专利名称：治疗性蛋白抑制剂综合症的cd154阻断治疗的制作方法
技术领域：
本发明总的涉及抑制不需要的免疫反应、具体地抑制逆适应性T-淋巴细胞介导的免疫反应。本发明具体地涉及预防、治疗、抑制或逆转对外源施用蛋白或其它生物治疗试剂的免疫学抑制。
背景技术：
血友病A是X连锁的遗传缺陷疾病，它影响着每10,000生命中的一个或两个男性个体。患血友病A的病人在内源凝血因子VIII(FVIII)中有部分或完全的功能缺陷，并且必须接受纯化或重组FVIII替代治疗。Lusher等(1993)，328 N.Engl.Med.453-459。15％患血友病A的病人对其FVIII替代治疗发生高效价抗体反应(即＞10BU/mL)。这些个体称为“高反应者”(McMillan等(1988)，71血液344-348。称为FVIII抑制剂的这些抗体通过与施用的内源FVIII结合阻断了FVIII替代治疗试剂的功能(生物活性)。此逆适应性体液免疫反应使得高反应者中流血症状的治疗成为难题。较轻的流血症状(如hamarthroses)常常用活化的凝血酶原复合物浓缩物(如Autoplex或FEIBA，FVIII抑制剂阻断活性)成功地得到治疗，但严重流血难以用这些药剂控制[Brettler(1996)，9临床血液学319-329]。大多数高反应者在接受随后FVIII输注前有低水平的FVIII抑制抗体，FVIII输注刺激(加强)阻断抗体的产生。因此，在高反应者病人中抑制抗体的再诱导是可预防的[Brettler(1996)，9临床血液学319-329]。用FVIII预防已证明减少了血友病人中关节内出血和慢性关节病的得病几率[Liesner等(1996)Br.J.Haematol.92，973-978。然而，因为高反应者中FVIII特异的体液免疫反应，这些个体不能接受使用FVIII的预防治疗。
对FVIII有可诱导的、强有力的免疫反应的高反应者常常在治疗方案中用非常高剂量的FVIII常规输注治疗，此治疗方案设计以诱导对外源FVIII治疗的耐受性[Brettler(1996)，9临床血液学319-329]。在某些病例中，将免疫调节剂[糖皮质激素、环磷酰胺、静脉内免疫球蛋白(IVIg)]加到耐受性治疗方案中。耐受性治疗在50-80％高反应者个体中有效。Mariani等(1994)，72 Thromb.Haemostasis 155-158。每个病人这样的治疗费用为200,000美元到将近一百万美元。因为在耐受性诱导过程(常持续3-8个月)中FVIII输注在高反应者中诱导非常高水平的抑制剂，所以这些个体如果的确有流血也不能用FVIII治疗[Bretter(1996)，9临床血液学319-329]。
成功的耐受性诱导之后，病人常常维持预防性FVIII输注每周二至三次[Bretter(1996)，9临床血液学319-329]。用这些方法诱导耐受性的机理仍不清楚，但是可能涉及抗独特型抗体的诱导(Gilles等(1996)97临床研究杂志1382-1388)或者产生FVIII抑制抗体的B细胞克隆的直接抑制。另外，IVIg制品含有针对FVIII抑制剂的抗独特型抗体，这可以解释在某些高反应者中此治疗的效力[Sultan等(1991)，91美国医学杂志5A-35S-5A-39S)]。在必须使用FVIII治疗流血的非常严重和威胁生命的病例中，可以通过在抗Ig或蛋白A柱上进行体外免疫吸附来除去FVIII抑制剂[Knobl等(1995)，74 Thromb.Haemostasis 1035-1038；Gjorstrup等(1991)，61 Vox Sang 244-250]。这些方法耗费时间并且导致血清免疫球蛋白(Ig)总水平50％-75％的降低[Knobl等(1995)，74Thromb.Haemostasis 1035-1038]，由此潜在增加了感染的危险。
蛋白替代治疗的相似并发症也在其它天先性或获得性蛋白缺陷病包括其它凝血因子、血或血浆蛋白、生长因子等缺陷的治疗中遇到。而且，类似并发症也已在其它临床治疗中遇到，例如在治疗上施用内源稀少或隔离的蛋白的重组合成对应物时就会遇到。例如，类似并发症已在涉及重组细胞因子、淋巴因子或酶的施用的治疗中遇到。一个例子是施用促血细胞生成素(EPO)治疗盆血。另一例子是施用干扰素β(IFNβ)治疗多发性硬化(MS)。还有一例子是施用人生长激素用于治疗以加速生长。在治疗上施用微生物蛋白时，例如当施用链激酶治疗中风或其它类型血管阻塞时，也遇到类似并发症。
