专利名称：取代的犬尿氨酸、其制备方法及其作为药物的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及某些化合物的新的医疗用途和一些新化合物，以及制备这些化合物的方法和含有这些化合物的药物组合物。
特别地，本发明涉及用于治疗与大脑衰老过程相关的识知障碍的化合物，该类化合物被用作犬尿氨酸转氨酶(现有技术中称为KAT)的抑制剂。
这些用作KAT抑制剂的化合物可通过标准试验来鉴定，例如按照J.Neurochem.，57，533-540(1991)中所述，在鼠脑组织的匀浆中测定化合物对抑制KAT活性的能力，或者按照J.Neurochem.，52，1629-1636(1989)中所述的利用鼠脑组织切片测定该类化合物对犬尿喹啉酸(KYNA)生成的抑制作用。
KAT能催化由犬尿氨酸(KYN)转向KYNA的生物合成 而且KAT是脑内KYNA细胞外浓度调节的特异应答物质(J.Neurochem.，57，533-540，1991)。
KYNA是有效的兴奋氨基酸(EAA)受体拮抗物，它对N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体复合物的甘氨酸调节位点具有特别高的亲和性(J.Neurochem.，52，1319-1328，1989)。
作为天然存在的脑代谢产物(J.Neurochem.，51，177-180，1988和BrainRes，454，164-169，1988)，KYNA可能是作为大脑谷氨酸功能的反向内源调节剂而起作用(Ann.N.Y.Acad.Sci.，Vol.648，P.140-153，1992)。
EAA受体，特别是NMDA受体是已知的，它在哺乳动物脑内起重要作用(J.C.WatkinsandG.L.，Collingridge-编辑-，TheNMDAreceptor，OxfordUniversityPress，Oxford，1989，PP.242)。例如，NMDA受体的激活对认知过程，例如学习和记忆是重要的(J.C.WatkinsandG.L.Collingridge-eds-，InTheNMDAreceptor，OxfordUniversityPress，Oxford，P.137～151，1989)，对大脑进化也是重要的(TrendsPharmacol.Sci.，11，290～296，1990)。
因此，NMDA受体功能的下降对大脑生理功能，进而对整个有机体具有不利的影响。例如在衰老的大脑内出现的NMDA受体数量的减少(Synapse，6，388～343，1990)可能和衰老相关的识知功能的失调相关联的。
在脑内，KYNA的浓度及KYNA的生物合成酶KAT的活性随着年龄增长有明显增长(BrainRes.558，1～5，1992andNeurosci，Lett.，94，145～150，1988)。KAT抑制剂通过使NMDA受体上谷氨酸片段的增加，对NMDA受体功能不充分和/或KAT活性及KYNA量异常增强的情况特别有用。因此，它们对治疗与衰老相关的病理表现，例如，老年人的识知障碍，包括注意力和记忆力减弱以及失眠现象特别有用。
KAT抑制剂也可以用于治疗产期脑功能失调，产期脑功能失调可能与产后KAT进化的特征区特异类型中的不规则相关(H.BaranandR.SchwarczRegionaldifferencesintheontogenicpatternofKATintheratbrain，Dev.BrainRes.，inpress)。
因此本发明的第一方面包括KAT抑制剂在治疗产期脑功能失调方面的应用。
在本发明说明书中，“治疗”一词包括“预防性治疗”及“症状的明显减轻”。
根据本发明，用作KAT抑制剂的特定化合物是具有下列通式(Ⅰ)的5-取代犬尿氨酸衍生物 其中R是卤素、C1-C6烷基、C5-C7环烷基、苯基-C1-C4烷基、C1-C6烷氧基、C6-C10芳氧基、苯基C1-C4烷氧基或三氟甲基;
R1是羟基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、羟基氨基、C1-C4烷氧基氨基或苄氧基氨基。
本发明也包括用作KAT抑制剂的式(Ⅰ)化合物的药物可接受的盐类，及式(Ⅰ)代表的单独存在或混合存在的可能的异构体。
本发明也涉及式(Ⅰ)化合物所代表的某些新化合物。
作为本发明第二个目的的化合物，是具有下列通式(IA)的化合物
其中R是卤素、C1-C6烷基、C5-C7环烷基、苯基-C1-C4烷基、C1-C6烷氧基、C6-C10芳氧基、苯基C1-C4烷氧基或三氟甲基;
