专利名称：一组末端酰胺化的抗菌肽的制作方法
技术领域：
本发明涉及一组末端酰胺化的抗菌肽、其制备方法及在制备治疗细菌、真菌感染的药物中的应用，该抗菌肽对细菌和真菌及其耐药菌株有显著的杀菌活性。
背景技术：
抗菌肽是生物体经诱导产生的一种具有生物活性的小分子多肽，一般由20-60个氨基酸组成，分子量在2000-7000D左右。随着医学免疫学和分子生物学的迅速发展，抗菌肽的研究越来越成为生物技术与生物医药领域中的热门课题。至今为止，在许多动物(尤其是昆虫)、植物、微生物和人体上己发现了超过200多种抗菌肽，这类短肽不仅对细菌、真菌有广谱的杀菌作用，而且对病毒、原虫及癌细胞也有攻击作用。临床试验也表明，在机体感染病菌或可能导致病菌感染的情况下，抗菌肽能快速杀灭已侵入的病菌，并且能阻止病菌的继续侵染。随着对抗菌肽一级结构和高级结构研究的不断深入，己有许多研究者对这些抗菌肽的结构和功能进行研究，发现在模拟膜的疏水环境下，分子中的α “螺旋度与其杀菌活性密切相关。另外研究结果表明抗菌肽是通过破坏膜的完整性使得细菌细胞膜渗漏而杀死细菌(Nakajima Y. et al.，J. Biol. Chem, 262 :1665_1669 ；ZasloffM. Nature, 2002,415 389-395)。因此有人试图通过增加分子中α-螺旋结构或提高多肽中含正电荷氨基酸的比 歹舌个生白勺$月太(Broth W. B. et al. ,Antimicrobial Agents Chemotherapy, 2001,45 1894-1895 ；Hong S. Y. etal.，P印tides，2001，22 :1669_1674)。

发明内容
本发明涉及一种由SEQ. ID NO 1所示式I的氨基酸序列组成的抗菌肽Rl-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-R2-NH2(SE Q. ID NO 1)式 I其中Rl 是 Leu, lie, Val, Phe, Lys-Leu, Lys-Ile, Lys-Val, Lys-Phe, Arg-Leu, Arg-Ile, Arg-Val, Arg-Phe 或不存在；R2 :Val, Val-Lys, Val-Arg, Val-Lys-Lys, Val-Lys-Arg, Val-Lys-Lys-Leu, Val-Lys_Lys_11e , Val-Lys-Lys-Val, Val-Lys-Lys-Phe , Val-Lys-Arg-Leu, Val-Lys-Arg-Ile, Val-Lys-Arg-Val, Val-Lys-Arg-Phe, Val-Arg-Lys, Val-Arg-Arg, Val-Arg-Lys-Leu, Val-Arg_Lys_11e , Val-Arg-Lys-Val, Val-Arg-Lys-Phe , Val-Arg-Arg-Leu, Val-Arg-Arg-11 e, Val-Arg-Arg-Val, Val-Arg-Arg-Phe 或不存在。所述抗菌肽的进一步特征在于，该抗菌肽的结构为以下4种Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-NH2 (SEQ. ID NO 2)，
Rl-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-NH2 (SEQ. ID NO :3)，Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-R2-NH2 (SEQ. ID NO 4)，Rl-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-R2-NH2(SE Q. ID NO 5)之一，Rl 是 Leu, lie, Val, Phe, Lys-Leu, Lys-Ile, Lys-Val, Lys-Phe, Arg-Leu, Arg-Ile, Arg-Val 或 Arg-Phe ；R2 Mi Val, Val-Lys, Val-Arg, Val-Lys-Lys, Val-Lys-Arg, Val-Lys-Lys-Leu, Val-Lys-Lys-IIe , Val-Lys-Lys-Val, Val-Lys-Lys-Phe, Val-Lys-Arg-Leu, Val-Lys-Arg-Ile, Val-Lys-Arg-Val, Val-Lys-Arg-Phe ；Val-Arg-Lys, Val-Arg-Arg, Val-Arg-Lys-Leu, Val-Arg-Lys-Ile, Val-Arg-Lys-Val, Val-Arg-Lys-Phe, Val-Arg-Arg-Leu, Val-Arg-Arg-Ile, Val-Arg-Arg-Val 或 Val-Arg-Arg-Phe0所述抗菌肽的进一步特征在于，该抗菌肽的结构为Rl-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-NH2,其中 Rl 是 Leu，lie, Val，Phe，Lys-Leu，Lys-IIe，Lys-Val，Lys-Phe，Arg-Leu，Arg-IIe，Arg-Val 或 Arg-Phe0所述抗菌肽的进一步特征在于，该抗菌肽的结构为Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-R2-NH2, 其中 R2 是 Val， Val-Lys, Val-Arg, Val-Lys-Lys, Val-Lys-Arg, Val-Lys-Lys-Leu, Val-Lys_Lys_I1e， Val-Lys-Lys-Val, Val-Lys-Lys-Phe, Val-Lys-Arg-Leu, Val-Lys-Arg-IIe, Val-Lys-Arg-Val, Val-Lys-Arg-Phe ；Val-Arg-Lys, Val-Arg-Arg, Val-Arg-Lys-Leu, Val-Arg-Lys-I1e, Val-Arg-Lys-Val, Val-Arg-Lys-Phe， Val-Arg-Arg-Leu, Va 1 -Arg-Arg-11 e, Val-Arg-Arg-Val 或 Val-Arg-Arg-Phe0所述抗菌肽的进一步特征在于，该抗菌肽的结构为Rl-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-R2-N H2, 其中 Rl 是 Leu, lie, Val, Phe, Lys-Leu, Lys-Ile, Lys-Val, Lys-Phe, Arg-Leu, Arg-Ile, Arg-Val 或 Arg-Phe ；R2 是 Val，Val-Lys, Val-Arg, Val-Lys-Lys, Val-Lys-Arg, Val-Lys-Lys-Leu, Val-Lys_Lys_I1e， Val-Lys-Lys-Val, Val-Lys-Lys-Phe, Val-Lys-Arg-Leu, Val-Lys-Arg-IIe, Val-Lys-Arg-Val, Val-Lys-Arg-Phe ；Val-Arg-Lys, VaI-Arg-Arg,Val-Arg-Lys-Leu,Val-Arg-Lys-I le,Val-Arg-Lys-Val,Val-Arg-Lys-Phe, Val-Arg-Arg-Leu, Va 1 -Arg-Arg-11 e, Val-Arg-Arg-Val 或 Val-Arg-Arg-Phe0所述抗菌肽的进一步特征在于，具有如下序列Leu-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-LyS-Ser-Val-NH2 (S EQ. ID NO 6)Leu-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-N H2(SEQ. ID NO 7)Leu-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-L yS-NH2 (SEQ. ID NO 8)
Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-NH2 (SEQ. ID NO 9)Leu-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-NH2 (SEQ. ID NO 10)Lys-Leu-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-LyS-Ser-NH2 (S EQ. ID NO 11)Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Arg-N H2 (SEQ. ID NO 12) Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-LyS-Ser-Val-Arg-NH2 (S EQ. ID NO 13)Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Arg-Lys-N H2 (SEQ. ID NO 14)Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Arg-Arg-N H2 (SEQ. ID NO 15)Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Lys-I Ie-NH2 (SEQ. ID NO 16)Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Lys-V al-NH2 (SEQ. ID NO 17)Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Lys-P he-NH2 (SEQ. ID NO 18)Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Arg-I Ie-NH2 (SEQ. ID NO 19)Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Arg-L eu-NH2(SEQ. ID NO 20)Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Arg-V al-NH2(SEQ. ID NO 21)Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Arg-P he-NH2(SEQ. ID NO 22)Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Arg-Arg-I Ie-NH2(SEQ. ID NO 23)Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Arg-Arg-L eu-NH2 (SEQ. ID NO 24)Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Arg-Arg-V al-NH2(SEQ. ID NO 25)Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Arg-Arg-P he-NH2(SEQ. ID NO 26)Ile-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-L ys-NH2(SEQ. ID NO 27)Val-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-LyS-NH2(SEQ. ID NO 28)Phe-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-L yS-NH2(SEQ. ID NO 29)Leu-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-A rg-NH2(SEQ. ID NO 30)Ile-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-A rg-NH2(SEQ. ID NO 31)Val-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-A rg-NH2(SEQ. ID NO 32)Phe-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-A rg-NH2(SEQ. ID NO 33)Leu-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Arg-A rg-NH2 (SEQ. ID NO 34)Ile-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Arg-A rg-NH2(SEQ. ID NO 35)Val-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Arg-A rg-NH2(SEQ. ID NO 36)Phe-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Arg-A rg-NH2(SEQ. ID NO 37)IIe-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-NH2 (SEQ. ID NO 38)Val-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-NH2 (SEQ. ID NO 39)Phe-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-NH2 (SEQ. ID NO 40)Arg-Ile-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-NH2 (S EQ. ID NO 41)Arg-Val-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-NH2 (S EQ. ID NO 42) Arg-Phe-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-NH2 (S EQ. ID NO 43)Arg-Leu-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-NH2 (S EQ. ID NO 44)Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-NH2 (S EQ. ID NO 45)Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Lys-N H2 (SEQ. ID NO 46)Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Lys-L eu-NH2 (SEQ. ID NO 47)。