因此，需要改进的或更有效的用于最小化或抑制与外源施用蛋白结合或阻断外源施用蛋白治疗活性的抑制抗体发生的免疫抑制或免疫调节治疗。特别地，需要无须泛T细胞免疫抑制的治疗法，即不使受治疗者对恶性肿瘤或机会性感染易感的治疗法。更应指出的是，需要逆转或抑制阻止对需要其的病人施予所需蛋白治疗的抑制剂综合症。
发明概述本发明的一个目的是提供减轻逆适应性T细胞反应而不需要泛T细胞免疫抑制的免疫调节剂。另一目的是提供减轻对所需外源蛋白治疗的逆适应性体液免疫反应严重性的免疫调节剂。另一目的是提供延迟对所需外源蛋白治疗的逆适应性体液免疫反应发生的免疫调节剂。另一目的是提供抑制或逆转对所需外源蛋白治疗的逆适应性体液免疫反应的免疫调节剂。进一步的目的是提供阻断共刺激信号、特别是免疫球蛋白合成的共刺激信号向活化T细胞传递的免疫调节剂。具体的目的是提供CD40:CD154结合阻断剂如CD154阻断剂用于治疗，尤其是用于减轻、延缓对所需外源蛋白治疗试剂如FVIII的逆适应性抑制抗体反应的发生或逆转其的治疗。
本发明在于发现使用CD40:CD154结合阻断剂如CD154阻断剂可减轻、减弱、抑制、防止、延缓或逆转对蛋白抗原的逆适应性抑制抗体反应而无须广泛抑制受治疗者的免疫系统。更精确地，本发明在于发现使用CD154阻断剂可减轻、减弱、抑制、防止、延缓或逆转不利的抑制体液免疫，此免疫阻断施用给个体以替代或改进内源缺陷型蛋白，例如凝血因子如FVIII的蛋白治疗的生物活性。
因此本发明提供用于外源蛋白抑制剂综合症的免疫调节治疗的方法和组合物。第一种方法减轻或减弱外源蛋白抑制剂综合症的严重性。第二种方法抑制综合症的不利影响。第三种方法防止综合症的发生。第四种方法延迟综合症的发生。第五种方法抑制综合症的发展。第六种方法逆转综合症。所有前面的方法包括用CD40:CD154结合阻断剂[是指任何阻断CD40配体(即CD40L，也称为CD154或5c8抗原，并且有时在本领域中称为gp39)与其反受治疗者或相关受治疗者(本文为CD40)结合的试剂治疗移植受治疗者。优选地，结合阻断剂是CD154(CD40L)阻断剂，即任何与CD154结合并阻止或干扰其与反受治疗者(例如CD40)结合的试剂]治疗患外源蛋白抑制剂综合症(是指逆适应性体液免疫反应)或有此危险的受治疗者。CD154阻断剂的实例是单克隆抗体(MAb)，具体地是在美国专利5,474,771中公开的具有5c8 MAb抗原特异性结合特征的单克隆抗体，在此引用该文献作为参考。
如上所述，可以实施本发明以减轻或减弱针对用于替代或改进缺陷性天然(内源)蛋白的生物活性的外源蛋白产生的综合症。也可以实施本发明以减轻或减弱针对其它外源蛋白，包括任何用于治疗目的外源蛋白的抑制剂综合症。例如，可以实施本发明以防止、逆转或抑制针对任何重组合成蛋白治疗、尤其具有与天然功能性稀少蛋白或天然隔离于特定身体结构或区室中如骨髓、淋巴结或中央神经系统的天然蛋白的抑制反应。相似地，可以实施本发明以防止、逆转或抑制对瞬间表达或仅对特定环境刺激反应或在发育过程的特定点表达的天然蛋白重组形式的抑制反应。因此，可以实施本发明以减轻或减弱针对生长激素、创伤愈合因子(如组织再生因子或分化因子)、细胞因子或淋巴因子(如集落刺激因子、干细胞因子、干扰素或白细胞介素)、酶(如葡糖脑苷脂酶)、凝血因子(如凝血酶、凝血酶原、因子V、因子VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子XI或因子XII)或其它血浆成分(如白蛋白、组织血纤维蛋白溶酶原激活剂)的抑制剂反应。另外，可以实施本发明以减轻或减弱针对外源蛋白、尤其用于治疗目的(如血管阻塞的治疗)的细菌蛋白(如链激酶)的抑制剂反应。本发明实施针对的目标是人。具体地，可以实施本发明以减轻或减弱血友病人中的凝血因子抑制剂综合症。
本发明前述和其它目的、特征和优势以及本发明本身将从下面优选实施方案的描述中得到更充分的理解。
发明详述
