一种治疗黑色素瘤的中药组合物及其制备方法
【专利摘要】本发明属于中药领域，涉及一种治疗黑色素瘤的中药组合物及其制备方法。为了克服现有技术中化学治疗过程对黑色素瘤患者的副作用较大，本发明提供一种能够治疗黑色素瘤的中药组合物，其主要由刺五加、党参、山楂、地榆等多味中药制备得到。其用于黑色素瘤治疗时可以显著抑制黑色素瘤细胞增殖和诱导细胞凋亡,且药物的副作用低，适合开发成黑色素瘤治疗药物。
【专利说明】一种治疗黑色素瘤的中药组合物及其制备方法

【技术领域】
[0001] 本发明属于中药【技术领域】，特别是涉及一种用于治疗黑色素瘤的中药组合物及其 制备方法。

【背景技术】
[0002] 恶性黑素瘤是由皮肤和其他器官黑素细胞产生的肿瘤。皮肤黑素瘤表现为色素 性皮损在数月或数年中发生明显改变。虽其发病率低，但其恶性度高，转移发生早，死亡率 高，因此早期诊断、早期治疗很重要。恶性黑素瘤大多发生于成人，巨大性先天性色素痣继 发癌变的病例多见于儿童。黑素瘤病因学尚未完全阐明。一些研宄资料提示，其发生与下 列危险因素有关：基因、环境及基因/环境共同因素。比如不典型（发育不良）痣或黑色素 瘤家族史、光导致色素沉着的皮肤、不容易晒黑皮肤、红色头发人种、强的间断日光暴露、日 晒伤、多发黑色素细胞痣等。基因/环境多种因素导致黑素瘤恶性转化。恶性转化的关键 细胞通路：Rb通路、p53通路、PI3K/AKT通路、RAS/MAPK通路（20?30% NRAS突变，55? 60% BRAF 突变）。
[0003] 皮肤恶性黑素瘤的临床症状，包括出血、瘙痒、压痛、溃疡等，一般来讲，黑素瘤的 症状与发病年龄相关，年轻患者一般表现为瘙痒、皮损的颜色变化和界限扩大，老年患者一 般表现为皮损出现溃疡，通常提示预后不良。皮肤恶性黑素瘤的皮损表现与解剖部位及肿 瘤的生长方式相关，即与组织学类型相关，组织学类型又因年龄、型别、种族的不同而有很 大差异。不同类型的黑素瘤具有不同的病因和遗传学背景，目前黑素瘤的临床组织学分型 采用Clark分型，包括四型：恶性雀斑痣样黑素瘤（LMM);浅表扩散性黑素瘤；肢端雀斑样 黑素瘤/黏膜黑素瘤；结节性黑素瘤（NM)。在患恶性黑素瘤的白种人中，约70%为SSM。但 在所有恶性黑素瘤的亚洲人中，发生于较少日光照射部位的ALM占72%。
[0004] 目前临床对于黑色素瘤的治疗原则为对早期未转移的损害应手术切除，应根据 Breslow深度确定切除皮损周边正常皮肤的范围，如果是指（趾）恶性黑素瘤，可采用截指 (趾）术。应切除受累淋巴结，但预防性淋巴结切除仍有争议。肢体动脉灌注抗有丝分裂药 物治疗肢体黑素瘤有一定疗效。虽然生物化学治疗和分子靶向治疗具有很大的前景，但对 于发生广泛转移的黑色素瘤患者采用联合化疗和放射治疗仍是最主要的治疗方式。本发明 旨在提供一种疗效确切并且毒副作用低的黑色素瘤治疗药物。


【发明内容】

[0005] 现有技术中化学治疗过程对黑色素瘤患者的副作用较大，并且对于黑色素瘤细胞 的杀灭不能令人满意。为了克服上述现有技术的不足，本发明的目的是提供一种能够治疗 黑色素瘤的中药组合物，其可以显著杀灭黑色素瘤细胞，适合开发成黑色素瘤治疗药物。
[0006] -种治疗黑色素瘤的中药组合物，其由以下重量份配比的原料制成：刺五加8-20 份、党参5-15份、山楂5-15份、地榆3-10份、仙鹤草10-25份、淫羊藿5-15份、黄连10-20 份、汉黄芩3-10份、木通10-20份、黄柏8-20份、制何首乌5-12份、枸杞10-20份、知母3-10 份、姜黄5-15份、芡实3-10份、石斛3-10份、牛膝5-12份、五倍子10-15份、当归10-20份、 厚朴3-10份、黄芪5-15份、金银花5-15份、天麻5-25份、茯苓10-20份；
