下在室温搅拌2小时，然后浓缩。将残余物溶于水并将该溶液通过Amberlite IRA 401(OH)柱，将滤液浓缩得到粘性油(187mg)。将该油溶于吡啶/水的1∶1混合物(8ml)中并加入固体3,5-二磺苯基异硫氰酸钠(680mg；2mmol)。将所得溶液在氮气下在53℃加热3小时。然后浓缩该溶液得到白色固体残余物。该粗产物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化得到有64个3,5-二磺苯基脲钠基团的BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32，为白色松散固体。
实施例33以3,5-二羧苯基硫脲钠结尾的树状聚合物的制备BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32将三氟乙酸(3ml)加入BHAlyslys2lys4lys8lys16DBL32(300mg；0.02mmol)的搅拌的无水二氯甲烷(3ml)悬液中，并将所得溶液在氮气下在室温搅拌2小时，然后浓缩。将残余物溶于水并将该溶液通过Amberlite IRA 401(OH)柱，将滤液浓缩得到粘性油(186mg)。将该油溶于吡啶/水的1∶1混合物(8ml)中并加入3,5-二羧苯基异硫氰酸钠(450mg；2mmol)。将所得溶液在氮气下在53℃加热13小时。然后浓缩该溶液得到白色固体残余物。该粗产物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化得到有64个3,6-二羧苯基脲钠基团的BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32，为白色松散固体。
实施例34以4-膦酰氧基苯基硫脲钠结尾的树状聚合物的制备BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32将三氟乙酸(2ml)加入BHAlyslys2lys4lys8lys16DBL32(147mg；0.01mmol)的搅拌的无水二氯甲烷(2ml)悬液中，并将所得溶液在氮气下在室温搅拌2小时，然后浓缩得到粘性油。将该油溶于N,N-二甲基-N-烯丙胺缓冲液(pH9.5；5ml)中并加入固体4-膦酰氧基苯基异硫氰酸盐(250mg)。用1M碳酸钠将所得溶液的pH调节到10，并将该混合物在氮气下在53℃加热3小时。浓缩该溶液得到白色固体残余物。将残余物再次溶于水并将该溶液通过Amberlite IR 120(Na)柱，浓缩滤液。残余物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化得到有64个4-膦酰氧基苯基脲钠基团的BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32，为白色松散固体(150mg)。
实施例35以4-膦酰苯基硫脲钠结尾的树状聚合物的制备BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32将三氟乙酸(2ml)加入BHAlyslys2lys4lys8lys16DBL32(147mg；0.01mmol)的搅拌的无水二氯甲烷(2ml)悬液中，并将所得溶液在氮气下在室温搅拌2小时，然后浓缩得到粘性油。将该油溶于N,N-二甲基-N-烯丙胺缓冲液(pH9.5；5ml)中并加入固体4-膦酰苯基异硫氰酸盐(250mg)。用饱和碳酸氢钠溶液将所得溶液的pH调节到9，并将该混合物在氮气下在53℃加热3小时。浓缩该溶液得到白色固体残余物。将残余物再次溶于水并将该溶液通过Amberlite IR 120(Na)柱，浓缩滤液。残余物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化得到有64个4-膦酰苯基脲钠基团的BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32BRI6196，冷冻干燥后为白色松散固体(152mg)。
