专利名称：对cd122的抗体的制作方法
对CD122的抗体
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本申请为正式申请，且主张申请日为2010年4月8日的申请号为61/322，229的申请及申请日为2010年6月30日的申请号为61/360，405的申请的优先权，两份专利申请的整体均作为本发明的参照。
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背景技术：
在T细胞、NK细胞、单核细胞和B细胞的一个亚群上表达的⑶122为525氨基酸 长度的 I 型膜蛋白(Zamai 等，J. Biol. Regul. Homeost. Agents 15:95-97(2001))。CD 122分子是白细胞介素2(IL-2)和白细胞介素15(IL-15)这两个I型细胞因子的受体的必不可少的一部分。⑶122，也称为IL-2和IL-15受体的β链，与其他的受体亚成分结合，以产生显示精确的细胞因子特异性和亲和性的受体。在细胞表面上功能性地与CD122的联合的分子包括⑶25 (也被称为的IL-2受体α链或IL_2Ra )、⑶132(也称为为共同Y或Y c链)和IL-15受体a链(也可简称为IL_15Ra ;还未分配CD名称)(Waldmann，Nat.Rev. Immunol. 6 :595-601 (2006))。CD 122 与 CD 132 结合形成的受体显示出对 IL-2 (KD = InM)和IL-15(KD = IOnM)两者的中间水平的亲和性(中间亲和性受体)。⑶122与⑶25及⑶132的共同结合产生的受体特别对IL-2具有高亲和性(KD= IOpM)，而⑶122与IL-15Ra及CD132的结合可产生对IL-15有高亲和性的受体(KD = IOpM) (Ma, A.，等，Annu. Rev. Immunol. 24 :657-679 (2006))。
IL-2和IL-15共同分担刺激T淋巴细胞增殖的能力，但在维护免疫系统方面却各具独特的活性。IL-2通过引发已激活的T细胞凋亡而限制T细胞反应性，而IL-15对于NK细胞的发育及⑶8+记忆T细胞的发育和维护均必不可少(Waldmann, Nat. Rev. Immunol. 6 595-601 (2006))。这两种细胞因子在其与各自的受体相互作用方法中也体现它们的根本区别。当可溶的IL-2细胞因子与细胞表面上中度或高亲和力的IL-2受体相互作用时，IL-2信号发生。该可溶的细胞因子的递送，其中分泌自相同或不同细胞的细胞因子与单一细胞表面全部受体亚成分相互作用，是除IL-15外，所有I型细胞因子传输其信号的机制。相反，IL-15信号发生的实现是通过将结合于细胞表面IL-15Ra的IL-15呈递到另一个表达⑶122和⑶132分子的细胞。这也被称为反式呈递。反式呈递是这样一种机制，与IL_15Ra受体亚成分或其片段结合的IL-15，以可溶的或结合于一个细胞的状态存在，能被呈递至一个可表达剩余受体亚成分(⑶122和⑶132)的另一细胞，随后导致信号发生。分离的IL-15Ra或其片段对IL-15的亲和性很高(KD = IOpM)，并认为IL-15与IL-15Ra在内质网内结合，然后以复合物的形式传递到细胞表面以反式呈递到细胞表面能表达⑶122和⑶132的其他细胞。当IL-15与表达在同一细胞的⑶122，⑶132和IL_15Ra结合时，顺式呈递即发生。绝大多数的IL-15信号发生是通过反式呈递进行，顺式呈递的作用很小，而呈递可溶性的IL-15所产生的信号几乎没有或完全没有(Stonier与Schluns，Immunol. Lett. 127 :85-92(2010) ；Ma 等，Annu. Rev. Tmmunol. 24 :657-679(2006) ；Dubois等，Immunity 17 :537-547(2002))
和与I型细胞因子共享基本结构、一些功能活性及某些受体亚成分一样，IL-2和IL-15分别与免疫介导的疾病相关。比如，通过使用单克隆抗体靶向IL-2受体(CD25)的α链来抑制IL-2活性，是一种有效的免疫调节策略，目前被批准用于急性肾移植排斥反应(Vincenti 等，New Engl. J. Med. 338 :161_5 (1998))。另外，抗-CD25 方法的治疗益处也被报道于应对哮喘(Busse 等，Am. J. Respir. Crit. Care Med. 178 :1002-1008 (2008))、葡萄膜炎(Yehet 等，J. Autoimmun. 31 :91-97(2008))和多发性硬化症(Rose 等，Neurology, 69 785-789(2007))的临床试验，这提示出IL-2参与了这些过程。IL-15特异性的单克隆抗体已被报道在临床试验中有积极的治疗效果，如类风湿关节炎(Baslund et al. , ArthritisRheum. 52 :2686-2692 (2005))，并且据报道在银屑病(Villadsen 等，J. Clin. Invest. 112 1571-1580(2003))、腹腔疾病(Maiuri 等，Gastroenterology 119 :996-1066(2000))和系统性红斑狼疮(Bo et等，Scand. J. Immunol. 69 :119-129(2009))的动物模型中具有疗效。小鼠的抗人CD122单克隆抗体已产生自接种了人T细胞系的小鼠，随后通过多种技术被认·定为对IL-2受体β链具有特异性。这些抗⑶122的单克隆抗体可抑制IL-2依赖性的具有中间亲和力IL-2受体的细胞增殖，但它们不能有效地抑制IL-2依赖性的具有高度亲和力IL-2受体的细胞增殖。此外，还未曾报道过能有效地抑制IL-15反式呈递的抗⑶122的单克隆抗体。
一种抗 CD122 的抗体，Mik-β I (Tsudo 等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:1982-1986(1989))，已作为治疗T细胞大颗粒淋巴细胞白血病的方法被用于测试(Morris等，Proc. Nat. Acad. Sci. USA 103 :401-406 (2006))。Mik- β I 亦被人源化，且此形态HuMik-β I (Hakimi 等，J. Immunol. 151 :1075-1085(1993))已被报道可延长非人类灵长类动物的心脏同种异体移植物的存活。

发明内容
本发明提供一种分离的单克隆抗体，其可特异性地结合于⑶122，然后阻止IL-2及IL-15与包含⑶122及⑶132的受体结合。一些抗体阻止IL-2与包含⑶122，⑶132及⑶25的受体结合。一些抗体阻止反式呈递于IL-15Ra的IL-15与包含⑶122及⑶132的受体结合。一些抗体阻止IL-15与包含⑶122，⑶132及IL_15Ra的受体结合。当抗体相对于IL-2或IL-15提供不大于100倍摩尔的量时,一些抗体阻止上述环境中任何或全部结合的30%。
一些单克隆抗体与⑶122的结合可被如下情况阻止⑶122氨基酸序列(见SEQ ID NO 73)42,43和/或133残基被丙氨酸取代和/或65残基被苏氨酸取代和/或70残基被赖氨酸取代。一些单克隆抗体与⑶122的结合可被如下情况阻止⑶122氨基酸序列(见SEQID NO 73)42和/或43残基被丙氨酸取代和/或65残基被苏氨酸取代。一些单克隆抗体与⑶122的结合可被如下情况阻止⑶122氨基酸序列(见SEQ ID NO :73)65残基被苏氨酸取代和/或70残基被赖氨酸取代和/或133残基被丙氨酸取代。一些单克隆抗体特异性地与一个抗原表位结合，包括SEQ ID NO :73序列中42残基。一些单克隆抗体特异性地与一个抗原表位结合，包括SEQ ID NO :73序列中65残基。一些抗体特异性地与一个⑶122的抗原表位结合，包括SEQ ID NO :73序列中133残基。一些抗体特异性地与一个⑶122的抗原表位结合，包括SEQ ID NO :73序列中42、43、65、70和/或133残基。一些单克隆抗体特异性地与一个⑶122的抗原表位结合，包括SEQ ID NO :73序列中42、43和65残基。一些单克隆抗体特异性地与一个⑶122的抗原表位结合，包括SEQ ID NO :73序列中65、70和133残基。一些单克隆抗体特异性地与一个⑶122的抗原表位结合，后者位于SEQ ID NO:73序列的纤连蛋白III型结构域I中。一些单克隆抗体特异性地与一个⑶122的抗原表位结合，后者位于SEQ ID NO 73序列的纤连蛋白III型结构域I和2中。SEQ ID NO 73的39或41残基被取代为丙氨酸时，一些单克隆抗体与CD122的结合被检测到不被阻止。
一些抗体与抗体ABC2或ABClOl竞争结合⑶122，其中ABC2的特征在于一个成熟的SEQID NO 30的轻链可变区和一个成熟的SEQ ID NO 25的重链可变区，ABClOl其特征在于一个成熟的SEQ ID NO 40的轻链可变区的和一个成熟的SEQ ID NO 35的重链可变区。一些 抗体结合于与ABC2或ABClOl相同的⑶122上的抗原表位。一些抗体包含三个轻链⑶Rs和三个重链CDRs，其中每个CDR至少有90%的序列与来自于ABC2 (SEQ ID NOS :27-29轻链和22-24重链)或ABClOl (SEQ ID NOS :37-39轻链，32-34重链)的相应CDR相同。
一些抗体是嵌合的、人源化的、饰面(veneered)的或人的。一些抗体具有人IgGl κ同种型(isotype)。一种抗体可以是完整的抗体或单链抗体，Fab或F(ab’ )2片段。
本发明还提供人源化或嵌合的ABC2抗体，其特异地与CD122结合，其中ABC2是特征为一个成熟的SEQ ID NO :30的轻链可变区和一个成熟的SEQ ID NO :25的重链可变区的小鼠抗体。一些这样的抗体包括一条人源化轻链和人源化的重链，该人源化轻链包括所述ABC2轻链的三个CDRs (SEQ ID NO :30)，该人源化的重链包括所述ABC2重链的三个CDRs (SEQID NO 25)。
一些抗体包括一条与SEQ ID NO :42至少90%相同的人源化的轻链和一条与SEQ IDNO :41至少90%相同的人源化的重链。通过Kabat编号，残基T、I、A、I、A和Y分别占据某些抗体位点1128、!148、!149、册8、!193和1^71。通过Kabat编号，残基G占据某些抗体位点H42。一些抗体中，轻链 CDRs 是 SEQ ID N0S. 27-29 且重链 CDRs 是 SEQ ID NOS :22-24。
本发明进一步提供了人源化的或嵌合的ABClOl抗体，其特异性结合于CD122，其中ABClOl的特征在于一个成熟的SEQ ID NO 40的轻链可变区和成熟的SEQ ID NO 35的重链可变区。一些这样的抗体包括一条人源化轻链和一条人源化重链，其中所述轻链包含SEQID NO :40的三个⑶Rs，所述重链包括SEQ ID N0:35的三个⑶Rs。一些这样的抗体包含一条与SEQ ID NO :44至少90%相同的成熟的人源化轻链可变区和一条与SEQ ID NO :43至少90 %氨基酸序列相同的成熟的人源化重链可变区。通过Kabat编号，残基Y、T、M、Q、I、R和K分别占据这样一些抗体位点H27、H30、H48、H66、H67、H71和L49。一些这样的抗体中，轻链 CDRs 是 SEQ ID N0S. 37-39 且重链 CDRs 是 SEQ ID N0S. 32-34。
本发明进一步提供了一种药物组合物，该组合物由包括任何上述的抗体和药学上可接受的载体。
本发明进一步提供在患者体内抑制不希望的免疫应答的方法，包括给患者施用任何上述抗体的有效方案。在一些方法中，病人有一种自身免疫性疾病，如，例如，多发性硬化、类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、糖尿病、牛皮癣、腹腔疾病或葡萄膜炎。在一些方法中，患者有哮喘或过敏。在一些方法中，病人有移植物抗宿主疾病。在一些方法中，病人有宿主抗移植物疾病。
本发明进一步提供了一种在患者体内治疗癌症的方法，包括给患者施用任何上述抗体的有效方案。在一些方法中，所述癌症表达可检测到的⑶122。
本发明进一步提供一个SEQ ID NO 73中的不超过100个的连续残基的分离片段，其包括一个或多个43、65和133残基。一些分离的片段包括SEQ ID NO :73的43和65残基。一些分离的片段包括SEQ ID NO 73的65和133残基。一些分离的片段包括10个或更少的连续的SEQ ID NO :73中的残基。一些这样的分离的片段连接到一个载体，该载体可帮助诱发应对所述片段的抗体的产生，并且/或者该载体作为一个组合物的组件与佐剂一起以帮助诱发应对所述片段的抗体的产生。


图I. ABC2和ABClOl对IL-15反式呈递的影响。
图2. ABC2和ABClOl对通过高亲和性IL-2受体由IL-2介导的细胞增殖的影响。
图3. ABC2 VH的一致cDNA序列及对应的推测的氨基酸序列。
图4. ABC2 VL的一致cDNA序列及对应的推测的氨基酸序列。
图5. ABClOl VH的一致cDNA序列及对应的推测的氨基酸序列。
图6. ABClOl VL的一致cDNA序列及对应的推测的氨基酸序列。
图7.成熟的ABC2 VH，人源化的ABC2 VH (HuABC2 VH)及人受体DA430129 VH区的氨基酸序列比对。
图8.侧翼有SpeI及HindIII位点的设计的HuABC2 VH基因的核苷酸及推测的氨基酸序列。
图9.成熟的ABC2VL，人源化的ABC2 VL (HuABC2 VL)及人受体M29469 VL区的氨基酸序列比对。
图10.侧翼有NheI及EcoRI位点的设计的HuABC2 VL基因的核苷酸及推测的氨基酸序列。
图 11.成熟的 ABC101VH，人源化的 ABClOl VH (HuABClOl VH)及人受体 DA936142 VH区的氨基酸序列比对。
图12.侧翼有SpeI及HindIII位点的设计的HuABClOl VH基因的核苷酸及推测的氨
基酸序列。
图 13.成熟的 ABClOl VL，人源化的 ABClOl VL (HuABClOl VL)及人受体 Z46622 VL VH区的氨基酸序列比对。
图14.侧翼有NheI及EcoRI位点的设计的HuABClOl VL基因的核苷酸及推测的氨基酸序列。
图15. pHuABC2及pHuABClOl表达载体的原理构造。
图16. HuABC2及HuABClOl对IL-15反式呈递的影响。
图17. HuABC2和Hu ABC101对通过高亲和性IL-2受体由IL-2介导的细胞增殖的影响。
图 18. ABC2, ABC10U ABCl 16 和 Mik-β I 与多种 CD 122 结构的结合。
图19. ABC2、ABC101、ABCl 16和Mik-β I与多种人CD122的单氨基酸取代突变体的结合。
图20.在GM-CSF、IL-2或IL-15/IL-15Ra复合物存在下，可表达野生型或突变型⑶122的TF-I转染子的生长。
定义
单克隆抗体或其他生物实体，如⑶122的一个片段通常以分离的形式提供。这意味着抗体或其他生物实体通常是源自产物或提纯物的干扰蛋白或其他污染物的至少50% w/w的纯度，但不排除这样的可能，即所述的抗体与过量的一种(或多种)药物上可接受的载体 或其他介质结合，以方便其使用。通常分离的单克隆抗体或其他的生物实体剂是纯化后剩余的优势大分子种类。
单克隆抗体与其靶抗原的的特异性结合意味着亲非和力至少有106、107、108、109或IOkiM'特异性结合可检测到更高的量级，且可从非特异性结合至少一个不相关靶标的情况中区分。特异性结合能产生于特定官能团或特定空间配合(例如，锁和钥匙型)之间形成的键，而非特异性结合产生于范德华力。然而特异性结合并不必然意味着单克隆抗体只结合一个且只有一个祀标。
当CD122中的突变抑制了抗体与CD122的特异性结合，该结合强度(无论是由复合信号、亲和常数或其他测量方法)检测结果较CD122(SEQ ID NO :73)的野生型形式低(例如，降低至超过平均值的标准误差，SEM)，且可比野生型形式的结合低50%或10%。所述结合的减少也可以通过与阳性对照抗体的结合对比而进行评估，如实施例中使用的市售的L5抗FLAG 抗体，该阳性对照抗体结合于链接到CD122的FLAG 多肽。例如，如果抗体与突变CD 122的结合强度低于抗FLAG抗体与链接的FLAG 多肽的结合强度的50%或更优地低于10%，则所述突变可抑制抗⑶122抗体的结合。
基本的抗体结构单元是由亚基组成的四聚体。每个四聚体包含两对相同的多肽链，每对多肽链有一个“轻”链(约25kDa)和一个“重”链(约50-70kDa)。每条链的氨基末端部分包括一个可变区来主要负责抗原识别，可变区约100至110或更多的氨基酸。该可变区最初被表达时连接到一个可分裂的信号肽上。没有信号肽的可变区，有时也被称为成熟的可变区。因此，例如，成熟的轻链可变区，意味着没有轻链信号肽的轻链可变区。每条链的羧基末端部分被定义为恒定区，主要负责效应功能。
轻链被分类为为K或λ轻链。重链被分类为γ、μ、α、δ或ε ,并定义对应抗体的同种型(isotype)分别为IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。在轻链和重链内，可变区和恒定区通过一个约12个或12个以上的氨基酸的“J”区连接，同时重链还包括一个约10个或更多个氨基酸“D”区。
每个轻/重链对的成熟可变区形成抗体结合位点。因此，一个完整的抗体具有2个结合位点。除双功能抗体或双特异性抗体外，所述两个结合位点是相同的。所述的链都表现出相同的通用结构或相对保守的骨架区(FR)，其通过3个高变区连接，所述的高变区也叫互补决定区或CDRs。源自每个轻/重链对的两条链的CDRs是由框架区对准，以结合到特定的抗原表位。从N-末端至C-末端，轻链和重链均包括结构域FRl、CDRl、FR2、CDR2、FR3、⑶R3和FR4。每个结构域的氨基酸分配与Kabat《免疫学重要的蛋白质的序列》(Sequencesof Proteins of Immunological Interest)(国立卫生研究院，Bethesda,MD, 1987和 1991)中的定义或 Chothia & Lesk, J. Mol. Biol. 196 :901-917(1987) ;Chothia 等，Nature 342 878-883(1989)的定义是一致的。Kabat的还提供了一种广泛使用的编号惯例(Kabat编号)，其中，不同重链或不同轻链之间的相应残基被分配了相同的编号。