R1是羟基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、羟基氨基、C1-C4烷氧基氨基或苄氧基氨基。
条件是(ⅰ)当R1是羟基且同时R是卤素时，则该卤素不是氟;和(ⅱ)当R1是羟基且同时R是C1-C6烷基时，则该C1-C6烷基不是甲基。
本发明的第二个目的中也包括式(IA)化合物的药用可接受的盐类，及式(IA)代表的单独存在或混合存在的全部可能的异构体，且同样受上述条件的限制。
在本说明书中，对于上述的式(Ⅰ)和(IA)，各种取代基的特征如下“卤素”代表Cl、Br、I或F，优选Cl和Br。
“C1-C6烷基”包括，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基和正己基，优选的是甲基、乙基、正丙基或异丙基。
“C5-C7环烷基”代表5～7节的单碳环，优选的是环戊基或环己基。
“C6-C10芳氧基”包括，例如苯氧基和萘氧基;优选的是苯氧基。
“苯基-C1-C4烷基”代表含有苯基的C1-C4烷基，例如苄基或1-苯基乙基;优选的是苄基。
“苯基-C1-C4烷氧基”代表含有苯基的C1-C4烷氧基，例如苄氧基或1-苯基乙氧基;优选的是苄氧基。
“C1-C6烷氧基”包括，例如，甲氧基、乙氧基、正丙氧基和异丙氧基;优选的是甲氧基或乙氧基。
“C1-C6烷基氨基”包括，例如，甲氨基、乙氨基、正丙氨基、异丙氨基和正丁氨基;优选的是甲氨基。
“C1-C4烷氧基氨基”包括，例如，甲氧氨基、乙氧氨基、正丙氧氨基和异丙氧氨基;优选的是甲氧氨基。
式(Ⅰ)和(IA)的化合物具有一不对称碳原子，因而它们可能以光学异构体的消旋混合物(对映体)形式存在，或以单一光学异构体形式存在。
除非另有说明，式(Ⅰ)或(IA)化合物的不对称中心的S构型相当于天然犬尿氨酸的L型，反之，R构型相当于天然犬尿氨酸的D型。
式(Ⅰ)或(IA)化合物的药用可接受的盐类包括使用药用可接受的酸类所形成的盐，或无机酸，例如盐酸、氢溴酸、硝酸或硫酸、或有机酸，例如柠檬酸、酒石酸、马来酸、富马酸、甲磺酸或乙磺酸，或者，当式(Ⅰ)或(IA)的化合物含有酸性基团，例如羰基时，则与药用可接受的碱形成盐，例如碱金属，如钠或钾，碱土金属如钙或镁;锌或铝;或有机碱例如脂族胺类如甲胺、二乙胺、三甲基胺、乙胺和杂环胺如吡啶。
本发明优选的一类化合物是由式(IA)表示的化合物，其单一的异构体或异构体混合物，及其药用可接受的盐类，其中R是卤素，C1-C6烷基或C5-C7环烷基;R1是羟基;条件是(ⅰ)当R是卤素时，则该卤素是不氟;和(ⅱ)当R是C1-C6烷基时，则该C1-C6烷基不是甲基。
上述式(IA)优选的化合物的特例有2-氨基-4-(2-氨基-5-氯苯基)-4-氧代-丁酸;
2-氨基-4-(2-氨基-5-乙基苯基)-4-氧代-丁酸;
2-氨基-4-(2-氨基-5-溴苯基)-4-氧代-丁酸;
2-氨基-4-(2-氨基-5-正丙基苯基)-4-氧代-丁酸;
2-氨基-4-(2-氨基-5-异丙基苯基)-4-氧代-丁酸;
2-氨基-4-(2-氨基-5-环己基苯基)-4-氧代-丁酸;
及上述化合物单一的异构体或异构体的混合物及其药用可接受的盐类。
本发明的式(Ⅰ)或(IA)的化合物可根据下述方法制备1)使式(Ⅱ)的化合物与氯代乙腈反应而得到式(Ⅲ)的化合物 其中R如式(Ⅰ)或(IA)中所定义，
其中R定义如上。
2)使式(Ⅲ)的化合物与二乙基乙酰氨基丙二酸的钠盐反应，得到式(Ⅳ)的化合物 其中R定义如上。
3)使式(Ⅳ)的化合物用浓盐酸处理，得到R定义如上且R1是羟基的式(Ⅰ)或(IA)的化合物;如果需要，可以将式(Ⅰ)或(IA)的化合物转换成R1部分不是羟基的另一种式(Ⅰ)或(IA)的化合物;且如果需要，可以将式(Ⅰ)或(IA)的化合物成盐;且如果需要，可以将式(Ⅰ)或(IA)化合物的异构体混合物分离成单一的异构体。
或者，式(Ⅰ)或(IA)的化合物可以通过立体有择地定向合成方法而直接得到单一的异构体。
式(Ⅱ)的化合物与氯乙腈之间的反应可通过以下步骤完成，向搅拌着的三氯化硼的二氯甲烷溶液中，加入式(Ⅱ)化合物于无水苯中的溶液，然后加入氯代乙腈和三氯化铝，将所得的混合物回流20小时。
式(Ⅲ)的化合物与乙酰氨基丙二酸钠盐之间的反应可通过下述步骤进行向乙醇的钠溶液中加入乙酰氨基丙二酸二乙酯(溶于乙醇中)，然后加入式(Ⅲ)的化合物，使反应混合物在室温放置20小时，然后于40℃加热4小时。
式(Ⅳ)的化合物与浓盐酸之间的反应例如可按下述方法进行将式(Ⅳ)的化合物于浓盐酸中回流7小时。