实施例36以4,6-二膦酰萘基硫脲钠结尾的树状聚合物的制备PAMAM4.0将4,6-二膦酰萘基异硫氰酸钠(165mg)的水溶液(2ml)加入PAMAM4.0(51mg；0.01mmol)的水(2ml)溶液中。用饱和碳酸氢钠溶液将该混合物的pH调节到9.5，并将该混合物在室温下用力搅拌1小时，然后在氮气下在53℃加热3小时。将该混合物过滤，将滤液浓缩得到棕色固体残余物。粗产物用凝胶过滤法(交联葡聚糖G25；水)纯化得到以24个4,6-二膦酰萘基硫脲钠基团结尾的PAMAM4.0，冷冻干燥后为棕色固体(81mg)。
实施例37以荧光素硫脲结尾的树状聚合物的制备PAMAM4.0(EDA)将固体荧光素异硫氰酸盐(188mg)加入PAMAM4.0(EDA)(74mg；0.01mmol)的水(3ml)溶液中。加入饱和碳酸氢钠溶液将pH调节到9，并将所得均质溶液在室温下搅拌过夜，然后浓缩。橙色残余物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化得到以21个荧光素硫脲基团结尾的PAMAM4.0(EDA)，冷冻干燥后为松散的橙色固体(193mg)。
实施例38以(苯基-3-硼酸)-硫脲钠结尾的树状聚合物的制备PAMAM4.0(EDA)将固体(苯基-3-硼酸)异硫氰酸盐(100mg；0.5mmol)加入PAMAM4.0(EDA)(69mg；0.01mmol)的水(5ml)溶液中。将1M碳酸钠加入到溶解的异硫氰酸盐中(pH约10)。然后该混合物在氮气下在53℃加热2小时，之后过滤并将滤液浓缩得到棕色固体残余物。该粗产物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化得到以32个(苯基-3-硼酸)硫脲基团结尾的PAMAM4.0(EDA)，冷冻干燥后为白色松散固体(87mg)。
实施例39以3,5-二羧苯基硫脲钠结尾的聚赖氨酸的制备。
将聚-L-赖氨酸氢溴化物(4-15K)(Sigma化学公司)(50mg)的水(2ml)溶液加入3,5-二羧苯基异硫氰酸钠(305mg)的水(3ml)溶液中，用碳酸氢钠水溶液将所得溶液的pH调节到9。然后将该溶液在氮气下在53℃加热4小时。将该溶液冷却并过滤，滤液浓缩得到米色固体残余物。该粗产物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化并冷冻干燥得到以3,5-二羧苯基硫脲钠结尾的聚-L-赖氨酸，为白色松散固体(71mg)。
实施例40以4-(膦酰甲基)苯基硫脲钠结尾的聚赖氨酸的制备。
将固体4-(膦酰甲基)苯基异硫氰酸盐(231mg；1.0mmol)加入聚-L-赖氨酸氢溴化物(30-70K)(Sigma化学公司)(50mg)在吡啶/水的1∶1混合物中的溶液中。用1M碳酸钠将该混合物的pH调节到9.5并将该溶液在氮气下在53℃加热过夜。将该混合物冷却并过滤，滤液浓缩得到棕色固体残余物。该粗产物用凝胶过滤法(交联葡聚糖LH20；水)纯化得到棕色固体(82mg)。
实施例41以1-膦酰-氧苯基-4-硫脲结尾的聚-L-赖氨酸的制备。
向在53℃加热并搅拌的聚-L-赖氨酸氢溴化物(50mg,SigmaP2636,30-70千道尔顿)的水(10ml)溶液中加入4-膦酰氧基苯基异硫氰酸盐(153mg)，并用1M碳酸钠溶液将该混合物的pH调节到9.5-10。该混合物在53℃加热并搅拌5小时，然后过滤。澄清溶液用交联葡聚糖LH20凝胶过滤法纯化，用水洗脱。洗脱液冷冻干燥得到白色泡沫产物。77mg。94％。
实施例42以苯甲酰氨基-4-硼酸结尾的聚-L-赖氨酸的制备。
在惰性气氛下，向聚-L-赖氨酸氢溴化物(50mg,Sigma P2636,30-70千道尔顿)的DMSO(10ml)溶液中加入4-羧苯基硼酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(90mg)和1M碳酸钠溶液(2ml)，该混合物在20℃搅拌60小时。真空除去溶剂，将残余物溶于水(5ml)并过滤。澄清溶液用交联葡聚糖LH20凝胶过滤法纯化，用水洗脱。洗脱液冷冻干燥得到白色泡沫产物。50mg。90％。