T细胞活化和依赖其的免疫学过程既需要T细胞受治疗者(TCR)介导的信号又需要同时传送的共刺激信号。重要的共刺激信号通过CD40与抗原呈递细胞的结合传递，例如B细胞通过T细胞上的CD40L(CD154)传递。人类CD40是成熟B细胞以及巨噬细胞和活化内皮细胞上表达的50kD细胞表面蛋白。CD40属于与编程性细胞死亡有关的一类受治疗者，包括Fas/CD95和肿瘤坏死因子(TNF)α受治疗者。人CD154(CD40L)是具有与瞬间表达的TNFα的同源性的32KD II型膜糖蛋白，主要在活化T细胞上瞬间表达。已经证明CD40:CD154结合是所有T细胞依赖性抗体反应所必需的。特别地，CD40:CD154结合提供抗编程性细胞死亡和/或淋巴因子刺激的信号。
在发现人类X-连锁的hyper-IgM综合症(X-HIGM)是由功能性CD154的遗传缺陷所导致的表型时，CD40:CD154结合在促进T细胞依赖性生物学反应方面的重要性得到更充分地理解。患者具有正常或高IgM水平，但不能产生IgG，IgA或IgE抗体，并且患有复发的、有时严重的细菌及寄生虫感染以及有增加的淋巴瘤和腹部癌症的得病几率。类似表型在非人类动物中观察到，其导致编码CD154的基因成为零合基因(敲除动物)。CD154无效合子的B细胞可以在无CD40:CD154结合时产生IgM，但不能进行同型转换或在亲和成熟后正常存活。在组织学上，淋巴结生发中心不能正常发育，并且记忆B细胞缺乏或发育不足。在功能上，这些缺陷导致次级(成熟)抗体反应的严重减少或缺失。也观察到细胞免疫性的缺陷，表现为增加的细菌和寄生虫的感染几率。许多细胞介导的缺陷可通过施用IL-12或IFN-γ加以逆转。这些观察结果证实了这样的观点，即正常的CD40:CD154结合促进I型T-辅助细胞免疫学反应的形成。
用蛋白抗原阻断免疫过程中的CD40:CD154相互作用可以特异地阻断小鼠中对抗原的抗体反应[Foy等(1993)，178实验医学杂志1567-1576]。例如，抗CD154抗体可以在胶原蛋白诱导的关节炎中阻断抗胶原抗体的诱导[Durie等(1993)，261科学1328-1330]。抗CD154抗体可以降低患自发狼疮的小鼠中抗dsDNA和抗核小体的自身抗体[Mohan等(1995)，154免疫学杂志1470-1480]。另外，抗CD154抗体可以减轻患实验性自身免疫脑脊髓炎(EAE)的小鼠中(MS模型)的症状。也有报道在移植-宿主疾病、氯化汞诱导的肾小球性肾炎和炎性肠疾病的啮齿动物模型中得到相似结果。
因此，CD40:CD154阻断可以提供强有力的治疗以减轻或减缓不需要的体液免疫反应，具体地自身免疫疾病环境中的免疫反应或者实际上靶抗原是具治疗价值的蛋白而其价值被逆适应性免疫反应阻碍的情况。然而，尽管有大量有希望的结果的报道，但是在诱导的逆适应性免疫疾病(如自身免疫)啮齿动物模型中进行的研究与在实际疾病环境或尤其在大型动物临床前模型系统(如灵长类)中测试的结果很少相关。
在此公开的是在认为可预测治疗外源蛋白抑制剂综合症的治疗效力的临床前模型中估评优选的CD154阻断剂即具有MAb 5c8抗原特异性结合特性的人化MAb(Lederman等，实验医学杂志1751091-1101，1992)的效应的方法。具体地，本模型包括减轻或减弱对凝血因子(如FVIII)和淋巴因子(如IFNβ)特异的生物抑制体液反应的CD154阻断治疗。这些模型可以适于通过常规操作以用于评估CD154阻断治疗减轻或减弱针对任何具有治疗价值的蛋白产生的抑制体液免疫的效力。
下面的讨论描述并且举例说明可以实施本发明以及提供原理上证据研究结果的各种内容和条件，包括本发明的特定实施方案。
受治疗者本发明可用于治疗或预防需要或正在接受蛋白替代治疗，实际上任何蛋白治疗的哺乳动物。因此，受治疗者患外源蛋白抑制剂综合症或有发生外源蛋白抑制剂综合症的危险。例如，用外源FVIII治疗的血友病人正处于变为“高反应者”的高度危险之中，之后FVIII失去了其预期的抑制流血症状的效应。因此，本发明特别适用于血友病人。测定血友病人是否已发生针对治疗性施用的FVIII的抑制反应和/或变为高反应者的方法众所周知。见例如血液学临床和实验实践，第二卷，Bick编，Mosby-Year Book，Inc.，Publ.(1993)，1544-1548页。优选地，受治疗的哺乳动物是灵长类动物，更优选地高等灵长类动物，最优选地人类。在其它实施方案中，受治疗者可以是患外源蛋白抑制剂综合症或有发生外源蛋白抑制剂综合症危险的另一哺乳动物，特别是具有商业重要性的哺乳动物或宠物或其它有价值动物如濒危物种的成员。因此，受治疗者也包括但不限于绵羊、马、牛、山羊、猪、狗、猫、兔、豚鼠、仓鼠、沙鼠、大鼠和小鼠。