术语“抗体”包括完整的抗体和其所结合的片段。通常情况下，片段与产生它们的完整的抗体竞争结合特定的靶标，包括单独的重链和轻链Fab、Fab'、F (ab' )2、F (ab) C、Dabs、纳米体和Fv。片段可以产生自重组DNA技术完整的免疫球蛋白酶分离或化学分离。术语“抗体”还包括双特异性抗体。双特异性抗体或双功能抗体是具有两个不同的重/轻链对和两个不同结合位点的人工杂交抗体。
术语“抗原表位”是指位于抗原上的能与抗体结合的位点。抗原表位可由一个或多个蛋白三级折叠的并列的连续的氨基酸或不连续的氨基酸形成。由连续氨基酸形成的抗原表位(也称为线性表位)通常暴露于变性剂后受影响，而由三级折叠形成的抗原表位(也称为构象表位)通常经变性剂处理后不受影响。抗原表位的独特空间构象中通常包括至少为3个，更通常为5个或8-10个氨基酸。抗原表位独特空间构象的测定方法包括，例如，X-射线结晶学和二维核磁共振，见，例如 Methods in Molecular Biology, Vol. 66,Glenn E. Morris,Ed. (1996)中的抗原表位定位标准试验流程(Epitope Mapping Protocols)。。
识别相同或重叠抗原表位的抗体可被简单的免疫分析法检定，该免疫分析法显示一个抗体相对于另一个抗体竞争结合靶抗原的能力。抗体的对应抗原表位也可以是确定的结合于抗原的抗体的X-射线晶体学(以鉴定接触残基)。或者，如果可减少或消除一种抗体结合的抗原所有氨基酸突变类型也可减少或消除另一种抗体的结合，则这两种抗体具有相同的抗原表位。如果可减少或消除一种抗体结合的抗原某些氨基酸突变类型也可减少或消除另一种抗体的结合，则这两种抗体具有重叠的抗原表位。
抗体间的竞争由试验分析来确定，其中被测的抗体抑制参照抗体与共有抗原的特异结合(见，如Junghans等，Cancer Res. 50 :1495,1990)。在竞争性结合试验分析中，若过量的被测试抗体(例如，至少2x、5x、10x、20x或IOOx)抑制至少50%，但优选为75%、90%或99%参照抗体的结合，则被测试抗体与参照抗体竞争。由竞争法确定的抗体(竞争性抗体)包括与参照抗体具有相同结合抗原表位的抗体，及与一个毗邻抗原表位(由于空间位阻发生，该毗邻抗原表位充分接近与参照抗体结合的抗原表位)结合的抗体。
术语“患者”包括接受预防或治疗处理的人类和其他哺乳动物测试体。
为了对氨基酸替换的保守性和非保守性进行分类，氨基酸分组如下组I (疏水性侧链)甲硫氨酸、丙氨酸、缬氨酸亮，氨酸、异亮氨酸；组II (中性亲水性侧链)半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸；组III (酸性侧链)天冬氨酸、谷氨酸；组IV(基本侧链)天冬酰胺、谷氨酰胺、组氨酸、赖氨酸、精氨酸；组V(影响链定位的残基)甘氨酸、脯氨酸；组VI (芳香侧链)色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸。保守的替换涉及同一类氨基酸之间的替换，非保守替换构成一类氨基酸的成员被另一类氨基酸的成员替换。
序列一致性百分率根据Kabat编号法则对抗体序列进行最大比对。如果受试抗体区域(如一条轻链或一条重链的完整的成熟可变区)与一个参照抗体的相同序列比对，比对后，受试抗体与参照抗体相同序列百分率为受试抗体与参照抗体中占据相同位置的氨基酸数量除以两个区域的比对位置的总数，缺口不算在内，乘以100以转换成百分率。
“包括”的一个或多个例举元素的组合物或方法还囊括其它没有特别例举的元素。例如，一个包括抗体的组合物，该组合物可以仅含有该抗体，也可与其它成分相结合。详细说明
I.概要
本发明提供单克隆抗体，该抗体特异性地结合⑶122，⑶122是IL-2和IL-15的受体的一个组分。所述单克隆抗体实质上可以抑制IL-2和IL-15介导的功能，这是通过抑制这些细胞因子与它们的受体结合实现的。所述单克隆抗体可以用于抑制不需要的免疫反应或治疗癌症，以及其他应用。
II.革巴#〒
除非另有说明，CD122是指人CD122。一个示例性的人类序列被指定为Swiss Prot注册号P14784。其中已知的自然等位基因的变异性包括10L —V :dbSNP rs57770674、83 S —F，dbSNP rs2228143 和 391 D — E :dbSNP rs228942。完整的人 CD122 序列具有 551 个氨基酸，其中氨基酸1-26为一个信号肽。约27-240残基构成胞外结构域。约241-265残基构成跨膜结构域，约266-551残基构成胞质结构域。本发明的所述抗体结合到位于CD122胞 外结构域内的抗原表位。
突变残基通过SEQ ID N0:73定义，SEQ ID NO :73为无信号序列的完整的CD122序列。如果在结合实验中实际使用的CD122不同于SEQ ID NO :73 (例如，N-端截短的SEQ ID NO:73)，则突变体为当与SEQ ID NO 73进行最大匹配时，任何形式所使用的⑶122的相应残基。
如背景中讨论的，⑶122与⑶132、⑶25和/或IL-15Ra的结合形成受体。简言之，⑶122和⑶132的组合构成的受体对IL-2和IL-15具有中等亲合力。⑶122、⑶132和⑶25的组合构成的受体对IL-2具有高亲和力，而⑶122、⑶132和IL_15Ra的构成的受体对IL-15具有高亲和力。
除非另有指明，否则⑶132、⑶25和/或IL-15Ra是指这些蛋白质的人类形式。人⑶132的一个示例性人类序列被指定为Swiss Prot注册号P31785，这是一种含369个氨基酸的蛋白质，其中约残基1-22是信号肽，23-262是胞外结构域，263-283是跨膜结构域，284-369是胞质结构域。
⑶25的示例性的人类序列被指定Swiss Prot P01589，它有272个残基，其中约残基1-21是信号肽，22-240是胞外结构域，残基241-259是跨膜结构域，残基260-272是胞质结构域。
IL-15Ra的示例性的人类序列被指定Swiss Prot Q13261，它有267个残基，其中约残基1-30是信号肽，31-205是胞外结构域，残基206-228是跨膜结构域，残基229-267是胞质结构域。
除非以其他方式从上下文可知，参照上述受体之一意味着至少指蛋白质的细胞外结构域，通常也指完整的蛋白质，而不是可裂解的信号肽。
如背景中讨论的，上述受体与IL-2和IL-15结合，其中后者可以表现为顺式或反式。除非另从上下文可知，这些分子是指这些蛋白质的人类形式。人IL-2的示例性序列被指定为Swiss Prot P60568，它是一种含153个氨基酸的蛋白质，其中氨基酸1-20是信号肽。人IL-15的示例性序列的被指定为Swiss Prot P40933，它是一种含162个氨基酸的蛋白质，其中氨基酸1_29是彳目号妝。除非另从上下文可知，参照IL-2或IL-15意味着是已经去除信号肽的成熟蛋白。III.本发明的抗体
A.结合特异性和功能特性
本发明提供能与CD122蛋白内的抗原表位结合的单克隆抗体。指定的抗体ABC2和ABClOl就是2个这样的示例性的小鼠抗体。ABC2和ABClOl均可特异性结合人类⑶122。本发明中ABC2、ABClOl和一些其它的抗体，其特征在于，其进一步可特异性结合到猕猴⑶122，且不能有效地与小鼠和狗⑶122结合。结合到⑶122被证明为单独结合⑶122和/或上面讨论的并入了 CD122的受体。本发明的单克隆抗体，其特征在于，单克隆抗体作为一个单一试剂，可以阻止并入了 CD122的受体与IL-2和IL-15的结合及随后作为应答的细胞增殖的信号。
优选的抗体可以抑制IL-2和IL-15结合到并入了 CD122的低和高亲和力受体，也可抑制IL-15的顺式和反式结合。这样的抗体区别于以前报道对⑶122的抗体，包括Mik-β I和其人源化形式。如实施例8中所示，HuMik-β I仅示出了抑制可溶型IL-15介导的细胞 (该细胞具有CD122)增殖的弱能力，且不能检测出抑制IL-2介导的细胞增殖(该细胞具有高亲和力IL-2受体，包括⑶122)的能力。Mik-β I、其人源化形式和其它已知的抗⑶122抗体来也缺乏任何或至少实质的能力来抑制以反式呈递呈现的IL-15。
抑制可以用结合试验来证明，其中，细胞上表达的并入了 CD122的受体，在被测试抗体的存在下，与IL-2或IL-15结合。可替换地，或另外地，抑制也可以用如下方法证明，即在IL-2或IL-15存在下于合适细胞上表达并入了⑶122的受体，然后测试单克隆抗体对IL-2或IL-15介导的细胞增殖的效果。抑制IL-15可以在这样的模式下顺式或反式测试。体现抑制的示例性的测定模式在实施例中有描述。任选地，所试抗体的抑制也通过与下述物质进行比较而证明，即不结合CD122或其受体联合组件的不相关对照抗体、或IL-2及IL-15、或不含抗体的载体。
实质性抑制意味着至少抑制25、30、40、50或75% (如25-75%或30-70% )的由IL-2或IL-15介导的结合、细胞的增殖和/或其他功能活性。抑制通常在如下条件下可证明，即相对于IL-2或IL-15配体，抗体不超过100倍摩尔过量(例如，2_50或2_10或2_5倍摩尔过量)。对于功能测定，在抗体存在条件下，IL-2或IL-15通常呈现为可充分刺激功能活性所需的最低剂量水平。抗体通常为50ηΜ-5 μ M之间的浓度。优选的抗体显示可抑制IL-2与低或高亲和力受体(或两者)相互作用的至少40%，对以顺式和反式呈现的IL-15的抑制则至少为40%。抑制程度也可以被量化为50%增殖抑制浓度(IC50)，如实施例2和实施例8中描述的，所述的增殖是由IL-15反式介导至TF-I β细胞所致。抗体的浓度低于2 μ g/ml,且优选地,低于I μ g/ml,如O. 1-1或O. 5-1 μ g/ml是优选的。如实施例8中描述的，能抑制IL-2介导的TF-I α β增殖(该细胞具有高亲和力IL-2受体)50%的抗体浓度优选地低于 100 或 50 μ g/ml,如 10-50 μ g/ml。
从这些结果中可明显发现，本发明的抗体的IC50取决于被抑制的相互作用的性质。对于具有高亲和力IL-2受体的细胞，相比于抑制IL-15的反式呈递，抗⑶122抗体对IL-2的抑制更困难(即，相同的所需抗体的浓度更高)。对于只具有中等亲合力IL-2受体的细胞，相比于抑制可溶性IL-2或IL-15，抑制IL-15反式呈递更困难(即，相同的所需抗体的浓度更高)。
在动物模型或临床试验中，优选的抗体也能抑制免疫性失调或癌症。在实施例中讨论了动物模型中对抗移植物抗宿主疾病的测试活性。动物模型的一些其他示例在背景技术部分中讨论。其中一个这样的模型是由Villadsen等人(同上)描述的SCID/牛皮癣模型。在非人类灵长类动物的器官移植中，可与猴CD122交叉反应的抗人CD122抗体可被测试(Tinubu等人，同上)。肿瘤动物模型被广泛使用，其中人类肿瘤细胞被注入到免疫缺陷实验动物体内，如小鼠或大鼠。
本发明的某些抗体可结合到与一个抗体(被指定为ABC2或ABC101)相同的或覆盖的抗原表位。这些抗体的成熟的可变区的重链和轻链被分别指定为SEQ ID NO S. 25和30，及35和40。其它具有该结合特征的抗体能通过以下方法获得用CD122或含有所期望抗原表位的CD122的一部分来免疫小鼠,然后筛选能结合CD122的抗体,可选择地,可与ABC2或ABClOl竞争的抗体。通过该试验认定的抗体可将之筛选以用于抑制IL-2和IL-15的相互作用，这在实施例中和其他部分有所描述。也可对突变形式的CD122抗原的相应抗体进行筛选，以鉴定出能显示与ABC2或ABClOl具有相同或相似结合属性的抗体(结合于突变改变集合)。所述的突变可以是位于贯穿CD122胞外结构域或其一部分(具有抗原表位)的每次一个残基的丙氨酸替换(若丙氨酸已有，或者为丝氨酸)，或更广泛的多个空间间隔上的替换。
SEQ ID NO 73残基42,43和65的突变可抑制ABC2特异性地结合CD 122 (例如，实施例中描述的，< 10%的阳性对照抗FLAG抗体的结合)。同样，SEQ ID NO :73残基65、70和133的突变可抑制ABClOl特异性结合到CD122。由于相对极少的残基可影响结合，且所述的残基在空间的分布比一个典型的线性表位(例如3-20个连续氨基酸)分布更广泛，这些结果显示，ABClOl并且很可能ABC2结合到构象表位。或者，一个或多个影响结合的残基可不直接接触抗体而别构调节。65号残基突变为苏氨酸可以抑制结合，而突变为丙氨酸不抑制结合的现象表明，该残基对结合的影响是变构调节的。结合抗原表位(该表位包括SEQ IDNO73的42、43、65、70和133残基中的一个或更多个残基)的其他抗体，且特别地，结合抗原表位(该表位包括42、65和133残基中的一个或更多个残基)的抗体，很可能共享ABC2及ABClOl的结合属性。因此，当一种抗体，其特异性结合可被SEQ ID NO :73残基42、43和65中一个或多个突变抑制，或特别地，被42和65残基的突变抑制，则该抗体共享ABC2的相似属性。一些这样的抗体可结合到一个抗原表位，该抗原表位包括SEQ ID NO:73的42、43和/或65残基或者由其组成。一些这样的抗体可结合到一个抗原表位，该抗原表位包括42和43残基或者由其组成，且在其中残基65别构影响抗体的结合。所述的抗原可以是线性的，例如一个抗原表位(例如，2-5，3-5，3-10，3-15，3-20, 5-10，5-15或5-20个连续氨基酸)包括指定的氨基酸(42、43和65)中的一个、两个或全部三个，或由其组成，所述的抗原表位也可以是构象表位，其包括指定的氨基酸中的一个，两个或全部三个，或由其组成。特异性结合可以被突变(SEQID NO 73的残基65、70和133中一个、两个或全部三个突变)阻止的抗体很可能与ABClOl共享相似的抑制属性。一些这样的抗体可结合到一个抗原表位，该抗原表位具有SEQ ID NO : 73的65或133残基，或65和133残基。这样的抗原表位可以是线性表位(例如，2-5、3-5、3-10、3-15、3-20、5-10、5-15或5-20个连续氨基酸)，其包括指定的氨基酸出5、70和133)中的一个，两个或全部三个，或由其组成。某些本发明的抗体可特异性结合于CD122，该结合实质上并不被取代SEQ ID NO 73的残基39或41 (取代为丙氨酸)阻止(例如，实施例中描述的，至少阳性对照抗体结合的50%)。(39和41残基的突变抑制Mik-β I抗体的结合。)。任何上述抗体类型包括这样的抗体，该抗体特异性结合到抗原表位(该表位不包括SEQ ID NO 73的残基39或41)，或换句话说，该抗体与⑶122的结合并不能被残基的取代检测性地抑制(在实施例中，高于阳性对照抗FLAG抗体50%的
口口乂 O
结合到抗原表位的抗体，所述的抗原表位含有一个或多个特定残基，可以通过免疫处理CD122的片段(该片段含有这些一个或多个特定残基)而产生。片段可以例如具有不超过SEQ ID NO :73的100、50、25、10或5个连续的氨基酸。通常有这样的片段至少有SEQ IDNO 73中的5个，6个，7个，8个或9个连续的残基。这些片段可以被链接到载体，这有利于诱发应对该片段的抗体反应的产生，且/或与一个佐剂结合以帮助诱发上述反应。结合到所希望残基的抗体也可通过如下方法产生免疫处理一个全长CD122(信号序列除外)或纤连蛋白III结构域I和/或2的全长胞外结构域(信号序列除外)。然后，这样的抗体可以被筛选以差异性地结合人和鼠的杂交CD 122，或与特定残基突变的突变型对比，被筛选以差
异性结合野生型⑶122。针对人和鼠的杂交⑶122的筛选可以定位结合于⑶122内特定结构域(例如纤维连接蛋白III结构域I和/或2)的抗体。针对突变体的筛选更精确地定义了结合特异性，以允许认定这样一些抗体，其结合可以通过残基43、43、65、70和/或133的突变而受抑制，且与示例抗体共享抑制属性。
具有选定的的鼠抗体的结合特异性的抗体(如ABC2或ABC101)也可以用多种噬菌体展示技术生产。见Winter，WO 92/20791。此方法是特别适合用于生产人抗体。在该方法中，选定的鼠抗体的重链或轻链可变区作为起始材料使用。例如，如果轻链可变区被选作起始材料，一个噬菌体文库被构建，其中的组分显示相同的所述轻链可变区(即鼠起始材料)和不同的重链可变区。所述的重链可变区能例如产生自一个重排的人重链可变区的文库。对⑶122显示强特异性结合(例如，至少108，优选至少IO9M4)的噬菌体被筛选。所述的来自该噬菌体的重链可变区然后作为起始材料用于进一步构建一个噬菌体文库。在这个文库中，每个噬菌体显示相同的重链可变区(即第一个显示文库认定的区域)和不同的轻链可变区。所述的轻链可变区能例如产生自一个重排的人轻链可变区的文库。同理，对CD122显示强特异性结合的噬菌体被筛选。所生成的抗体通常与鼠起始材料有相同或相似的抗原表位特异性。
其它抗体可以通过突变编码示例抗体(如ABC2或ABC101)重链和轻链的cDNA的方式获得。本发明还包括这样一些单克隆抗体，它们与ABC2或ABClOl的成熟重和/或轻链可变区氨基酸序列至少有90%、95%或99%相同，且保持其功能特性，和/或由于少部分功能上不重要的氨基酸替换(如保守性替换)，缺失，或插入，不同于单独的抗体。本发明还包括这样一些单克隆抗体，它们具有至少一个，更优地为6个CDR(S)(由Kabat定义)，它们与ABC2 或 ABClOl 相应的 CDRs 具有 90%、95%、99%或 100%相同。
B.非人抗体
