专利名称：一种具有溶栓作用的黄芪发酵物的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种发酵物的制备方法。
背景技术：
据统计，由血栓及动脉粥样硬化引起的心脑血管疾病是人类最主要的疾病死亡原因之一。由于其发病原因受多种因素控制，因此攻克此类疾病成为当今世界面临的最严峻的挑战之一。血栓病(脑、心、四肢梗塞等)发病率高，死亡率高，其中脑中风患者中70%是脑血栓。一旦患上血栓性疾病,治疗费用相当昂贵，因此人们需要高效、低毒、价格低廉的溶栓药物。
根据现代医学和生物学研究的最新成果，血液中血纤维蛋白的凝结和溶解作用是整个过程的关键。纤溶酶系统是一个具有多种生理功能的蛋白溶解酶系统，其主要作用是降解血管壁上沉积的纤维蛋白，是血液中凝块消除、恢复血流的主要因素。目前临床上使用的溶栓药都有一个共同的缺陷，即出血并发症，同时治疗费用高、半衰期短，不能口服。黄苗为豆科植物蒙古黄苗Astragalus membranaceus (Fisch. ) Bge. var.mongholicus (Bge. ) Hsiao 或膜荚黄苗 Astragalus membranaceus (Fisch. ) Bge.的干燥根。现代药理研究表明黄芪总皂苷具有抗血栓形成作用，其作用机制与提高前列环素(PGI2)和一氧化氮(NO)水平有关。

发明内容
本发明提供一种具有溶栓作用的黄芪发酵物的制备方法；目的是为了提高黄芪的生物活性，发挥更广泛的药理作用。具有溶栓作用的黄芪发酵物的制备方法，按以下步骤实现一、黄芪浸泡于水中10 24小时，过滤，将浸泡后的黄芪装袋，每袋50 250g，在121°C下灭菌20 40分钟，冷却至室温；二、向每袋黄芪中接入I 5ml浓度为I X IO5 I X 108cfu/ml的侧耳菌菌液，在22 32°C下发酵10 50天，干燥，即完成具有溶栓作用的黄芪发酵物的制备；其中步骤二中侧耳菌菌液，所述侧耳菌(Pleurotus ostreatus)的编号为ACCC50128。本发明中黄芪主要含有皂苷、黄酮、多糖、氨基酸及微量元素，具有利尿、强心、提高机体免疫力和抗衰老等功效。黄芪味甘，微温，归脾、肺经，具有补气升阳、托毒排脓、敛疮生肌、利水消肿、固表止汗的功效。侧耳菌(Pleurotus ostreatus)系担子菌纲口蘑科侧耳属真菌，是民间常用食用菌，不仅营养价值高，同时又具有一定的药用价值。侧耳菌含有多糖、多肽、酶等生物活性成分，具有免疫促进、降血脂、清除自由基、抗肿瘤等多种药理活性。侧耳菌具有强大的酶系和生物转化能力，黄芪经侧耳菌发酵后，使多糖、肽及酶类等生物活性成分的组成及含量发生较大变化，一方面提高原有活性成分的含量，另一方面通过微生物的转化生成新的活性物质，从而扩大其药理活性范围。利用微生物发酵，不仅降低了用药成本，提高了功效，还为新药开发提供了途径。本发明所制备的黄芪发酵物，含有多糖及可溶性蛋白质，活性成分含量高，有直接纤溶作用又具有激活纤溶酶原的作用，对血块的溶解作用非常明显，具有较好的降解血栓纤维蛋白的能力，溶解率达到96. 31% 99. 73%，而且经过药理、毒理实验表明，无毒副作用，服用安全。
具体实施例方式具体实施方式
一本实施方式具有溶栓作用的黄芪发酵物的制备方法，按以下歩骤实现一、黄苗浸泡于水中10 24小时,过滤,将浸泡后的黄苗装袋,姆袋50 250g,在121°C下灭菌20 40分钟，冷却至室温；ニ、向每袋黄芪中接入I 5ml浓度为IXlO5 lX108cfu/ml的侧耳菌菌液，在22 32°C下发酵10 50天，干燥，即完成具有溶栓作用的黄芪发酵物的制备；其中步骤ニ中侧耳菌菌液，所述侧耳菌(Pleurotus ostreatus)的编号为ACCC50128。本实施方式中侧耳菌的编号为ACCC50128，购买自中国农业微生物菌种保藏管理中心。本实施方式中的黄芪为蒙古黄芪或膜荚黄芪，从市场上购买得到。本实施方式步骤ー中的过滤是为了滤去多余水分。本实施方式中所得具有溶栓作用的黄芪发酵物，可作为原料制成任何一种药剂学上所述的常规剂型(常规剂型为注射剂、冻干粉针剂、片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、混悬齐 、ロ服液、气雾剂、喷雾剂、滴鼻剂、栓剂)。
具体实施方式
ニ 本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤一中黄芪浸泡于水中12 22小时，过滤，将浸泡后的黄芪装袋，每袋100 200g，在121°C下灭菌25 35分钟。其它步骤及參数与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