所述抗菌肽的进一步特征在于，一种药物组合物，包括治疗有效量的权利要求1-6 的任一项所述的抗菌肽或者其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体或稀释剂。所述抗菌肽的进一步特征在于，制备用于治疗细菌或真菌感染药物中的用途。本发明提供了此类抗菌肽的制备方法，本发明采用微波促进Fmoc/tBu正交保护固相合成策略高效快速地合成得到此类抗菌肽的肽链。采用微波促进Fmoc/tBu正交保护固相合成策略，于固相载体上先合成得到载有第一个Fmoc保护氨基酸的树脂，茚三酮法检测为阴性后脱去Fmoc保护基得到载有第一个氨基酸残基的树脂；再进入下一个偶联循环，按照相应的肽序用不同的保护氨基酸重复偶联和脱保护的步骤，依次延长所需的氨基酸序列，合成得到载有相应多肽的树脂，最后用切割剂将多肽从树脂上切割下来得到多肽粗品。粗品经纯化，冻干得多肽纯品。本发明提供的一组抗菌肽，其制备方法可以是固相化学法，也可以将抗菌肽的编码基因克隆到载体上，然后在宿主细胞中表达后获得。其中表达载体可以是质粒或病毒中的一种，宿主细胞可以是原核细胞，包括大肠杆菌、枯草芽孢杆菌等，宿主细胞也可以是真核细胞、包括酵母细胞、植物细胞、昆虫细胞和哺乳动物细胞等。制备的抗菌肽可通过质谱鉴定。利用96孔板法检测多肽的杀菌活性(In Yup Park etc ；FEBS Letters ； 437(1998)258-262)以预先合成的天然抗菌肽Pexiganan以及抗生素氨苄西林和庆大霉素为对照，进行杀菌活性检测。结果表明本发明合成抗菌肽的杀菌活性强于所述两种天然抗菌肽的杀菌活性。抗菌肽在高效杀菌的同时也有可能作用于高等有机体包括人体细胞，因为抗菌肽的作用方式都是在细胞膜上穿孔使得细胞发生渗漏死亡。所以把抗菌肽能否使红细胞发生渗漏作为其是否有毒性的一个标准，如果抗菌肽能使红细胞中的血红蛋白发生渗漏，就可以通过检测0D490。值确定毒性的大小。因此本发明还检测了合成抗菌肽对人体红细胞的溶血活性，实验表明，抗菌肽溶血率值很低，证实本发明合成抗菌肽的溶血毒性极小。
具体实施例方式在本说明书全文中采用以下缩写DIEA :N, N' - 二异丙基乙胺；DMF 二甲基甲酰胺；DCM 二氯甲烷；Fmoc :N_9_芴甲氧羰基；DIC =N, N，-二异丙基碳二亚胺；DMAP :4_ 二甲氨基吡啶；HB TU 苯并三氮唑-N，N，N' ,N'-四甲基脲六氟磷酸酯；HOBT 羟基-苯并三氮唑；HPLC 高效液相色谱；ESI-MS 电喷雾质谱；Gly 甘氨酸；Ser 丝氨酸；Ala 丙氨酸； Thr 苏氨酸；Val 缬氨酸；Ile 异亮氨酸；Leu 亮氨酸；Tyr 酪氨酸；Phe 苯丙氨酸；His 组氨酸；Pro 脯氨酸；Asp 天门冬氨酸；Met 蛋氨酸；Glu 谷氨酸；Trp 色氨酸；Lys 赖氨酸；Arg 精氨酸。Asn 天冬酰胺；Gln 谷氨酰胺。本发明是通过下列实施例来进行说明的，但这些实施例不做任何限制本发明的解释。实施例1Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-NH2 (SEQ. ID NO 2)的微波促进固相合成(1)树脂的溶胀
称取Fmoc-Rink amide-MBHA Resin 50mg (取代量 0. 4mmol/g)，经 7mL DCM 溶胀 30min，抽滤去DCM，再用IOmLNMP溶胀30min，最后分别用NMP，DCM, NMP 7mL冲洗干净。(2)微波促进Fmoc保护基的脱除将溶胀好的树脂放入反应器中，加入7mL含0. IM HOBT的25 %哌啶/NMP (V/V)溶液，在微波反应器中反应lmin，微波功率为15W，反应温度控制在50°C以内，使用空气压缩机压缩空气冷却，反应结束后滤去溶液；再加入7mL含0. IM HOBT的25%哌啶/NMP (V/V)溶液在微波反应器中再反应4min，微波功率为25W，反应温度控制在50°C，使用空气压缩机压缩空气冷却。反应结束后滤去溶液，用NMP洗涤干净。得到脱去初始连接的Fmoc保护基的树脂。(3)微波促进 Fmoc-Val-Rink amide-MBHA Resin 的合成将Fmoc-Ser (tBu)-OH (0. 04mmol)，HBTU (0. 04mmol) , HOBT (0. 04mmol)禾口 DIPEA(0. 08mmol)溶于IOmL NMP中，再将此溶液加入上面的树脂中，在微波反应器中反应 7min，微波功率为25W，反应温度控制在50°C，使用空气压缩机压缩空气冷却。反应结束后滤除反应液，用DCM和NMP各7mL洗涤树脂3次。(4)偶合效率的检测用茚三酮法或者溴酚兰法定性检测树脂的偶合效率，显色反应为阴性即可进入下一个偶合循环。茚三酮法取少量树脂颗粒用乙醇洗涤，放入透明小瓶中加入5%茚三酮乙醇、 KCN吡啶溶液(2ml 0. OOlM KCN稀释于98ml吡啶中)、80%苯酚乙醇溶液各2滴，于100°C 加热5分钟，如果树脂显蓝色即为阳性。溴酚兰法取少量树脂颗粒用二甲酰乙酰胺洗涤，放入透明小瓶中加入3滴的溴酚蓝二甲基乙酰胺溶液，常温下振摇3分钟，如果树脂显蓝色即为阳性。(5)肽链的延长按照SEQ. ID NO 2的序列，重复上述脱保护和偶合的步骤依次连接上相应的氨基酸，偶合微波促进反应时间5 20min不等。得到连有肽链的树脂。(6)树脂上多肽的裂解将上述得到的连有肽链的树脂放入反应瓶中，各加入裂解剂Reagent K (TFA/苯甲硫醚 / 水 / 苯酚/EDT，82. 5 5 5 5 2. 5，V/V) 10mL，先在 0°C下振摇 30min，再在常温下反应3h。反应结束后抽滤，加少量TFA和DCM洗涤三次，合并滤液。将滤液加入大量的冰乙醚中析出白色絮状沉淀，冷冻离心得到目标多肽的粗品。最终得到SEQ. ID NO 2粗品 72. 5mg，收率为 93. 6%0使用HPLC测定纯度。色谱条件为C18反相柱(150mmX4. 6mm, 5 μ m)；流动相A 0. 1 % TFA/水(V/V)，流动相B 0. 1% TFA/乙腈(V/V)；流动相梯度流动相B 10 % 80 %， 20min ；流速为lmL/min ；柱温为40°C ；检测波长为214nm。使用制备液相色谱纯化，色谱条件为:C18 反相柱(320mmX28mm, 5 μ m)；流动相 A 0. 1% TFA/ 水(V/V)，流动相 B 0. 1% TFA/ 乙腈(V/V)；流动相梯度流动相B 40% 90%，20min ；流速为6mL/min检测波长为214nm。 收集的溶液冻干得纯品。理论相对分子质量为1937. 26。ESI-MS m/z 理论计算值[M+H]+ 1839. 19，实验测定值[M+H]+ =1839. 2实施例2