CD40:CD154结合阻断剂的实例用于实施本发明的治疗化合物包括任何阻断细胞表面CD40(例如位于B细胞上)与例如活化T细胞表面上表达的CD40L(CD154)相互作用的化合物。应该特别注意的CD40:CD154结合阻断剂化合物如CD154阻断剂包括单克隆抗体和多克隆抗体(MAbs)以及抗体衍生物如嵌合分子、人化分子、具有降低效应物功能的分子、双特异性分子和抗体的偶联物。在优选的实施方案中，抗体具有与MAb 5c8基本上相同的抗原特异性结合特征，如美国专利5,474,771中所述，在此引用其公开内容作为参考。在目前高度优选的实施方案中，抗体是人化的5c8(hu5c8)。其它已知的抗CD154的抗体包括抗体ImxM90、ImxM91和ImxM92(由Immunex Corp.，Seattle WA公开)、商业上可从Ancell得到的抗-CD40L mAb(克隆24-31，目录号353-020，Bayport，MN)和商业上可从Genzyme得到的抗-CD40L mAb(Cambridge，MA，目录号80-3703-01)。同样商业上可以得到的有来自PharMingen的抗-CD40L mAb(San Diego，目录号33580D)。许多其他抗-CD40L抗体也得到制备和鉴定(参见，例如Bristol-Myers Squibb的WO96/23071，在此引用其说明书作为参考)。
本发明也包括使用从上述或等价MAb衍生或加工得来的CD154阻断剂如完整Fab片段、F(ab’)2化合物、VH区、Fv区、单链抗体(参见，例如WO 96/23071)、多肽、多肽融合构建体、CD40融合体(如CD40Ig，如在Hollenbaugh等，免疫学方法1881-7，1995中所述，在此引用作为参考)和小分子化合物如小的半肽化合物或非肽化合物，所有这些均能够阻断或阻止CD40:CD154结合。设计、筛选和优化小分子的方法在1996年6月21日提交的PCT/US96/10664中提供，在此引用其说明书作为参考。
因此，本发明可以使用用标准重组DNA技术制备MAb衍生的CD154阻断剂(Winter和Milstein，自然349293-99，1991)。一类这样的CD154阻断剂是通过将编码具有目的特异性的非人哺乳动物如小鼠或大鼠抗体的抗原结合区的核酸与编码人免疫球蛋白(Ig)恒定区的核酸连接构建的嵌合抗体或融合抗体(Cabilly等，美国专利No.4,816,567；Morrison等，美国国家科学院院报816851-55，1984)。从这样的构建体表达的嵌合抗体用于人类治疗或预防时一般具有比嵌合体来源的非人抗体更低的免疫原性。另一类这样的CD154阻断剂是重组的“人化”或“灵长类化”的抗体。人化或灵长类化抗体是经遗传加工从具有目的特异性的非人类哺乳动物抗体衍生的抗体，其中用编码来自人或灵长类动物Ig轻链或重链相应区域的氨基酸的密码子替换编码抗原结合不需要的氨基酸的部分或所有密码子。即它们是主要包含人免疫球蛋白序列的嵌合体，其中插入了负责特异性抗原结合的区域(参见，例如PCT专利申请WO94/04679)。人化抗体在体内具有比嵌合抗体更低的免疫原性。目前，具有与MAb5c8(本文中HC15c8)基本上相同的抗原特异性的人化MAb对于实施本发明是优选的。
用于本发明的另一类MAb衍生的CD154阻断剂包括可以在非人动物如其中已整合一种或多种人类免疫球蛋白转基因的转基因动物中制备的人类抗体。这样的动物可以用作用于制备杂交瘤的脾细胞的来源，如U.S.5,569,825中所述。
任何前述MAb之一的抗体片段和MAb衍生的治疗试剂也可用于本发明。单价抗体包括与第二种重链的Fc(或主干)区域结合的重链/轻链二聚体。“Fab区”是指那些与包含重链Y分支部分的序列大致相同或相似或在整体上与轻链大致相同或相似并且已表明整体上(集合体)表现抗体活性的链部分。Fab蛋白包括一条重链和一条轻链的集合体(常称为Fab’)以及对应于抗体Y 2个分支片段的四聚体(常称为F(ab)2)，无论上述任何形式是共价或非共价集合体，只要集合体能选择性与特定抗原或抗原家族反应即可。