[0007] 本发明上述中药均为临床常用中药，其入药部位均为本领域技术人员所熟知，所 述的中药组合物经过合理配伍后能够显著减轻黑色素瘤治疗过程中的毒副作用，并增强疗 效。根据中药组合物对黑色素瘤药物或放射治疗过程中的黑色素瘤细胞杀灭的增强效果 以及对于治疗过程中毒副作用的减轻效果的差异，发明人在上述中药组合物基础上优选如 下：
[0008] (一）刺五加15份、党参10份、山楂10份、地榆7份、仙鹤草18份、淫羊藿10份、 黄连15份、汉黄芩7份、木通15份、黄柏14份、制何首乌9份、枸杞15份、知母7份、姜黄 10份、芡实7份、石斛6份、牛膝8份、五倍子13份、当归15份、厚朴7份、黄芪10份、金银 花10份、天麻20份、茯苓15份。
[0009] (二）刺五加8份、党参5份、山楂5份、地榆3份、仙鹤草10份、淫羊藿5份、黄连 10份、汉黄芩3份、木通10份、黄柏8份、制何首乌5份、枸杞10份、知母3份、姜黄5份、芡 实3份、石斛3份、牛膝5份、五倍子10份、当归10份、厚朴3份、黄芪5份、金银花5份、天 麻5份、茯苓10份。
[0010] (三）刺五加20份、党参15份、山楂15份、地榆10份、仙鹤草25份、淫羊藿15份、 黄连20份、汉黄芩10份、木通20份、黄柏20份、制何首乌12份、枸杞20份、知母10份、姜 黄15份、芡实10份、石斛10份、牛膝12份、五倍子15份、当归20份、厚朴10份、黄芪15 份、金银花15份、天麻25份、茯苓20份。
[0011] (四）刺五加12份、党参12份、山楂10份、地榆5份、仙鹤草16份、淫羊藿18份、 黄连13份、汉黄芩6份、木通20份、黄柏10份、制何首乌8份、枸杞16份、知母6份、姜黄 10份、芡实5份、石斛8份、牛膝7份、五倍子8份、当归14份、厚朴10份、黄芪5份、金银花 15份、天麻15份、茯苓17份。
[0012] 本发明的中药组合物可以制备成临床上常用的剂型。优选地，本发明中药组合物 按照常规制备工艺制备成散剂、合剂、片剂或胶囊剂。本发明还提供一种上述中药组合物的 制备方法，其包括下述步骤：取处方量中药材碎成粗粉，按照粗粉总重量的4?9倍加入体 积浓度为40%?95%的乙醇溶液，回流提取三次，回流时间为2?5h，滤过，滤液合并后回 收乙醇，冷却过滤，用水洗涤，干燥后即得中药浸膏；本领域技术人员可在该制备方法技术 上制备得到临床上常用中药药物剂型，如片剂、胶囊剂等。
[0013] 本发明还请求保护上述中药组合物在制备治疗黑色素瘤的药物中的用途。本发明 中药组合物具有显著抑制黑色素瘤细胞增殖以及诱导细胞凋亡的作用，本发明实施例7显 示，本发明中药组合物体外对三种黑色素瘤细胞株（B16、A375和SK-MEL-2)细胞增殖均显 示了较强的抑制作用，以25-100mg/mL浓度最为显著。采用AnnexinV和PI双染流式细胞术 检测表明，本发明中药组合物对人黑色素瘤细胞株A375显示了较强的诱导细胞凋亡作用， 适宜开发成黑色素瘤治疗药物。
[0014] 本发明中药组合物在治疗黑色素瘤方面，与现有技术相比具有如下优势：
[0015] 1)与当前黑色素瘤治疗药物相比，本发明中药组合物为天然纯中药制剂，不良反 应和副作用显著降低，且本发明中药组合物作用全面，药物治疗效果更佳，显著提高了黑色 素瘤患者的用药依从性，并提高了患者的生活质量。
[0016] 2)本发明中药组合物中含有多种药物组分，作用靶点众多，药理实验显示其具有 显著降低化学药物治疗过程中毒副作用的效果，提高其对黑色素瘤细胞的黑色素瘤抑制效 果。