Leu-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-NH2 (SEQ. ID NO 6) ；ESI-MS m/z 理论计算值[Μ+Η]+:2051· 34，[M+3H]3+:684· 45，[M+4H]4+ 513. 585，实验测定值[M+H]+ 2051. 3，[M+3H]3+ 684. 4，[M+4H]4+ 513. 6实施例3Leu-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-N H2 (SEQ. ID NO 7) ； ESI-MS m/z 理论计算值[Μ+Η]+:2179· 81，[M+2H]2+:1090· 4，[M+3H]3+ 727. 27，实验测定值[M+H]+ 2179. 9，[Μ+2Η]2+ 1090. 5，[Μ+3Η]3+ 727. 3实施例4Leu-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys -Lys-NH2 (SEQ. IDNO 8) ； ESI-MS m/z 理论计算值[M+H]+ 2307. 98，[M+2H]2+ 1154. 49， [M+3H]3+ 769. 99，实验测定值[M+H]+ 2308. 1，[M+2H]2+ 1154. 6，[M+3H]3+ 770. 0实施例5Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-NH2 (SEQ. ID NO 9) ；ESI-MSm/z 理论计算值[M+H]+ 1938. 47，[M+2H]2+ 969. 74，[M+3H]3+ 646. 82，实验测定值[M+H]+ 1938. 6，[Μ+2Η]2+ :969· 8，[Μ+3Η]3+ :646· 9实施例6Leu-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-LyS-Ser-NH2 (SEQ. ID NO 10) ；ESI-MS m/z 理论计算值[M+H]+ :1952. 5，[M+2H]2+ -.976. 75，[M+3H]3+ :651. 5，实验测定值[M+H]+ :1952. 6，[M+2H]2+ -.976. 8，[M+3H]3+ :651. 5实施例7Lys-Leu-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-LyS-Ser-NH2 ( SEQ. ID NO 11) ；ESI-MS m/z 理论计算值[M+H]+:2080· 67，[M+2H]2+:1040· 84，[M+3H]3+ 694. 22，实验测定值[M+H]+ 2080. 8，[M+2H]2+ 1040. 9，[M+3H]3+ 694. 3实施例8Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Ar g-NH2 (SEQ. ID NO 12) ； ESI-MS m/z 理论计算值[M+H]+ -.2222. 83，[M+2H]2+ 1111. 92， [M+3H]3+ :741. 61，实验测定值[M+H]+ -.2222. 9，[M+2H]2+ :1112· 0，[M+3H]3+ :741· 7实施例9Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Arg-NH2 ( SEQ. ID NO 13) ； ESI-MS m/z 理论计算值[M+H] + 2094. 66，[M+2H]2+:1047· 83，[M+3H]3+ 698. 89，实验测定值[M+H]+ 2094. 8，[M+2H]2+ 1047. 9，[M+3H]3+ 698. 9实施例10Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Arg-Ly S-NH2 (SEQ. ID NO 14) ； ESI-MS m/z 理论计算值[M+H]+ -.2222. 83，[M+2H]2+ 1111. 92， [M+3H]3+ 741. 61，实验测定值[M+H]+ -.2222. 9，[M+2H]2+ 1112. 0，[M+3H]3+ 741. 7实施例11Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Arg-Ar g-NH2 (SEQ. ID NO 15) ； ESI-MS m/z 理论计算值[M+H]+ :2250· 85，[M+2H]2+ :1125· 92， [Μ+3Η]3+ :750. 95，实验测定值[M+Hr+ 2251. 0，[M+2H]2+ 1126. 0，[M+3H]3+ 751. 0
实施例12Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Lys-Ile-NH2 (SEQ. ID NO 16) ； ESI-MS m/z 理论计算值[Μ+Η]+:2307· 98，[M+2H]2+ 1154. 49, [M+3H]3+ 769. 99，实验测定值[M+H]+ 2308. 1，[M+2H]2+ 1154. 6，[M+3H]3+ 770. 0实施例13Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Lys -Val-NH2 (SEQ. IDNO 17) ； ESI-MS m/z 理论计算值[Μ+Η]+:2293· 95，[M+2H]2+:1147· 48， [M+3H]3+ 765. 32，实验测定值[M+H]+ -.2294. 1，[M+2H]2+ 1147. 6，[M+3H]3+ 765. 4实施例14Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Lys-P he-NH2 (SEQ. IDNO 18) ； ESI-MS m/z 理论计算值[M+H]+ -.2342, [M+2H]2+ 1171. 5，[M+3H]3+ 781. 33，实验测定值[M+H]+:2342· 1，[M+2H]2+:1171· 6，[M+3H]3+:781· 4实施例15Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Ar g-I Ie-NH2 (SEQ. ID NO 19) ； ESI-MS m/z 理论计算值[M+H]+ :2336，[M+2H]2+ 1168. 5， [M+3H]3+ 779. 33，实验测定值[M+H]+ 2336. 1，[M+2H]2+ 1168. 6，[M+3H]3+ 779. 4实施例16Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Arg-L eu-NH2 (SEQ. IDNO 20) ； ESI-MS m/z 理论计算值[M+H]+ :2336，[M+2H]2+ 1168. 5，[M+3H]3+ 779. 33，实验测定值[M+H]+ 2336. 