实施例43Ⅰ．尿囊绒膜(CAM)测定本试验中使用最初由Folkman(1985)描述并由Maragoudakis等人(1988)加以改进的体内CAM血管生成模型。简言之，当在接触CAM的卵壳上打开一个小口时，将新鲜的受精卵在37℃下培养4天。将此开口用玻璃纸带覆盖并将该卵放回到孵化箱中直到第9天应用受试化合物时为止。将该受试化合物置于无菌塑料盘(10mm)上并使之在无菌条件下干燥。将对照盘(含有PBS)置于距离含有受试物质的盘1cm远的CAM上。在所有盘中均加入醋酸可的松的无菌溶液(100ug/盘，Sigma)以防止炎性应答。将加载并干燥后的盘反转并置于CAM上，将开口覆盖并培养这些卵直到第11天评定血管生成。CAM测定中血管生成的形态学评估如上处理这些卵以进行形态学评估。第11天时，将这些卵注满10％缓冲的福尔马林(Janssen Chimica,Geel,Belguim)，除去塑料盘并使这些卵在室温下保持至少4小时。将盘周围的大部分面积切去并置于玻璃载片上，用Harris-Hooker等人(1983)的方法测定血管密度指数(表示成血管数)。Ⅱ．大鼠主动脉测定本试验中使用由Nicosia等人(1990)最初描述的大鼠主动脉环模型。简言之，将琼脂糖的1.5％无菌溶液(Pharmacia Biotech AB.Upppsala,Sweden)倒入培养皿中并使之成凝胶状。在琼脂糖凝胶中冲压出两个直径分别为10和17mm的同心圈，从而得到琼脂糖环。将这些环内外多余的琼脂糖除去。将这些环转移到6孔平板(Nuncion,Roskilde，丹麦)上，每孔中含有三个环。从3月龄的雄性Wistar大鼠得到胸主动脉。将这些主动脉立即转移到含有无血清最低必需培养液(MEM)的培养盘中。仔细地除去主动脉周围的纤维脂肪性组织以损害主动脉壁。切取主动脉环薄片(0.5mm厚)并用无血清培养基连续彻底冲洗12次。在将这些主动脉环转移到培养皿中的培养基环中之前，将每个琼脂糖孔的底部涂上150ul凝固纤维蛋白原。当纤维蛋白凝胶形成后，将主动脉环转移到琼脂糖孔中并置于琼脂糖孔的中心。然后将琼脂糖孔完全填充上凝固纤维蛋白原。将部分纯化的牛纤维蛋白原(Sigma)溶于无血清培养基中使浓度为3mg/ml。将20ul 50μl/ml的牛凝血酶溶液(Sigma)加入到1ml纤维蛋白原溶液中使产生凝固。在室温下在30秒内形成纤维蛋白凝胶。当纤维蛋白凝胶化后，向6孔板的每孔中加入6ml添加有20％FCS(Gibco)、10mM Hepes(Gibco)和1mM L-谷酰胺(Gibco)的MEM培养液，并将合适浓度的受试化合物加入该培养液中。大鼠主动脉环测定中血管生成的定量每日在倒置显微镜下检查培养物并记分。用微脉管生长曲线代表微脉管的生长。由于微脉管网络的空间复杂性，通常有200-250个以上的微脉管形成(Nicosia等人，1990)。对微脉管进行计数的观测者的误差范围较高，因此，所形成的微脉管分为0(无脉管)到10(最多的脉管数)级打分。结果Ⅰ．CAM测定
已评估了更高浓度(50μg/cam)的BRI2995和BRI6112:BRI2995使50％胚胎死亡。存活的胚胎显示脉管密度的抑制为73％。BRI6112在这一浓度未发现毒性。但仅观测到对脉管密度的轻微抑制(-16％)。
试验中用TNP-470(50μ/cam)和戊聚糖多硫酸酯(PPS)(50μg)这两种用于临床试验的化合物作为对照化合物。它们使脉管密度分别降低了21％±16和42％±28。不过PPS在这一浓度导致80％胚胎死亡。Ⅱ．大鼠主动脉测定BRI2995,BRI2996和BRI2999在20μg/ml和100μg/ml的浓度下(几乎)完全抑制了微脉管的形成。
BRI6196在20μg/ml和100μg/ml浓度下近似完全抑制，且在4μg/ml也有抑制作用。
