专利名称：使血浆中逃逸免疫检测病毒失活之组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种新的使存在于已被感染了的、但通过常规免疫方法对此病毒不发生抗体的输血者的血浆中的被膜病毒，如存在于供血血浆中的HIV(人体免疫缺乏性病毒)和HCV(肝C病毒)失活之组合物，特别地，本发明提供了在天然或合成的去污剂存在的条件下有机溶剂破坏这些病毒的保护性膜的新的用途和方法。
Horowitz公开了一种用溶剂和去污剂相结合使病毒失活的方法Mrogenthaler J-J(ed)Virus Inactivation in Plasma Products，CurrStud Hematol Blood Transfus Basel Karger，1989，NO.56，PP83-96.此文揭示了在37℃以下仅用磷酸三正丁酯(TNBP)，杀病毒的能力会被减弱，在此条件下没有任何一种去污剂(胆酸钠或Tween-80)是杀病毒的。然而，在37℃时，当TNBP和去污剂共存时却能获得优异的杀病毒能力。
本发明公开了一种新的组合物，即对Horowitz的溶剂和去污剂混合物有引进能力的某些添加剂，这些添加剂的加入会导致在28℃以下更快或更完全地杀死病毒。
本发明所公开的组合物其配比为组分配比(体积比)低分子醇1-3TNBP100去污剂 适量其中所述的低分子醇可以是乙醇、丙醇或丁醇。另外，所述的去污剂可以是胆酸钠、Tween-80或Triton-X。去污剂的量与Horowitz溶液所使用的去污剂的量相同。
根据本发明，已发现在TNBP和去污剂的混合物中加入1至3％的乙醇、丙醇或丁醇，可以在10分钟内有效地杀病毒，并且温度可以降至不超过28℃，这对于蛋白质很有利，因为很多蛋白质对热度性很敏感，因此在前面技术的描述中均要求失活的处理应在30℃以下进行。根据本发明，已发现将此组合物接种兔子，会导致形成抗此病毒的抗体。
优选实施方案的详细述为虽然下面描述的实施方案使用乙醇和丁醇，但预期任何数量的部分增水小分子都是有效的，并且这些实施例应被认为仅是用于说明的。
化学试剂可从商业供应商处买到，尽可能使用不需要进一步纯化的最高级别的化学试剂。这里使用的标记病毒，Sindbis病毒的滴定度，是通过使用原发性鸡胚胎细胞的终点滴定和细胞学测定。
新鲜冷冻的血浆(FFP)和低温沉淀物(CYO)由无既往或最近病毒感染的健康个人提供。
实施例1在TNBP中加入低分子量醇对病毒失活的效率。
将FFP或CYO样品用Sindbis病毒人为污染，然后将TNBP本身或将加有第一种添加剂(按每100体积份TNBP计的0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0份乙醇)的TNBP(每100份的血浆蛋白溶液中加入一份此TNBP)，在28℃时，加入到蛋白质组分中。一次一次地(在每10分钟间隔内)等份数地移取溶液使反应通过用5％的小牛血清稀释至100倍过量的很小Essential Medium Eagle并冷冻而终止，直至量后测定病毒滴定度，发现通过加入乙醇(在TNBP中加入2-3％)，在第一个10分钟内，病毒失活的程度比仅用TNBP大10倍，其在低温沉淀中的效果比FFP溶液更为显著。
用第二种添加剂(丁醇、将0.5、1.0、1.5和2.0体积份的丁醇加入到100体积份的TNBP中)。已发现最有效的浓度为1.0至1.5％的丁醇。同样使用添加剂的TNBP在28℃时的灵活的效果比不使用醇的TNBP增加约10倍。