三本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤一中黄芪浸泡于水中18小时，过滤，将浸泡后的黄芪装袋，每袋150g，在121°C下灭菌30分钟。其它步骤及參数与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
四本实施方式与具体实施方式
一至三之一不同的是步骤ニ中向每袋黄芪中接入2 4ml浓度为IXlO5 lX107cfu/ml的侧耳菌菌液，在25 30°C下发酵20 40天。其它步骤及參数与具体实施方式
一至三之一相同。
具体实施方式
五本实施方式与具体实施方式
一至三之一不同的是步骤ニ中向每袋黄芪中接入3ml浓度为lX106cfu/ml的侧耳菌菌液，在28°C下发酵35天。其它步骤及參数与具体实施方式
一至三之一相同。
具体实施方式
六本实施方式具有溶栓作用的黄芪发酵物的制备方法，按以下歩骤实现一、黄芪浸泡于水中20小时，过滤，将浸泡后的黄芪装袋，每袋200g，在121°C下灭菌40分钟，冷却至室温；ニ、向每袋黄芪中接入5ml浓度为I X 106cfu/ml的侧耳菌菌液，在25°C下发酵45天，干燥，即完成具有溶栓作用的黄芪发酵物的制备；其中步骤ニ中侧耳菌菌液，所述侧耳菌(Pleurotus ostreatus)的编号为ACCC50128。、
本实施方式中黄芪为蒙古黄芪。本实施方式得到的具有溶栓作用的黄芪发酵物与黄芪药材相比，进行纤溶酶活性及体外溶栓实验，过程如下纤溶活性测定通过20IU/mL、40IU/mL、60IU/mL、80IU/mL、100IU/mL 浓度尿激酶的纤溶活性建立标准曲线，以尿激酶标准品单位数的对数为横坐标，溶菌圈垂直两直径乘积的对数为纵坐标绘制标准曲线，计算回归方程。称取黄芪药材和黄芪发酵物2g，加入IOmL生理盐水于4°C浸提24h，离心后取上清液。取供试品溶液各10 y L和尿激酶标准品点于同一琼脂糖纤维蛋白平板上，置37°C恒温箱中反应18h，取出后用游标卡尺测量溶圈垂直两直径，将供试品垂直两直径乘积的对数代入标准曲线回归方程，计算供试品纤溶活性。血块溶解率的测定家兔心脏采血，凝固成血块，切成小块，重量在IOOmg左右，用滤纸吸去其表面水分后，精确称重，放置于不同试管中。加入500ii L样液,取同体积0. 9%生理盐水作为空白对照，放置于37°C恒温6h，取出用滤纸吸干水分称重，计算血块溶解率。纤溶活性及溶栓作用结果如下表I纤溶酶活性及体外溶栓实验结果
权利要求
1.ー种具有溶栓作用的黄芪发酵物的制备方法，其特征在于具有溶栓作用的黄芪发酵物的制备方法，按以下步骤实现一、黄芪浸泡于水中10 24小时，过滤，将浸泡后的黄芪装袋，每袋50 250g，在121°C下灭菌20 40分钟，冷却至室温；ニ、向每袋黄芪中接入I 5ml浓度为I X IO5 I X 108cfu/ml的侧耳菌菌液，在22 32°C下发酵10 50天，干燥，即完成具有溶栓作用的黄芪发酵物的制备； 其中步骤ニ中侧耳菌菌液，所述侧耳菌(Pleurotus ostreatus)的编号为ACCC50128。
2.根据权利要求I所述的ー种具有溶栓作用的黄芪发酵物的制备方法，其特征在于步骤一中黄芪浸泡于水中12 22小时，过滤，将浸泡后的黄芪装袋，每袋100 200g，在121°C下灭菌25 35分钟。
3.根据权利要求I所述的ー种具有溶栓作用的黄芪发酵物的制备方法，其特征在于步骤一中黄芪浸泡于水中18小时，过滤，将浸泡后的黄芪装袋，每袋150g，在121°C下灭菌30分钟。
4.根据权利要求1、2或3所述的ー种具有溶栓作用的黄芪发酵物的制备方法，其特征在于步骤ニ中向每袋黄芪中接入2 4ml浓度为I X IO5 I X 107cfu/ml的侧耳菌菌液，在25 30°C下发酵20 40天。
5.根据权利要求1、2或3所述的ー种具有溶栓作用的黄芪发酵物的制备方法，其特征在于步骤ニ中向每袋黄芪中接入3ml浓度为I X 106cfu/ml的侧耳菌菌液，在28°C下发酵35天。
全文摘要
一种具有溶栓作用的黄芪发酵物的制备方法，它涉及一种发酵物的制备方法。它目的是为了提高黄芪的生物活性，发挥更广泛的药理作用。方法一、黄芪浸泡于水中过滤后装袋，灭菌，冷却；二、向每袋黄芪中接入侧耳菌菌液，发酵后干燥，即完成。本发明中黄芪经侧耳菌发酵后，使多糖、肽及酶类等生物活性成分的组成及含量发生较大变化，提高原有活性成分的含量，转化生成新的活性物质，从而扩大其药理活性范围。本发明中制备的黄芪发酵物具有直接纤溶作用又具有激活纤溶酶原的作用，对血块的溶解作用非常明显，具有较好的降解血栓纤维蛋白的能力，溶解率达到96.31%～99.73%，而且经过药理、毒理实验表明，无毒副作用，服用安全。
文档编号A61K36/481GK102716181SQ20121022898
公开日2012年10月10日 申请日期2012年7月4日 优先权日2012年7月4日
发明者方自若, 曹思思, 王伟明, 陈丽艳 申请人:黑龙江省中医研究院