专利名称：山茱萸裂苷在制备治疗糖尿病肾病药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及山茱萸裂苷在制备治疗糖尿病肾病药物中的应用。
背景技术：
糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN),又称糖尿病肾小球硬化症,是糖尿病常见的慢性微血管并发症，通常指由于糖尿病引起的肾小球基底膜增厚，系膜扩张以及胞外基质增生，导致肾小球的高滤过和蛋白尿，其特点以肾小球血管受损、硬化为主，形成结节性病变，进而出现肾功能的异常，最终形成终末期肾衰(ESRD)，终末期肾衰是DN病人的主要死亡原因之一。据世界卫生组织统计，2011年全球有3. 36亿人患有糖尿病，糖尿病已经成为全球第三号杀手，仅次于心脑血管疾病。糖尿病的病程长，若失治、误治，则极易出现血管、肾脏、视网膜及神经系统慢性并发疾病。其中有1/3的患者转化为糖尿病肾病，糖尿病肾病是糖尿病最常见的并发症，也是糖尿病患者的主要死亡原因之一。我国糖尿病的最新流行病学调查报告显示，20岁以上人群糖尿病患病率达9. 7%，而糖尿病前期的患病率高达15. 5%，估计目前我国约有九千二百万糖尿病患者，一亿四千八百万糖尿病前期患者。 可见，中国已成为糖尿病大国，而糖尿病已成为威胁我国公众健康的重大疾病之一。在终末期肾功能衰竭患者中，糖尿病肾病占16%。肾功能的损害，使肾脏不能保留对人体有用的蛋白质，不能排泄废物而引起浮肿(下肢、脸部明显)，容易发展成为尿毒症。鉴于此，DN 应得到早期的诊断与治疗。然而早期DN发病较隐匿，临床诊断较困难。
自主开发创新药物是我国目前的一项紧迫任务，从中药中寻找治疗糖尿病肾病的活性成分是一条途径，是我国治疗糖尿病肾病创新药物研制的优势所在，也将极大地提高产品的市场竞争力，填补市场空白，产生良好的社会效益、获得可观的经济效益。
山茱萸为山茱萸科植物山茱萸(Cornus officinalis Sieb. et Zucc.)的干燥成熟果肉，主要产地为豫西、浙江，味酸、涩，微温，归肝、肾经。其功效为补益肝肾，涩精固脱。 临床用于内热消渴，眩晕耳鸣，腰膝酸痛，阳痿遗精，遗尿、尿频，崩漏带下，大汗虚脱等。目前已有研究发现，山茱萸对糖尿病肾病具有确切的疗效。环烯醚萜总苷能显著降低糖尿病血管并发症模型大鼠血清可溶性细胞间黏附分子(sICAM-1)，肿瘤坏死因子(TNF-α )水平，部分恢复一氧化氮(NO)和内皮素(ET)的动态平衡，保护血管内皮细胞，有利于控制糖尿病血管并发症的发生发展。山茱萸环烯醚萜总苷能抑制糖尿病大鼠肾皮质糖化终产物 (AGEs)的形成，使其受体mRNA表达水平下降，具有减轻糖尿病肾病变的作用。山茱萸环烯醚萜总苷可改善糖尿病大鼠肾组织形态学病变及修复Na+，K+-ATP酶活性，对DN所引起的结构和功能改变都具有一定的防治作用。糖尿病患者由于高糖时葡萄糖的自动氧化增多及非酶糖化反应过程中非酶糖基化终产物的形成需通过氧化反应，会引起大量的自由基蓄积，同时由于醛糖还原酶通路活性增强的含量降低，导致还原型谷胱 甘肽过氧化物酶含量降低，机体抗氧化能力降低，引起广泛的自由基损伤。环烯醚萜总苷及氨基胍均能显著增加 SOD的含量。山茱萸环烯醚萜总苷对糖尿病血管并发症引起的氧化应激损伤具有保护作用。由此可见，山茱萸是对糖尿病微血管病变具有确切的疗效，其中环烯醚萜苷类成分是主要的有效部位。尽管目前对环烯醚萜苷类成分治疗糖尿病肾病的作用机理进行了较为深入的研究，但是见局限于某类化学成分治疗糖尿病肾病机制的研究，并没有从整体上研究山茱萸治疗糖尿病肾病作用机制。生物代谢研究表明，山茱萸中环烯醚萜苷类成分经过肾脏作用后的代谢产物是体内产生抗肾损伤的物质基础，而且代谢产物体内外降糖强肾作用均强于环烯醚萜苷，此研究表明肾脏代谢在山茱萸环烯醚萜苷类成分的降糖强肾作用中起到了重要的作用。