其他应对CD122的非人单克隆抗体，例如，鼠、豚鼠、灵长类动物、兔或大鼠，其生产可以通过，例如，免疫动物来获得，该免疫可以使用⑶122或它们的片段、具有⑶122的细胞，任选地，以上讨论过的共同表达其共受体蛋白的细胞。见Harlow & Lane, Antibodies, ALaboratory Manual (CSHP NY, 1988)(以引用的方式并入本文中)。这样的免疫原能天然获得、通过肽合成法获得或重组表达。任选地，所述免疫原的操作能通过混合或与载体蛋白络合。任选地，所述免疫原的操作能通过佐剂。如下文所述，多种类型的佐剂可以被使用。弗氏完全佐剂及随后使用弗氏不完全佐剂对于免疫试验动物是优选的。兔子和豚鼠通常用来制作多克隆抗体。小鼠通常用于制备单克隆抗体。抗体被筛选用于与CD122的特异性结合。所述的筛选可以通过测定抗体与一组⑶122删除突变的结合而进行，然后测定哪一种删除突变结合了该抗体。结合可以通过例如Western blot、FACS或ELISA被分析。
C-人源化抗体
人源化抗体是一种基因工程抗体，其中来自于非人“供体”抗体的CDRs被转移到人“受体”的抗体序列上(见，例如 Queen，US 5, 530, 101 and 5, 585, 089 ；ffinter,US 5,225,539，Carter, US 6, 407, 213, Adair, US 5, 859, 205 6，881，557，Foote，US 6,881,557)。所述受体抗体序列可以是，例如，一个成熟的人抗体序列，这样的序列的组合物，人抗体序列的共有序列，或一个种系的区域序列。因此，人源化抗体是这样一种抗体，该抗体具有全部或实质上源于供体抗体的某些或所有的CDRs，及可变区框架序列和恒定序列，如果存在，完全或实质上源于人抗体序列。同样地，人源化的重链具有至少一个，两个和通常所有三个CDRs， 其完全或实质上源自一个供体抗体的重链，及重链可变区框架序列和重链恒定区，如果存在的话，基本上源自人重链可变区框架和恒定区序列。同样地，人源化轻链具有至少一个，两个和通常所有三个CDRs，其完全或实质上源于一个供体抗体的轻链，及轻链可变区框架序列和轻链恒定区，如果存在的话，基本上源自人轻链可变区的框架和恒定区序列。除了纳米抗体和dAbs外，人源化抗体包括人源化重链和人源化轻链。当各自CDRs的相应残基(由Kabat定义)至少有85 %、90 %、95 %或100 %是相同时，人源化抗体的一个CDR实质上源自相应的非人类抗体CDR。当85、90、95或100%相应残基(由Kabat定义)相同时，抗体链的可变区框架序列或抗体链的恒定区实质上分别源自人可变区框架序列或人恒定区序列。
虽然人源化抗体通常并入6个源自鼠抗体的CDRs (优选由Kabat定义)，它们也可以被制成少于全部⑶Rs的抗体(例如，至少为3、4或5),⑶Rs源自鼠抗体(如Pascalis等，J. Immunol. 169 :3076, 2002 ；Vajdos 等，Journal of Molecular Biology, 320 415-428, 2002 ；Iwahashi 等，Mol. Tmmunol. 36 :1079-1091,1999 ；Tamura 等，Journal ofImmunology, 164 :1432-1441,2000)
在一些抗体中，只有CDRs的一部分，即用于结合所需要的CDR残基的子集，称为特异性决定残基(SDRs)，需要在人源化抗体中保留以供结合使用。不接触抗原的且不在SDRs内的⑶R残基，可以通过以往的研究加以认定(例如在⑶R H2中的残基H60-H65常常不是必需的)，或在位于 Chothia 超变量环之外的 Kabat CDRs 区域(Chothia, J. Mol. Biol. 196 :901,1987),或用分子建模和或以经验为主地,或如Gonzales等在Mol. Immunol. 41 :863, 2004中所描述的。人源化抗体的某些位置的一个或更多供体CDR残基空缺或全部供体CDR消失，占据在该位置上的氨基酸可以是占据受体抗体序列的相应位点(根据Kabat编码)的氨基酸。受体的CDR中的供体氨基酸替换数目反映了竞争平衡的考虑。这种替换对于减少人源化抗体中鼠氨基酸的数目从而减少潜在的免疫原性是有潜在优点的。然而，所述的替换也可能导致亲和性变化，要优先避免亲和力显著减少。CDRs内的替换位点和替换氨基酸的选择可以依据经验。
人受体抗体序列可以任选地选自于众多已知的人抗体序列，以提供人受体序列的可变区框架和相应的供体抗体链的可变区框架的高度序列同一性(例如,65-85%的同一性)。源自人可变区框架残基的某些氨基酸可被选择以用于替换，该替换是基于它们对CDR构象和/或对抗原的结合的影响。检测这种影响可以通过如下方法进行建模、检测特定位置的氨基酸的特征、或经验观测替换带来的影响、或诱变特定的氨基酸。
例如，当鼠的可变区框架残基和一个选定的人可变区框架残基之间的氨基酸不同，人框架氨基酸可以被源自鼠抗体的等效框架氨基酸取代，只要氨基酸可被合理地预期
(1)与抗原直接非共价结合，
(2)毗邻CDR区域，
(3)否则与CDR区相互作用(例如在一个CDR区内约6A )。
其他替换候选是在那个位点通常不作为人免疫球蛋白的受体人框架氨基酸。这些氨基酸可被源自鼠供体抗体同等位置的氨基酸替换，或被源自更典型的人免疫球蛋白同等位置的氨基酸替换。其他替换候选是在那个位点通常不作为人免疫球蛋白的受体人框架氨基酸。
本发明的一个示例性的人源化抗体是ABC2的人源化形式，其特征在于一个SEQ ID NO:42的成熟的轻链可变区的和一个SEQ ID N0:41的成熟的重链可变区，且被指定为HuABC2。本发明还提供HuABC2的变异型。这样的变异型通常由少数(例如，典型地不超过1、2、3、5或10)替换、缺失或插入而造成与HuABC2序列的不同。这种差异通常发生在框架中，但也可发生在CDRs。例如，只有在H28、H48、H49、H68、H93和L71位点的替换子集可以被制备。人源化的单克隆抗体(mAb)中许多不接触CDRs的框架残基能适应源于供体鼠mAb或其他鼠或人抗体的相应位置的氨基酸的替换，且甚至许多潜在的CDR-接触残基也服从替换或CDRs内的的氨基酸可以被改变。一个示例性的CDR替换是将一个CDR内的一个残基替换为用于提供可变区框架的占据人受体序列相应位置的残基。
通常，在变异的人源化ABC2序列内的替换关于被替换的HuABC2氨基酸是保守的。优选地，发生在HuABC2内的替换(不论是否保守)对结合亲和力或人源化mAb效价没有实质性的效果，即，它抑制包括⑶122的受体与IL-2和IL-15之间相互作用的能力(例如，展示的实施例和背景中描述的分析方法中的一些或所有变型的人源化ABC2抗体“效价”本质上是相同的，即，实验误差范围内，与HuABC2 “效价”相同)。优选地，成熟的变型的轻链和重链V区的序列至少90 %，更优地，至少95 %，并且最优选地，至少98 %相同于各自的HuABC2成熟的轻链和重链V区。或者，特别是那些与ABC2的可变区框架序列具有高度序列一致性的其他人抗体受体序列，也适合提供人源化抗体可变区框架序列。
在一些变型的HuABC2中，至少1、2、3、4、5或所有6个受体-供体替换位点，其已在示例性抗体中提及(即H28、H48、H49、H68，、H93和L71)，优选地分别被残基T、I、A、I、A和Y替换(所述残基占据鼠供体抗体重链的相应位置)。在一些变型体中，H42被G替换。如果所述重链受体序列是DA430129cDNA (GenBank登录号)编码的序列之外的序列，或所述轻链受体序列M29469cDNA (GenBank登录号)编码的序列之外的序列，受体-供体替换对于特定可变框架区位点的特定占据可以是或不是必须的，这取决于占据特定位点的残基是否在受体与供体之间相同。
本发明的另一示例性的人源化抗体是ABClOl的人源化形式，其特征为一个SEQ ID NO44的成熟的轻链可变区和一个SEQ ID NO :43的成熟的重链可变区的，且被指定HuABClOl。本发明还提供HuABClOl的变异型。这样的变异型通常由少数(例如，典型地不超过1、2、3、5或10)替换、缺失或插入而造成与HuABClOl序列的不同。这种差异通常发生在框架中，但也可发生在CDRs。例如，只有在H27、H30、H48、H66、H67、H71和L49位点的替换子集可以被制备。人源化抗体中许多不接触CDRs的框架残基能适应源于供体鼠抗体或其他鼠或人抗体的相应位置的氨基酸的替换，且甚至许多潜在的CDR-接触残基也服从替换或CDRs内的的氨基酸可以被改变。一个示例性的CDR替换是将一个CDR内的一个残基替换为用于提供可变区框架的占据人受体序列相应位置的残基。
通常，在变异的人源化ABClOl序列内的替换关于被替换的ABClOl氨基酸是保守的。优选地，发生在ABClOl内的替换(不论是否保守)对结合亲和力或人源化mAb效价没有实质性的效果，即，它抑制包括⑶122的受体与IL-2和IL-15之间相互作用的能力(例如，展示的实施例和背景中描述的分析方法中的一些或所有变型的人源化ABClOl抗体“效价”本质上是相同的，即，实验误差范围内，与HuABC2 “效价”相同)。优选地，成熟的变型的轻链和重链V区的序列至少90 %，更优地，至少95 %，并且最优选地，至少98 %相同于各自的HuABClOl成熟的轻链和重链V区。或者，特别是那些与HuABClOl的可变区框架序列具有高度序列一致性的其他人抗体可变区框架受体序列，也适合提供人源化抗体框架。
在一些变型的HuABClOl中，至少1、2、3、4、5、6或所有7个受体-供体替换位点，其已在示例性抗体中提及(即H27、H30、H48、H66、H67、H71和L49)，优选地分别被残基Y、T、M、Q、I、R和K替换(所述残基占据小鼠供体抗体重链的相应位置)。如果所述重链受体序列是DA936142cDNA(GenBank登录号)编码的序列之外的序列，或所述轻链受体序列Z46622cDNA (GenBank登录号)编码的序列之外的序列，受体-供体替换对于特定可变框架区位点的特定占据可以是或不是必须的，这取决于占据特定位点的残基是否在受体与供体之间相同。
P-嵌合抗体与饰面抗体
本发明进一步提供了非人类抗体，特别是实施例中的ABC2和ABClOl抗体，其嵌合形式与饰面形式(Veneered)。
嵌合抗体是这样一种抗体，其中非人类抗体(例如，鼠)的轻链和重链的成熟的可变区与人轻链和重链恒定区结合。这样的抗体，实质上或完全保留鼠抗体的结合特异性，并且具有大约三分之二的人类序列。
饰面抗体是这样一种类型的人源化抗体，该抗体保留一些通常所有非人抗体的CDRs和一些的非人可变区框架残基，但将其他可变区框架残基(可能对B或T细胞抗原表位有贡献，例如暴露的残基(Padlan, Mol. Immunol. 28 :489,1991)取代为源自人抗体序列相应位点的残基。其结果是这样一种抗体，其中CDRs全部或实质上来源于非人抗体，且非人抗体的可变区框架则由于取代而变得更人源化。本发明包括ABC2或ABC101抗体的饰面形式。
E-人的抗体
人类抗CD122的抗体用下面的多种技术来描述。有些人抗体通过竞争结合实验来筛选，通过Winter的(如上)噬菌体展示法筛选，或以其他方式，以获得与特定小鼠抗体(如实施例中小鼠单克隆抗体之一)具有相同抗原表位特异性。具有特定抗原表位特异性的人抗体也可以通过只用⑶122的一个片段作为目标抗原来筛选，和/或用⑶122的缺失突变体集合作为抗原来筛选。
人抗体的制造方法包括的三源杂交瘤方法，Oestberg等，Hybridoma 2 361-367 (1983) ;Oestberg，美国专利 No. 4，634，664 ;和 Engleman 等，美国专利 4，634，666，转基因小鼠的使用，其中包括人免疫球蛋白基因(见，如Lonberg等，W093/12227(1993) ；US5，877，397，US 5，874，299，US 5，814，318，US 5，789，650，US 5，770，429，US 5，661，016，US5，633，425，US 5，625，126，US 5，569，825，US 5，545，806，Nature 148，1547-1553 (1994)，Nature Biotechnology 14,826(1996), Kucherlapati, WO 91/10741 (1991))和卩遼菌体展示方法(见，如 Dower 等，WO 91/17271 和 McCafferty 等，WO 92/01047, US 5，877，218，US5，871，907，US 5，858，657，US 5，837，242，US 5，733，743 和 US 5,565,332)。
F.恒定区选择
嵌合抗体、人源化抗体(包括面饰抗体)，或人抗体的重和轻链可变区可以被连接到人恒定区的至少一部分。在某种程度上，恒定区的选择取决于抗体依赖性补体和/或细胞介导的细胞毒性是否是所期望的。例如，人类的同种型IgGl和IgG3具有补体介导的细胞毒性但人类同种型IgG2和IgG4不具有。轻链恒定区可以是λ或κ。抗体可以表达为含有两条轻链和两条重链的四聚体、表达为单独的重链和轻链、表达为Fab，Fabi , F(ab/ )2,和Fv，或单链抗体，其中重链和轻链的可变结构域通过间隔区链接。
人恒定区在不同个体间显示同种异型(alIotypic)的变化和同族同种异型的(isoallotypic)变化，即恒定区在不同个体的一个或多个多态性位点可以不同。同种异型和同族同种异型的(isoallotypic)区别在于血清识别一个结合于一个或多个其他同种型(isotype)的非多态性区域的同族同种异型(isoallotype)。关于人的恒定区,包括具有天然的的同种异型的恒定区，或具有在多态性位点被置换残基占据了的天然同种异型的恒定区。
在轻链和/或重链的氨基端或羧基端的一个或多个氨基酸，例如重链C-末端的赖氨酸，可能会丢失或在某一部分或全部分子上衍生化。可在恒定区制备替换，以减少或增加效应子功能，如补体介导的细胞毒性或ADCC(参见，例如Winter等，US PatentNo. 5, 624, 821 ；Tso 等，US Patent No. 5, 834, 597 ；and Lazar 等·，Proc. Natl. Acad. Sci.USA 103 :4005, 2006)，或在人体内延半衰期(参见，例如 Hinton 等，J. Biol. Chem. 279 6213，2004)。示例性的的替换包括在250位的谷氨酰胺和/或428位的亮氨酸(EU编号)，可以增加抗体的半衰期。234、235、236和/或237任意位点的替换可以降低对？0^受体的亲和力，有其是Fe YRI受体(参见，例如US 6，624，821)。任选地，在人IgG2的234、236和/或237位被丙氨酸取代，235位被谷氨酰胺取代。(参见，例如US5，624，821)。
H.重鉬杭体的表汰
嵌合的，人源化的(饰面的)和人的抗体通常由重组表达产生。重组多核苷酸构建体通常包括一个连接到抗体链编码序列的表达控制序列，其包含天然联合的或异源的启动子区。优选地，所述表达控制序列是在载体内的能够转化或转染进真核宿主细胞的真核启动子系统。一旦该载体已被纳入适当的宿主，宿主被置于合适的环境，以高水平地表达所述的核苷酸序列，及收集和纯化交叉反应抗体。
哺乳动物细胞是一种优选的表达核苷酸片段(编码免疫球蛋白或其片段)的宿主。见ffinnacker, From Genes to Clones, (VCH Publishers, NY, 1987)。一些能分泌完整的异源蛋白质的合适宿主细胞系已在本领域中被开发，包括CHO细胞系、各种COS细胞系、Hela细胞、HEK293细胞、L细胞，和包括Sp2/0和NSO的非抗体产生骨髓瘤。优选地，所述细胞是非人的。这些细胞的表达载体可以包括表达控制序列，如复制起点、启动子、增强子(Queen等，Immunol. Rev. 89 :49 (1986))，和必要的加工信息位点，如核糖体结合位点、RNA剪接位点、聚腺苷酸化位点和转录终止序列。优选的表达控制序列是来自内源性基因、巨细胞病毒、SV40、腺病毒、牛乳头状瘤病毒等的启动子。见Co等，J. Immunol. 148 :1149(1992)。
一旦表达，抗体可根据本领域的标准程序被纯化，包括HPLC纯化、柱色谱法、凝胶电泳等(一般见《蛋白纯化》(Springer-Verlag, NY, 1982)中的范围(Scope)部分)
IV.治疗的应用
所述抗体可用于抑制各种不希望的免疫反应，包括那些其中已使用的可抑制IL-2或IL-15各自相互作用的抗体。
由本发明的抗体治疗的免疫系统疾病中的一类是移植排斥反应。当同种异体的细胞或器官(如皮肤、肾脏、肝脏、心脏、肺，胰腺、骨髓)移植到宿主(即，供体和受体是同一物种中的不同个体)，宿主的免疫系统很可能产生对移植物中外来抗原的免疫应答(宿主抗移植物疾病)，导致移植的破坏。本发明的单克隆抗体对于阻止受体内的异体抗原引发的免疫反应是特别有用的。
本发明的单克隆抗体的一个相关应用是参与“移植物抗宿主”疾病(GVHD)的免疫应答调节。当免疫性感受态细胞转移到异体受体中时移植物抗宿主病(GVHD)是一种潜在致命的疾病。在这种情况下，供体的免疫活性细胞可能攻击受体的组织。皮肤、肠道上皮细胞和肝组织是频繁的被攻击目标，在GVHD过程中可能会被破坏。当免疫组织被移植时，该病呈现出特别严重的问题，如骨髓移植，但在其他情况下，不太严重的GVHD也被报道，包括心脏和肝脏移植。
需要免疫抑制的进一步的情形是在治疗I型糖尿病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、多发性硬化症、僵人综合征、类风湿关节炎、重症肌无力、红斑狼疮等自身免疫性疾病。在这些疾病中，机体发展出细胞或体液免疫应答，来应对自身抗原之一(导致该抗原的摧毁)，和潜在的严重的和/或致命后果。自身免疫性疾病可通过施用本发明的单克隆抗体之一来治疗。
其他的可用本发明的单克隆抗体来治疗的免疫系统疾病包括哮喘、过敏症、腹腔疾病、牛皮癣、和葡萄膜炎。麸质过敏症、牛皮癣、葡萄膜炎是自身免疫性疾病。
其他的可用本发明的单克隆抗体来治疗的失常包括癌症，尤其是血液系统恶性肿瘤，如白血病(例如，T细胞大颗粒淋巴细胞白血病)或淋巴瘤。一些这样的癌症可检测到的CD 122水平，该CD122的检测在蛋白质(例如，使用示例抗体进行免疫测定)或mRNA水平。相对于非癌组织，优选来自同一病人，一些这样的癌症显示出提高的CD122水平。任选地，癌症中⑶122的水平在给予处理之前测量。