1，[Μ+2Η]2+ :1168· 6，[Μ+3Η]3+ :779· 4实施例17Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Arg -Val-NH2 (SEQ. IDNO 21) ； ESI-MS m/z 理论计算值[Μ+Η]+:2321· 97，[Μ+2Η]2+:1161· 48， [Μ+3Η]3+ 774. 66，实验测定值[Μ+Η]+ -.2322. 1，[Μ+2Η]2+ :1161. 6，[Μ+3Η]3+ -.774. 7实施例18Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Arg -Phe-NH2 (SEQ. IDNO 22) ； ESI-MS m/z 理论计算值[M+H]+:2370· 01，[Μ+2Η]2+:1185· 51， [Μ+3Η]3+ :790. 67，实验测定值[Μ+Η]+ :2370. 1，[Μ+2Η]2+ :1185. 6，[Μ+3Η]3+ -.790. 7实施例1923) ；ESI-MS m/z 理论计算值[Μ+Η]+ :2364· 01，[Μ+2Η]2+ :1182· 5，[Μ+3Η]3+ 788. 67，实验测定值[Μ+Η]+ 2364. 1，[Μ+2Η]2+ :1182· 6，[Μ+3Η]3+ :788· 7实施例20Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Arg-Arg -Leu-NH2 (SEQ. IDNO 24) ； ESI-MS m/z 理论计算值[M+H]+ 2364. 01，[M+2H]2+ 1182. 5， [M+3H]3+ 788. 67，实验测定值[M+H]+ 2364. 1，[M+2H]2+ 1182. 6，[M+3H]3+ 788. 7实施例21 Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Arg-Arg -Val-NH2 (SEQ. IDNO 25) ； ESI-MS m/z 理论计算值[Μ+Η]+:2349· 98，[M+2H]2+ 1175. 49, [M+3H]3+ 783. 99，实验测定值[M+H]+ 2350. 1，[M+2H]2+ 1175. 6，[M+3H]3+ 784. 0
实施例22Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Arg-Arg -Phe-NH2 (SEQ. IDNO 26) ； ESI-MS m/z 理论计算值[M+H]+ 2398. 03，[M+2H]2+ 1199. 51， [M+3H]3+ 800. 01，实验测定值[M+H]+ 2398. 1，[M+2H]2+ 1199. 6，[M+3H]3+ 800. 1实施例23Ile-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Lys-NH2 (SEQ. ID NO 27) ； ESI-MS m/z 理论计算值[Μ+Η]+:2307· 98，[M+2H]2+ 1154. 49, [M+3H]3+ 769. 99，实验测定值[M+H]+ 2308. 1，[M+2H]2+ 1154. 6，[M+3H]3+ 770. 0实施例24Val-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys -Lys-NH2 (SEQ. IDNO 28) ； ESI-MS m/z 理论计算值[Μ+Η]+:2293· 95，[M+2H]2+:1147· 48， [M+3H]3+ 765. 32，实验测定值[M+H]+ -.2294. 1，[M+2H]2+ 1147. 62，[M+3H]3+ 765. 4实施例25Phe-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-L ys-NH2 (SEQ. IDNO 29) ； ESI-MS m/z 理论计算值[M+H]+ -.2342, [M+2H]2+ 1171. 5，[M+3H]3+ 781. 33，实验测定值[M+H]+:2342· 1，[M+2H]2+:1171· 6，[M+3H]3+:781· 4实施例26 Leu-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-A rg-NH2 (SEQ. IDNO 30) ； ESI-MS m/z 理论计算值[M+H]+ :2336，[M+2H]2+ 1168. 5，[M+3H]3+ 779. 33，实验测定值[M+H]+ 2336. 1，[Μ+2Η]2+ :1168· 6，[Μ+3Η]3+ :779· 4实施例27Ile-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Ly S-Arg-NH2 (SEQ. ID NO 31) ； ESI-MS m/z 理论计算值[M+H]+ :2336，[M+2H]2+ :1168· 5， [M+3H]3+ 779. 33，实验测定值[M+H]+ 2336. 1，[M+2H]2+ 1168. 6，[M+3H]3+ 779. 42实施例28Val-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys -Arg-NH2 (SEQ. IDNO 32) ； ESI-MS m/z 理论计算值[Μ+Η]+:2321· 97，[M+2H]2+:1161· 48， [M+3H]3+ 774. 66，实验测定值[M+H]+ -.2322. 1，[M+2H]2+ 1161. 6，[M+3H]3+ 774. 7实施例29Phe-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys -Arg-NH2 (SEQ. IDNO 33) ； ESI-MS m/z 理论计算值[Μ+Η]+:2370· 01，[M+2H]2+:1185· 51， [M+3H]3+ 790. 67，实验测定值[M+H]+ 2370. 1，[M+2H]2+ 1185. 6，[M+3H]3+ 790. 7实施例30Leu-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Arg -Arg-NH2 (SEQ. IDNO 34) ； ESI-MS m/z 理论计算值[M+H]+ 2364. 01，[M+2H]2+ 1182. 5， [M+3H]3+ 788. 67，实验测定值[M+H]+ 2364. 1，[M+2H]2+ 1182. 6，[M+3H]3+ 788. 7实施例31Ile-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Arg -Arg-NH2 (SEQ. ID NO 35) ； ESI-MS m/z 理论计算值[M+H]+ 2364. 01，[M+2H]2+ 1182. 5，[M+3H]3+ 788. 67，实验测定值[M+H]+ 2364. 1，[M+2H]2+ 1182. 6，[M+3H]3+ 788. 