专利名称：同时制备箬叶挥发油、总黄酮和总多糖的方法
技术领域：
本发明涉及农产品的深加工技术领域，特别是一种同时从箬叶中提取挥发油、黄酮和多糖等生物活性成分的方法。该方法涉及集成水蒸气蒸馏、大孔树脂技术，以及真空浓缩技术等提取箬叶生物活性成分的方法。
背景技术：
箬叶为禾本科(Graminales)竹亚科(BambusoideaeNees)箬竹属(Indocal.mus)植物的叶。主要分布于长江以南各省区。用箬叶可包裹糯米煮成食品，该食品是中华民族的传统美食之一，在我国南方地区具有悠久的历史，具有特殊的清香气味，食用方便，并且耐贮藏，深受人民群众喜爱。现代医学表明箬叶具有清热止血、解毒消肿、利尿抗癌等功效。现代科学研究证明，箬叶中含有挥发油、黄酮和多糖等功效成分。箬叶特有的棕香味是一种 令人愉悦的天然香味，从中提取的挥发油可再开发天然香精、食品添加剂等产品；药理试验证明，箬竹叶提取液具有良好的抗肿瘤、抗炎症、抗溃疡等作用。目前，关于箬叶挥发油、总黄酮和总多糖制备方法的专利申请有申请号为03142883. 5、01111117. 8等申请，但这些方法都是单一提取，资源利用率较低，提取成本较高，不适宜工业化大生产。

发明内容
本发明的目的在于提供一种同时从箬叶中提取制备挥发油、总黄酮和总多糖的方法，从而可避免单一提取所带来的资源浪费，提高了箬叶的资源利用率，降低了成本，并且该制备方法适宜工业化大生产。本发明的目的通过以下技术方案来实现一种同时制备箬叶挥发油、总黄酮和总多糖的方法，其工艺步骤为取箬叶粉末加5-12倍重量(L/kg)的水，浸泡0-4h，水蒸气蒸馏法提取2-12h，得挥发油；提取挥发油后药液留用，药渣加入以生药量计6-12倍重量(L/kg)的20-50%乙醇回流提取2-3次，每次0. 5-1. 5h，滤过，减压回收乙醇后，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得提取物，加水分散溶解，以生药量计使上样液浓度为0. 4-1. Og/ml，通过大孔树脂，吸附流速l-3BV/h，树脂柱径高比为I : 5-8，先用水洗脱2-3BV，洗脱液乙醇沉淀，干燥，得箬叶总多糖提取物；然后用40-90%乙醇洗脱3-5BV，洗脱流速为0. 8_2BV/h，此洗脱液浓缩，干燥，得箬叶总黄酮提取物。本发明所述原料箬叶，来源于禾本科(Graminales)竹亚科(BambusoideaeNees)箬竹属(Indocal. mus)其中任意一种植物的叶。所述提取箬叶挥发油、总黄酮和总多糖的原料，箬叶为野生箬竹叶，其中包括有柔毛箬竹、湖南箬竹、阔叶箬竹、箬叶竹、南岳箬竹、益阳箬竹、方脉箬竹、箬竹和鄂西箬竹等中的任意一种。所述萃取所用有机溶剂是石油醚、乙醚、乙酸乙酯等低极性或中等极性溶剂中的任意一种或一种以上组合。
所述利用大孔树脂法进行制备时，所用大孔树脂可以是非极性、弱极性和中等极性等任意一种类型，所述大孔树脂型号是HP20、HPD100A、DlOl、D201、AB-8等中的任意一种。所述工艺可按以下条件操作取箬叶粉末2-5kg，加5-12倍重量的水，浸泡0-4h，水蒸气蒸馏法提取4-12h，得挥发油；提取挥发油后药液留用，药渣加入以生药计6-12倍重量的20-50%乙醇回流提取2-3次，每次0. 5-1. 5h，滤过，合并提取液和挥发油提取后药液，减压浓缩，得提取物，加水分散溶解，以生药量计使上样液浓度为0. 4-1. Og/ml，通过大孔吸附树脂，吸附流速l-3BV/h，树脂柱径高比为I : 5-8，先用纯水洗脱2-4BV，多糖洗脱流速为3-5BV/h，得箬叶总多糖提取物；然后用70%乙醇洗脱3-6BV，洗脱流速为0. 8-2. OBV/h,70 %乙醇洗脱液浓缩，干燥，得箬叶总黄酮提取物。本发明中BV和BV/h的含义是通常将树脂装于圆筒性的树脂柱中，溶液连续地通过。树脂柱内装载树脂的体积称为床体积(BV)，工作时的各种物料量都与BV为单位。例如，溶液通过树脂的流量速度为2-4BV/h，即，每小时通过溶液的体积为树脂床容积的2-4倍。本发明质量控制方法，可包括以下一种或几种含量测定方法I、挥发油挥发油采用直接称重法计算得到
挥发油量
出油率=-----X 100%