单克隆抗体的有效施用方案意味着剂量、给药途径和给药频率可以延迟发病、减少严重性、抑制进一步恶化，和/或改善疾病的至少的一个迹象或症状。如果患者已经患有的疾病，所述方案可以称作治疗性有效方案。如果病人相对于一般人群显示出更高的疾病风险，但尚未出现症状，所述方案可以被称为预防性有效方案。在某些情况下，治疗或预防效果可以通过与同一患者内的历史对照或过去经验比较，而观察患者得出。在其他情况下，治疗或预防疾病的功效可以通过与为未受治疗的病人对照群体比较，对接受了治疗的病人群体进行前临床和临床试验来证明。
示例性的单克隆抗体的剂量为O. 1-20，或O. 5-5mg/kg体重(例如，O. 5、1、2、3、4或5mg/kg)，或10-1500mg作为固定剂量。该剂量依赖于病人的状况和前期治疗反应，若有的话，该处理是预防性的还是治疗性的，该紊乱是急性的还是慢性的，以及其他因素。
给药可以是肠胃外、静脉内的、口服的、皮下的、动脉内的、颅内的、鞘内的、腹膜内的、局部的、鼻内的或肌内的。施用进入体循环采用静脉内的或皮下给药的是优选的。静脉内给药可以是，例如，通过一段30-90分钟的输注。
给药的频率取决于在循环中的抗体的半衰期、患者的病情和给药途径，以及其他因素。所述的频率可以是每天、每周、每月、每季度或不定期，这要针对病人的所治疗的疾病的病情变化或进展。一个示例性的静脉给药频率是在一个连续的治疗过程中每周和季度之间，虽然也可以以更高或更低的频率。对于皮下给药，一个示例性的给药频率是在每周和每月之间，虽然也可以以更高或更低的频率。
给药剂量的数目取决于该紊乱是急性还是慢性，和治疗后该紊乱的响应。对于急性紊乱或慢性紊乱的急性发作，I至10之间剂量通常就足够了。有时一个快速注射，可选择地，以分开的形式，足够应对急性紊乱或慢性紊乱的急性发作。急性紊乱或急性发作的治疗可 以重复或循环。对于慢性紊乱，可以在固定的时间间隔给药，如在病人至少I年、5年或10年或对病人一生内每周、每两周、每月、每季度、每半年给药。
用于肠胃外给药的药物组合物优选是无菌的，实质上等渗并且在GMP条件下制造。药物组合物可以以单位剂量形式(即，单次给药的剂量)提供。药物组合物可使用一种或多种生理上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或助剂配制。该配制取决于所选择的给药途径。对于注射剂，抗体可在水溶液中配制，优选在生理性相容缓冲液中如Hank氏溶液、林格氏溶液、或生理盐水或醋酸盐缓冲液(以减少在注射部位的不适)。该溶液可以含有配制剂，如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。或者抗体在使用前可以是冻干形式，以与合适的载体(如无菌无热原水)共同构成。
使用本发明的抗体进行治疗，可以与其他应对所治疗的紊乱的有效疗法一起使用。传统的治疗免疫紊乱的方法包括肥大细胞脱颗粒抑制剂、皮质类固醇、非类固醇消炎药和较强的抗炎药物，如硫唑嘌呤、环磷酰胺、瘤可宁，FK506和环孢菌素。生物类抗炎剂，如Tysabri (那他珠单抗)或Humira (阿达木单抗)，也可以被使用。当用于治疗癌症时，本发明的抗体可以结合化疗、辐射、干细胞治疗、外科手术，或用其他生物制剂治疗，如对抗HER2抗原的赫赛汀 (曲妥珠单抗)、对VEGF的抗阿瓦斯丁 (贝伐单抗)，或EGF受体的抗体，如(爱必妥 ,西妥昔单抗)，和Vectibix (帕尼单抗)。化疗剂包括苯丁酸氮芥、环磷酰胺、苯丙氨酸氮芥、卡钼、柔红霉素、阿霉素、依达比星，和米托蒽醌、甲氨蝶呤、氟达拉滨、阿糖胞苷、足叶乙甙或托泊替康、长春新碱和长春花碱。
V.其他应用
所述的抗CD122抗体可以用于检测临床诊断或治疗中的CD122或用于研究。例如，该抗体可用于检测T-细胞上呈现的⑶122，可作为患者是否遭受可服从治疗的免疫介导的紊乱进行指示。肿瘤上表达的CD122也可以指示该肿瘤是适合本发明的抗体治疗的。所述抗体也可以作为用于实验室研究的试剂出售，该研究是检测T细胞和它们对各种刺激的反应。在上述用途中，单克隆抗体可以被荧光分子、自旋标记分子、酶或放射性同位素标记，亦可以试剂盒(含有必要的检测CD122的试剂)的形式提供。该抗体也可以被用来纯化CD122，例如，通过亲和层析法。所有以上和以下引用的专利申请、网站、其出版物、注册号等以全文引用的方式并入，其引用程度就如同将每一项特定且个别地以全文引用的方式并入。如果不同版本的序列在不同时期结合了不同注册号，则所述版本及其注册号以本申请的有效申请日为准。如果适用，关于所述的注册号，有效申请日意味着比实际申请日更早或优先申请的申请日。同样，如果不同版本的公开文本、网站等公开于不同时间，则以最接近本申请有效申请时间的版本为准，除非另有说明。本发明的任何功能，步骤，元件，实施例可以结合任何其他使用，除非另有说明。虽然本发明已经通过图示和实施例描述了本发明的一些细节，以便于清楚和理解，很明显某些实施某些变化和修改也是在权利要求保护范围之内的。
实施例
下面的例子讨论人抗CD122的单克隆抗体的生产、表征和人源化，并提供示例方法，通过方法，本发明描述的抗体对CD122的结合特性可以被确定。
实施例I· 鼠抗人CD122单克隆抗体的分离
使用两种形式的免疫原来引起的小鼠的抗CD122响应分离的融合了人IgGlFc区(CD122-Fc)的人CD122胞外结构域的和鼠骨髓瘤细胞(NSO)转染子，该转染子能在细胞表面稳定表达全长人CD122和人CD132(完整的天然人IL-2/15中间亲和力受体)(NSO-β Y)。能编码⑶122-Fc的基因的产生通过以下方法制备将编码5’序列的人CD122的细胞外区域(包括它的信号肽)融合到人IgGl Fe编码序列。所述的CD122_Fc基因在人CMV早期启动子控制下被克隆进一个表达载体。该表达载体还含有一个gpt标记用于筛选，所述的CD122-FC表达载体然后通过电穿孔导入到小鼠骨髓瘤细胞系NSO (欧洲动物细胞培养协会，索尔斯伯利，威尔特郡，英国)，且使用gpt标记来筛选转染子。消耗培养基采用ELISA筛选分析分泌的⑶122-Fc，高产细胞系用无血清培养基HybridomaSFM(Invitrogen, Carlsbad, CA)进行扩大培养。将消耗的无血清培养基中的CD122_Fc用Protein A Sepharose⑩亲和层析进行纯化。对于NSO-β Y稳定转染子,其同样通过将含全长人CD122和CD132的编码序列的表达载体转染进NSO细胞来创建。同时在细胞表面上表达基因产物的转染子通过使用市售的抗人CD122和CD132的抗体通过流式细胞术来识别。
鼠杂交瘤的生产使用标准程序进行。首先筛选杂交瘤培养上清液，用ELISA筛选对人CD 122的反应性。用CD122-Fc或不相干-Fe融合蛋白包被微量滴定板。将小鼠杂交瘤的消耗培养基加入到微量滴定板的各孔中。孵育后，用PBS洗涤板，再与过氧化物酶偶联的羊抗鼠κ多克隆抗体孵育，再次洗涤，并与过氧化物酶底物ABTS反应。显示对CD122-Fc反应性，却不显示对不相干-Fe融合蛋白反应性的上清液被认定为对CD122具有特异性，然后扩大培养该杂交瘤。对在细胞表面表达的天然人CD122的反应性可以由如下证明建立，即通过流式细胞术证明这些上清液对NSO- β Y和由PHA及IL-2激活的人T细胞的反应性，但不对非转染的NSO具有反应性。
能分泌与天然人CD122特异性结合的抗体的鼠杂交瘤，被分别亚克隆、同型化(isotyped),且在无血清培养基(使用Hybridoma-SFM)以纯化单克隆抗体。鼠IgG2a和IgG2b抗体用Protein A Sepharose _亲和层析纯化，鼠IgGl用G蛋白纯化。纯化的鼠抗人CD122单克隆抗体最初的表征是通过流式细胞术确定与人CD122的结合，其中CD122表达于普通(人T细胞)和转染的(NSO-β Y)细胞。根据最初与⑶122结合和功能表现，两种抗 CD 122 抗体，ABC2 (IgGl/ κ )的 ABClOl (IgG2b/ κ )被筛选出。ABC2 和 ABClOl 均特异性地结合到人和猕猴⑶122，但缺乏显著的狗和鼠⑶122结合(与不相关对照抗体在检测上无区别)。
实施例2
IL-15介导的增殖的抑制
人类红白血病细胞株TF-I (ATCC，马纳萨斯，弗吉尼亚州)的增长是完全依赖于外源提供的细胞因子，如 GM-CSF 或 IL-3 (Kitamura, T.等，Blood 73 =375-380 (1989))。TF-I 表达共有 Y 链(CD132)和 IL-15 的受体 α 链(Mortier 等，J. Biol. Chem. ,281 1612-1619 (2006))，但不表达 IL-2/IL-15 受体 β 链(CD122)，因此 IL-15 不能支持 TF-I的增长。TF-I内⑶122基因的表达允许中度和高度亲和力的IL-15受体的表达，且允许人IL-15支持所述转染子的增殖。TF-Ιβ产生自稳定的TF-I转染子，该转染子具有携带编 码人类⑶122的哺乳动物表达载体和一个嘌呤霉素抗性基因。TF-I β在人IL-15的存在下，及提供一个可溶的复合物的条件下增殖，该复合物为人IL-15结合到人IL-15R的胞外域的一部分上(scIL-15/IL_15Ra)，这取代了细胞结合的IL-15/IL-15Ra复合物并代表7 IL-15 的反式呈递(Mortier 等，J. Biol. Chem.，281 :1612-1619(2006))。所述的 IL-15/IL-15Ra片段复合物(scIL-15/IL-15Ra)是通过将人IL-15R a sushi结构域通过肽连接到人IL-15，并且在羧基末端加入了 6个组氨酸残基，这基本上都由Mortier报道(J. Biol.Chem. ,281 :1612-1619 (2006))，且他还提供了一个IL-15反式呈递的模型。
抗CD122单克隆抗体抑制由反式呈递介导的细胞增殖的能力，是用TF-I β细胞和scIL-15/IL-15Ra检测。在典型的实验中，6x IO4TF-I β细胞与不同量的纯化的鼠抗⑶122单克隆抗体在37°C下孵育10分钟。然后加入10ng/ml scIL-15/IL-15R,然后将细胞在37°C下额外孵育72小时，然后加入四唑盐WST-8 (Dojindo分子技术，罗克韦尔市，美国马里兰州)。用WST-8在37°C下孵育3小时后，细胞增殖通过测定450nm处的吸光度而被推断，该测定可指示脱氢酶活性并与活细胞数目成正比。在被测抗体存在下的细胞增殖水平和不添加抗体的细胞增殖水平进行比较，以测定抑制活性。如图I所示，ABC2和ABClOl实质上抑制了由IL-15反式呈递(体现为scIL-15/IL-15Ra)介导的TF-Ιβ细胞的生长，在ABC2浓度为1.0yg/m I及ABClOl浓度为O. 5 μ g/ml时，可显示约50%的抑制。
也使用TF-I β检测抗CD122单克隆抗体抑制由顺式呈递IL-15介导的细胞增殖的能力。在典型的实验中，6x IO4 TF-I β细胞与不同量的纯化的鼠抗⑶122单克隆抗体在37°C下孵育10分钟。然后加入10ng/ml IL-15，然后将细胞在37°C下额外孵育72小时。细胞增殖水平的测定使用上述的四唑盐WST-8，且与无抗体对照相比较。当浓度为370ng/ml时，ABC2和ABClOl实质上分别抑制约75%和40%的TF-I β细胞的生长。
实施例3
通过中度或高亲和力IL-2受体由IL-2介导的细胞增殖的抑制
ABC2和ABClOl被用来分析抑制细胞增殖的能力，该增殖由IL-2通过中度亲和力IL-2受体介导的，该分析使用TF-I β细胞。在典型的实验中，6x IO4TF-I β细胞与不同量的纯化的鼠抗CD122抗体在37°C下孵育10分钟。然后加入200ng/ml IL-2，然后将细胞在37°C下孵育72小时。细胞增殖水平的测定使用上述的四唑盐WST-8，且与无抗体对照相比较。当浓度为80ng/ml时，ABC2和ABClOl实质上平均抑制超过50%的由IL-2介导的TF-I β 细胞生长。 ABC2和ABClOl被用来分析抑制细胞增殖的能力，该增殖由IL-2通过高亲和力IL-2受体介导。TF-Ia β由转染了哺乳动物表达载体(编码人⑶25和⑶122)的TF-I产生，因此表达IL-2的高亲和力受体。在典型的实验中，6x IO4TF-I α β细胞与不同量的纯化的鼠抗 CD122抗体在37°C下孵育10分钟。然后加入10ng/ml IL-2，然后将细胞在37°C下孵育额外的72小时。细胞增殖水平的测定使用上述的四唑盐WST-8，且与无抗体对照相比较。如图2所示，在IL-2存在下，ABC2和ABClOl实质上抑制了 TF-I α β细胞的增长。在10 μ g/ ml浓度下，ABC2和ABClOl分别可抑制TF-I α β 49%和46%的增殖。 实施例4 重链和轻链可变区的序列用TRIzol试剂(Invitrogen)从约IO7杂交瘤细胞中提取总RNA，5’ -RACE中的 oligo dT-primed cDNA使用GeneRacer试剂盒(Invitrogen公司，卡尔斯巴德，加利福尼亚州)或SMARTer RACE cDNA Amplification试剂盒(Clontech,山景城，加利福尼亚州)，按照供应商的说明书操作。重链和轻链可变区的cDNAs的扩增用聚合酶链反应(PCR)进行，使用使鼠Y-I和K链恒定区分别退火的3'引物和GeneRacer试剂盒或SMARTer RACE cDNA Amplification试剂盒提供的5 ' RACE引物。重链可变区(VH)的 PCR，3 '引物具有序列5 ' -GCCAGTGGATAGACAGATGG-3 '(对于 Y -I) (SEQ ID NO: 17)，5 ' -GCCAGTGGATAGACCGATGG-3 '(对于 Y _2a) (SEQ ID NO: 18)或 5' -GCCAGTGGATAGACTGATGG-3'(对于 Y _2b) (SEQ ID NO: 19)。对于轻链可变区(VL)， 3'引物具有序列5' -GATGGATACAGTTGGTGCAGC-3' (SEQ ID NO :20)。扩增出的 VH 和 VL cDNAs被亚克隆进pCR4Blunt-T0P0载体(Invitrogen)以进行序列测定。一些重链和轻链克隆被测序，与典型鼠重链和轻链可变区同源的单拷贝序列被认定。ABC2VH的一致cDNA序列和推测的氨基酸序列在图3中显示。信号肽序列 (MKLffLNWVFLLTLLHGIQC) (SEQ ID NO 21)为斜体。成熟多肽(E)的N-末端氨基酸序列用双下划线标注。根据 Kabat 等· (Sequences of Proteins of Immunological Interests,第五版，NIH出版No. 91-3242，美国卫生和公共服务部，1991)定义的⑶R序列用下划线标注。 ABC VH的CDR1、CDR2和CDR3序列分别为DFYME(SEQ ID NO 22), ASRNKANDYTTEYSASVKG (SEQ ID NO 23)和 SYYRYDGMDY (SEQ ID NO :24)。成熟 ABC2VH 氨基酸序列是 EVKLVESGGGLVQPGG SLRLSCATSGFTFSDFYMEWVRQPPGKRLEWIAASRNKANDYTTEYSASVKGRFIVSRDTSQSILYLQMNALRAEDT AIYYCARSYYRYDGMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO :25)。ABC2VL 一致的cDNA序列或推测的氨基酸序列在图4中显示。信号肽序列 (MDFQVQIFSFLLISASVIVSRG) (SEQ ID NO 26)为斜体。成熟多肽(Q)的N-末端氨基酸序列用双下划线标注。根据Kabat等.(同上)定义的⑶R序列用下划线标注。ABC2VL的 CDRl、CDR2 和 CDR3 序列分别为 SAISSVSYMY (SEQ ID NO :27)、DTSNLVS (SEQ ID NO 28)和 QQffNTYPYT (SEQ ID NO :29)。成熟 ABC2VL 氨基酸序列是 QVVLTQSPVMSASPGEKVTMTCSAISSV SYMYWYQQKPGSSPRLLIYDTSNLVSGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQWNTYPYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO 30)。ABClOl VH—致的cDNA序列或推测的氨基酸序列在图5中显示。信号肽序列(MRVLILVYLLTVLPGILS) (SEQ ID NO 31)为斜体。成熟多肽(D)的N-末端氨基酸序列用双下划线标注。根据Kabat等.(同上)定义的⑶R序列用下划线标注。ABClOl VH的⑶R1、 CDR2 和 CDR3 序列分别为 NDNHWffN(SEQ ID NO 32)，YIDSSGSSDNNPSLKS (SEQ ID NO 33)和 GGGRDYYGMDY (SEQ ID NO :34)。成熟 ABClOl VH 氨基酸序列是 DVQLQESGPGLVKPSQTVSLTCTV TGYSITNDNHWWNWIRQVSGSKLEWMGYIDSSGSSDNNPSLKSQISITRDTSKNQLFLQLNSVTIEDIGTYYCARGG GRDYYGMDYffGQGTSVTVSS(SEQ ID NO :35)。ABClOl VL—致的cDNA序列或推测的氨基酸序列在图6中显示。信号肽序列 (METDTLLLffVLLLffVPGSTG) (SEQ ID NO 36)为斜体。成熟多肽(D)的N-末端氨基酸序列用双下划线标注。根据Kabat等.(同上)定义的⑶R序列用下划线标注。ABClOl VL的⑶R1、 CDR2 和 CDR3 序列分别为 RASQSVSTSSYSYVH(SEQ ID NO 37)，YASNLES(SEQ ID NO 38)和 QHSffDIPFT (SEQ ID NO :39)。成熟 ABClOl VL 氨基酸序列是 DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRAS QSVSTSSYSYVHWYQQKPGQPPKLLIKYASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDTATYYCQHSffDIPFTFG GGTKLEIK(SEQ ID NO 40)。