其中R1不是羟基的式(Ⅰ)或(IA)的化合物，可以按照本领域的普通技术人员共知的方法，由R如上所定义且R1羟基的式(Ⅰ)或(IA)的化合物作起始物而进行制备。
使式(Ⅰ)或(IA)的化合物成盐可以按照已知的方法进行;通常是通过将本发明的化合物与适量的成盐试剂反应而实施的。
已如上述，式(Ⅰ)或(IA)的化合物中有一不对称碳原子，因此这些化合物可以以消旋混合形式存在，也可能以单一的光学异构体(非对映体)形式存在。因而，这些化合物可以先作为混合物的形式进行合成，然后通过常规方法将所要的异构体分离出来，或通过已知的立体有择性方法进行合成。
从相应的消旋混合物中分离为单一的光学异构体例如可以按下述方法进行按照现有技术中已知的方法，使用合适的氨基酸保护基团，如乙酰基、羰苄氧羰基或叔丁氧羰基，将外消旋的式(Ⅰ)或(IA)化合物转换成N-保护的化合物。然后将所得到的式(Ⅰ)或式(IA)的外消旋化合物的N-保护的衍生物，在用适当的光学活性胺如α-甲基苄胺，番木鳖碱或辛可宁，在适当的溶剂如乙酸乙酯或二噁烷存在下成盐后，再进行重结晶，得到式(Ⅰ)或(IA)化合物的一种对映性纯的非对映异构体的盐，然后用已知方法脱保护，而得到式(Ⅰ)或(IA)化合物的拆开的(R)或(S)对映体。
或者也可以通过立体有择地定向合成方法而直接得到式(Ⅰ)或(IA)化合物的单一对映体。
例如，将式(Ⅴ)的化合物， (其中R是卤素、C1-C6烷基、C5-C7环烷基、苯基-C1-C4烷基、C1-C6烷氧基、C6-C10芳氧基、苯基-C1-C4烷氧基或三氟甲基;
R2是COR3或COOR3，其中R3是C1-C6烷基)与式(VIA)或(VIB)的化合物进行反应， (其中R2按式(Ⅴ)化合物中所定义)然后将所得的化合物用合适的水解剂如HCl或HBr进行水解，得到其中R如上所定义且R1是羟基的式(Ⅰ)或(IA)化合物的纯对映体。
通过本领域技术人员熟知的标准操作，可以将R1是羟基的式(Ⅰ)或(IA)化合物的纯对映体转换成取代基R1是羟基的式(Ⅰ)或(IA)的另一种化合物。
式(Ⅴ)化合物与式(VIA)或(VIB)化合物之间的反应例如可以通过下述方法完成，在合适的钯复合物如三(二亚苄基丙酮二钯(O)-氯仿加合物存在下，将反应物混合而进行。
式(Ⅴ)的化合物可以按现有技术已知的方法制备(J.Org.Chem.1979，44，1133)。
式(VIA)或(VIB)的化合物可按现有技术已知方法制备(J.Org.Chem.1988，53，6138)。
式(VIA)或(VIB)的化合物中的C1-C6烷基的含意与式(Ⅰ)或(IA)化合物中相同。
或者，也可以直接得到纯的式(Ⅰ)的或(IA)的化合物的对映体，例如，通过将式(Ⅰ)或(IA)的外消旋化合物或及其反应衍生物，与适当的光学纯的胺，如(R)-(-)-或(S)-(+)-2-氨基-2-苯乙醇，在适当的溶剂如二甲基甲酰胺(DMF)中如在5°至25℃温度下进行反应，反应时间可以如从1小时至48小时之间。所得到的非对映异构体可以通过层析法分离而得到纯的差向异构体(即非对映异构体仅在一个不对称中心上构象不同)，该产物经合适的水解剂如HCl或HBr进行水解，而得到式(Ⅰ)或(IA)的对映体纯的化合物。
在本发明的化合物的合成中，用作起始物的相当于式(Ⅱ)化合物的取代的苯胺是可以商购的化合物，或通过本领域技术人员熟知的方法进行制备。
式(Ⅰ)或(IA)的化合物在抑制犬尿氨酸转氨酶(KAT)的效率可以用下述试验A)、B)、C)表明。
A)鼠脑组织匀浆中KAT活性抑制的测定KAT用OKunoetal.详述的方法测定(Measurementofratbrain kynurenine amino-transferase at physiological kynurenine concenrtrations，J.Neurochem.，57，533-540，1991)。简言之，动物被断头处死，然后将脑组织匀化(15v/w在5mMTris-乙酸酯缓冲液，pH8.0中，含有10mM2-巯基乙醇和50μm吡哆醛-5′-磷酸)且在2μm[3H]KYN(30 n Ci)，1mM2-酮戊二酸和70μM吡哆醛-5′-磷酸存在下，在150nMTris-乙酸酯缓冲液pH8.0中，于37℃培养2小时。该反应通过加入三氯乙酸而终止。
新合成的[3H]KYNA在Dowex 50 W阳离子交换柱上由[3H]KYN中分离，并用液体闪烁谱分析法定量。空白对照通过使用已在沸水中加热失活10分钟的组织而进行的。
在这些条件下测试时，本发明的化合物能够抑制KAT的活性。
