专利名称：抗癌中药组合物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种中药组合物，特别是涉及一种具有抗癌作用的中药组合物。
背景技术：
恶性肿瘤是严重危害人类健康及生命的常见病，其死亡率居各种疾病之首。世界每年约有500万人因患恶性肿瘤而被夺去生命。目前治疗肿瘤的主要手段包括手术、放疗、 化疗，但由于化疗药物对肿瘤细胞与正常细胞的选择性较差，在杀灭或抑制肿瘤细胞的同时，亦严重损伤生长相当活跃的正常细胞，并对机体的重要器官如心、肝、肾、肺及神经系统等产生一定的毒副作用，对机体的免疫产生抑制作用。正因上述的各种原因，使世界上许多国家的科学家们逐步把研究重心移向中药方面。肿瘤的中医药治疗在我国有悠久的历史， 在我国肿瘤临床上运用中医药十分普遍，据大量的临床报道，中医药的应用具有改善症状， 提高生存质量，延长生存期，在一定程度上稳定或缩小肿瘤的效果；与化放疗同用具有明显的减毒增效作用。与西医西药相比，中医药疗效广泛、毒副反应小、耐受性好，适用人群广， 而且治疗成本相对较低，在肿瘤治疗领域发挥着西方医学不可替代的作用，越来越受到国际社会的重视。中药重楼为百合科重楼属(Paris)植物滇重楼(Paris polyphylla Smith var. yannanensis)及七叶一枝花(paris polyphylla Smith var. chinensis (Franch.) Hara)的根茎，具有清热解毒，消肿止痛、凉肝定惊之功效，用于治疗臃肿、咽喉肿痛、毒蛇咬伤、跌打伤痛、凉风抽搐等症，是著名中成药云南白药、季德胜蛇药片、宫血宁胶囊等的主要组成药物。现代药理作用表明该药具有止血、祛痰和抑菌、镇痛镇静、抗早孕杀灭精子、抗细胞毒等作用，在临床应用于治疗功能性子宫出血、神经性皮炎和外科炎症以及治疗肿瘤等，都有显著的疗效。目前以重楼为主要成分的复方有金复康口服液、楼莲胶囊、肝复乐胶囊等。黄药子 CTuber Dioscoreae)又名黄独(Dioscorea bulbifera L)、香芋、红药子等，为薯蓣科薯蓣属植物黄独的块茎。主要分布于长江以南各地。黄药子之名始载于宋代 《开宝本草》，其性寒苦，入肝、肺经。古代认为有清热解毒，凉血止血，消肿散瘿的功效。《千金月令》中已经记载用黄药子酒可以治疗甲状腺癌的治疗方法。中医临床用黄药子单、复方制剂进行抗肿瘤的治疗，疗效明显。现代药物研究表明本品含有多种抗癌化学成分，其抗肿瘤效果明显，同时对多种皮肤真菌有抑制作用。黄药子含有留体皂甙、二萜内酯及1-(3-丙氨基)-2-甲基哌啶活性成分等。它在体内和体外均有一定的抗肿瘤作用，抗瘤活性随剂量增大而增大。然而其抗肿瘤机制尚不明确，抑制甲硫氨酸氨肽酶II活性可能是黄药子抗肿瘤的一个机制。总之，黄药子的抗肿瘤作用有待进一步研究。目前只有重楼皂苷与黄芪多糖的药物组合物(CN101152408A)的专利见诸报道。 到目前为止尚未发现具有抗癌作用且由重楼皂苷提取物和黄药子醇提物的中药组合物见诸报道
发明内容