实施例5ABC2VH和VL的人源化人源化VH和VL基因的设计和构建根据已有方法进行(Tsurushita，N.，等.，Methods 36:69-83(2005))。与小鼠ABC2 VH同源的人VH序列在GenBank数据库中搜索，且由人 DA430129cDNA(DA430129 VH)(GenBank 注册号；Kimura，K.，等·，Genome Res. 16 55-65(2006))编码的VH序列被选择作为人源化受体。图7显示了成熟ABC2 VH、人源化 ABC2 VH(HuABC2 VH)和人受体DA430129 VH区氨基酸序列的比对。序列上面的数字指示了根据Kabat等人(同上)规定的位置。由Kabat等人(同上)定义的⑶R序列在ABC2 VH氨基酸序列中用下划线标注。为设计HuABC2 VH氨基酸序列，小鼠ABC2 VH的⑶R序列首先被转接到DA430129VH的相应位置。下一步，在框架区位置(该位置是小鼠ABC2可变区的三维模型，其被建议与CDRs的联系具有重要意义)，小鼠ABC2VH氨基酸残基替换相应的人残基。这些取代，在HuABC2氨基酸序列用下划线表示，发生在位置28、48、49、68和 93(图.7)。另外，被发现在相应V区亚群中非典型的DA430129 VH人框架在氨基酸残基被典型的残基取代，减少潜在的免疫原性。这种类型的取代，在HuABC2 VH氨基酸序列用双下划线标注，发生在位置42 (图7)。编码HuABC2 VH的基因被设计为外显子，该外显子包括一个信号肽、一个剪接供体信号、和适当的限制性内切酶位点以为后续克隆到哺乳动物表达载体中。HuABC2 VH基因的信号肽序列来自小鼠ABC2 VH基因。HuABC2 VH外显子的剪接供体信号来自人类生殖系JHl段。侧翼为Spe I和HindIII位点的所设计HuABC2 VH基因核苷酸序列及推测的氨基酸如图8所示。信号肽序列用斜体标注。成熟多肽的N-末端的氨基酸残基用双下划线标注。根据Kabat等人(同上)的定义的CDR序列以下划线标出。 成熟 HuABC2 VH 的氨基酸序列是 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDFYMEWVRQAPGKGLEWIA ASRNKANDYTTEYSASVKGRFIVSRDDSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCARSYYRYDGMDYWGQGTTVTVSS. (SEQ ID NO 41)。与小鼠ABC2 VL同源的人Vk序列在GenBank数据库中搜索，且由人 M29469cDNA (M29469VL) (GenBank 注册号；Spatz 等，J. Immunol. 144 =2821-2828 (1990))编码的Vk序列被选择作为人源化受体。图9显示了成熟ABC2VL、人源化ABC2 VL(HuABC2 VH)和人受体M29469 VL区氨基酸序列的比对。序列上面的数字指示了根据Kabat等人(同上)规定的位置。由Kabat等人(同上)定义的⑶R序列在ABC2 VL氨基酸序列中用下划线标注。为设计HuABC2 VL氨基酸序列，小鼠ABC2 VL的CDR序列首先被转接到M29469 VL 的相应位置。下一步，在框架区位置(该位置是小鼠ABC2可变区的三维模型，其被建议与 CDRs的联系具有重要意义)，小鼠ABC2 VL氨基酸残基71位，在HuABC2 VL中用下划线标注，替换相应的人残基(图9)。编码HuABC2 VL的基因被设计为外显子，该外显子包括所述的小鼠ABC2 VL基因的信号肽和来自小鼠生殖系Jkl段的剪接供体信号。侦彳翼为NheI和 EcoRI位点的所设计HuABC2 VL基因核苷酸序列及推测的氨基酸如图10所示。信号肽序列用斜体标注。成熟多肽的N-末端的氨基酸残基用双下划线标注。根据Kabat等人(1991) 的定义的CDR序列以下划线标出。成熟HuABC2VL的氨基酸序列是EIVLTQSPATLSLSPGERAT LSCSAISSVSYMYWYQQKPGQAPRLLIYDTSNLVSGVPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQffNTYPYTF GGGTKVEIK(SEQ ID NO 42)。实施例6ABClOIVH和VL的人源化与小鼠ABC101VH同源的人VH序列在GenBank数据库中搜索，且由人 DA936142cDNA(DA936142VH) (GenBank 注册号；Kimura 等，Genome Res. 16 :55-65 (2006)) 编码的VH序列被选择作为人源化受体。图11显示了成熟ABClOl VH、人源化A BClOl VH (HuABClOl VH)和人受体DA936142 VH区氨基酸序列的比对。序列上面的数字指示了根据 Kabat等人(同上)规定的位置。由Kabat等人(同上)定义的⑶R序列在ABClOl VH氨基酸序列中用下划线标注。为设计HuABClOl VH氨基酸序列，小鼠ABClOl VH的CDR序列首先被转接到DA936142 VH的相应位置。下一步，小鼠27、30、48、66、67和71位氨基酸，该位置是小鼠ABClOl可变区的三维模型，其被建议与CDRs的联系具有重要意义，替换相应的人框架残基。这些位置的氨基酸残基在HuABClOlVH序列(图11)用下划线标注。编码 HuABClOl VH的基因被设计为外显子，该外显子包括所述的小鼠ABClOl VH基因的信号肽和来自人生殖系JH6段的剪接供体信号。侧翼为SpeI和HindIII位点的所设计HuABClOl VH 基因核苷酸序列及推测的氨基酸如图12所示。信号肽序列用斜体标注。成熟多肽的N-末端的氨基酸残基用双下划线标注。根据Kabat等人(1991)的定义的CDR序列以下划线标出。成熟 HuABClOl VH 的氨基酸序列是 QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGYSITNDNHWffNWIRQHP GKGLEWMGYIDSSGSSDNNPSLKSQITISRDTSKNQLSLKLSSVTAADTAVYYCARGGGRDYYGMDYffGQGTTVTVS S (SEQ ID NO 43)。为人源化小鼠 ABC101 VL,由人 Z46622cDNA(Z46622VL) (GenBank 注册号；Giachino 等，J. Exp. Med. 181 =1245-1250(1995))编码的Vk序列被选择作为受体。图13显示了成熟 ABC101 VL、人源化ABC101 VL (HuABClOl VL)和人受体Z46622VL区氨基酸序列的比对。序列上面的数字指示了根据Kabat等人(同上)规定的位置。由Kabat等人(同上)定义的 ⑶R序列在ABC101VL氨基酸序列中用下划线标注。为设计HuABClOl VL氨基酸序列，小鼠 ABC101 VL的⑶R序列首先被转接到Z46622 VL的相应位置。下一步，下一步，小鼠49位氨基酸，该位置是小鼠ABC101可变区的三维模型，其被建议与CDRs的联系具有重要意义， 替换相应的人框架残基。这些位置的氨基酸残基在HuABClOl VL序列(图13)用下划线标注。编码HuABClOl VL的基因被设计为外显子，该外显子包括所述的小鼠ABC101 VL基因的信号肽和来自小鼠生殖系Jk2段的剪接供体信号。侧翼为NheI和EcoRI位点的所设计 HuABClOl VL基因核苷酸序列及推测的氨基酸如图14所示。信号肽序列用斜体标注。成熟多肽的N-末端的氨基酸残基用双下划线标注。根据Kabat等人(1991)的定义的CDR序列以下划线标出。成熟HuABClOl VL的氨基酸序列是DIVMTQSPDSLGVSLGERATINCRASQSVSTSS YSYVHWYQQKPGQPPKLLIKYASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSWDIPFTFGQGTKLEI K(SEQ ID NO 44)。实施例7HuABC2 和 HuABClOl IgGl/κ 抗体的表达设计有SpeI和HindIII位点的HuABC2 VH基因和设计有Nhe I和EcoR I位点的HuABC2 VL基因，被插进一个哺乳动物表达载体中的相应位点，以生成pHuABC2。设计有Spe I和 HindIII位点的HuABClOl VH和设计有Nhe I和EcoR I位点的HuABClOl VL，被插进一个哺乳动物表达载体中的相应位点，以生成pHuABClOl。pHuABC2和pHuABClOl (全体地，表达载体)的结构见图15。从顶部的SalI位点沿顺时针方向，所述的表达载体包含的重链转录单元，该单元开始于人巨细胞病毒(CMV)的主要立即早期启动子和增强子(CMV启动子) 以起始抗体体重链基因的转录。CMV之后是VH外显子，它是一个含有人Y-I重链恒定区的基因组序列，该区包括CH1、铰链、CH2和CH3与其间的内含子，CH3之后还有为mRNA加工的 Y -I基因的多聚腺苷酸化位点。重链基因序列之后，轻链转录单元开始于CMV启动子，随后为VL的外显子和一个基因组序列，该基因组序列含有人κ链恒定区外显子(CL)及其前部的部分内含子和该κ基因的poly A信号。所述的轻链基因后是SV40早期启动子(SV40启动子)，大肠杆菌黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因(谷丙转氨酶)，和含有SV40多聚腺苷酸化位点(SV40poly(A)位点)的片段。最后，所述的表达载体含有质粒pUC19的一部分， 其包含细菌的复制起点(pUC ori)和beta-内酰胺酶基因(β内酰胺酶)。为了获得稳定产生HuABC2和HuABClOl IgGl的/ κ抗体的细胞系(分别为HuABC2 和HuABClOl)，表达载体pHuABC2和pHuABClOl分别为被引入到小鼠骨髓瘤细胞系NSO的染色体中。通过电穿孔进行稳定转染NSO,电穿孔技术为Bebbington等人所描述(Bio/ Technology 10 :169-175，1992)。(生物/10 :169-175，1992)。在转染前，表达载体使用 FSPI 将之线性化。用10 μ g线性化质粒转染约IO7细胞，悬浮在含有10% FBS的DME培养基中， 并镀在几个96-孔中。24小时后，选择培养基(含有10% FBS、HT培养基补充物(Sigma， St. Louis,MO)、0· 25mg/ml黄嘌呤和I μ g/ml霉酹酸的DME培养基)被施加。经过约10天的处筛选，来自转染子成活筛选的培养上清液被用于抗体生产的分析。通过标准步骤，用夹心ELISA测定HuABC2和HuABClOl的表达，通常使用羊抗人IgG Fe多克隆抗体来捕获，使用HRP标记的羊抗人κ链多克隆抗体来检测结合的人源化抗体。 不同量的合适的人IgGl/κ抗体被用来构建标准曲线以用于定量。分别高产HuABC2和 HuABClOl的NSO稳定转染子在无血清培养基(使用Hybridoma SFM(Invitrogen))中适应并扩增。用Protein A亲和层析法纯化HuABC2和HuABClOl。实施例8人源化的抗CD 122抗体的特征对纯化的HuABC2和HuABClOl进行抑制TF-I β增殖能力的测试，所述的增殖是通过可溶的IL-15/IL-15Ra复合体介导的(如上文所述的，用scIL-15/IL_15Rα作为IL-15反式呈递的方式)(图16)。HuABC2和HuABClOl实质上均可抑制TF-I β的增长，然而小鼠抗 ⑶122单克隆抗体的人源化形式(HuMik-β I ；Hakimi等，同上)在测试的最高浓度(10 μ g/ ml)只显示了轻微抑制。对于抑制IL-15反式呈递到TF-I β细胞而介导的细胞增殖，50% 抑制所需要的抗体浓度为对于HuABC2是O. 7 μ g/ml，对于HuABClOl是O. 5 μ g/ml，对于 HuMik-β I 是约 10 μ g/ml。对纯化的HuABC2和HuABClOl进行抑制TF-I α β增殖能力的测试，上文已描述， TF-I α β在IL-2的存在下能表达高亲和力的IL-2受体(图17)。HuABC2和HuABClOl实质上均可抑制TF-Ia β的增长,然而HuMik-β I在测试的最高浓度(100 μ g/ml)不显示活性，只显示了与同型对照相同的抑制水平。对于抑制IL-2介导的TF-I α β细胞增殖，50% 抑制所需要的抗体浓度为对于HuABC2是14 μ g/ml，对于HuABClOl是42 μ g/ml。实施例9人源化的抗CD122抗体对对抗主体疾病的异种骨移植发育的体内分析HuABC2疗法对移植物抗宿主病发展的效果，可以通过给予免疫缺陷小鼠人 immuocompetant 细胞(van Rijn, R. S.,等·，Blood 102 :2522_2531 (2003))建立异种 (xenographic)模型而检测。通过引入人外周血单个核细胞(PBMC),异种的移植物抗宿主疾病(XGVH D)可诱导于 NOD/Shi-scid，IL-2R y nul1 (NOG)小鼠(描述于 Ito，R.等， Transplantation 87 1654-1658 (2009)) 特别地，每次间隔注射的 Ix IO7 人 PBMC 的 8_10 周年龄的NOG小鼠在注射前一天接受2. 5Gy的辐照。对小鼠每天进行监测及每周两次称重来跟踪疾病的发展。发展了 XGVHD的小鼠在注射PBMC2-3天后开始体重降低，并表现出驼背姿势、竖起皮毛、行动不便、呼吸急促、贫血，注射了 Ix IO7人PBMC的辐照受体在10-14天后死亡。为了显示接受了人源化抗⑶122抗体的小鼠在XGVHD过程中的改变，NOG小鼠在注射PBMC前一天接受腹膜内注射10mg/kg (抗体/体重)对照人IgGl抗体或HuABC2，或在注射PBMC当天接受，或在注射PBMC后3天、7天和10天接受。在实施每种抗体前对小鼠称重，且在死之前或按IA⑶C准则牺牲之前检测XGVHD的迹象，该迹象已在上文描述。人类细胞的转移是一个疾病进展的迹象指示，其在注射PBMC10天后通过检测人CD45+百分含量进行监测，所述的CD45+百分含量是通过流式细胞术对每只小鼠的血液中的CD45+百分含量进行检测。在注射PBMC10天后，被施用对照抗体的小鼠体重平均降低了 20±2.8%，而被施用HuABC2的小鼠体重平均仅降低了 10+2. 3%。在注射PBMC10天后，被施用对照抗体的小鼠其血液中平均有89. 2±4. 2%人⑶45+细胞，而被施用HuABC2的小鼠其血液中平均有64. 9± 11. 6%人⑶45+细胞。在注射PBMC10天后，被施用对照抗体的全部6只小鼠死亡，而被施用HuABC2的小鼠当天仅有2只死亡。因此，通过3个独立的参数体重下降百分数、人细胞转移百分数和死亡数，可以发现，相比于施用对照抗体，被施用HuABC2的小鼠显示了较轻的GVHD症状。例10在牛皮癣模型中分析人源化抗CD122抗体当将人牛皮癣患者皮肤移植到严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠时，牛皮癣的表型特征(例如，表皮增厚、广泛的表皮突形成和炎性细胞的出现)仍然存在(NickolofT等.， Am. J. Pathol. 146 :580_588 (1995))。这个模型已被用于研究牛皮癣病候选药物的疗效(Zegler 等，Lab Invest. 81 :1253-1261 (2001) ；Villadsen 等，J. Clin. Invest. 112 1571-1580(2003) ;Bhagavathula 等，Am. J. Pathol. 166 :1009-1016 (2005))，并且对人的疗效，该模型也是有积极影响的。本实施例描述了体内研究，其可在牛皮癣患者皮肤-SCID小鼠移植模型中证明HuABC2的功效。在一个典型的实验中，人牛皮癣患者皮肤移植到SCID小鼠。组织愈合后，小鼠经腹腔注射HuABC2或对照抗体，剂量为每3天(共21天)每只动物10mg/kg。处理期结束后， 处死动物。将移植的人牛皮癣皮肤及周围的少量鼠皮肤切下，用10%福尔马林缓冲液固定，组织切片用光学显微镜进行组织学检查。每个组织切片的表皮面积以相等部分(equal segments)获得,表皮厚度以盲法(blinded manner)计算。移植前的一小片固定在10%福尔马林缓冲液中牛皮癣供体皮肤用于表皮厚度的零时间分析(zero-time assessment)。将 HuABC2组和对照组的表皮厚度对比，来评价HuABC2对牛皮癣的功效。HuABC2的影响还通过以下方式进一步评价(I)分析皮肤移植的组织学特征，来分析牛皮癣的特征，包括表皮增生和表皮突的形成，及(2)将组织切片染色，染料为对抗人CD3的抗体或其他细胞表面标记物，以认定浸润细胞。实施例11表位定位 ⑶122的胞外区由两个纤连蛋白III型结构域组成，称为Dl和D2(Wang，X.等.Science 310 :1159-1163(2005))。为定位由ABC2和ABClOl识别的CD122分子的抗原表位，所有的小鼠抗人⑶122抗体分子(来源于JN Biosciences)，他们结合于多种鼠/人嵌合⑶122 分子的形式，及在HEK293细胞的表面表达的人CD122分子的分离的结构域由流式细胞术确定。此外，小鼠抗 CD 122 单克隆抗体 Mik- β I (Tsudo 等.，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86 1982-1986(1989))包含进所述的分析，其作为本发明的产生的进一步的一个鼠抗⑶122抗体，ABCl 16，它相对于ABC2和ABClOl抑制CD 122与IL-2和IL-15相互作用的能力较低。描述于图18中的所述的6个不同的重组⑶122构建体被用于分析。HuDl/HuD2包含人 ⑶122 Dl (成熟蛋白的I位丙氨酸至101位苯丙氨酸，SEQ ID NO 49)和D2(成熟蛋白的第 102位谷氨酸至214位苏氨酸，SEQ ID NO 50)结构域。