实施例2在溶剂和去污剂的混合物中通过加入醇对杀病毒影响。
同样，使用实施例1中公开的相同实验条件，不同的是还加入了去污剂。去污剂选自Twwen80(1％)、或Triton X100(1％)或胆酸钠(0.2％)(所有为按每100份FFP或CYO计的体积份)，将加有去污剂的TNBP的具有的病毒失活性与加有醇的并含有相同的去污剂的TNBP的具有的病毒失活性进行比较。所有失活活实验条件都在28℃下进行。得到的结果再一次表明，病毒在CYO中的失活效果比用FFP的同样处理的要差。然而，在测定的最早期(加入处理试剂后10分钟)，在加有去污剂的TNBP中存在1-3％的乙醇(或者为丙醇或者为丁醇)，其效果为加有同样去污剂的TNBP本身大12倍。
用TNBP加丁醇(每100份体积的TNBP中为1％(体积)，加胆酸钠(0.2％)在32℃至26℃之间重复失活动力学研究。使用的TNBP的浓度为0.3％或1.5％。已经发明当温度升至32℃时做活性实验，存在丁醇(加上TNBP加上胆酸盐)对结果无实质性(与无丁醇的加有胆盐酸的TNBP比较)，然而，在26℃时，无论是TNBP0.3或为1.5％(体积/血浆蛋白溶液的体积)。混合物中丁醇的存在使第一个10分钟内杀病毒的有效性增加了6倍。
将一部分具有失活病毒的FFP通过皮下、静脉和肌肉注射，使兔子免疫，经过给药三周后，在处理的兔子的血清中，检测到抗病毒的抗体。
本发明提供的使血浆中逃逸免疫检测病毒失活之组合物，可以快速完全地使被膜病毒失活，提供了一种新的使病毒失活的方法，同时扩展了有机溶剂的新用途。
权利要求
1.一种使血浆中逃逸免疫检测病毒失活之组合物，其中，其组成为组成 配比(体积比)低分子醇 1-3TNBP 100去污剂适量
2.权利要求1所述的组合物，其中，所述的低分子醇是乙醇、丙醇或丁醇。
3.权利要求1所述的组合物，其中，所述的去污剂是胆酸钠、Tween-80或Triton-X。
4.一种使血浆中逃逸免疫检测病毒失活的方法，其中，在血浆蛋白溶液中加入低分子醇和有机溶剂以及去污剂能够使一万只病毒在十分钟内失活。
5.权利要求4所述的方法，其中，所述的低分子醇是乙醇、丙醇或丁醇。
6.权利要求4所述的方法，其中，所述的去污剂是胆酸钠、Tween-80或Triton-X。
7.权利要求4所述的方法，其中，所述的有机溶剂是磷酸三正丁酯。
8.权利要求4所述的方法，其中，所述的低分子醇的浓度为1-3体积低分子醇100体积有机溶剂。
9.权利要求4所述的方法，其中，所述的有机溶剂的浓度为0.3-1.5体积有机溶剂100体积血浆蛋白溶液。
10.权利要求4所述的方法，其中，所述的失活步骤的温度为1-28度。
11.一种人体血浆蛋白组合物，含有通过溶剂杀死的失活病毒颗粒，此溶剂为磷酸三正丁酯、低分子醇和去污剂。
12.权利要求11所述的人体血浆蛋白组合物，其中，所述的低分子醇是乙醇、丙醇或丁醇。
13.权利要求11所述的人体血浆蛋白组合物，其中，所述的去污剂是胆酸钠、Tween-80或Triton-X。
全文摘要
本发明公开了使血浆中逃逸免疫检测病毒失活之组合物，包括低分子醇和TNBP，其中所述的低分子醇可以是乙醇、丙醇或丁醇，其中低分子醇和TNBP的配比是1-3∶100。本发明提供的使血浆中逃逸免疫检测病毒失活的组合物，可以快速完全地使被膜病毒失活，提供了一种新的使病毒失活的方法，同时扩展了有机溶剂的新用途。
文档编号A61L2/16GK1151524SQ9511839
公开日1997年6月11日 申请日期1995年11月30日 优先权日1995年11月30日
发明者徐家祥 申请人:徐家祥