BRI2923和BRI6039在100μg/ml浓度下减少了微脉管的生长。
参考文献1．Folkman J.(1985)生物化学杂志267:10931-10934。2．Harris-Hooker S.A.等人(1983)细胞生理学杂志114:302-310。3．Hasegawa A.等人(1986)糖类化学杂志5(1):11-19。4．Maragoudakis M.E.等人(1988)组织细胞20:531-539。5．Nicosia R.F.和Ottinetti A.(1990)细胞生物学研究(Cell Dev.Bio.)26:119-128。6．Sabesan S.(1994)生物有机与医药化学快报4(20):2457-2460。
权利要求
1．预防性或治疗性抑制人或非人动物患者血管生成的方法，它包含给予该患者有效量的选自下列的化合物ⅰ．具有多个侧链基团的直链非糖类聚合物，其中所述侧链基团中至少有一个具有键合或连接其上的含有阴离子或阳离子的部分；和ⅱ．具有多个端基的树状聚合物，其中所述端基中至少有一个具有键合或连接其上的含有阴离子或阳离子的部分。
2．按照权利要求1的方法，其中所述化合物为通式Ⅰ的直链多离子
R是形成直链聚合物骨架的非糖类单体单元；X是非必需的单体单元R的侧链基团上的连接基；和A是含有阴离子的部分。
3．按照权利要求2的方法，其中所述直链聚合物的分子量分布的中值范围是1,000-1,000,000。
4．按照权利要求3的方法，其中所述直链聚合物的分子量分布的中值范围是10,000-600,000。
5．按照权利要求2的方法，其中在所述直链聚合物中所述单体单元R是胺或酰胺部分。
6．按照权利要求5的方法，其中在所述直链聚合物中所述单体单元R是赖氨酸或其他氨基酸部分。
7．按照权利要求2的方法，其中在所述直链聚合物中所述连接基X，当存在时，是选自下列组成的官能连接基酯，酰胺，醚，硫醚，胺，脲，硫脲，甲氨酸酯和碳酸酯。
8．按照权利要求2的方法，其中在所述直链聚合物中所述连接基X，当存在时，是选自下列组成的间隔基可选为取代的或分支的烷基链；可选被取代的烷氧基、聚烷氧基、烷硫基或聚烷硫基链，可选被取代的链烯基、多链烯基、炔基或多炔基链，和式-(CH2)n-2-(CH2)n-基团，其中C是-CH2-,-CH=CH-,-C≡C-,-O-或-S-，而n是1-15的整数。
9．按照权利要求1的方法，其中所述化合物是树状化合物，它包含一个共价键合到至少两个树状分支上的多价核心，并通过至少两个生长支扩展。
10．按照权利要求9的方法，其中所述树状聚合物是基于氨核心的聚酰氨基胺树状聚合物。
11．按照权利要求9的方法，其中所述树状聚合物是基于乙二胺核心的聚酰氨基胺树状聚合物。
12．按照权利要求9的方法，其中所述树状聚合物是基于二苯甲基胺或其他合适核心的聚赖氨酸树状聚合物。
13．按照权利要求9的方法，其中所述化合物是通式Ⅱ的多离子树状聚合物
其中I是起始核心；Z是内部分支单元；n是整数，它表示生成的树状聚合物的数目；和A是含有阴离子的部分，它可以通过非必需的连接基X连接到内部分支单元Z上。
14．按照权利要求1-13任一项所述的方法，其中在所述化合物中所述含有阴离子或阳离子的部分通过酰胺或硫脲键而键合到直链聚合物或树状聚合物的胺、巯基、羟基或其他活性官能侧链或端基上。
15．按照权利要求1-14任一项所述的方法，其中在所述化合物中所述含有阴离子的部分选自下列成员含有磺酸的部分，含有羧酸的部分(包括含有神经氨酸和唾液酸的部分和含有修饰的神经氨酸和唾液酸的部分)，含有硼酸的部分，以及含有磷酸和膦酸的部分(包括含有酯化磷酸和膦酸的部分)。
16．按照权利要求1-15任一项所述的方法，其中在所述化合物中键合到直链聚合物或树状聚合物的氨基或其他活性官能侧链或端基上的部分选自以下基团，其中n为0或正整数
-ArXP(=O)(OR)2X=O,CH2,CHF,CF2R=烷基，芳基H,Na-ArXP(=O)(OR1)(NR2R3)X=O,CH2,CHF,CF2R1=烷基，芳基H,Na R2,R3=烷基，芳基-Ar[P(=O)(OR)2]nR=烷基，芳基H,Na n=1-3-Ar[B(OH)2]nn=1-3-Ar[COOH]nn=1-3