箬叶量2、总黄酮精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇溶解制成每Iml含橙皮苷0. 22mg的溶液。分别精密吸取橙皮苷对照品溶液1，2，3，4，5ml，于5ml量瓶中，加甲醇定容，摇匀。分别精密吸取上述对照品溶液0. 5ml，置25ml量瓶中，准确加入10% A1C13溶液I. 0ml，再用蒸馏水定容至刻度，摇匀，室温放置15min，于310nm处测定吸光度，以橙皮苷浓度为横坐标，吸光度为纵坐标,绘制曲线。精密称取箬叶黄酮提取物样品各3份，每份5mg，加甲醇溶解并定容于25ml容量瓶中，摇匀。分别精密吸取上述对照品溶液0. 5ml，置25ml量瓶中，准确加入10% A1C13溶液
I.0ml，再用蒸馏水定容至刻度，摇匀，室温放置15min，于310nm处测定吸光度，计算含量。3、总多糖精确称取105°C干燥恒重的葡萄糖20mg，置500ml容量瓶中，定容，摇匀(含葡萄糖40mg/L)。分别吸取葡萄糖标准溶液0. 4,0. 6,0. 8，I. 0，I. 2，I. 4，I. 6，I. 8mL，用蒸馏水补充至2. OmL,加入5%的苯酹溶液ImL,摇勻，吸取5ml浓硫酸大力冲入大试管中，静止lOmin，摇匀，室温下放置20min，于490hm处测定吸光度。(以2. OmL蒸馏水作为空白对照)。精密称取箬叶多糖提取物样品各3份，每份5mg，加水溶解并定容于25ml容量瓶中，摇匀。精确取待测多糖稀释液I. OmL，加苯酚试液I. OmL，摇匀，放置IOmin后，快速加入
5.OmL浓硫酸，摇匀，放置20min，于490nm测定吸光值，根据回归方程计算各待测液中多糖 浓度，计算多糖含量。本发明的有益效果
本发明是一种同时提取分离箬叶中挥发油、总黄酮和总多糖的制备方法，采用该方法可以将箬叶中三类有效成分同时提取，有效地避免了单一提取所带来的资源浪费，提高了箬叶的资源利用率，降低了成本，并且该制备方法适宜工业化大生产。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步描述，但实施例并不对本发明有任何限制。实施例I :取箬叶粉2kg，加8倍量水，浸泡2h，水蒸气蒸馏法提取7h，得挥发油；提取挥发油后药液留用，药渣加入以生药量计9倍量计，30%乙醇回流提取3次，每次I. Oh,滤过，提取液减压回收乙醇后，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得提取物，加水分散溶 解，以生药量计使上样液浓度为0. 7g/ml，通过AB-8大孔树脂，吸附流速2BV/h，树脂柱径高比为I : 6，先用水洗脱3BV，洗脱流速为3BV/h，洗脱液浓缩，乙醇沉淀，干燥，得箬叶总多糖提取物；然后用70%乙醇洗脱3BV，洗脱流速为I. 5BV/h，此洗脱液浓缩，干燥，得箬叶总黄酮提取物。实施例2 取箬叶粉5kg，加5倍量水，浸泡4h，水蒸气蒸馏法提取12h，得挥发油；提取挥发油后药液留用，药渣加入以生药量计12倍量计，40%乙醇回流提取3次，每次I. 5h，滤过，提取液减压回收乙醇后，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得提取物，加水分散溶解，以生药量计使上样液浓度为I. Og/ml，通过HP-20大孔树脂，吸附流速3BV/h，树脂柱径高比为I : 8，先用水洗脱4BV，洗脱流速为4BV/h，洗脱液浓缩，乙醇沉淀，干燥，得箬叶总多糖提取物；然后用70%乙醇洗脱4BV，洗脱流速为2BV/h，此洗脱液浓缩，干燥，得箬叶总黄酮提取物。实施例3 取箬叶粉2kg，加12倍量水，浸泡Oh，水蒸气蒸馏法提取4h，得挥发油；提取挥发油后药液留用，药渣加入以生药量计6倍量计，40%乙醇回流提取3次，每次I. 0h，滤过，提取液减压回收乙醇后，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得提取物，加水分散溶解，以生药量计使上样液浓度为0. 8g/ml，通过D-101大孔树脂，吸附流速2BV/h，树脂柱径高比为I : 7，先用水洗脱2BV，洗脱流速为2BV/h，洗脱液浓缩，乙醇沉淀，干燥，得箬叶总多糖提取物；然后用70%乙醇洗脱3BV，洗脱流速为lBV/h，此洗脱液浓缩，干燥，得箬叶总黄酮提取物。实施例4 取箬叶粉3kg，加5倍量水，浸泡3h，水蒸气蒸馏法提取6h，得挥发油；提取挥发油后药液留用，药渣加入以生药量计8倍量计，40%乙醇回流提取3次，每次I. 5h，滤过，提取液减压回收乙醇后，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得提取物，加水分散溶解，以生药量计使上样液浓度为I. 6g/ml，通过HPD-100A大孔树脂，吸附流速3BV/h，树脂柱径高比为I : 8，先用水洗脱3BV，洗脱流速为2BV/h，洗脱液浓缩，乙醇沉淀，干燥，得箬叶总多糖提取物；然后用90%乙醇洗脱4BV，洗脱流速为2BV/h，此洗脱液浓缩，干燥，得箬叶总黄酮提取物。实施例5