7实施例32Val-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Arg -Arg-NH2 (SEQ. IDNO 36) ； ESI-MS m/z 理论计算值[M+H]+ 2349. 98，[M+2H]2+ 1175. 49， [M+3H]3+ 783. 99，实验测定值[M+H]+ 2350. 1，[M+2H]2+ 1175. 6，[M+3H]3+ 784. 0实施例33Phe-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Arg -Arg-NH2 (SEQ. IDNO 37) ； ESI-MS m/z 理论计算值[M+H]+ 2398. 03，[M+2H]2+ 1199. 51， [M+3H]3+ 800. 01，实验测定值[M+H]+ 2398. 1，[M+2H]2+ 1199. 6，[M+3H]3+ 800. 1实施例34IIe-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-LyS-Ser-NH2 (SEQ. ID NO 38) ；ESI-MSm/z 理论计算值[M+H]+ 1952. 5，[M+2H]2+ 976. 75，[M+3H]3+ 651. 5，实验测定值[M+H]+ 1952. 6，[Μ+2Η]2+ :976· 8，[Μ+3Η]3+ :651· 5实施例35Val-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-NH2 (SEQ. ID NO 39) ；ESI-MS m/z 理论计算值[M+H]+ :1938. 47，[M+2H]2+ :969. 74，[M+3H]3+ :646. 82，实验测定值[M+H]+ :1938. 6，[M+2H]2+ :969. 8，[M+3H]3+ :646. 9实施例36Phe-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-NH2 (SEQ. ID NO 40) ；ESI-MS m/z 理论计算值[M+H]+ :1986. 51，[M+2H]2+ :993. 76，[M+3H]3+ :662. 84，实验测定值[M+H]+ :1986. 6，[M+2H]2+ :993. 9，[M+3H]3+ :662. 9实施例37Arg-IIe-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-LyS-Ser-NH2 ( SEQ. ID NO 41) ； ESI-MS m/z 理论计算值[M+H]+:2108· 69，[M+2H]2+:1054· 84，[M+3H]3+ 703. 56，实验测定值[M+H]+ :2108. 8，[M+2H]2+ 1054. 9，[M+3H]3+ 703. 6实施例38Arg-Val-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-LyS-Ser-NH2 ( SEQ. ID NO 42) ； ESI-MS m/z 理论计算值[M+H] + 2094. 66，[M+2H]2+:1047· 83，[Μ+3Η]3+ 698. 89，实验测定值[Μ+Η]+ 2094. 8，[Μ+2Η]2+ 1047. 9，[Μ+3Η]3+ 698. 9实施例39Arg-Phe-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-LyS-Ser-NH2 ( SEQ. ID NO 43) ； ESI-MS m/z 理论计算值[M+H]+:2142· 7，[Μ+2Η]2+:1071· 85，[Μ+3Η]3+ 714. 9，实验测定值[Μ+Η]+ :2142. 8, [Μ+2Η]2+:1071· 9，[Μ+3Η]3+:714· 9实施例40Arg-Leu-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-LyS-Ser-NH2 ( SEQ. ID NO 44) ； ESI-MS m/z 理论计算值[M+H]+:2108· 69，[M+2H]2+:1054· 84，[M+3H]3+ 703. 56，实验测定值[M+H]+ :2108. 8，[M+2H]2+ 1054. 9，[M+3H]3+ 703. 6实施例41 Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-LyS-NH2 (SEQ. ID NO 45) ； ESI-MS m/z 理论计算值[Μ+Η]+:2066· 65，[M+2H]2+:1033· 82，[M+3H]3+ 689. 55，实验测定值[M+H]+ 2066. 8，[Μ+2Η]2+ 1033. 9，[Μ+3Η]3+ 689. 6实施例42Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Ly S-NH2 (SEQ. ID NO 46) ； ESI-MS m/z 理论计算值[M+H]+ 2194. 82，[M+2H]2+ 1097. 91， [M+3H]3+ 732. 27，实验测定值[M+H]+ 2194. 9，[M+2H]2+ 1098. 0，[M+3H]3+ 732. 3实施例43Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Lys -Leu-NH2 (SEQ. IDNO 47) ； ESI-MS m/z 理论计算值[Μ+Η]+:2307· 98，[M+2H]2+ 1154. 49, [M+3H]3+ 769. 99，实验测定值[M+H]+ 2308. 1，[M+2H]2+ 1154. 6，[M+3H]3+ 770. 0实施例44合成抗菌肽的杀菌活性检测以下实施例中所使用的各种菌株购于中国生物制品检定所。采用96孔板法对合成抗菌肽的杀菌活性进行检测，并用氨苄西林、庆大霉素和固相化学法合成的抗菌肽pexiganan作为对照，以评价本发明中作为举例的十条抗菌肽的杀菌活性。按以下步骤进行测定抗菌肽的杀菌活性菌种复苏，接种斜面37°C培养过夜，接菌于普通LB培养基中，37°C培养过夜，稀释菌液使菌浓度为104-105CFU/ml，按每孔IOOul菌液接种于96孔板中，将多肽以一定比例稀释后，每孔中加入10ul，将96孔板置于37°C培养过夜，酶标仪检测OD620值(In Yup Park etc ；FEBS Letters ；437 (1998) 258-262)。检测结果见表 1。含有抗菌肽的细菌的生长浓度(OD62tl)与不加抗菌肽的细菌的生长浓度的比值大于90%时的抗菌肽浓度即为最小抑菌浓度(最小抑菌浓度(MIC)定义为显著抑制细菌生长的最低的浓度)。表1实施例1 43中抗菌肽对不同细菌的抗菌活性最小抑菌浓度(MIC)的比较
权利要求