以可代表量的式(Ⅰ)或(IA)化合物而得到的结果列于下表中表1
nc＝未计算B)通过鼠组织切片测定对KYNA产生的抑制按照常规，从大脑皮质得到的切片(1×1mm;重≈1.5mg/片)在冰上分离，然后转入培养皿中(10片/皿)，该培养皿中含有1ml的氧化的Krebs-Ringer缓冲液(NaCl，118.5mM;KCl，4.75mM;CaCl2，1.77mM;MgSO4，1.18mM;NaH2PO4，12.9mM;NaH2PO4，3mM;葡萄糖，5mM;pH7.4)。接着，在50μM L-KYN存在下，在氧气室内振摇的水浴上，该组织在37℃下预培养10分钟，然后在37℃再培养2小时。按照要求，本发明的化合物包括在培养物中。培养后，迅速将培养皿置于冰上，快速地将切片与培养基分离。为了测定KYNA，将1ml的培养基样品浸渍于沸水浴中10分钟，然后离心(8.730×g，10分钟)除去沉淀的蛋白质。上清液用0.2M HCl稀释(11，v/v)，并加到Dowex 50 W(氢型，Sigma)阳离子交换柱(0.5×2cm)上。接着，用1ml的0.1M HCl和1ml的水洗涤该柱，含KYNA的部分用2ml的水洗脱出来。洗脱液加到3-μm C18HPLC柱(100×3.2内径，Bioanalytical Systems，West Lafayette，IN，U.S.A)，KYNA用含有50mM乙酸铵和5%甲醇的流动相以0.5ml/min的速度洗脱，在该条件下，KYNA的保留时≈7分钟。
记录数据并用连接到置于340nm的160UV吸收监测仪(BeckmanInstruments，Berkeley，CA，U.S.A)的Hewlett-Packard3390A积分仪进行计算。
在本测试中，用代号表示的式(Ⅰ)或(IA)的化合物被测试，所得结果列于表2中。
表2 ＊在300μm nc＝未计算表1和表2中所用的缩写Me、Et、n-Pr、i-Pr分别代表甲基、乙基、正丙基和异丙基。
C)使用部分纯化酶制剂进行动力学分析KAT抑制剂(BrainResearch，534，37-44(1990)。
在0.1ml总体积的反应混合物中，含有用未标记的KYN稀释到最终浓度为2μm的[3H]KYN(30 nCi)、1mM丙酮酸盐、70μm吡哆醛-5′-磷酸、150mM Tris-乙酸盐缓冲液pH8.0，和部分纯化的酶制剂。如果需要，受试化合物包括在培养混合物中，该反应通过加入丙酮酸盐开始，在37℃培养2小时后加入14μl的50%(w/w)的三氯乙酸而使反应终止。接着，加入1ml的0.1M HCl，并用Beckman52B微型离心机离心4分钟而将变性蛋白除去。1ml的所得的上清液加在Dowex 50 W柱(0.5×1.0cm;H+型)上，先用1ml的0.1M HCl洗涤，然后用1ml的蒸馏水洗涤。[3H]KYNA用2ml的蒸馏水洗脱，并用液相闪烁谱分析法定量。酶测定重复三次，空白对照通过已于沸水浴中加热失活10分钟的酶制剂而进行的。
动力学试验是使用上述的标准KAT方法，通过在有或没有固定浓度的受试化合物存在的条件下，改变在2μm至2mM之间的KYN的浓度而进行的。用两次重复的点作图，通过线性回归分析确定最佳曲线。
动力学常数L-犬尿氨酸D,L-5-Cl,犬尿氨酸KmKi369μM88μM本发明在其范围中还包括一些药物组合物，该组合物含有治疗有效量的式(Ⅰ)或(IA)的化合物的活性物质或其药用可接受的盐类以及式(Ⅰ)或(IA)包括的任何可能的异构体及异构体的混合物，其相关的一种或多种药用可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
哺乳动物，如人，是可用本发明的药用组合物治疗的。
本发明的化合物可以通过常规途径，例如胃肠外给药，如通过静脉注射或输液，肌内注射、皮下的、局部的或口服的或其它的通过吸入或吹入的适宜形式给药。剂量取决于患者的年龄、体重和条件，化合物的效力和施用途径。例如，对于成年人，合适的施用剂量为每剂中活性物质量为0.1至100mg，每天服用1～4次。本发明的药用组合物通常按下述方法制备并以药用可接受的形式施用。例如静脉注射或输液的溶液可以含有的载体是无菌水，或优选的是无菌的等渗性的盐水溶液。
肌内注射的悬浮剂、溶液剂或乳剂可以含有与活性化合物一起的药用可接受的载体，例如，无菌水、橄榄油、油酸乙酯、二元醇如丙二醇和如有必要适量的利多卡因盐酸盐。
注射剂的配方中可以含有其它配方制剂如助悬剂、稳定剂和/或分散剂。
或者，活性成分可以以粉末状配制，在使用前与合适的载体如无菌的无热原的水一起而构成。在局部施用制剂中，如霜剂、洗剂、膏剂时，活性成分可与常用的含油的或乳化的载体混合。