本发明涉及一种具有抗癌作用的中药组合物，所述的具有抗癌作用的中药组合物，它的抗癌活性高且具有广谱性，其制备方法简单。本发明是通过以下技术方案加以实现的，一种具有抗癌作用的中药组合物，该具有抗癌作用的中药组合物是由重楼皂苷提取物和黄药子醇提物按质量比1 1-1 2，其中重楼皂苷提取物中含有留体类皂苷的质量分数为25% 60%，黄药子醇提物中黄药子甾体皂苷类物质的质量分数为12% 43%。所述中药组合物较佳的一种配比是由重楼皂苷提取物和黄药子醇提物按质量比 1 1所组成。上述的具有抗癌作用的中药组合物的制备方法，包括以下过程1)重楼皂苷提取(1)将云南产滇重楼的粗粉过5目筛后用4倍体积比的70% 85%乙醇浸泡1小时，然后在85°C的温度下加热回流提取3次，每次2小时，合并提取液并浓缩而得到浸膏；(2)将上述浸膏加入到50 100倍体积比的0% 20%乙醇中并分散均勻，离心， 沉淀后再溶解，再离心，重复2次，合并上清液；(3)将上述上清液经大孔吸附树脂层析柱，所用干树脂量按照与浸膏重量比例为 4 1 10 1计算，上柱流速为1 3BV/h，洗脱液弃去用；用60% 80%乙醇洗脱，流速为2 5BV/h，收集乙醇洗脱液，减压浓缩真空干燥后即可得到重楼皂苷提取物；2)黄药子醇提物的制备(1)将黄药子粉碎成Icm小块，按黄药子小块与去离子水Ig IOml比例将黄药子加入去离子水中，在温度100°c提取半小时，回收提取液，并且按第1次回流提取操作条件再进行回流提取2次，合并3次提取液；(2)将步骤1)合并的提取液经过滤，滤液用旋转蒸发器浓缩，浓缩液在温度100°C 蒸发干燥得到为黄药子醇提物，质量分数为15% ；3)重楼皂苷提取物和黄药子醇提物组合按重楼皂苷提取物粉末与黄药子醇提物的质量比1 1，加入去离子水中，经超声混合均勻得到具有抗癌作用的中药组合物，以每毫升水溶液中共计含20毫克重楼皂苷提取物和黄药子醇提物。所述提取物与药学上可接受的辅料混合制成任一制剂。所述组合物可以加药学上可接受的辅料制成临床上或药学上可接受的注射剂或口服制剂。本发明的优点在于，与重楼皂苷单独使用相比，抑瘤率明显提高。而且该中药组合物制备方法简单，活性更高且作用明显。与以往重楼皂苷与黄芪多糖药物组合物相比具有广谱抗癌，针对多种癌症，肝癌，艾氏，S180肉瘤都有很好的治疗效果，抑瘤率达到 40% -50%，并可制备成各种不同的剂型。
具体实施例方式1、将云南产滇重楼500g粗粉过5目筛后分别用4倍体积比的70%和85%乙醇浸泡1小时，然后在85°C的温度下加热回流提取3次，每次2小时，合并提取液并浓缩而得到浸膏；将上述浸膏加入到100倍体积比的20%乙醇中并分散均勻，离心，沉淀后再溶解，再离心，重复2次，合并上清液；将上述上清液经大孔吸附树脂层析柱，所用干树脂量按照与浸膏重量比例为5 1计算，上柱流速为1 !3BV/h，洗脱液弃去；用60% 80%乙醇洗脱，流速为2 5BV/h，收集乙醇洗脱液，减压浓缩真空干燥后即可得到重楼皂普提取物 47. 19g。2、将黄药子药材500g粉碎成Icm小块，按黄药子小块与去离子水Ig IOml比例将黄药子加入去离子水中，在温度100°c提取半小时，回收提取液，并且按第1次回流提取操作条件再进行回流提取2次，合并3次提取液；将提取液经过滤，滤液用旋转蒸发器浓缩， 浓缩液在温度100°C蒸发干燥得到为黄药子醇提物75. 32g。3、取重楼皂苷提取物粉IOmg与黄药子醇提物10mg，配制成每毫升水溶液中共计含20mg，重楼皂苷提取物和黄药子醇提物的具有抗癌作用的中药组合物混合液。本发明的中药组合物的药效试验如下将得到的组合物，通过体内对荷瘤小鼠的试验显示，与重楼皂苷单独使用相比，抑瘤率明显提高，且无明显毒副作用，而且该中药组合物制备方法简单，活性高且作用明显。