【具体实施方式】
[0017] 以下通过具体实施例进一步描述本发明，但本领域技术人员应该知晓，所述实施 例并不以任何方式限制本发明。
[0018] (一）制剂实施例部分
[0019] 实施例1本发明中药组合物及制备工艺
[0020] 处方组成如下：刺五加 80g、党参50g、山楂50g、地榆30g、仙鹤草100g、淫羊藿 50g、黄连100g、汉黄芩30g、木通100g、黄柏80g、制何首乌50g、枸杞100g、知母30g、姜黄 5〇g、芡实30g、石斛30g、牛膝50g、五倍子100g、当归100g、厚朴30g、黄芪50g、金银花50g、 天麻50g、茯苳IOOg ;
[0021] 制备方法：取处方量中药材碎成粗粉，按照粗粉总重量的4倍加入体积浓度为 40%的乙醇溶液，回流提取三次，回流时间为5h，滤过，滤液合并后回收乙醇，冷却过滤，用 水洗涤，干燥后即得中药浸膏；将中药浸膏粉碎并加入制剂常用辅料制备成片剂或胶囊剂。
[0022] 实施例2本发明中药组合物及制备工艺
[0023] 处方组成如下：刺五加 200g、党参150g、山楂150g、地榆100g、仙鹤草250g、淫 羊藿150g、黄连200g、汉黄芩100g、木通200g、黄柏200g、制何首乌120g、枸杞200g、知母 l〇〇g、姜黄150g、芡实100g、石斛100g、牛膝120g、五倍子150g、当归200g、厚朴100g、黄芪 150g、金银花150g、天麻250g、茯苓200g ;
[0024] 制备方法：取处方量中药材碎成粗粉，按照粗粉总重量的5倍加入体积浓度为 90%的乙醇溶液，回流提取三次，回流时间为3h，滤过，滤液合并后回收乙醇，冷却过滤，用 水洗涤，干燥后即得中药浸膏；将中药浸膏粉碎并加入制剂常用辅料制备成片剂或胶囊剂。
[0025] 实施例3本发明中药组合物及制备工艺
[0026] 处方组成如下：刺五加 150g、党参100g、山楂100g、地榆70g、仙鹤草180g、淫羊藿 l〇〇g、黄连150g、汉黄芩70g、木通150g、黄柏140g、制何首乌90g、枸杞150g、知母70g、姜 黄l〇〇g、芡实70g、石斛60g、牛膝80g、五倍子130g、当归150g、厚朴70g、黄芪100g、金银花 100g、天麻 200g、茯苳 150g ;
[0027] 制备方法：取处方量中药材碎成粗粉，按照粗粉总重量的5倍加入体积浓度为 70%的乙醇溶液，回流提取三次，回流时间为4h，滤过，滤液合并后回收乙醇，冷却过滤，用 水洗涤，干燥后即得中药浸膏；将中药浸膏粉碎并加入制剂常用辅料制备成片剂或胶囊剂。
[0028] 实施例4本发明中药组合物及制备工艺
[0029] 处方组成如下：刺五加 80g、党参150g、山楂150g、地榆30g、仙鹤草250g、淫羊藿 150g、黄连100g、汉黄苳100g、木通100g、黄柏160g、制何首乌120g、枸杞100g、知母30g、姜 黄50g、芡实100g、石斛100g、牛膝70g、五倍子100g、当归150g、厚朴30g、黄芪100g、金银 花100g、天麻100g、茯苳IOOg ;
[0030] 制备方法：取处方量中药材碎成粗粉，按照粗粉总重量的5倍加入体积浓度为 70%的乙醇溶液，回流提取三次，回流时间为4h，滤过，滤液合并后回收乙醇，冷却过滤，用 水洗涤，干燥后即得中药浸膏；加入乙醇至含醇量为75% (v/v)，静置24小时，取上清液，回 收乙醇浓缩，加水至1000ml，搅匀，分装，流通蒸汽灭菌35min，即得合剂。
[0031] 实施例5本发明中药组合物及制备工艺