山茱萸裂苷，(cornuside)是从山茱萸科植物山茱萸(Cornus officinalis Sieb. et Zucc.)的干燥成熟果肉中提取的单体，分子结构式见图1。文献研究表明，山茱萸裂苷具有良好的抗炎、抗病毒、肝保护和心脏保护效果，但这种效应对于糖尿病状态下引起的并发症肾损伤的保护作用尚未见相关研究报道。发明内容
本发明提供一种山茱萸裂苷在制备治疗糖尿病肾病药物中的应用。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是一种山茱萸裂苷在制备治疗糖尿病肾病药物中的应用。
作为优选，将山茱萸裂苷加工成口服剂型药物中的应用，包括颗粒剂、片剂、胶囊剂和口服液体剂。另一种方案是，将山茱萸裂苷加工成注射剂型药物中的应用。将山茱萸裂苷初产品，加入适量辅料，制成相关剂型，包括口服剂型与注射剂型，口服剂型包括颗粒剂(冲服剂)、片剂(素片、包衣片、分散片、速崩片、泡腾片等)、胶囊剂(硬胶囊、软胶囊)、口服液体剂。该药物可用于治疗糖尿病肾病。作为优选，山茱萸裂苷的有效治疗量为O.lg-5. 5g/kg。经实验验证，给药量达O. lg-5. 5g/kg的山茱萸裂苷，对糖尿病肾病的治疗具有显著疗效。
一种治疗糖尿病肾病的含山茱萸裂苷的胶囊或片剂，制备方法如下制剂处方 山茱萸裂苷120g、微晶纤维120g、淀粉30g、乳糖28g、糊精3g ;根据处方按照配比将各组分混合均匀，之后加入体积分数80%的乙醇溶液制粒，整粒；制成胶囊或者压制成片剂。
一种治疗糖尿病肾病的含山茱萸裂苷的颗粒剂，制备方法如下颗粒剂处方山茱萸裂苷120g、乳糖1015g;将山茱萸裂苷与乳糖混合均匀，用体积分数70%的乙醇溶液制软材，制粒、干燥、整粒、分装即得。
一种治疗糖尿病肾病的含山茱萸裂苷的注射液，制备方法如下取20g山茱萸裂苷加适量注射用水，加热溶解，调PH值至7. 0，加入活性炭O. 2g，加热至80-85°C保温，过滤后，加注射用水至2000ml，O. 2μπι微孔滤膜过滤，灌封，即得。
本发明提出了山茱萸裂苷在制备治疗`糖尿病肾病药物中的新用途，为治疗糖尿病肾病提供了新的药物选择。


图1是山茱萸裂苷的分子结构式。
图2是未知化合物I的液相色谱图。
图3是未知化合物I的LC-MS负离子模式图。
图4是未知化合物I的LC-MS正离子模式图。
图5是未知化合物鉴定的紫外光谱图。
图6是山茱萸裂苷对STZ诱导的糖尿病肾损伤大鼠体重的影响数据图，其中■ 与正常组相比*P < O. 05 ;与模型组相比flP < O. 05。
图7是山茱萸裂苷对STZ诱导的糖尿病肾损伤大鼠肾重的影响数据图，其中 与正常组相比**P < 0.01 ;与模型组相比##P < O. 01。
图8是western blot蛋白印迹表达图。
图9是山茱萸裂苷对糖尿病肾病大鼠肾组织相关蛋白表达效果图。
具体实施方式
下面通过具体实施例，对本发明的技术方案作进一步的具体说明。应当理解，本发明的实施并不局限于下面的实施例，对本发明所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本发明保护范围。
在本发明中，若非特指，所有的份、百分比均为重量单位，所有的设备和原料等均可从市场购得或是本行业常用的。
实施例1山茱萸裂苷的制备1.实验材料仪器山茱萸生品，Agilent LC /MSD TOF (USA) ； Agilent 1100 二元泵(USA); Agilent 1100标准自动进样器(USA);Milli_Q 超纯水机(MiIlipore, Bedford, MA, USA) 试剂甲酸(分析纯，上海凌峰化学试剂有限公司)；乙腈(色谱纯，Fisher Science);水为超纯水。