固体口服制剂，如片剂和胶囊剂，与活性物质一起可以含有稀释剂，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、纤维素、玉米淀粉和土豆淀粉;润滑剂例如硅石、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸镁或钙，和/或聚乙二醇;结合剂，例如，淀粉、阿拉伯胶、明胶、甲基纤维素，羧甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮;解聚剂，例如淀粉、藻酸、藻酸盐、淀粉甘醇酸钠;泡腾混合物;着色剂;甜味剂;湿润剂，例如卵磷脂、多乙氧基醚、十二烷基硫酸酯;以及，通常药物制剂中所使用的无毒、药物上惰性的物质。所述药物制剂可根据已知方法配制，例如通过混合、制粒、压片、包糖衣或包膜等方法。
片剂也以用本领域已知的方法进行包衣。
液体口服形式的制剂，例如，混悬剂、糖浆剂或液剂可以按常规方法，例如，用药用可接受的添加剂、防腐剂、甜味剂/或调味剂而进行配制。
本发明的药用组合物，可以通过本领域熟知的方法而制成某些剂型，使该药用组合物施用于患者后，其活性成分可以或快速、或持续或缓慢地释放。
下述的实施例用以说明本发明，但并不限制本发明。
实施例15-氯-2氨基-α-氯代乙酰苯在氮气氛下，温度为5℃至10℃的条件下向搅拌着的三氯化硼的二氯甲烷溶液(100ml1M，0.1mol)中滴加4-氯苯胺(12.12g，0.095mol)的无水苯溶液(120ml)。
向所得的混合物中，依次加入氯代乙腈(7.72ml，0.115mol)和三氯化铝(13.33g，0.1mol)。然后，将该混合物回流20小时。
冷却后，加入冰冷却的2N盐酸(≈100ml)，形成一种黄色沉淀，混合物在搅拌下于80℃加热，直到沉淀溶解(≈45′)。
冷却后的溶液通过加入2NNaOH使pH调至2，并用二氯甲烷萃取(三次)。
有机相用水洗涤，然后干燥(Na2SO4)，并浓缩。
残留物用己烷(≈120ml)研磨，得到9.27g所需的淡棕色固体产物，m.p.133-136℃。
按照相似方法，可以制得下列化合物5-甲基-2-氨基-α-氯代乙酰苯，m.p.127～129℃;
5-氟-2-氨基-α-氯代乙酰苯，m.p.121～123℃;
5-乙基-2-氨基-α-氯代乙酰苯，m.p.118～120℃;
5-环己基-2-氨基-α-氯代乙酰苯，m.p.88～91℃;
5-溴-2-氨基-α-氯代乙酰苯，m.p.127～130℃;
5-正丙基-2-氨基-α-氯代乙酰苯，m.p.119～122℃;
5-异丙基-2-氨基-α-氯代乙酰苯，m.p.66～70℃。
实施例2乙酰氨基-(2-氨基-5-氯苯甲酰甲基)丙二酸乙酯将钠(1.04g，0.0453mol)溶于乙醇(80ml)中，并加入乙酰氨基丙二酸二乙酯(9.84g，0.0453mol)在120ml乙醇的溶液，该溶液在45℃加热1小时。
冷却至室温后，滴加5-氯-2-氨基-α-氯代乙酰苯(9.25g，0.0453mol)在150ml乙醇的溶液，同时在氮气氛下搅拌。
将反应物在室温搅拌20小时，然后将该混合物在40℃加热4小时。将反应混合物蒸发至干，残留物用300ml水溶解，并加入1NNaOH(20ml)，用乙醚萃取。
有机相用水洗涤，干燥并蒸发至干，得到固体，用210ml异丙醇重结晶而得到6.02g所需的膏状固体的产物，m.p.156～158℃。
按照相似的方法，可以制备下列化合物乙酰氨基-(2-氨基-5-甲基苯甲酰甲基)-丙二酸二乙酯，m.p.179～181℃;
乙酰氨基-(2-氨基-5-氟代苯甲酰甲基)-丙二酸二乙酯，m.p.143～145℃;
乙酰氨基-(2-氨基-5-乙基苯甲酰甲基)-丙二酸二乙酯，m.p.121～123℃;
乙酰氨基-(2-氨基-5-环己基苯甲酰甲基)-丙二酸二乙酯，m.p.89～93℃;
乙酰氨基-(2-氨基-5-溴代苯甲酰甲基)-丙二酸二乙酯，m.p.151～154℃;
乙酰氨基-(2-氨基-5-正丙基苯甲酰甲基)-丙二酸二乙酯，m.p.115～117℃;和乙酰氨基-(2-氨基-5-异丙基苯甲酰甲基)-丙二酸二乙酯，m.p.110～115℃。
实施例32-氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸(D，L-5-氯代-犬尿氨酸)搅拌下将乙酰氨基-(2-氨基-5-氯代苯甲酰甲基)丙二酸二乙酯(5.3g，0.01377mol)在浓盐酸(60ml)的溶液回流7小时。