将上述中药组合物进行抗肿瘤活性试验，其方法和结果如下一 .抗肿瘤活性试验方法1体外抗肿瘤活性试验1. 1细胞株及培养小鼠肺腺癌LA795细胞株，培养于含10%灭活胎牛血清，100U/mL青霉素，100 μ g/ mL链霉素的RPMn640培养基中，于37°C，5 % CO2培养箱及饱和湿度条件下培养，3-4天传代一次。人肺腺癌A549细胞株，培养于含10%灭活胎牛血清，100U/mL青霉素，100 μ g/mL 链霉素的DMEM培养基中，于37°C，5% CO2培养箱及饱和湿度条件下培养，3 4天传代一次。1. 2药物抗肿瘤活性测定MTT法将对数生长期细胞用胰酶消化后配制成浓度为3X104个/mL的细胞悬液，接种于96孔酶标板，每孔加200 μ L0 24h后换不含血清培养液使细胞同步化生长，每孔 200 μ L。第三天加含不同浓度药物及相应溶剂对照的新鲜培养液，每孔加200 μ L，受试药设 8个剂量组，每组设8个平行孔，于37°C培养24h后，每孔加无血清无酚红培养液新鲜配制的0. 5mg/mLMTT100 μ L，继续培养4h，然后，每孔加100 μ LDMSO溶解MTT甲簪颗粒，用微型振荡器振荡混勻后，于酶标仪上测定光密度值(OD)，实验重复三次，取平均值。以溶剂对照处理肿瘤细胞为对照组，由OD值计算抑制率，公式为细胞生长抑制率=(对照组OD值一实验组OD值)/对照组ODX 100%，并由此求得IC50(半数抑制率)，IC5tl =细胞生长抑制率为50%的药物浓度。2.体内抗肿瘤活性验用制备的的药物组合物分别进行H22肝癌模型，S180实体瘤模型，艾氏实体瘤模型的药效试验。2. 1.动物造模2. 1. 1.H22肝癌模型取接种H22肝癌细胞后腹水饱满的荷瘤小鼠，消毒腹部，于超净工作台中抽取乳白色腹水为瘤源，生理盐水洗涤，腹水2mL，腹水与生理盐水的比例为1 4，生理盐水8mL，配成细胞悬液，以无菌注射器抽取0.2mL，分别接种于48只小鼠腋下。 整个操作在无菌条件下进行。2. 1. 2. S180实体瘤模型取接种S180细胞后腹水饱满的荷瘤小鼠，消毒腹部，于超净工作台中抽取乳白色腹水为瘤源，生理盐水洗涤，腹水2mL，腹水与生理盐水的比例为 1 4，生理盐水8mL，配成细胞悬液，以无菌注射器抽取0.2mL，接种于48只小鼠腋下。整个操作在无菌条件下进行。2.1.3.艾氏实体瘤模型取接种艾氏细胞后腹水饱满的荷瘤小鼠，消毒腹部，于超净工作台中抽取乳白色腹水为瘤源，生理盐水洗涤，腹水2mL，腹水与生理盐水的比例为 1 4，生理盐水8mL，配成细胞悬液，以无菌注射器抽取0.2mL，接种于48只小鼠腋下。整个操作在无菌条件下进行。2.2.动物分组及给药接种次日开始给药，每日1次(1)模型组灌服生理盐水，每只0. 2mL ； (2)重楼皂苷组按100mg/kg灌服实施例中制备的重楼皂苷提取物0. 2ml ； (3)黄药子组按100mg/kg 灌服实施例中制备的黄药子醇提物0. 2ml ； (3)重楼皂苷和黄药子组合物组按200mg/kg 灌服实施例中制备的混合物0. 2mL·给药两周，于给药结束后次日颈部脱臼处死小鼠，解剖取其瘤组织，称重量，测抑瘤率抑瘤率(％) = (1-给药组平均瘤重/生理盐水组平均瘤重)X100%，摘取肺，脾，肝用多聚甲醛液固定，称重肝脏及脾脏重量。肝指=(肝脏重量/ 体重)*1000，脾指=(脾脏重量/体重)*1000。二、抗肿瘤活性试验结果表1重楼皂苷提取物和黄药子醇提物组合物体外抗肿瘤活性试验结果