此外，可用标准重组DNA技术通过改变抗原结合位点附近的氨基酸残基杂改变重组抗体与其抗原的结合亲和性。可根据分子模型通过诱变来增加人化抗体的抗原结合亲和性(Queen等，美国国家科学院院报8610029-33，1989；PCT专利申请WO 94/04679)。根据靶组织类型或预想的特定治疗方案增加或减小抗体对CD154的亲和性可能是有利的。这可用噬菌体展示技术来进行(参见，例如Winter等，免疫学年鉴12433-455，1994和Schier等，分子生物学杂志.25528-43，1996，在此引用作为参考)。例如，为了半预防性治疗，用恒定水平的具有减小的对CD154的亲和性的抗体治疗患者是有利的。同样，具有增加的对CD154的亲和性的抗体对于短期治疗可能是有利的。
给药途径用于本发明的CD40:CD154结合阻断剂，包括CD154阻断剂可以用医学上可接受的任何方式给药。根据具体情况，局部或系统给药可能是理想的。优选地，药剂通过胃肠外途径如通过静脉内、动脉内、皮下、肌肉内、眼眶内、心室内、腹膜内、被膜下、颅内、脊髓内或鼻内注射、输注或吸入给药。药剂也可通过在供体组织移植之前或之后将输入泵或者可生物相容或可生物降解的缓释移植物植入受治疗者宿主来给药。选择性地，本发明的某些化合物或其制品可适于口腔或肠道给药。本发明还有一些化合物将适于体表给药。
在进一步的实施方案中，通过施用编码阻断剂的载体或其它可表达的遗传物质将CD40:CD154结合阻断剂间接提供给受治疗者。将遗传物质导入受治疗者的细胞或组织并在其中表达，由此在原位产生阻断剂。例如，适当的核酸构建体将包含编码一种或多种MAb 5c8免疫球蛋白(Ig)链的序列，如U.S.专利5,574,771中公开的。其它适当的构建体将包含编码嵌合或人化版本的MAb 5c8 Ig链或其抗原结合片段。其它适当构建体将包含编码部分或全部其它CD154特异性MAb的序列。将构建体系统或局部地运送到例如邻近表达胰岛素组织移植部位的位点。
选择性地，将编码阻断剂的载体或其它遗传物质导入适当的分离细胞种群中以制备产生阻断剂的宿主细胞。然后将这些宿主细胞局部或系统地移植或输注给受治疗者以提供CD40:CD154结合阻断剂的原位产生。适当宿主细胞包括培养细胞如永生化细胞以及从受治疗者获得的细胞(例如外周血或淋巴结细胞如天然杀伤(NK)细胞)。
制剂一般来说，将用于实施本发明的化合物悬浮、溶解或分散于药学上可接受的载体或赋形剂中。得到的治疗组合物对受治疗者的体内平衡，特别是电解液平衡没有负面影响。因此，载体实例包括正常的生理盐水(0.15M NaCl，pH7.0到7.4)。另一载体实例包括50mM磷酸钠，100mM氯化钠。许多其它可接受的载体在本领域内众所周知并且描述于例如雷明顿药物科学，Gennaro编，Mack出版公司，1990。可接受的载体可包括可生物相容的、惰性或可生物吸附的盐、缓冲剂、寡糖或多糖、聚合物、粘性增强剂、防腐剂等。
配制用于实施本发明的任何CD40:CD154结合阻断剂如CD154阻断剂以运送药学上有效的或治疗上有效的量或剂量，即足以对受治疗者产生可检测到的、优选医学上有利的效应的量。医学上有利的效应将包括防止、延缓或减轻受治疗者医疗状态的恶化或可检测到地改进其医疗状态。例如，对所需外源蛋白治疗特异的抑制抗体的效价可以得到抑制或降低。因此，本发明治疗化合物如CD154阻断剂的有效量是可检测到地恢复蛋白治疗的治疗效果的任何量。有效量是使受治疗者基本上不产生引起抑制剂综合症的逆适应性抗体的量。
治疗剂量和频率用于完成本发明任何特定化合物给药的剂量和频率在本领域普通医生如外科医生的技术和临床判断能力之内。基本剂量和施用方案通过临床前和临床试验加以确定，试验包括广泛但常规的研究以测定所需化合物的有效、例如最佳给药参数。即使在完成这些建议之后，临床医生通常将根据各种因素如受治疗者年龄、医疗状态、体重、性别和与其它药物的共同治疗针对不同受治疗者宿主改变这些剂量。测定用于本发明的每种CD40:CD154结合阻断剂的有效剂量和给药方案是药物和医学领域技术人员的日常事务。给药量和疗程应该足以在受治疗者健康状态的一个或多个指标中产生临床上有利的改变。疗程和剂量方案的实例列于这里包括的证据-原理研究中。