1.一种由SEQ. ID NO 1所示式I的氨基酸序列组成的抗菌肽Rl-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-R2-NH2 (SEQ. ID NO 1) 式I 其中Rl 是 Leu, lie, Val, Phe, Lys-Leu, Lys-Ile, Lys-Val, Lys-Phe, Arg-Leu, Arg-Ile, Arg-Val, Arg-Phe 或不存在；R2 :Val, Val-Lys, Val-Arg, Val-Lys-Lys, Val-Lys~Arg, Val-Lys-Lys-Leu, Val-Lys-Lys-IIe , Val-Lys-Lys-Val, Val-Lys-Lys-Phe, Val-Lys-Arg-Leu, Val-Lys-Arg-Ile, Val-Lys-Arg-Val, Val-Lys-Arg-Phe, Val-Arg-Lys, Val-Arg-Arg, Val-Arg-Lys-Leu, Val-Arg-Lys-Ile, Val-Arg-Lys-Val, Val-Arg-Lys-Phe, Val-Arg-Arg-Leu, Val-Arg-Arg-Ile, Val-Arg-Arg-Val, Val-Arg-Arg-Phe 或不存在。
2.根据权利要求1中所述的抗菌肽，其特征在于，该抗菌肽的结构为以下4种 Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-NH2 (SEQ. ID NO 2), Rl-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-NH2 (SEQ. ID NO 3)，Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-R2-NH2 (SEQ. ID NO 4)，Rl-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-R2-NH2 (SEQ. ID NO 5)之一，Rl 是 Leu，lie, Val, Phe, Lys-Leu, Lys-Ile, Lys-Val, Lys-Phe, Arg-Leu, Arg-IIe, Arg-Val 或 Arg-Phe ；R2 是 Val，Val-Lys, Val-Arg, Val-Lys-Lys, Val-Lys-Arg, Val-Lys-Lys-Leu, Val-Lys-Lys-Ile, Val-Lys-Lys-Val, Val-Lys-Lys-Phe, Val-Lys-Arg-Leu, Val-Lys-Arg-IIe, Val-Lys-Arg-Val, Val-Lys-Arg-Phe ；Val-Arg-Lys, Val-Arg-Arg, Val-Arg-Lys-Leu, Val-Arg-Lys-I1e, Val-Arg-Lys-Val, Val-Arg-Lys-Phe, Val-Arg-Arg-Leu, Va 1 -Arg-Arg-11 e, Val-Arg-Arg-Val 或 Val-Arg-Arg-Phe0
3.根据权利要求2中所述的抗菌肽结构，其特征在于，该抗菌肽的结构为 Rl-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-LyS-Ser-NH2,其中 Rl 是Leu, lie, Val, Phe, Lys-Leu, Lys-Ile, Lys-Val, Lys-Phe, Arg-Leu, Arg-IIe, Arg-Val 或 Arg-Phe。
4.根据权利要求2中所述的抗菌肽，其特征在于，该抗菌肽的结构为Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-R2-NH2,其中 R2 是 Val, Val-Lys, Val-Arg, Val-Lys-Lys, Val-Lys-Arg, Val-Lys-Lys-Leu, Val-Lys-Lys-Ile, Val-Lys-Lys-Val, Val-Lys-Lys-Phe, Val-Lys-Arg-Leu, Val-Lys-Arg-I1e, Val-Lys-Arg-Val, Val-Lys-Arg-Phe ；Val-Arg-Lys, Val-Arg-Arg, Val-Arg-Lys-Leu, Val-Arg-Lys-I1e, Val-Arg-Lys-Val, Val-Arg-Lys-Phe， Val-Arg-Arg-Leu, Val-Arg-Arg-IIe，Va 1 -Arg-Arg-Va 1 或 Val-Arg-Arg-Phe0
5.根据权利要求2中所述的抗菌肽结构，其特征在于，该抗菌肽的结构为RI-VaI-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-R2-NH2, 其中 Rl 是 Leu, lie, Val, Phe, Lys-Leu, Lys-Ile, Lys-Val, Lys-Phe, Arg-Leu, Arg-IIe, Arg-Val 或 Arg-Phe ；R2 是 Val, Val-Lys, Val-Arg, Val-Lys-Lys, Val-Lys-Arg, Val-Lys-Lys-Leu, Val-Lys-Lys-Ile, Val-Lys-Lys-Val, Val-Lys-Lys-Phe, Val-Lys-Arg-Leu, Val-Lys-Arg-Ile, Va 1-Lys-Arg-Va 1，VaI-Lys-Arg-Phe ；Val-Arg-Lys, Val-Arg-Arg, Val-Arg-Lys-Leu, Val-Arg-Lys-IIe, Val-Arg-Lys-Val, Val-Arg-Lys-Phe， Val-Arg-Arg-Leu, Va 1 -Arg-Arg-11 e, Val-Arg-Arg-Val 或 Val-Arg-Arg-Phe0
6.根据权利要求1中所述的抗菌肽，其特征在于，具有如下序列 Leu-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-LyS-Ser-Val-NH2 (SEQ. ID NO 6)Leu-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-LyS-NH2 (S EQ. ID NO 7)Leu-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Lys-N H2 (SEQ. ID NO 8)Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-LyS-Ser-Val-NH2 (SEQ. ID NO 9)Leu-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-LyS-Ser-NH2 (SEQ. ID NO 10)Lys-Leu-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-NH2 (SEQ. ID NO 11)Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Arg-NH2 (S EQ. ID NO 12)Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Arg-NH2 (SEQ. ID NO 13)Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Arg-Lys-NH2 (S EQ. ID NO 