甲醇提取样品的制备称取山茱萸生、制品粉末各I g，精密称定，分别置25 mL容量瓶中，加80%甲醇定容到刻度，密塞，称重，超声提取45 min，再次称重，用甲醇补充丢失的重量。
2.实验方法的确立液相色谱条件色谱柱为Ag ilent Zorbax C18 (250mm X 4. 6 mm, 5. O μπι)柱,柱温 30 °C。流动相A为0.1%的甲酸溶液；B为乙腈，梯度洗脱，洗脱程序如下梯度洗脱0 10 min, 2% B ; 10 15 min, 2% 5% B ; 15 20 min, 5% 10% B ；20 30 min, 10% 15% B ；30 40 min, 15% 20% B ；40 50 min, 20% 25% B ；50 60 min, 25% 50% B。进样量为10 yL，流速为I mL/min，柱后分流，分流比约为1:1。DAD检测器记录190 400 nm的光谱数据，结果见图2，图中色谱峰I是我们需要制备的化合物。
质谱条件=LC-MS系统使用ESI离子源，在正离子模式与负离子模式下分别采集数据。数据采集范围m/z550 1100。离子源参数干燥气(N2),流速8 mL/min ;雾化压力 35 psi ;干燥气温度320 °C。LC-MS分析结果见图3和图4。
3.电离方式的确定在电喷雾过程中，由于样品中各组分带上正电和负电的难易程度不同，有必要进行正离子和负离子电离方法的比较，以选择一种适合这两个成分的电离方法。实验过程中发现在ESI正负两种离子化方式下都能带上电荷，本实验采用两种电离方法来检测这未知成分 (见图3和图4)。
负离子模式的结果化合物I的m/z= +541. 1466，可能分子式见表I。
表I未知化合物I的可能分子式和分子量
权利要求
1.一种山茱萸裂苷在制备治疗糖尿病肾病药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于将山茱萸裂苷加工成口服剂型药物中的应用，包括颗粒剂、片剂、胶囊剂和口服液体剂。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于将山茱萸裂苷加工成注射剂型药物中的应用。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于山茱萸裂苷的有效治疗量为O.lg-5. 5g/kg ο
5.一种治疗糖尿病肾病的含山茱萸裂苷的胶囊或片剂，其特征在于制剂处方山茱萸裂苷120g、微晶纤维120g、淀粉30g、乳糖28g、糊精3g ;根据处方按照配比将各组分混合均匀，之后加入体积分数80%的乙醇溶液制粒，整粒；制成胶囊或者压制成片剂。
6.一种治疗糖尿病肾病的含山茱萸裂苷的颗粒剂，其特征在于颗粒剂处方山茱萸裂苷120g、乳糖1015g;将山茱萸裂苷与乳糖混合均匀，用体积分数70%的乙醇溶液制软材，制粒、干燥、整粒、分装即得。
7.一种治疗糖尿病肾病的含山茱萸裂苷的注射液，其特征在于取20g山茱萸裂苷加适量注射用水，加热溶解，调PH值至7. 0，加入活性炭O. 2g，加热至80-85°C保温，过滤后， 加注射用水至2000ml，O. 2 μ m微孔滤膜过滤，灌封，即得。
全文摘要
本发明涉及山茱萸裂苷在制备治疗糖尿病肾病药物中的应用。本发明提出了山茱萸裂苷在制备治疗糖尿病肾病药物中的新用途，为治疗糖尿病肾病提供了新的药物选择。经实验验证，给药量达0.1g-5.5g/kg的山茱萸裂苷，对糖尿病肾病的治疗具有显著疗效。山茱萸苷对糖尿病状态下肾组织具有满意的抗炎症损伤、改肾功能的效应，是治疗糖尿病肾病的有效药物。
文档编号A61K31/7048GK103054890SQ20121053242
公开日2013年4月24日 申请日期2012年12月12日 优先权日2012年12月12日
发明者曹岗, 蔡宝昌, 杜伟锋, 岳显可 申请人:浙江中医药大学