取箬叶粉2kg，加4倍量水，浸泡2h，水蒸气蒸馏法提取6h，得挥发油；提取挥发油后药液留用，药渣加入以生药量计7倍量计，50%乙醇回流提取3次，每次I. Oh,滤过，提取液减压回收乙醇后，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得提取物，加水分散溶解，以生药量计使上样液浓度为0. 8g/ml，通过D-201大孔树脂，吸附流速2BV/h，树脂柱径高比为I : 6，先用水洗脱3BV，洗脱流速为2BV/h，洗脱液浓缩，乙醇沉淀，干燥，得箬叶总多糖提取物；然后用80%乙醇洗脱3BV，洗脱流速为lBV/h，此洗脱液浓缩，干燥，得箬叶总黄酮提取物。以上实施例利用上述质量检测方法测得挥发油、总黄酮和总多糖含量如下
权利要求
1.一种同时制备箬叶挥发油、总黄酮和总多糖的方法，其特征在于工艺按以下步骤进行取箬叶粉末加5-12倍重量的水，浸泡0-4h，水蒸气蒸馏法提取2-12h，用有机溶剂萃取得箬叶挥发油；提取挥发油后药液留用，药渣加入以生药量计6-12倍重量的20-50%乙醇回流提取2-3次，每次0. 5-1. 5h，滤过，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得提取物，加水分散溶解，以生药量计使上样液浓度为0. 4-1. Og/ml，通过大孔树脂，吸附流速l-3BV/h，树脂柱径高比为I : 5-8，先用水洗脱2-4BV，洗脱液乙醇沉淀，干燥，得箬叶总多糖提取物；然后用40-90%乙醇洗脱3-6BV，洗脱流速为0. 8_2BV/h，此洗脱液浓缩，干燥，得箬叶总黄酮提取物。
2.如权利要求I所述的同时制备箬叶挥发油、总黄酮和总多糖的方法，其特征在于所述原料箬叶为野生箬竹叶，包括有柔毛箬竹、湖南箬竹、阔叶箬竹、箬叶竹、南岳箬竹、益阳箬竹、方脉箬竹、箬竹和鄂西箬竹中的任意一种。
3.如权利要求I所述的同时制备箬叶挥发油、总黄酮和总多糖的方法，其特征在于所述萃取用的有机溶剂是石油醚、乙醚、乙酸乙酯低极性或中等极性溶剂中的任意一种或一种以上组合。
4.如权利要求I所述的同时制备箬叶挥发油、总黄酮和总多糖的方法，其特征在于所述的大孔树脂是非极性、弱极性和中等极性任意一种。
5.如权利要求I或4所述的同时制备箬叶挥发油、总黄酮和总多糖的方法，其特征在于所述大孔树脂的型号是HP20、HPD100A、D101、D201、AB-8中的任意一种。
6.如权利要求I所述的同时制备箬叶挥发油、总黄酮和总多糖的方法，其特征在于所述工艺按以下条件操作取箬叶粉末2-5kg，加5-12倍重量的水，浸泡0-4h，水蒸气蒸馏法提取4-12h，得挥发油；提取挥发油后药液留用，药渣加入以生药计6-12倍重量的20-50%乙醇回流提取2-3次，每次0. 5-1. 5h，滤过，合并提取液和挥发油提取后药液，减压浓缩，得提取物，加水分散溶解，以生药量计使上样液浓度为0. 4-1. Og/ml，通过大孔吸附树脂，吸附流速l-3BV/h，树脂柱径高比为I : 5-8，先用纯水洗脱2-4BV，多糖洗脱流速为3_5BV/h，得箬叶总多糖提取物；然后用70%乙醇洗脱3-6BV，洗脱流速为0. 8-2. OBV/h，70%乙醇洗脱液浓缩，干燥，得箬叶总黄酮提取物。
全文摘要
本发明公开了一种同时制备箬叶挥发油、总黄酮和总多糖的方法。取箬叶粉末加5-12倍重量的水，浸泡0-4h，水蒸气蒸馏法提取2-12h，用有机溶剂萃取得挥发油；提取后的药液留用，药渣加入以生药量计6-12倍重量20-50％乙醇回流提取2-3次，每次0.5-1.5h，滤过，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得提取物，加水分散溶解，以生药量计使上样液浓度为0.4-1.0g/ml，通过大孔树脂，吸附流速1-3BV/h，树脂柱径高比为1∶5-8，先用水洗脱2-4BV，洗脱液乙醇沉淀，干燥，得总多糖；然后用40-90％乙醇洗脱3-6BV，洗脱流速为0.8-2BV/h，此洗脱液浓缩，干燥，得总黄酮。
文档编号A61P29/00GK102671017SQ20121012816
公开日2012年9月19日 申请日期2012年4月27日 优先权日2012年4月27日
发明者张长友, 易继斌, 谭遵伟, 陈新, 高跃生 申请人:湖北长友现代农业股份有限公司