[0032] 处方组成如下：刺五加120g、党参120g、山楂100g、地榆50g、仙鹤草160g、淫羊藿 180g、黄连130g、汉黄苳60g、木通200g、黄柏100g、制何首乌80g、枸杞160g、知母60g、姜 黄l〇〇g、芡实50g、石斛80g、牛膝70g、五倍子80g、当归140g、厚朴100g、黄芪50g、金银花 150g、天麻 150g、茯苳 170g ;
[0033] 制备方法同实施例4。
[0034] 实施例6本发明中药组合物及制备工艺
[0035] 处方组成如下：刺五加140g、党参100g、山楂130g、地榆60g、仙鹤草200g、淫羊藿 150g、黄连200g、汉黄苳30g、木通160g、黄柏110g、制何首乌70g、枸杞160g、知母70g、姜 黄110g、芡实50g、石斛100g、牛膝120g、五倍子150g、当归160g、厚朴100g、黄芪150g、金 银花120g、天麻180g、茯苓170g ;
[0036] 制备工艺同实施例4。
[0037] (二）药效实施例部分
[0038] 实施例7 :本发明中药组合物对黑色素瘤细胞株的抑制作用
[0039] 1、细胞株：小鼠黑色素瘤细胞株（B16)，购自中国科学院上海细胞库。人黑色素瘤 细胞株仏375和51(-1^1^-2)购自4了〇：。上述细胞株用含有10%胎牛血清的01^1培养基在 37°C、体积分数为5 % C02、完全饱和湿度条件下常规培养，48h更换培养基，细胞生长达饱 合状态时，用0. 25%胰蛋白酶+0. 02% EDTA消化传代，2?3d传代1次，实验选用对数生长 期细胞。
[0040] 2、细胞增殖的检测：
[0041] 分别调整B16、A375和SK-MEL-2细胞株细胞悬液浓度为I X 105/mL，加入96孔培 养板内，每孔100μL，置37°C5%C02孵箱培养24h。吸除旧培养基，分别加入含本发明中 药组合物的无血清DMEM培养基（药物浓度为100mg/mL，50mg/mL，25mg/mL，5mg/mL)，并设 空白对照组和调零组，每组均设3复孔，继续培养24h。加入10 μ LWST-8溶液，培养2h。在 490nm处检测各孔的吸光值。细胞增殖抑制率=〔1-(加药组OD平均值-调零孔OD平均 值V (空白对照组OD平均值-调零孔OD平均值）〕X 100%。实验重复3遍以上。
[0042] 3、细胞凋亡的检测
[0043] 调整A375细胞悬液浓度为I X 106/mL，将细胞接种于6孔板，每孔1ml。待细胞 生长达融合状态后，吸弃原培养基，分别加入含本发明中药组合物（药物浓度为100mg/mL， 50mg/mL，25mg/mL，5mg/mL)的无血清DMEM培养基，空白组加含0. 1 % DMSO的培养基，药物 作用24h后，将细胞上清吸至离心管内，细胞经胰酶消化后，移至与细胞上清相同的离心管 内，1000rpm4°C离心5min，弃上清，用PBS洗1遍，弃上清，用Binding buffer洗1遍，并 以195 μ L Binding buffer重悬，5 μ L Annexin V-FITC混匀后室温避光孵育10分钟，用 Binding buffer洗1遍，并以190 μ L Binding buffer重悬，加10 μ LPI混勾后流式细胞仪 上机检测。
[0044] 4实验结果
[0045] 4. 1本发明中药组合物对三种黑色素瘤细胞株细胞增殖影响的检测结果
[0046] 表1本发明中药组合物对三种黑色素瘤细胞株细胞增殖影响的检测结果
[0047]

【权利要求】