反应物真空蒸发至干，残留物用水溶解，用二氯甲烷洗涤。
将水相浓缩，残留物溶于水(100ml)中，将所得溶液用2NNaOH将pH调至6.5而得到所需的黄色沉淀产物。
过滤，水洗固体得到3.10g的所需产物，m.p.236～238℃(分解)。
按照类似的方法，可以制备下列化合物2-氨基-4-(2-氨基-5-甲基苯基)-4-氧代-丁酸，m.p.230～250℃(分解);
2-氨基-4-(2-氨基-5-氟代苯基)-4-氧代-丁酸，m.p.200～225℃(分解);
2-氨基-4-(2-氨基-5-乙基苯基)-4-氧代-丁酸，m.p.210℃(分解);
2-氨基-4-(2-氨基-5-环己基苯基)-4-氧代-丁酸，m.p.230～250℃(分解);
2-氨基-4-(2-氨基-5-溴代苯基)-4-氧代-丁酸，m.p.233℃(分解);
2-氨基-4-(2-氨基-5-正丙基苯基)-4-氧代-丁酸，m.p.233～234℃(分解);
2-氨基-4-(2-氨基-5-异丙基苯基)-4-氧代-丁酸，m.p.235℃(分解)。
实施例4通过非对映异构体盐的拆开方法而制备(S)(-)-2-氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸(L-5-氯代犬尿氨酸)和(R)-(+)-2-氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸(D-5-氯代犬尿氨酸)向搅拌着的2-氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代丁酸(5.23g，21.55mmol)、NaHCO3(3.98g，47.4mmol)和Na2CO3·10H2O(6.16g，21.55mmol)在300ml水的溶液中，室温下滴加乙酸酐(2.236ml，23.7mmol)。
将溶液搅拌1小时，用2NHCl酸化至pH5，用乙酸乙酯萃取(4次)，水洗，干燥并蒸发，以得到一浅黄色固体。
该粗产物用己烷研磨，得到2-乙酰氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代丁酸(4.20g;68.4%;m.p.187-190℃)。
向搅拌的2-乙酰氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代丁酸(4.20g，14.75mmol)在500ml95%乙醇的溶液中，滴加R-(+)-α-甲基苄胺(1.88ml，14.75mmol)。20分钟后，将溶剂蒸发掉，残留物用乙醚研制得到固体物(5.10g;m.p.130～150℃;[α]20D＝+2.5°(1%，CH3OH)。
用乙酸乙酯重结晶四次，得到1.12g(对映体收率37%)的2-乙酰氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸的(-)-α-甲基苄胺的盐(m.p.154.5～156℃;[α]20D＝-60.8°(1%，CH3OH)。
向剧烈搅拌的(-)-α-甲基苄胺盐(1.12g，2.76mmol)在乙酸乙酯(100ml)的溶液中，加入水(20ml)和1N HCl(2.9ml，2.9mmol)。30分钟后，分出有机相，水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用水洗，干燥并蒸发而得到淡棕色(-)-2-α-乙酰氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代丁酸(0.76g;97%)固体(m.p.182～183.5℃(分解);[α]20D＝-88.7°(1%，CH3OH)。
将(-)-2-乙酰氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸(0.76g，2.67mmol)在2N HCl(90ml)中的溶液，在回流温度下加热3小时，将该水溶液蒸发至干，将残留物溶于水中，用CH2Cl2洗涤并再蒸发。将残留物溶于水(30ml)中并用1N NaOH调pH至6.5，析出淡黄色固体物。将该固体过滤并用冷水洗涤，得到(R)-(+)-2-氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸(0.40g;59.7%;m.p.210～211℃(分解);[α]20D＝+11.5(1%，CH3COOH;ee＝96%)。