为了举例说明抗CD154化合物的剂量因素，给出下面关于抗CD154 mAb施用策略的实例。给药量可容易地针对其它类型的抗CD154化合物加以调整。一般地，应该考虑约0.05-50mg/kg受治疗者体重的单一剂量，1-20mg/kg范围的剂量最常用。为了在病人无症状时开始CD154阻断治疗或对急性疾病进行紧急治疗，MAb的有效剂量范围是约1mg/kg体重到约20mg/kg体重，每天施用或间隔约2到5天，维持约三周时间。通过此后以约0.1mg/Kg体重到约20mg/kg体重剂量的间歇给药维持治疗。为维持目的，剂量间隔从约1周变化到约3个月。目前，1月的剂量间隔是优选的。
如果需要，可以连续或与常规免疫抑制剂结合实施CD154阻断治疗。为了谨慎，常规免疫抑制剂(如皮质类固醇或钙调磷酸酶抑制剂)可以由医生在CD154阻断治疗的任何时间点一起施用。选择性地，CD154阻断MAb可以与常规药物偶联。这可以有利地允许常规药剂以少于常规剂量的量施用，例如当该药剂作为单一治疗施用时少于常规剂量的约50％。因此，应该避免了许多与该药剂有关的副作用发生。因此，根据本发明，CD154阻断MAb可以与靶向B细胞的其它药剂一起使用如抗CD19、抗CD28或抗CD20抗体(未偶联或放射标记的)、IL-14拮抗剂、LJP394(LaJolla药物受治疗者阻断剂)、IR-1116(Takeda小分子)和抗Ig独特型的单克隆抗体。选择性地，这些组合可能包括T细胞/B细胞靶向药剂如CTLA4Ig、IL-2拮抗剂、IL-4拮抗剂、IL-6拮抗剂、受治疗者拮抗剂、抗CD80/CD86的单克隆抗体、TNF、LFAl/ICAM拮抗剂、VLA4/VCAM拮抗剂、brequinar和IL-2毒素偶联物(例如DAB)、脱氢可的松、抗CD3 MAb(OKT3)、mycophenolate mofetil(MMF)、环磷酰胺以及其它免疫抑制如钙调磷酸酶信号阻断剂，包括但不限于tacrolimus(FK506)。这些组合也可包括T细胞靶向药剂如CD4拮抗剂、CD2拮抗剂和IL-12。
为了维持移植物的整合或者在抑制移植排斥急性事件之后的时期内，如果必要，单独或与常规抗排斥药剂结合施用维持剂量的抗CD40L抗体。随后，可以降低给药的剂量或频率或同时降低这二者。在无移植排斥体症出现时，治疗可以停止，但注意监测移植排斥的体症。在其它情况下，根据普通医生的判定，例如可以以4周或更长间隔施行不定期治疗。然而，根据疾病症状的任何复发，受治疗者宿主可能需要长期的间歇治疗。
用于评估CD40:CD154阻断剂治疗方案的临床前模式系统用于测试CD40:CD154阻断化合物(例如，抗-CD40L化合物或CD154阻断剂，如具有MAb 5c8特异性的MAb)效率的目前优选模式系统实例如下所述。在每个系统中，可以进行常规改变或调整以按照需要修饰公开的技术从而在动物模型中评估任何目的CD40:CD154阻断化合物对蛋白抑制效价情况的影响。一些修饰的例子在下面简述中提及；然而，一些其它适当修饰对熟练人员是明显的，并且也考虑在内。
血友病A的敲除小鼠模型最近，美国红十字会的研究者已建立了产生天然鼠FVIII无效合子(“敲除”)的小鼠育种群体[Bi等(1995)，10 Nature Genetic 119]。这些小鼠表现人血友病A的所有相关病理学症状。而且，小鼠模型精确地模拟了这些疾病病理学症状的病因学具生物学活性的、天然的FVIII的遗传或先天性缺乏。已报道以相当于传统FVIII替代治疗的方式施用的人FVIII的大剂量给药在小鼠中引发FVIII抑制剂抗体的产生[Quian等，(1996)，88血液656a(增刊)]。其它施用方式，具体地借助编码功能性FVIII的腺病毒载体的整合的组成型替代目前看来使蛋白治疗处于免疫原性更低的环境中[Connely等(1998)，91血液3273-3281]。
CD154阻断剂如抗鼠CD154在上述血友病小鼠群体中对“高反应者”发生的影响可以基本上按下述得到评估抗原(FVIII)可以在实验日0和14以大剂量(如0.2μg)注射。在实验日54或附近，抽取血样并使用常规ELISA技术分析FVIII抑制抗体的存在。之后，可以例如在实验日55和/或57或附近，给测试群体(如5只或更多动物；可以安排相似数目的动物作为一个或多个适当对照群体)提供适当剂量的抗鼠CD154(如腹膜内或静脉内250μg)。可以在实验日56或附近给予FVIII的攻击剂量。之后，可以在适当实验日抽取血样并分析以监测测试群体中抑制抗体对FVIII的继发性反应的发生、抑制或逆转。例如，可以在实验日74、81和96提取血样。除了测试群体中动物间的一些个体差异，预期CD154阻断治疗将显著地阻断或抑制对FVIII的继发性体液免疫。