I位的丙氨酸相当于在人⑶122编码区N-末端计数过来第27个氨基酸。MoDl/MoD2包含鼠⑶122 Dl (成熟蛋白I位的丙氨酸至第102位的苯丙氨酸，SEQ ID N051)和D2(成熟蛋白的第103位的天冬氨酸至215 位的异亮氨酸，SEQ ID NO 52)结构域。HuDl/MoD2包含人Dl和鼠D2结构域(分别为SEQ ID NO 49 和 SEQ ID NO 52)。MoDl/HuD2 包含鼠 Dl 和人 D2 结构域(分别为 SEQ ID NO 51 和SEQ ID NO 50)。HuDl包含分离的人Dl结构域(SEQ ID NO :49)，及HuD2包含分离的人 D2结构域(SEQ ID N0:50)。所有的六个构建体的羧基末端融合接到其后为源自人CD55基因的GPI锚定信号的FLAG肽上(SEQ ID NO :53)。这些构建体被克隆进合适的质粒载体以在HEK293细胞表面上表达。ABC2、ABC101、ABC116和Mik-β I (5 μ g/ml)结合到表达6种CD 122构建体的转染子的测定通过标准程序由流式细胞术进行。细胞表面上表达这些构建体，可用大鼠抗FLAG肽抗体L5 (BioLegend, San Diego, CA)认证。能瞬时表达上述6种⑶122构建体中任何一种的 HEK293细胞首先与被测试抗体中的一种进行孵育。ABC2、ABC101、ABCl 16和Mik-β I与这些CD122构建体的结合特性在图18中总结。图中的符号“ + ”表示，对每个转染子，结合一个测试抗体的MCF (几何平均通道荧光)值是结合L5的MCF值的至少50%。符号表示，结合一个测试抗体的MCF值是结合L5的MCF值的低于10% (即，指示在结合可测量精确的边缘内缺乏结合特异性)。单独的人⑶122的Dl结构域对于结合ABC2和Mik-β I是足够的。单独的人CD122的D2结构域对于结合ABC116是足够的。对于结合ABC101，人的 Dl结构域和人D2结构域或鼠D2结构域之一是必要的，这显示，ABClOl的抗原表位需要来自Dl和D2结构域的氨基酸残基。更具体地定位ABC2、ABClOl和Mik-β I识别的CD122分子抗原表位，在HuDl/HuD2构建体(SEQ ID NO 54)中通过标准方法的定点诱变，来产生单氨基酸替换突变体。每个突变的HuDl/HuD2构建体的羧基末端融合接到其后为源自人CD55基因的GPI锚定信号的FLAG 肽上(SEQ ID N0:53)，这些构建体在HEK293细胞表面上被测定和表达。在分析中使用的 HuDl/HuD2突变体列于图19中。每个突变体名字中左边的字母、中间的数字、右侧的字母分别表示野生型⑶122中的一个氨基酸、⑶122中的位置、和突变体中的一个氨基酸。符号 “ + ”和在图中表示，当测试抗体浓度为100ng/ml时，结合一个测试抗体的MCF值是结合大鼠抗FLAG肽抗体L5的MCF值的至少50%、10%和20%之间、不超过10%。人⑶122位置39和41的氨基酸残基被确定为对Mik- β I结合到表达⑶122的细胞十分重要。Dionyssopoulou 等人(J. Immunol. Methods, 241 :83_95 (2000)),米用固相妝扫描技术，在此前曾报道，Mik-β I识别一个不连续抗原表位，该表位由D2结构域中位于2个区域的氨基酸形成；一个区域在106位的亮氨酸至148位的脯氨酸之间，另一个在170位的谷氨酸和202位的丙氨酸之间。我们的研究检测了细胞表面表达的CD122，显示D2结构域对 Mik-β I结合到⑶122不是关键的，而决定性的Mik-β I识别的残基只位于Dl结构域。Dl结构域的42、43和65位氨基酸残基被发现对于ABC2结合到人⑶122是非常重要的(图19)。对于ABClOl，Dl结构域的65和70位的氨基酸残基及D2结构域的第133位的残基则是重要的(图19)。因此，氨基酸残基的特殊设置与ABC2和ABClOl结合到⑶122 是有关的。HuABC2和HuABClOl与人⑶122的18个单氨基酸的取代突变体的结合显示于图19，且也用上面描述的步骤通过FACS检测，除了结合的人源化抗体用PE标记的羊抗人IgG抗体检测。HuABC2和ABC2表现出相同的与这18个⑶122突变体结合的模式。同样，HuABClOl 与这些⑶122突变体的结合模式跟ABC101相同。人⑶122的Dl和D2结构域的29个其他的单取代氨基酸突变体，实质上并不能降低HuABC2或HuABClOl与⑶122的结合。人⑶122上位于42、43、65和133的氨基酸残基，其发送IL-2和IL-15介导的信号的功能重要性用如下方法测量。全长⑶122(SEQ ID NO 73)的表达载体，其之前在实施例2 中用于产生TF-I β细胞，在位点42、43、65和133接受定点突变。产生的突变⑶122基因 (被指定为 F-R42A(SEQ ID NO :74)，F-R43A (SEQ ID NO :75)，F-G65T (SEQ ID NO 76)和 F-Hl33A(SEQ ID NO 77)(图20))携带了单氨基酸突变分别为，位置42的精氨酸到丙氨酸、43位的精氨酸到丙氨酸、65位的甘氨酸到苏氨酸及133位的组氨酸到丙氨酸。如实施例2所描述的，TF-I稳定的转染子随着这4个突变的⑶122基因每一个产生。当含有10% FCS的RPMI-1640培养基作为基本培养基时，TF-I在2ng/ml GM-CSF的存在下健康增长，在无GM-CSF时不生长。TF-I在存在200ng/ml IL-2或10ng/ml of IL-15/ IL-15Ra复合物(scIL-15/IL_15Ra ;—种可溶性的复合物人IL-15结合于人IL-15Ra 胞外域的一部分)时也不生长。TF-Ιβ，其可表达中度或高亲和力的IL-2/IL-15受体，其在GM-CSF、IL-2或IL-15/IL-15Ra复合物的存在下健康生长。表达人CD122的F-R42A、 F-G65T或F-H133A突变体的TF-I细胞，在IL-2或IL-15/IL-15R α复合物的存在下失去生长能力，而在GM-CSF存在下具有生长能力。表达F-R43A突变体的TF-I细胞在IL_2、IL-15/ IL15Ra复合物或GM-CSF存在下具有生长能力。SEQ ID N0S.和序列对应表 SEQ ID NO 1 ABC2 VH cDNA 序列ATGAAGTTGTGGTTAAACTGGGTTTTTCTTTTAACACTTTTACATGGTATCCAGTGTGAGGTGAAGCTGGTGGAATCTGGAGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGTTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAACTTCTGGGTTCACCTTCAGTGATTTCTACATGGAGTGGGTCCGCCAGCCTCCAGGGAAGAGACTGGAGTGGATTGCTGCAAGTAGAAACAAAGCTAATGATTATACAACAGAGTACAGTGCATCTGTGAAGGGTCGGTTCATCGTCTCCAGAGACACTTCCCAAAGCATCCTCTACCTTCAGATGAATGCCCTGAGAGCTGAGGACACTGCCATTTATTACTGTGCAAGATCCTACTATAGGTACGACGGTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO 2ABC2 VH氨基酸序列MKLWLNWVFLLTLLHGIQCEVKLVESGGGLVQPGGSLRLSCATSGFTFSDFYMEWVRQPPGKRLEWIAASRNKANDYTTEYSASVKGRFIVSRDTSQSILYLQMNALRAEDTAIYYCARSYYRYDGMDYWGQGTSVTVSSSEQ ID NO 3ABC2 VL cDNA 序列ATGGATTTTCAAGTGCAGATTTTCAGCTTCCTGCTAATCAGTGCCTCAGTCATAGTGTCCAGAGGACAAGTTGTTCTCACCCAGTCTCCAGTAATCATGTCTGCATCTCCAGGGGAGAAGGTCACCATGACCTGCAGTGCCATCTCAAGTGTAAGTTACATGTACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGATCCTCCCCCAGACTCCTGATTTATGACACATCCAACCTGGTTTCTGGAGTCCCTGTTCGCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACCTCTTACTCTCTCACAATCAGcCGAATGGAGGCTGAAGATGCTGCCACTTATTACTGCCAGCAGTGGAATACTTACCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAASEQ ID NO 4ABC2 VL氨基酸序列MDFQVQIFSFLLISASVIVSRGQVVLTQSPVIMSASPGEKVTMTCSAISSVSYMYWYQQKPGSSPRLLIYDTSNLVSGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQffNTYPYTFGGGTKLEIKSEQ ID NO 5ABClOl VH cDNA 序列ATGAGAGTGTTGATTCTTGTGTACCTGTTGACAGTCCTTCCTGGTATACTGTCTGATGTACAGCTTCAGGAGTCAGGACCTGGCCTGGTGAAGCCTTCTCAGACAGTGTCCCTCACCTGCACTGTCACTGGCTACTCTATCACTAATGATAATCACTGGTGGAACTGGATCCGGCAGGTTTCAGGAAGCAAACTGGAGTGGATGGGGTACATAGACTCCAGTGGTAGTTCTGACAACAATCCATCTCTCAAAAGTCAAATCTCCATCACTAGAGACACTTCCAAGAACCAGTTATTCCTGCAGTTGAACTCTGTGACTATTGAAGATATAGGCACATATTACTGTGCAAGAGGCGGTGGTAGGGATTACTATGGCATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA SEQ ID NO 6 ABClOl VH氨基酸序列MRVLILVYLLTVLPGILSDVQLQESGPGLVKPSQTVSLTCTVTGYSITNDNHWffNWIRQVSGSKLEWMGYIDSSGSSDNNPSLKSQISITRDTSKNQLFLQLNSVTIEDIGTYYCARGGGRDYYGMDYffGQGTSVTVSSSEQ ID NO 7ABClOl VL cDNA 序列ATGGAGACAGACACACTCCTGCTATGGGTGCTGCTGCTCTGGGTTCCAGGTTCCACTGGTGACATTGTGCTGACACAGTCTCCTGCTTCCTTAGCTGTATCTCTGGGGCAGAGGGCCACCATCTCATGCAGGGCCAGCCAAAGTGTCAGTACATCTAGCTATAGTTATGTTCACTGGTACCAACAGAAACCAGGACAGCCACCCAAACTCCTCATCAAGTATGCATCCAACCTAGAATCTGGGGTCCCTGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACCCTCAACATCCATCCTGTGGAGGAGGAGGATACTGCAACATATTACTGTCAGCACAGTTGGGACATTCCGTTCACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAASEQ ID NO 8ABClOl VL氨基酸序列METDTLLLWVLLLWVPGSTCDIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASQSVSTSSYS YVHWYQQKPGQPPKLLIKYASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDTATY YCQHSffDIPFTFGGGTKLEIK SEQ ID NO 9人源化ABC2 (HuABC2) VH基因的核苷酸序列ACTAGTACCACCATGAAGTTGTGGTTGAACTGGGTTTTTCTTTTGACACTTTTGCATGGAATCCAGTGTGAAGTGCAGCTCGTGGAATCTGGAGGAGGCTTGGTTCAGCCTGGGGGATCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGGTTCACCTTCAGTGATTTCTACATGGAGTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTCGAGTGGATTGCTGCAAGTAGAAACAAAGCTAATGATTATACAACAGAGTACAGTGCATCTGTGAAGGGTCGGTTCATCGTCTCCAGAGACGATTCCAAGAACTCACTCTACCTTCAGATGAATAGCCTGAAAACCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCAAGATCCTACTATAGGTACGACGGTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCACAGTCACCGTCTCCTCAGGTAAGTTGGCTTTTTTAAGCTTSEQ ID NO 10人源化ABC2 (HuABC2) VH氨基酸序列MKLWLNWVFLLTLLHGIQCEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDFYMEW VRQAPGKGLEWIAASRNKANDYTTEYSASVKGRFIVSRDDSKNSLYLQMNSLKTE DTAVYYCARSYYRYDGMDYWGQGTTVTVSS SEQ ID NO 11人源化ABC2 (HuABC2) VL基因的核苷酸序列GCTAGCACCACCATGGATTTTCAAGTGCAGATTTTCAGCTTCCTGCTGATCAGTGCCTCAGTCATCGTGTCCAGAGGAGAAATTGTGCTCACCCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAGAGAGCCACCCTCTCCTGCAGTGCCATCTCAAGTGTGAGTTACATGTACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGACAGGCTCCCAGACTCCTGATTTATGACACATCCAACCTGGTGTCTGGAGTCCCTGCCCGCTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACCGACTACACTCTCACAATCAGCAGCCTGGAGCCTGAAGATTTTGCCGTTTATTACTGCCAGCAGTGGAATACTTACCCCTACACCTTCGGAGGGGGGACCAAAGTGGAAATCAAACGTAAGTAGAATCCAAGAATTCSEQ ID NO 12人源化ABC2 (HuABC2) VL氨基酸序列MDFQVQIFSFLLISASVIVSRGEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSAISSVSYMY WYQQKPGQAPRLLIYDTSNLVSGVPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYCQ QffNTYPYTFGGGTKVEIK SEQ ID NO 13人源化ABClOl (HuABClOl) VH基因的核苷酸序列ACTAGTACCACCATGAGAGTGTTGATTCTTGTGTACCTGTTGACAGTCCTTCCTGGTATTCTGTCTCAGGTACAGCTTCAGGAGTCAGGACCTGGCCTGGTCAAGCCTTCTCAGACACTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGCTACTCTATCACTAATGATAATCACTGGTGGAACTGGATCCGGCAGCACCCAGGAAAGGGCCTGGAATGGATGGGGTACATCGACTCCAGTGGTTCCTCTGACAACAATCCATCTCTCAAAAGTCAAATCACCATCTCAAGAGACACTTCCAAGAACCAGCTCTCCCTGAAGTTGAGCTCTGTGACTGCCGCCGATACAGCCGTGTATTACTGTGCAAGAGGCGGAGGCAGGGATTACTATGGCATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCACCGTCACCGTCTCCTCAGGTAAGAATGGCCTCTCAAGCTTSEQ ID NO 14人源化ABClOl (HuABClOl) VH氨基酸序列MRVLILVYLLTVLPGILSQVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGYSITNDNHWffN WIRQHPGKGLEWMGYIDSSGSSDNNPSLKSQITISRDTSKNQLSLKLSSVTAADT AVYYCARGGGRDYYGMDYffGQGTTVTVSS SEQ ID NO 15人源化ABClOl (HuABClOl) VL基因的核苷酸序列 GCTAGCACCACCATGGAGACAGACACACTCCTGCTATGGGTGCTGCTGCTCTGGG