14)Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Arg-Arg-NH2 (S EQ. ID NO 15)Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Lys-Ile-N H2 (SEQ. ID NO 16)Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Lys-Val-N H2 (SEQ. ID NO 17)Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Lys-Phe-N H2 (SEQ. ID NO 18)Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Arg-Ile-N H2 (SEQ. ID NO 19)Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Arg-Leu-N H2(SEQ. ID NO 20)val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Arg-Val-NH2(SEQ. ID NO 21)Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Arg-Phe-N H2(SEQ. ID NO 22)Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Arg-Arg-Ile-N H2(SEQ. ID NO 23)Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Arg-Arg-Leu-N H2 (SEQ. ID NO 24)Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Arg-Arg-Val-N H2(SEQ. ID NO 25)Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Arg-Arg-Phe-N H2(SEQ. ID NO 26)Ile-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Lys-N H2(SEQ. ID NO 27)Val-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Lys-N H2(SEQ. ID NO 28)Phe-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Lys-N H2(SEQ. ID NO 29)Leu-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Arg-N H2(SEQ. ID NO 30)Ile-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Arg-N H2(SEQ. ID NO 31)Val-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Arg-N H2(SEQ. ID NO 32)Phe-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Arg-N H2(SEQ. ID NO 33)Leu-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Arg-Arg-N H2 (SEQ. ID NO 34)Ile-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Arg-Arg-N H2(SEQ. ID NO 35)Val-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Arg-Arg-N H2(SEQ. ID NO 36)Phe-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Arg-Arg-N H2(SEQ. ID NO 37)IIe-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-LyS-Ser-NH2 (SEQ. ID NO 38)Val-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-LyS-Ser-NH2 (SEQ. ID NO 39)Phe-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-LyS-Ser-NH2 (SEQ. ID NO 40)Arg-IIe-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-LyS-Ser-NH2 (SEQ. ID NO 41)Arg-Val-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-LyS-Ser-NH2 (SEQ. ID NO 42)Arg-Phe-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-LyS-Ser-NH2 (SEQ. ID NO 43)Arg-Leu-Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-LyS-Ser-NH2 (SEQ. ID NO 44)Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-NH2 (SEQ. ID NO 45)Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Lys-NH2 (S EQ. ID NO 46)Val-Lys-Arg-Phe-Lys-Lys-Phe-Phe-Arg-Lys-Leu-Lys-Lys-Ser-Val-Lys-Lys-Leu-N H2 (SEQ. ID NO 47)。
7.—种药物组合物，包括治疗有效量的权利要求1-6的任一项所述的抗菌肽或者其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体或稀释剂。
8.权利要求1-6的任一项的抗菌肽在制备用于治疗细菌或真菌感染药物中的用途。
全文摘要
本发明提供一组末端酰胺化的新抗菌肽，这些抗菌肽对耐药细菌菌株具有强的杀菌活性。本发明合成抗菌肽的制备方法可以是固相化学法或是通过基因工程表达获得。本发明合成抗菌肽可以用于制备治疗革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌感染引起的疾病的药物。
文档编号A61P31/04GK102329375SQ201110291548
公开日2012年1月25日 申请日期2011年9月30日 优先权日2011年9月30日
发明者孙李丹, 杨宝卫, 邓欣, 钱海, 陈巍, 韩京, 黄文龙 申请人:中国药科大学