SCIB-hu嵌合小鼠模型最初由Mosier等(1988)，335自然256-259报道的嵌合小鼠模型是以通过移植正常人外周血白细胞(PBL)产生稳定小鼠-人嵌合体来免疫学治疗(功能重建)严重复合免疫缺陷(SCID)小鼠为基础的。此系统已用于对人淋巴细胞体内行为和动态相互作用的大量研究。重要的是，此系统已用于研究CD40:CD154阻断剂对正常人淋巴细胞对鼠红细胞(用作模式抗原)的反应的影响[Chen等(1995)，155免疫学杂志2833-2840。在此研究中表明抗CD40和CD154 MAb下调人总体Ig合成。
此模型系统使得可以评估抗-人CD154如Hu5c8体内对人T细胞的影响，可使用任何目的蛋白作为测试抗原。在一个适当修饰方案中，可以通过移植来自血友病受治疗者如高反应者的人PBL来制备SCID-hu小鼠嵌合体。当然，此方法可以采用来自任何患外源蛋白抑制剂综合症的病人的PBL进行。在从血友病高反应者制备SCID-hu小鼠的病例中，适当数目(例如2-5或更多)小鼠可以按下述分成研究组A组(hu5c8和FVIII)；B组(hu5c8单独)；C组(FVIII单独)；D组(只有载体)；E组(对照Ig和FVIII)；F组(对照Ig单独)。所示的测试项和/或对照在移植时与hu PBL混合并在实验日2和/或4腹膜内提供。随后FVIII抑制反应的动力学可以通过标准技术(ELISA)、使用几周时期内在适当间隔抽取的血监测。预期用hu5c8处理可阻断或消除对FVIII的继发性体液免疫。
非人灵长类动物模型AVONEX(IFNβ)模型将弥猴或cynomologus猴按下述分成适当研究组，例如每组2-4只动物1组[对照抗原(HAS)；50μg/kg以及hu5c8，5mg/kg]，2组(载体和Hu5c8，5mg/kg)，3组(AVONEX，50μg/Kg和hu5cB，5mg/kg)，4组(AVONEX，50μg/kg以及hu5c8，5mg/kg)，5组(载体和hu5c8，5mg/kg)。1，2和3组在实验日1开始并在此后大约每隔一日或二日接受hu5c8。4和5组在实验17开始并在此后大约每隔一日或二日接受hu5c8。所有AVONEX在实验日3或附近开始接受AVONEX q.o.d。AVONEX抑制抗体的发生和动力学使用常规ELISA技术监测。预期用hu5c8处理的或未处理的AVONEX组之间有明显差异。具体地，预期用hu5c8预处理可基本上阻断或消除AVONEX抑制抗体的发生。预期用hu5cB延迟处理可基本上抑制或逆转对AVONEX的继发性体液免疫的发展。
上述模型可以经常规改变以适于评估hu5c8或另一CD154阻断剂对针对其它模式抗原包括外源蛋白治疗的初发和/或继发性抑制反应的影响。例如可以对此方法和剂量水平进行常规的适当修饰以评估提供CD154阻断治疗的预防或治疗方案的灵长类动物中FVIII或另一凝血因子的情况。
等价物本发明可以体现在其它特定形式中而不背离本发明精神或基本特征。因此，应当认为前述实施方案是在此公开的本发明所有方面的举例说明而不是对其进行限定。因此本发明的范围通过附属的权利要求而不是前面的描述来说明，并且认为在这些权利要求含义和相同范围内的所有改变也应当包括在本发明范围之内。
本发明还在以下编号的段落中得到说明。
1.一种减轻外源蛋白抑制剂综合症严重性的方法，包括给患此综合症或有此危险的受治疗者施用有效量CD40:CD154结合阻断剂的步骤。
2.一种抑制外源蛋白抑制剂综合症不利影响的方法，包括给患此综合症或有此危险的受治疗者施用有效量CD40:CD154结合阻断剂的步骤。
3.一种防止外源蛋白抑制剂综合症发展的方法，包括给患此综合症或有此危险的受治疗者施用有效量CD40:CD154结合阻断剂的步骤。
4.一种延迟外源蛋白抑制剂综合症发生的方法，包括给患此综合症或有此危险的受治疗者施用有效量CD40:CD154结合阻断剂的步骤。
5.一种抑制外源蛋白抑制剂综合症发展的方法，包括给患此综合症或有此危险的受治疗者施用有效量CD40:CD154结合阻断剂的步骤。