权利要求
1.一种抗癌中药组合物，其特征在于，所述中药组合物由重楼皂苷提取物和黄药子醇提物按质量比1 1 1 2所组成。
2.根据权利要求1所述的抗癌中药物组合物，其特征在于，所述中药组合物由重楼皂苷提取物和黄药子醇提物按质量比11所组成。
3.根据权利要求1或2所述的抗癌中药组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤1)重楼皂苷提取(1)将重楼粗粉过筛后分别用4倍体积比的70% 85 %乙醇浸泡，然后加热回流提取， 浓缩而得到浸膏；(2)将上述浸膏加入到50 100倍体积比的0% 20%乙醇中并分散均勻，离心，沉淀后再溶解，再离心，重复2次，合并上清液；(3)将上述上清液经大孔吸附树脂层析柱，所用干树脂量按照与浸膏重量比例为 4 1 10 1计算，上柱流速为1 !3BV/h，洗脱液弃去；用60% 80%乙醇洗脱，流速为2 5BV/h，收集乙醇洗脱液，减压浓缩真空干燥后即可得到重楼皂苷提取物；2)黄药子醇提物的制备(1)将黄药子粉碎成小块，按黄药子小块与去离子水Ig IOml比例将黄药子加入去离子水中，回流提取得提取液；(2)将步骤(1)合并的提取液经过滤，滤液用旋转蒸发器浓缩，浓缩液在温度100°C蒸发干燥得到为黄药子醇提物，质量分数为15% ；3)重楼皂苷提取物和黄药子醇提物按比例混合。
4.根据权利要求3所述的抗癌中药组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤1)重楼粗粉过5目筛后用4倍体积比的70% 85%乙醇浸泡。
5.根据权利要求3所述的抗癌中药组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤幻中黄药子碎块回流提取3次，每次半小时，黄药子醇提物质量分数为15%。
6.根据权利要求3所述的抗癌中药组合物的制备方法，其特征在于，所述提取物与药学上可接受的辅料混合制成任一制剂。
7.根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物可以加药学上可接受的辅料制成临床上或药学上可接受的注射剂或口服制剂。
8.根据权利要求3所述的中药组合物的制备方法，其特征在于，重楼皂苷提取物中含有留体类皂苷的质量分数为25 60%，黄药子中黄药子留体皂苷类物质的质量分数为 12% 43%。
全文摘要
本发明属于医药技术领域，公开了一种具有抗肿瘤作用的中药组合物及其制备方法和用途。所述的中药组合物是由重楼皂苷提取物和黄药子醇提物按1∶1～1∶2配伍所组成的药物混合物。其制备过程包括重楼皂苷提取物的制备、黄药子醇提物的制备、及重楼皂苷提取物与黄药子醇提物混合物的制备。本发明优点制备过程简单，所得到的中药组合物具有抗癌作用，它的抗癌活性高且具有广谱性，与单独应用重楼皂苷或黄药子醇提物相比，组合物的抗肿瘤活性更强，且毒副作用更小，同时有增强免疫的作用。
文档编号A61P35/00GK102309665SQ201110269310
公开日2012年1月11日 申请日期2011年9月13日 优先权日2011年9月13日
发明者尹双双, 满淑丽, 王洁银, 高文远 申请人:天津大学