TTCCAGGTTCCACTGGTGACATTGTGATGACACAGTCTCCTGACTCCTTAGGCGT ATCTCTGGGGGAGAGGGCCACCATCAACTGCAGGGCCAGCCAAAGTGTCAGCACA32TCTAGCTATAGTTATGTTCACTGGTACCAACAGAAACCAGGACAGCCACCCAAACTCCTCATCAAGTATGCATCCAACCTAGAATCTGGGGTCCCTGACAGGTTCAGCGGCTCTGGGTCTGGGACAGACTTCACCCTCACCATCAGCAGCCTGCAGGCTGAGGATGTGGCAGTCTATTACTGTCAGCACAGTTGGGACATTCCCTTCACATTCGGACAGGGGACCAAACTCGAAATCAAACGTAAGTAGTCTTCTCAGAATTCSEQ ID NO 16人源化ABClOl (HuABClOl) VL氨基酸序列METDTLLLWVLLLWVPGSTCDIVMTQSPDSLGVSLGERATINCRASQSVSTSSYSYVHWYQQKPGQPPKLLIKYASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSffDIPFTFGQGTKLEIKSEQ ID NO 17小鼠Y-13’ PCR引物GCCAGTGGATAGACAGATGGSEQ ID NO 18小鼠Y _2a 3’ PCR引物GCCAGTGGATAGACCGATGGSEQ ID NO 19小鼠Y-2b的3，PCR引物GCCAGTGGATAGACTGATGGSEQ ID NO 20小鼠κ的3’ PCR引物GATGGATACAGTTGGTGCAGCSEQ ID NO 21ABC2 VH信号肽序列MKLffLNWVFLLTLLHGIQCSEQ ID NO 22ABC2 VH CDRl氨基酸序列DFYMESEQ ID NO 23ABC2 VH CDR2氨基酸序列ASRNKANDYTTEYSASVKGSEQ ID NO 24ABC2 VH CDR3氨基酸序列SYYRYDGMDYSEQ ID NO 25成熟ABC2 VH氨基酸序列EVKLVESGGGLVQPGGSLRLSCATSGFTFSDFYMEWVRQPPGKRLEWIAASRNKANDYTTEYSASVKGRFIVSRDTSQSILYLQMNALRAEDTAIYYCARSYYRYDGMDYWGQGTSVTVSSSEQ ID NO 26ABC2 VL信号肽序列MDFQVQIFSFLLISASVIVSRGSEQ ID NO 27ABC2 VL CDRl氨基酸序列SAISSVSYMYSEQ ID NO 28ABC2 VL CDR2氨基酸序列DTSNLVSSEQ ID NO 29ABC2 VL CDR3氨基酸序列QQWNTYPYTSEQ ID NO 30成熟ABC2 VL的氨基酸序列QVVLTQSPVIMSASPGEKVTMTCSAISSVSYMYWYQQKPGSSPRLLIYDTSNLVSGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQWNTYPYTFGGGTKLEIKSEQ ID NO 31ABClOl VH信号肽序列MRVLILVYLLTVLPGILSSEQ ID NO 32ABClOl VH CDRl氨基酸序列NDNHWWNSEQ ID NO 33ABClOl VH CDR2氨基酸序列YIDSSGSSDNNPSLKSSEQ ID NO 34ABClOl VH CDR3氨基酸序列GGGRDYYGMDYSEQ ID NO 35成熟ABClOl VH的氨基酸序列DVQLQESGPGLVKPSQTVSLTCTVTGYSITNDNHWWNWIRQVSGSKLEWMGYIDSSGSSDNNPSLKSQISITRDTSKNQLFLQLNSVTIEDIGTYYCARGGGRDYYGMDYWGQGTSVTVSSSEQ ID NO 36ABClOl VL信号肽序列METDTLLLWVLLLWVPGSTGSEQ ID NO 37ABClOl VL CDRl氨基酸序列 RASQSVSTSSYSYVHSEQ ID NO 38ABClOl VL CDR2氨基酸序列YASNLESSEQ ID NO 39ABClOl VL CDR3氨基酸序列QHSffDIPFTSEQ ID NO 40成熟ABClOl VL的氨基酸序列DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASQSVSTSSYSYVHWYQQKPGQPPKLLIKYASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDTATYYCQHSWDIPFTFGGGTKLEIKSEQ ID NO 41成熟HuABC2 VH的氨基酸序列EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDFYMEWVRQAPGKGLEWIAASRNKA NDYTTEYSASVKGRFIVSRDDSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCARSYYRYDGMDY WGQGTTVTVSS SEQ ID NO 42成熟HuABC2 VL的氨基酸序列EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSAISSVSYMYWYQQKPGQAPRLLIYDTSNLVS GVPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQWNTYPYTFGGGTKVEIK SEQ ID NO 43成熟HuABClOl VH的氨基酸序列QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGYSITNDNHWWNWIRQHPGKGLEWMGYIDS SGSSDNNPSLKSQITISRDTSKNQLSLKLSSVTAADTAVYYCARGGGRDYYGMDY WGQGTTVTVSS SEQ ID NO 44成熟HuABClOl VL的氨基酸序列DIVMTQSPDSLGVSLGERATINCRASQSVSTSSYSYVHWYQQKPGQPPKLLIKYA SNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSWDIPFTFGQGTKLEI KSEQ ID NO 45人DA430129cDNA编码的成熟mature VH区的氨基酸序列EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSFSDHYMDWVRQAPVKGLEWVGRTRDKANSYTTEYAASVKGRFTVSRDDSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCVRGGAAMARGYQDGLDVffGQGTTVTVSSSEQ ID NO 46人M29469cDNA编码的成熟VL区的氨基酸序列 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNKA TGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSKWPLTFGGGTKVEIKSEQ ID NO 47人DA936142 cDNA编码的成熟VH区的氨基酸序列QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIDNTGFYWSWIRQHPGKGLEWIGNIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQLSLKLSSVTAADTAVYYCARDWGNSWDRGMDVffGQGTTVTVSSSEQ ID NO 48人Z46622cDNA编码的成熟VL区的氨基酸序列 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIY WASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPSYTFGQGTK LEIKSEQ ID NO 49人⑶122 Dl结构域的氨基酸序列AVNGTSQFTCFYNSRANISCVWSQDGALQDTSCQVHAWPDRRRWNQTCELLPVSQASWACNLILGAPDSQKLTTVDIVTLRVLCREGVRWRVMAIQDFKPFSEQ ID NO 50人⑶122 D2结构域的氨基酸序列ENLRLMAPISLQVVHVETHRCNISffEISQASHYFERHLEFEARTLSPGHTffEEAP LLTLKQKQEWICLETLTPDTQYEFQVRVKPLQGEFTTWSPWSQPLAFRTKPAALG KDTSEQ ID NO 51小鼠CD122 Dl结构域的氨基酸序列AVKNCSHLECFYNSRANVSCMWSHEEALNVTTCHVHAKSNLRHWNKTCELTLVRQASWACNLILGSFPESQSLTSVDLLDINVVCWEEKGWRRVKTCDFHPFSEQ ID NO 52小鼠CD122 D2结构域的氨基酸序列DNLRLVAPHSLQVLHIDTQRCNISWKVSQVSHYIEPYLEFEARRRLLGHSWEDASVLSLKQRQQWLFLEMLIPSTSYEVQVRVKAQRNNTGTWSPWSQPLTFRTRPADPMKEISEQ ID NO 53携带FLAG多肽和GPI锚定信号的区域的氨基酸序列 TGGGDYKDDDDKGGGPNKGSGTTSGTTRLLSGHTCFTLTGLLGTLVTMGLLT SEQ ID NO 54人⑶122 Dl和D2结构域的氨基酸序列AVNGTSQFTCFYNSRANISCVWSQDGALQDTSCQVHAWPDRRRWNQTCELLPVSQ ASWACNLILGAPDSQKLTTVDIVTLRVLCREGVRWRVMAIQDFKPFENLRLMAPI SLQVVHVETHRCNISffEISQASHYFERHLEFEARTLSPGHTffEEAPLLTLKQKQE WICLETLTPDTQYEFQVRVKPLQGEFTTWSPWSQPLAFRTKPAALGKDT SEQ ID NO 55人⑶122 Dl和D2结构域W38K突变体的氨基酸序列AVNGTSQFTCFYNSRANISCVWSQDGALQDTSCQVHAKPDRRRWNQTCELLPVSQ ASWACNLILGAPDSQKLTTVDIVTLRVLCREGVRWRVMAIQDFKPFENLRLMAPI SLQVVHVETHRCNISffEISQASHYFERHLEFEARTLSPGHTffEEAPLLTLKQKQE WICLETLTPDTQYEFQVRVKPLQGEFTTWSPWSQPLAFRTKPAALGKDT SEQ ID NO 56人⑶122 Dl和D2结构域P39S突变体的氨基酸序列 AVNGTSQFTCFYNSRANISCVWSQDGALQDTSCQVHAWSDRRRWNQTCELLPVSQ ASWACNLILGAPDSQKLTTVDIVTLRVLCREGVRWRVMAIQDFKPFENLRLMAPI SLQVVHVETHRCNISffEISQASHYFERHLEFEARTLSPGHTffEEAPLLTLKQKQE WICLETLTPDTQYEFQVRVKPLQGEFTTWSPWSQPLAFRTKPAALGKDT SEQ ID NO 57人⑶122 Dl和D2结构域D40A突变体的氨基酸序列 AVNGTSQFTCFYNSRANISCVWSQDGALQDTSCQVHAWPARRRWNQTCELLPVSQ ASWACNLILGAPDSQKLTTVDIVTLRVLCREGVRWRVMAIQDFKPFENLRLMAPI SLQVVHVETHRCNISffEISQASHYFERHLEFEARTLSPGHTffEEAPLLTLKQKQE WICLETLTPDTQYEFQVRVKPLQGEFTTWSPWSQPLAFRTKPAALGKDT SEQ ID NO 58人⑶122 Dl和D2结构域R41A突变体的氨基酸序列 AVNGTSQFTCFYNSRANISCVWSQDGALQDTSCQVHAWPDARRWNQTCELLPVSQ ASWACNLILGAPDSQKLTTVDIVTLRVLCREGVRWRVMAIQDFKPFENLRLMAPI SLQVVHVETHRCNISffEISQASHYFERHLEFEARTLSPGHTffEEAPLLTLKQKQE WICLETLTPDTQYEFQVRVKPLQGEFTTWSPWSQPLAFRTKPAALGKDT SEQ ID NO 59人⑶122 Dl和D2结构域R42A突变体的氨基酸序列 AVNGTSQFTCFYNSRANISCVWSQDGALQDTSCQVHAWPDRARWNQTCELLPVSQ ASWACNLILGAPDSQKLTTVDIVTLRVLCREGVRWRVMAIQDFKPFENLRLMAPI SLQVVHVETHRCNISffEISQASHYFERHLEFEARTLSPGHTffEEAPLLTLKQKQE WICLETLTPDTQYEFQVRVKPLQGEFTTWSPWSQPLAFRTKPAALGKDT SEQ ID NO 60人⑶122 Dl和D2结构域R43A突变体的氨基酸序列 AVNGTSQFTCFYNSRANISCVWSQDGALQDTSCQVHAWPDRRAWNQTCELLPVSQ ASWACNLILGAPDSQKLTTVDIVTLRVLCREGVRWRVMAIQDFKPFENLRLMAPI SLQVVHVETHRCNISffEISQASHYFERHLEFEARTLSPGHTffEEAPLLTLKQKQE WICLETLTPDTQYEFQVRVKPLQGEFTTWSPWSQPLAFRTKPAALGKDT SEQ ID NO 61人⑶122 Dl和D2结构域W44A突变体的氨基酸序列 AVNGTSQFTCFYNSRANISCVWSQDGALQDTSCQVHAWPDRRRANQTCELLPVSQ ASWACNLILGAPDSQKLTTVDIVTLRVLCREGVRWRVMAIQDFKPFENLRLMAPI SLQVVHVETHRCNISffEISQASHYFERHLEFEARTLSPGHTffEEAPLLTLKQKQEWICLETLTPDTQYEFQVRVKPLQGEFTTWSPWSQPLAFRTKPAALGKDT SEQ ID NO 62人⑶122 Dl和D2结构域L64A突变体的氨基酸序列 AVNGTSQFTCFYNSRANISCVWSQDGALQDTSCQVHAWPDRRRWNQTCELLPVSQ ASWACNLIAGAPDSQKLTTVDIVTLRVLCREGVRWRVMAIQDFKPFENLRLMAPI SLQVVHVETHRCNISffEISQASHYFERHLEFEARTLSPGHTffEEAPLLTLKQKQE WICLETLTPDTQYEFQVRVKPLQGEFTTWSPWSQPLAFRTKPAALGKDT SEQ ID NO 63人⑶122 Dl和D2结构域G65A突变体的氨基酸序列 AVNGTSQFTCFYNSRANISCVWSQDGALQDTSCQVHAWPDRRRWNQTCELLPVSQ ASWACNLILAAPDSQKLTTVDIVTLRVLCREGVRWRVMAIQDFKPFENLRLMAPI SLQVVHVETHRCNISffEISQASHYFERHLEFEARTLSPGHTffEEAPLLTLKQKQE WICLETLTPDTQYEFQVRVKPLQGEFTTWSPWSQPLAFRTKPAALGKDT SEQ ID NO 64人⑶122 Dl和D2结构域G65T突变体的氨基酸序列 AVNGTSQFTCFYNSRANISCVWSQDGALQDTSCQVHAWPDRRRWNQTCELLPVSQ ASWACNLILTAPDSQKLTTVDIVTLRVLCREGVRWRVMAIQDFKPFENLRLMAPI SLQVVHVETHRCNISffEISQASHYFERHLEFEARTLSPGHTffEEAPLLTLKQKQE WICLETLTPDTQYEFQVRVKPLQGEFTTWSPWSQPLAFRTKPAALGKDT SEQ ID NO 65人⑶122 Dl和D2结构域A66S突变体的氨基酸序列 AVNGTSQFTCFYNSRANISCVWSQDGALQDTSCQVHAWPDRRRWNQTCELLPVSQ ASWACNLILGSPDSQKLTTVDIVTLRVLCREGVRWRVMAIQDFKPFENLRLMAPI SLQVVHVETHRCNISffEISQASHYFERHLEFEARTLSPGHTffEEAPLLTLKQKQE WICLETLTPDTQYEFQVRVKPLQGEFTTWSPWSQPLAFRTKPAALGKDT SEQ ID NO 66人⑶122 Dl和D2结构域S69A突变体的氨基酸序列 AVNGTSQFTCFYNSRANISCVWSQDGALQDTSCQVHAWPDRRRWNQTCELLPVSQ ASWACNLILGAPDAQKLTTVDIVTLRVLCREGVRWRVMAIQDFKPFENLRLMAPI SLQVVHVETHRCNISffEISQASHYFERHLEFEARTLSPGHTffEEAPLLTLKQKQE WICLETLTPDTQYEFQVRVKPLQGEFTTWSPWSQPLAFRTKPAALGKDT SEQ ID NO 67人⑶122 Dl和D2结构域Q70A突变体的氨基酸序列 AVNGTSQFTCFYNSRANISCVWSQDGALQDTSCQVHAWPDRRRWNQTCELLPVSQ ASWACNLILGAPDSAKLTTVDIVTLRVLCREGVRWRVMAIQDFKPFENLRLMAPI SLQVVHVETHRCNISffEISQASHYFERHLEFEARTLSPGHTffEEAPLLTLKQKQE