1. 一种治疗黑色素瘤的中药组合物，其特征在于，所述的中药组合物主要由以下重量 份的原料制得：刺五加8-20份、党参5-15份、山楂5-15份、地榆3-10份、仙鹤草10-25份、 淫羊藿5-15份、黄连10-20份、汉黄芩3-10份、木通10-20份、黄柏8-20份、制何首乌5-12 份、枸杞10-20份、知母3-10份、姜黄5-15份、芡实3-10份、石斛3-10份、牛膝5-12份、五 倍子10-15份、当归10-20份、厚朴3-10份、黄芪5-15份、金银花5-15份、天麻5-25份、茯 苓10-20份。
2. 如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，所述的中药组合物主要由以下重量 份的原料制得：刺五加15份、党参10份、山楂10份、地榆7份、仙鹤草18份、淫羊藿10份、 黄连15份、汉黄芩7份、木通15份、黄柏14份、制何首乌9份、枸杞15份、知母7份、姜黄 10份、芡实7份、石斛6份、牛膝8份、五倍子13份、当归15份、厚朴7份、黄芪10份、金银 花10份、天麻20份、茯苓15份。
3. 如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，所述的中药组合物主要由以下重量 份的原料制得：刺五加8份、党参5份、山楂5份、地榆3份、仙鹤草10份、淫羊藿5份、黄连 10份、汉黄芩3份、木通10份、黄柏8份、制何首乌5份、枸杞10份、知母3份、姜黄5份、芡 实3份、石斛3份、牛膝5份、五倍子10份、当归10份、厚朴3份、黄芪5份、金银花5份、天 麻5份、茯苓10份。
4. 如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，所述的中药组合物主要由以下重量 份的原料制得：刺五加20份、党参15份、山楂15份、地榆10份、仙鹤草25份、淫羊藿15份、 黄连20份、汉黄芩10份、木通20份、黄柏20份、制何首乌12份、枸杞20份、知母10份、姜 黄15份、芡实10份、石斛10份、牛膝12份、五倍子15份、当归20份、厚朴10份、黄芪15 份、金银花15份、天麻25份、茯苓20份。
5. 如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，所述的中药组合物主要由以下重量 份的原料制得：刺五加12份、党参12份、山楂10份、地榆5份、仙鹤草16份、淫羊藿18份、 黄连13份、汉黄芩6份、木通20份、黄柏10份、制何首乌8份、枸杞16份、知母6份、姜黄 10份、芡实5份、石斛8份、牛膝7份、五倍子8份、当归14份、厚朴10份、黄芪5份、金银花 15份、天麻15份、茯苓17份。
6. 如权利要求1-5任一所述的中药组合物，其特征在于，所述的中药组合物为散剂、合 剂、片剂或胶囊剂。
7. -种制备权利要求1-5任一所述中药组合物的方法，其特征在于，所述制备方法 包括如下步骤：取处方量中药材碎成粗粉，按照粗粉总重量的4?9倍加入体积浓度为 40%?95%的乙醇溶液，回流提取三次，回流时间为2?5h，滤过，滤液合并后回收乙醇，冷 却过滤，用水洗涤，干燥后即得中药浸膏；本领域技术人员可在该制备方法技术上制备得到 临床上常用中药药物剂型。
8. 权利要求1-5任一所述的中药组合物在制备治疗黑色素瘤的药物中的用途。
【文档编号】A61P35/00GK104491766SQ201510042242
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2015年1月27日 优先权日:2015年1月27日
【发明者】胡学荣 申请人:邹士东