将制备(-)-α-甲基苄胺盐过程中所得的母液混合并蒸发，得到4.9g(12mmol)的固体。该(-)和(+)盐的混合物和400ml乙酸乙酯，80ml水和1NHCl(12.6ml，12.6mmol)一起剧烈搅拌。30分钟后，分出有机相，水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用水洗，干燥并蒸发，得到富含(+)对映体的2-乙酰氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸(淡棕色固体)(3.41g;100%;m.p.172～178℃)。
向搅拌着的2-乙酰氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸(3.41g，11.97mmol)在400ml95%乙醇的溶液中，滴加(S)-(-)-α-甲基苄胺(1.52ml，11.97mmol)。20分钟后，蒸发掉溶剂。用乙酸乙酯进行三次重结晶后得到1.49g(61.3%)2-乙酰氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸的(+)-α-甲基苄胺盐(m.p.154.5～155.5℃);[α]20D＝+60.9(1%，CH3OH)。
1.49g的上述盐按上述，用于制备(-)对映体的方法进行，得到1.03g(98.5%)的(+)-2-乙酰氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸(m.p.179～180℃，分解);[α]20D＝+89.0(1%，CH3OH)。
为了制备(R)对映体，按上述方法用(+)-2-乙酰氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸作起始物，得到0.65g(71.4%)的(S)-(-)-2-氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸(m.p.208～209℃(分解);[α]20D＝-12.6°(1%，CH3COOH，ee＝96%)。
实施例5通过对映体有择合成方法制备(S)-(-)-2-氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸(L-5氯代犬尿氨酸)和(R)-(+)-2-氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸(D-5-氯代犬尿氨酸)。
在氮气氛下，用冰浴冷却4-氯-N-新戊酰苯胺(2.11g，10mmol)在30ml无水四氢呋喃中的溶液。然后滴加1.6M的正丁基锂(15.625ml，25mmol)的己烷溶液，在0℃搅拌2.5小时后，于0℃在20分钟内加入氯化三甲锡(2.19g，11mmol)溶于无水四氢呋喃(8ml)的溶液。然后将该反应物在0℃搅拌2小时，在室温搅拌16小时，用水骤冷，并用乙酸乙酯萃取，有机相用盐水洗涤，干燥并浓缩至干。残留物在硅胶柱上用闪式层析纯化(二异丙醚石油醚40°/70°＝1023)，得到3.1g4-氯-2-三甲基甲锡烷基-N-新戊酰苯胺的白色固体，(82.9%，m.p.169～172℃)。
＊Joc44，1133(1979)将4-氯-2-三甲基甲锡烷基-N-新戊酰基苯胺(1.6g，4.2mmol)和(S)-3-苄氧羰基-5-氧代-4-噁唑烷乙酰氯(1.25g，42mmol)溶于无水甲苯(50ml)中。向该溶液中加入Pd2(dba)3CHCl3(40.5mg)，该混合物在70℃加热8小时。混合物冷却后，通过硅藻土过滤除去催化剂，滤液浓缩，然后用乙酸乙酯稀释;所得的溶液依次用饱和的碳酸氢盐、水和饱和的NaCl洗涤，然后干燥并蒸发。残留物在硅胶柱上用闪式层析纯化(乙酸乙酯己烷＝830)，得到(S)-(+)-N-新戊酰-2-[1-氧-2-[3-(苄氧羰基)-5-氧代-噁唑烷-4-基]-乙基]-4-氯苯胺的无色晶体1.06g(53.5%);m.p.113～116℃;[α]20D＝-114.5(1%，乙酸乙酯)。
＊JOC53，6138(1988)。
将搅拌着的(S)-(+)-N-新戊酰-2-[1-氧-2-[3-(苄氧羰基)-5-氧-噁唑烷-4-基]乙基]-4-氯代苯胺(1.06g，2.24mmol)、37%HCl(20ml)、H2O(20ml)和CH3COOH(28ml)的混合物于70℃加热5.5小时，将该溶液蒸发至干，残留物溶于水(30ml)中，用CH2Cl2洗涤并再次蒸发，粗产物在硅胶柱上用闪式层析纯化(氯仿甲醇30%NH4OH＝140606)，得到(S)-(-)-2-氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸的黄色结晶(0.29g;51.5%;m.p.206～208℃;[α]20D＝-12.0°(1%;CH3COOH);ee＝96%)。