WICLETLTPDTQYEFQVRVKPLQGEFTTWSPWSQPLAFRTKPAALGKDT SEQ ID NO 68人⑶122 Dl和D2结构域Q70K突变体的氨基酸序列AVNGTSQFTCFYNSRANISCVWSQDGALQDTSCQVHAWPDRRRWNQTCELLPVSQ ASWACNLILGAPDSKKLTTVDIVTLRVLCREGVRWRVMAIQDFKPFENLRLMAPI SLQVVHVETHRCNISffEISQASHYFERHLEFEARTLSPGHTffEEAPLLTLKQKQE WICLETLTPDTQYEFQVRVKPLQGEFTTWSPWSQPLAFRTKPAALGKDT SEQ ID NO 69人⑶122 Dl和D2结构域K71A突变体的氨基酸序列 AVNGTSQFTCFYNSRANISCVWSQDGALQDTSCQVHAWPDRRRWNQTCELLPVSQ ASWACNLILGAPDSQALTTVDIVTLRVLCREGVRWRVMAIQDFKPFENLRLMAPI SLQVVHVETHRCNISffEISQASHYFERHLEFEARTLSPGHTffEEAPLLTLKQKQE WICLETLTPDTQYEFQVRVKPLQGEFTTWSPWSQPLAFRTKPAALGKDT SEQ ID NO 70人⑶122 Dl和D2结构域S132A突变体的氨基酸序列 AVNGTSQFTCFYNSRANISCVWSQDGALQDTSCQVHAWPDRRRWNQTCELLPVSQ ASWACNLILGAPDSQKLTTVDIVTLRVLCREGVRWRVMAIQDFKPFENLRLMAPI SLQVVHVETHRCNISffEISQAAHYFERHLEFEARTLSPGHTffEEAPLLTLKQKQE WICLETLTPDTQYEFQVRVKPLQGEFTTWSPWSQPLAFRTKPAALGKDT SEQ ID NO 71人⑶122 Dl和D2结构域H133A突变体的氨基酸序列 AVNGTSQFTCFYNSRANISCVWSQDGALQDTSCQVHAWPDRRRWNQTCELLPVSQ ASWACNLILGAPDSQKLTTVDIVTLRVLCREGVRWRVMAIQDFKPFENLRLMAPI SLQVVHVETHRCNISffEISQASAYFERHLEFEARTLSPGHTffEEAPLLTLKQKQE WICLETLTPDTQYEFQVRVKPLQGEFTTWSPWSQPLAFRTKPAALGKDT SEQ ID NO 72人⑶122 Dl和D2结构域Y134A突变体的氨基酸序列AVNGTSQFTCFYNSRANISCVWSQDGALQDTSCQVHAWPDRRRWNQTCELLPVSQASWACNLILGAPDSQKLTTVDIVTLRVLCREGVRWRVMAIQDFKPFENLRLMAPISLQVVHVETHRCNISffEISQASHAFERHLEFEARTLSPGHTffEEAPLLTLKQKQEWICLETLTPDTQYEFQVRVKPLQGEFTTWSPWSQPLAFRTKPAALGKDTSEQ ID NO 73全长人CD 122氨基酸序列AVNGTSQFTCFYNSRANISCVWSQDGALQDTSCQVHAWPDRRRWNQTCELLPVSQ ASWACNLILGAPDSQKLTTVDIVTLRVLCREGVRWRVMAIQDFKPFENLRLMAPI SLQVVHVETHRCNISffEISQASHYFERHLEFEARTLSPGHTffEEAPLLTLKQKQE WICLETLTPDTQYEFQVRVKPLQGEFTTWSPffSQPLAFRTKPAALGKDTIPWLGH LLVGLSGAFGFIILVYLLINCRNTGPWLKKVLKCNTPDPSKFFSQLSSEHG⑶VQ KWLSSPFPSSSFSPGGLAPEISPLEVLERDKVTQLLLQQDKVPEPASLSSNHSLT SCFTNQGYFFFHLPDALEIEACQVYFTYDPYSEEDPDEGVAGAPTGSSPQPLQPL SGEDDAYCTFPSRDDLLLFSPSLLGGPSPPSTAPGGSGAGEERMPPSLQERVPRD WDPQPLGPPTPGVPDLVDFQPPPELVLREAGEEVPDAGPREGVSFPWSRPPGQGEFRALNARLPLNTDAYLSLQELQGQDPTHLV SEQ ID NO 74全长人⑶122的F-R42A突变体的氨基酸序列AVNGTSQFTCFYNSRANISCVWSQDGALQDTSCQVHAWPDRARWNQTCELLPVSQASWACNLILGAPDSQKLTTVDIVTLRVLCREGVRWRVMAIQDFKPFENLRLMAPISLQVVHVETHRCNISffEISQASHYFERHLEFEARTLSPGHTffEEAPLLTLKQKQEWICLETLTPDTQYEFQVRVKPLQGEFTTWSPffSQPLAFRTKPAALGKDTIPWLGHLLVGLSGAFGFIILVYLLINCRNTGPWLKKVLKCNTPDPSKFFSQLSSEHG⑶VQKWLSSPFPSSSFSPGGLAPEISPLEVLERDKVTQLLLQQDKVPEPASLSSNHSLTSCFTNQGYFFFHLPDALEIEACQVYFTYDPYSEEDPDEGVAGAPTGSSPQPLQPLSGEDDAYCTFPSRDDLLLFSPSLLGGPSPPSTAPGGSGAGEERMPPSLQERVPRDWDPQPLGPPTPGVPDLVDFQPPPELVLREAGEEVPDAGPREGVSFPWSRPPGQGEFRALNARLPLNTDAYLSLQELQGQDPTHLVSEQ ID NO 75全长人⑶122的F-R43A突变体的氨基酸序列AVNGTSQFTCFYNSRANISCVWSQDGALQDTSCQVHAWPDRRAWNQTCELLPVSQASWACNLILGAPDSQKLTTVDIVTLRVLCREGVRWRVMAIQDFKPFENLRLMAPISLQVVHVETHRCNISffEISQASHYFERHLEFEARTLSPGHTffEEAPLLTLKQKQEWICLETLTPDTQYEFQVRVKPLQGEFTTWSPffSQPLAFRTKPAALGKDTIPWLGHLLVGLSGAFGFIILVYLLINCRNTGPWLKKVLKCNTPDPSKFFSQLSSEHG⑶VQKWLSSPFPSSSFSPGGLAPEISPLEVLERDKVTQLLLQQDKVPEPASLSSNHSLTSCFTNQGYFFFHLPDALEIEACQVYFTYDPYSEEDPDEGVAGAPTGSSPQPLQPLSGEDDAYCTFPSRDDLLLFSPSLLGGPSPPSTAPGGSGAGEERMPPSLQERVPRDWDPQPLGPPTPGVPDLVDFQPPPELVLREAGEEVPDAGPREGVSFPWSRPPGQGEFRALNARLPLNTDAYLSLQELQGQDPTHLVSEQ ID NO 76全长人⑶122的F-G65T突变体的氨基酸序列AVNGTSQFTCFYNSRANISCVWSQDGALQDTSCQVHAWPDRRRWNQTCELLPVSQASWACNLILTAPDSQKLTTVDIVTLRVLCREGVRWRVMAIQDFKPFENLRLMAPISLQVVHVETHRCNISffEISQASHYFERHLEFEARTLSPGHTffEEAPLLTLKQKQEWICLETLTPDTQYEFQVRVKPLQGEFTTWSPffSQPLAFRTKPAALGKDTIPWLGHLLVGLSGAFGFIILVYLLINCRNTGPWLKKVLKCNTPDPSKFFSQLSSEHG⑶VQKWLSSPFPSSSFSPGGLAPEISPLEVLERDKVTQLLLQQDKVPEPASLSSNHSLTSCFTNQGYFFFHLPDALEIEACQVYFTYDPYSEEDPDEGVAGAPTGSSPQPLQPLSGEDDAYCTFPSRDDLLLFSPSLLGGPSPPSTAPGGSGAGEERMPPSLQERVPRDWDPQPLGPPT PGVPDLVDFQPPPELVLREAGEEVPDAGPREGVS FPffSRPPGQGEFRALNARLPLNTDAYLSLQELQGQDPTHLVSEQ ID NO 77全长人⑶122的F-Hl33A突变体的氨基酸序列AVNGTSQFTCFYNSRANISC VWSQDGALQDTSCQVHAWPDRRRWNQTCELLPVSQ ASWACNLILGAPDSQKLTTVDIVTLRVLCREGVRWRVMAIQDFKPFENLRLMAPI SLQVVHVETHRCNISffEISQASAYFERHLEFEARTLSPGHTffEEAPLLTLKQKQE WICLETLTPDTQYEFQVRVKPLQGEFTTWSPffSQPLAFRTKPAALGKDTIPWLGH LLVGLSGAFGFIILVYLLINCRNTGPWLKKVLKCNTPDPSKFFSQLSSEHG⑶VQ KWLSSPFPSSSFSPGGLAPEISPLEVLERDKVTQLLLQQDKVPEPASLSSNHSLT SCFTNQGYFFFHLPDALEIEACQVYFTYDPYSEEDPDEGVAGAPTGSSPQPLQPL SGEDDAYCTFPSRDDLLLFSPSLLGGPSPPSTAPGGSGAGEERMPPSLQERVPRD WDPQPLGPPTPGVPDLVDFQPPPELVLREAGEEVPDAGPREGVSFPWSRPPGQGE FRALNARLPLNTDAYLSLQELQGQDPTHLV
权利要求
1.一种单克隆抗体，所述单克隆抗体特异性结合CD122并且能阻止IL-2和IL-15与含有⑶122和⑶132的受体结合。
2.根据权利要求I所述的单克隆抗体，其与CD122的结合可以被CD122残基42、43和/或133替换为丙氨酸和/或残基65替换为苏氨酸和/或残基70替换为赖氨酸所阻止，残基编号如SEQ ID NO:73中所示。
3.根据权利要求I所述的单克隆抗体，其与CD122的结合可以被CD122残基42和/或43替换为丙氨酸和/或残基65替换为苏氨酸所阻止，残基编号如SEQ ID NO: 73中所示。
4.根据权利要求I所述的单克隆抗体，其与CD122的结合可以被CD122残基65替换为苏氨酸和/或残基70替换为赖氨酸和/或残基133替换为丙氨酸所阻止，残基编号如SEQID NO:73中所示。
5.根据权利要求I所述的单克隆抗体，其特异性结合包含残基42的抗原表位，残基编号如SEQ ID NO:73中所示。
6.根据权利要求I所述的单克隆抗体，其特异性结合包含残基65的抗原表位，残基编号如SEQ ID NO:73中所示。
7.根据权利要求I所述的单克隆抗体，其特异性结合包含SEQID NO:7中残基133的⑶122的抗原表位。
8.根据权利要求I所述的单克隆抗体，其特异性结合包含SEQID NO:73中残基42、43、65、70和/或133的CD 122的抗原表位。
9.根据权利要求I所述的单克隆抗体，其特异性结合包含SEQID NO:73中残基42、43和65的⑶122的抗原表位。
10.根据权利要求I所述的单克隆抗体，其特异性结合包含SEQID NO:73中残基65、70和133的CD 122的抗原表位。
11.根据权利要求I所述的单克隆抗体，其特异性结合位于SEQID NO:73序列的纤连蛋白III型结构域I中的⑶122的抗原表位。
12.根据权利要求I所述的单克隆抗体，其特异性结合位于SEQID NO:73序列的纤连蛋白III型结构域I和2中的⑶122的抗原表位。
13.根据前述任一项权利要求所述的单克隆抗体，其与CD122的结合在检测上不被SEQID NO:73中残基39或41替换为丙氨酸时所阻止。
14.根据前述任一项权利要求所述的单克隆抗体，其阻止IL-2与包含⑶122、⑶132和⑶25的受体结合。
15.根据前述任一项权利要求所述的单克隆抗体，其阻止反式结合于IL-15Ra的IL-15或它的片段与包含⑶122和⑶132的受体结合。
16.根据前述任一项权利要求所述的单克隆抗体，其阻止IL-15与包含⑶122、⑶132和IL-15RQ的受体结合。
17.根据前述任一项权利要求所述的单克隆抗体，其中，当所述抗体相对于IL-2或IL-15呈现为不大于100倍摩尔过量时，所述的结合的抑制至少是抑制30%。
18.根据权利要求I所述的单克隆抗体，其与抗体ABC2竞争特异性结合CD122且其特征在于SEQ ID NO :30的一个成熟的轻链可变区和SEQ ID NO :25的一个成熟的重链可变区，或其与抗体ABClOl竞争特异性结合⑶122且其特征在于SEQ ID NO 40的一个成熟的轻链可变区和SEQ ID NO :35的一个成熟的重链可变区。
19.根据权利要求I所述的单克隆抗体，其结合于与ABC2或ABClOl相同的CD122上的抗原表位。
20.根据权利要求I所述的单克隆抗体，其包含三个轻链⑶Rs和三个重链⑶Rs，其中每个CDR至少有90%的序列与源自ABC2(SEQ ID NOS :27-29轻链和22-24重链)或ABClOl(SEQ ID NOS:37-39轻链和32-34重链)的一个相应CDR相同。
21.根据权利要求I所述的单克隆抗体，其包含ABC2或ABClOl的三个轻链⑶Rs和三个重链⑶Rs。
22.根据前述任一项权利要求所述的单克隆抗体，其为嵌合的、人源化的、饰面的或人的。
23.根据前述任一项权利要求所述的单克隆抗体，其具有人IgGlK同种型。
24.根据前述任一项权利要求所述的单克隆抗体，其是完整的抗体。
25.根据权利要求1-23中任一项所述的单克隆抗体，其是单链抗体、Fab或Fab’2片段。
26.一种特异结合CD122的人源化的或嵌合的ABC2抗体，其中ABC2是小鼠抗体且该ABC2抗体特征在于SEQ ID NO :30的一个成熟的轻链可变区和SEQ ID NO :25的一个成熟的重链可变区。
27.根据权利要求26所述的人源化抗体，其包含一条含有ABC2轻链(SEQID N0:30)三个CDRs的人源化的轻链，及一条含有ABC2重链(SEQ ID NO:25)三个CDRs的人源化的重链。
28.根据权利要求26所述的人源化抗体，其包含一个与SEQID NO:42至少90%相同的人源化成熟轻链可变区，及一个与SEQ ID NO. 41至少90%氨基酸序列相同的人源化重链可变区。
29.根据权利要求26所述的人源化抗体，其所提供的位点H28、H48、H49、H68、H93和L71，该位点通过Kabat编号，分别被残基T、I、A、I、A和Y占据。
30.根据权利要求29所述的人源化抗体，其进一步包括位点H42，该通过Kabat编号的位点被G占据。
31.根据权利要求26所述的人源化抗体，其中所述的轻链CDRs是SEQID N0S. 27-29，所述的重链 CDRs 是 SEQ ID NOS :22-24ο
32.一种特异结合⑶122的人源化的或嵌合的ABClOl抗体，其中ABClOl的特征在于SEQ ID NO 40的一个成熟的轻链可变区和SEQ ID NO 35的一个成熟的重链可变区。
33.根据权利要求32所述的人源化抗体，其包含一条含有SEQIDN0:40三个⑶Rs的人源化的轻链，及一条含有SEQ ID NO: 35三个⑶Rs的人源化的重链。
34.根据权利要求32所述的人源化抗体，其包含一个与SEQID N0:44至少90%相同的人源化成熟轻链可变区，及一个与SEQ ID NO. 43至少90%氨基酸序列相同的人源化重链可变区。
35.根据权利要求32所述的人源化抗体，其所提供的位点H27、H30、H48、H66、H67、H71和L49，该位点通过Kabat编号，分别被残基Y、T、M、Q、I、R和K占据。
36.根据权利要求32所述的人源化抗体，其中所述的轻链⑶Rs是SEQID N0S. 37-39且所述的重链CDRs是SEQ ID NOS. 32-34。
37.一种含有以上任一项权利要求定义的抗体和药学上可接受的载体的药物组合物。
38.一种在患者体内抑制不希望的免疫应答的方法，包括给患者施用以上任一项权利要求的抗体的有效方案。
39.根据权利要求38所述的方法，其中所述患者有自身免疫疾病。
40.根据权利要求38所述的方法，其中所述疾病是多发性硬化症、类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、糖尿病、牛皮癣、腹腔疾病或葡萄膜炎。
41.根据权利要求38所述的方法，其中所述患者有哮喘或过敏。
42.根据权利要求38所述的方法，其中所述患者有移植物抗宿主疾病。
43.根据权利要求38所述的方法，其中所述患者有宿主抗移植物疾病。
44.一种在患者体内治疗肿瘤的方法，包括给患者施用以上任一项权利要求的抗体的有效方案。
45.根据权利要求44所述的方法，其中所述肿瘤表达可检测到的CD122。
46.一个SEQ ID NO :73中的不超过100个连续残基的分离片段，包括43、65和133残基中的一个或多个。
47.根据权利要求所述的分离的片段，其包含SEQID NO:73的残基43和65。
48.根据权利要求所述的分离的片段，其包含SEQID N0:73的残基65和133。
49.根据权利要求所述的分离的片段，其包含SEQID N0:73中的10个或更少的连续残基。
50.根据权利要求所述的分离的片段，其连接到一个载体，该载体可帮助诱发应对所述片段的抗体的产生，并且/或者该载体作为一个组合物的组件与佐剂一起以帮助诱发应对所述片段的抗体的产生。
全文摘要
本发明提供了异性结合CD122的单克隆抗体，而CD122是IL-2和IL-15受体的一个组成部分。通过抑制这些细胞因子与它们的受体结合，所述的单克隆抗体具有实质上抑制IL-2和IL-15介导的功能的能力。所述的单克隆抗体可被用于抑制不希望发生的免疫应答或治疗肿瘤，以及其他。
文档编号A61P35/00GK102939305SQ201180018102
公开日2013年2月20日 申请日期2011年4月7日 优先权日2010年4月8日
发明者J.·云·曹, 鹤下直哉, 尼古拉斯·F.·兰多尔菲, 尚卡尔·库马尔 申请人:Jn生物科学有限责任公司