17．按照权利要求1或2所述的方法，其中所述化合物选自下列成员Ⅰ．以4-磺苯基硫脲结尾的聚-L-赖氨酸；ⅱ．以3,6-二磺萘基硫脲结尾的聚-L-赖氨酸；ⅲ．以(8-辛酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸结尾的聚-L-赖氨酸；ⅳ．以3,5-二羧苯基硫脲结尾的聚-L-赖氨酸；ⅴ．以4-(膦酰甲基)苯基硫脲结尾的聚-L-赖氨酸；ⅵ．以1-膦酰氧苯基-4-硫脲结尾的聚-L-赖氨酸；和ⅶ．以苯甲酰氨基-4-硼酸结尾的聚-L-赖氨酸。
18．按照权利要求1或权利要求9的方法，其中所述化合物选自下列成员Ⅰ．以烷基磺酸结尾的树状聚合物；ⅱ．以磺乙酰胺结尾的树状聚合物；ⅲ．以磺基琥珀酰胺酸结尾的树状聚合物；ⅳ．以N-(2-磺乙基)琥珀酰胺结尾的树状聚合物；ⅴ．以4-磺苯基硫脲结尾的树状聚合物；ⅵ．以3,6-二磺萘基硫脲结尾的树状聚合物；ⅶ．以4-磺萘基硫脲结尾的树状聚合物；ⅷ．以3,5-二磺苯基硫脲结尾的树状聚合物；ⅸ．以3,6,8-三磺萘基硫脲结尾的树状聚合物；ⅹ．以4-(磺甲基)苯甲酰胺结尾的树状聚合物；ⅹⅰ．以4-磺基苯甲酰胺结尾的树状聚合物；ⅹⅱ．以N-(4-磺苯基)丙酰胺结尾的树状聚合物；ⅹⅲ．以4-磺苯基脲结尾的树状聚合物；ⅹⅳ．以N,N,N-三甲基甘氨酰胺结尾的树状聚合物；ⅹⅴ．以4-三甲铵苯甲酰胺结尾的树状聚合物；ⅹⅵ．以4-(三甲铵甲基)苯甲酰胺结尾的树状聚合物；ⅹⅶ．以N-(2-乙酰氧基乙基)-N,N-(二甲铵)甲基羧酰胺结尾的树状聚合物；ⅹⅷ．以胍基结尾的树状聚合物；ⅹⅰⅹ．以4-([1,4,8,11-四氮杂环十四烷]甲基)苯甲酰胺结尾的树状聚合物；ⅹⅹ．以4-羧基-3-羟基-苄胺结尾的树状聚合物；ⅹⅹⅰ．以4-羧苯基酰胺结尾的树状聚合物；ⅹⅹⅱ．以3,5-二羧苯基酰胺结尾的树状聚合物；ⅹⅹⅲ．以4-膦酰氧基苯基硫脲结尾的树状聚合物；ⅹⅹⅳ．以4-(膦酰甲基)苯基硫脲结尾的树状聚合物；ⅹⅹⅴ．以乙基-4-(膦酰甲基)苯基硫脲结尾的树状聚合物；ⅹⅹⅵ．以(8-辛酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸结尾的树状聚合物；ⅹⅹⅷ．以(11-十一酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸结尾的树状聚合物；ⅹⅹⅷ．以(乙酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸结尾的树状聚合物；ⅹⅹⅰⅹ．以(4-丁酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸结尾的树状聚合物；ⅹⅹⅹ．以(4-甲基苯甲酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸结尾的树状聚合物；ⅹⅹⅹⅰ．以(8-辛酰氨基)-4-叠氮基-5-乙酰氨基-3,4,5-三脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸结尾的树状聚合物；ⅹⅹⅹⅱ．以(8-辛酰氨基)-4-氨基-5-乙酰氨基-3,4,5-三脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸结尾的树状聚合物；ⅹⅹⅹⅲ．以4-苯甲酰氨基硼酸结尾的树状聚合物；ⅹⅹⅹⅳ．以3,5-二羧苯基硫脲结尾的树状聚合物；ⅹⅹⅹⅴ．以4-膦酰苯基硫脲结尾的树状聚合物；ⅹⅹⅹⅵ．以4,6-二膦酰萘基硫脲结尾的树状聚合物；ⅹⅹⅹⅶ．以荧光素硫脲结尾的树状聚合物；和ⅹⅹⅹⅷ．以(苯基-3-硼酸)硫脲结尾的树状聚合物。