6.一种逆转外源蛋白抑制剂综合症的方法，包括向患此综合症或有此危险的受治疗者施用有效量CD40:CD154结合阻断剂。
7.一种维持外源蛋白治疗活性的方法，包括向患此综合症或有此危险的受治疗者施用有效量CD40:CD154结合阻断剂。
8.一种恢复外源蛋白治疗活性的方法，包括向用所述外源蛋白治疗并对其产生免疫反应的受治疗者施用有效量CD40:CD154结合阻断剂。
9.根据段落1、2、3、4、5、6、7或8所述的方法，其中CD40:CD154结合阻断剂是CD154(CD40L)阻断剂。
10.根据段落9所述的方法，其中CD154阻断剂是单克隆抗体。
11.根据段落10所述的方法，其中单克隆抗体具有ATCC保藏号HB10916产生的5c8抗体的抗原特异性结合特征。
12.根据段落1、2、3、4、5、6、7或8所述的方法，其中施用外源蛋白以替代内源缺陷型蛋白。
13.根据段落1、2、3、4、5、6、7或8所述的方法，其中外源蛋白具有与相应内源蛋白基本相同的一级结构并且从带有编码所述外源蛋白的可表达重组核酸的分离宿主细胞得到制备。
14.根据段落1、2、3、4、5、6、7或8所述的方法，其中外源蛋白是细菌来源的蛋白。
15.根据段落12所述的方法，其中外源蛋白是凝血因子。
16.根据段落15所述的方法，其中凝血因子是因子VIII或因子IX。
17.根据段落13所述的方法，其中外源蛋白是生长激素、创伤愈合因子、生长因子、细胞因子、淋巴因子、酶、凝血因子或血浆成分。
18.根据段落14所述的方法，其中外源蛋白是链激酶。
19.根据段落1、2、3、4、5或8所述的方法，其中受治疗者是人。
20.根据段落19所述的方法，其中是人是血友病患者。
权利要求
1.CD40CD154结合阻断剂的用途，用于制备在患此综合症或有此危险的受治疗者中减轻外源蛋白抑制剂综合症严重性的药物。
2.CD40CD154结合阻断剂的用途，用于在患此综合症或有此危险的受治疗者中抑制外源蛋白抑制剂综合症不利影响的药物。
3.CD40CD154结合阻断剂的用途，用于制备在患此综合症或有此危险的受治疗者中防止外源蛋白抑制剂综合症发展的药物。
4.CD40CD154结合阻断剂的用途，用于制备在患此综合症或有此危险的受治疗者中延迟外源蛋白抑制剂综合症发生的药物。
5.CD40CD154结合阻断剂的用途，用于制备在患此综合症或有此危险的受治疗者中抑制外源蛋白抑制剂综合症发展的药物。
6.CD40CD154结合阻断剂的用途，用于制备在患此综合症或有此危险的受治疗者中逆转外源蛋白抑制剂综合症的药物。
7.CD40CD154结合阻断剂的用途，用于制备在用所述外源蛋白治疗的受治疗者中维持外源蛋白治疗活性的药物。
8.CD40CD154结合阻断剂的用途，用于制备在用所述外源蛋白治疗并对其产生免疫反应的受治疗者中恢复外源蛋白治疗活性的药物。
9.根据权利要求1、2、3、4、5、6、7或8所述的用途，其中CD40CD154结合阻断剂是(a)CD154(CD40L)阻断剂；或(b)单克隆抗体；或(c)具有ATCC保藏号HB 10916产生的5c8抗体的抗原特异性结合特征的单克隆抗体。
10.根据权利要求1、2、3、4、5、6、7或8所述的用途，其中外源蛋白是(a)内源缺陷性蛋白的代用品；或(b)具有与相应内源蛋白基本相同的一级结构的蛋白；或(c)从带有编码所述外源蛋白的可表达重组核酸的分离宿主细胞得到制备的蛋白；或(d)细菌来源的蛋白；或(e)凝血因子，包括因子VIII或因子IX；或(f)生长激素、创伤愈合因子、生长因子、细胞因子、淋巴因子、酶、凝血因子或血浆成分；或(g)链激酶。
11.根据权利要求1、2、3、4、5、6、7或8所述的用途，其中受治疗者是人。
12.根据权利要求11所述的用途，其中人是血友病患者。
全文摘要
本发明提供减轻或减缓、抑制、防止外源蛋白抑制剂综合症的发生或逆转外源蛋白抑制剂综合症的方法和组合物，外源蛋白抑制剂综合症以凝血因子(如因子VIII)抑制剂综合症为例。所述方法使用CD40CD154结合阻断剂如CD154阻断剂来减轻或改进针对具有治疗价值的外源蛋白的逆适应性生物抑制体液免疫。
文档编号A61K38/19GK1651071SQ20041009786
公开日2005年8月10日 申请日期1998年6月19日 优先权日1997年6月20日
发明者B·阿戴尔曼 申请人:拜奥根Idec马萨诸塞公司