19．按照权利要求1-18任一项所述的方法，其中所述治疗包含抑制病人的血管生成，慢性炎症、糖尿病性视网膜病、银屑病和类风湿性关节炎以及涉及新血管的生长的其他疾病的治疗，通过抑制血管平滑肌细胞增殖而预防再狭窄，通过激活储存在胞外基质中的活性生长因子的释放而促进伤口愈合，以及通过抑制血管生成而抑制肿瘤细胞转移。
20．用于预防性或治疗性抑制人或非人动物血管生成的药物或兽医组合物，它包含如权利要求1-18任一项所定义的阴离子或阳离子直链聚合物或树状聚合物，以及至少一种药学上或兽医可接受的载体或稀释剂。
21．如权利要求1-18任一项所定义的阴离子或阳离子直链聚合物或树状聚合物在人或非人动物的血管生成的预防性或治疗性抑制中，或在用于人或非人动物的血管生成的预防性或治疗性抑制的药剂的制备中的应用。
22．一种化合物，它包含具有多个端基的树状聚合物，其中所述端基中至少有一个具有键合或连接其上的含有阴离子的部分，所述含有阴离子的部分选自下列成员Ⅰ．含有神经氨酸和唾液酸的部分，而不是2-硫代唾液酸；ⅱ．含有修饰的神经氨酸和唾液酸的部分；ⅲ．含有硼酸的部分；和ⅳ．含有磷酸和膦酸的部分，包括含有酯化磷酸和膦酸的部分。
23．按照权利要求22的化合物，其中所述树状聚合物包含一个共价键合到至少两个树状分支上的多价核心，并通过至少两个生长支扩展。
24．按照权利要求22或23的化合物，其中所述树状聚合物是基于氨核心的聚酰氨基胺树状聚合物。
25．按照权利要求22或23的化合物，其中所述树状聚合物是基于乙二胺核心的聚酰氨基胺树状聚合物。
26．按照权利要求22或23的化合物，其中所述树状聚合物是基于二苯甲基胺或其他合适核心的聚赖氨酸树状聚合物。
27．按照权利要求22-28任一项所述的化合物，其中所述含有阴离子的部分通过酰胺或硫脲键而键合到所述树状聚合物的末端胺、巯基、羟基或其他活性官能端基上。
28．按照权利要求22的化合物，它选自下列成员Ⅰ．以4-膦酰氧基苯基硫脲结尾的树状聚合物；ⅱ．以4-(膦酰甲基)苯基硫脲结尾的树状聚合物；ⅲ．以乙基-4-(膦酰甲基)苯基硫脲结尾的树状聚合物；ⅳ．以(8-辛酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸结尾的树状聚合物；ⅴ．以(11-十一酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸结尾的树状聚合物；ⅵ．以(乙酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸结尾的树状聚合物；ⅶ．以(4-丁酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸结尾的树状聚合物；ⅷ．以(4-甲基苯甲酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸结尾的树状聚合物；ⅸ．以(8-辛酰氨基)-4-叠氮基-5-乙酰氨基-3,4,5-三脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸结尾的树状聚合物；ⅹ．以(8-辛酰氨基)-4-氨基-5-乙酰氨基-3,4,5-三脱氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸结尾的树状聚合物；ⅹⅰ．以4-苯甲酰基硼酸结尾的树状聚合物；ⅹⅱ．以4-膦酰苯基硫脲结尾的树状聚合物；ⅹⅲ．以4,6-二膦酰萘基硫脲结尾的树状聚合物；和ⅹⅳ．以(苯基-3-硼酸)-硫脲结尾的树状聚合物。
全文摘要
预防性或治疗性抑制人或非人类动物患者血管生成的方法,它包括给予该患者有效量的化合物,其选自:(i)有多个侧链基团的直链非糖类聚合物,其中至少有一个侧链基团具有键合或连接其上的含有阴离子或阳离子的部分;和(ii)具有多个端基的树状聚合物,其中至少有一个端基具有键合或连接其上的含有阴离子或阳离子的部分。
文档编号A61P17/02GK1225654SQ97196452
公开日1999年8月11日 申请日期1997年7月17日 优先权日1996年7月17日
发明者B·R·玛苏斯, G·浩兰 申请人:生物分子研究所