按类似方法，可以制备
(R)-(+)-2-氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸(D-5-氯代犬尿氨酸);[α]20D＝+11.5°(1%，CH3COOH)。
实施例6通过非对映异构体的形成和层析分离制备(S)-2-氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸(L-5-氯代犬尿氨酸)和(R)-(+)-2-氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸(D-5-氯代犬尿氨酸)。
氮气氛下，于5～8℃时，向搅拌着的2-乙酰氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基-4-氧代-丁酸(0.569g;2mmol)在无DMF(8ml)的溶液中，分批加入1，1′-羰基二咪唑(0.34g;2.1mmol)。在5℃搅拌1.5小时后，于3～5℃时，滴加(R)-(-)2-氨基-2-苯乙醇(0.33g;2.4mmol)在无水DMF(6ml)中的溶液。然后将反应物在冰浴中搅拌2小时，在室温搅拌16小时，然后用水骤冷并用乙酸乙酯萃取。有机相用水洗涤，用无水硫酸钠干燥，并浓缩至干。残留物经闪式硅胶柱层析纯化(乙酸乙酯甲醇＝982)，而得到2-乙酰氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-N-(2-羟基-1-苯基乙基)-4-氧代丁酰胺的黄色固体(0.18g;22%;m.p.212～215℃)(纯非对映异构体Rf略小)。
将2-乙酰氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-N-(2-羟基-1-苯基-乙基)-4-氧代-丁酰胺(纯非对映异构体Rf略小)(0.155g;0.383mmol)在2N HCl(15ml)中的溶液，回流加热6小时，将该溶液蒸发至干，残留物溶于水中，用CH2Cl2洗涤并再蒸发，粗产物经闪式硅胶柱层析纯化(氯仿甲醇30%氨水溶液＝140606)，得到(S)-(-)-2-氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸的黄色固体(0.048g;50%，m.p.205～208℃;[α]20D＝-12.0°(1%，CH3COOH)。
按照相似方法，可以制备下列化合物(R)-(+)-2-氨基-4-(2-氨基-5-氯苯基)-4-氧代-丁酸(D-5-氯代犬尿氨酸);[α]20D＝+11.5°(1%，CH3COOH)。
实施例7口服施用的片剂片剂可以通过已知的方法如直接压片法或湿法制粒法而制得。
例如，每片重0.250g且含有50mg活性物质的片剂可以按下述方法制得组成(10，000片)2-氨基-4-(2-氨基-5-氯苯基)-4-氧丁酸500g乳糖1400g玉米淀粉500g滑石粉80g硬脂酸镁20g将2-氨基-4-(2-氨基-5-氯苯基)-4-氧代丁酸、乳糖和一半量的玉米淀粉混合，将混合物挤压通过0.5mm目的筛。将玉米淀粉(10g)悬浮于温水(90ml)中，所得的浆液用于将粉制粒，干燥制成的粒，过1.4mm目筛，然后加入剩余的淀粉、滑石粉和硬脂酸镁，小心混合然后压片。
其它剂量的片剂可以通过调节活性物质与辅剂的比例来制得。
实施例8口服施用的胶囊每粒内含物为0.200g并含有20mg活性物质的胶囊可以按下述方法制得500粒胶囊的组成2-氨基-4-(2-氨基-5-氯苯基)-4-氧代-丁酸10g乳糖80g玉米淀粉5g硬脂酸镁5g将上述物质装入双片硬度明胶胶囊中，每粒胶囊的内容物重0.200g。
实施例9肌内注射剂25mg/ml注射用药物组合物可通过下述方法制得，将25g的2-氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸的钠盐溶于注射用水(100ml)中制成注射液，然后封于1～5ml的安瓿内。
权利要求
1.作为犬尿氨酸转氨酶(KAT)抑制剂的一类化合物的使用，该类化合物用于治疗与衰老相关的识知障碍及产期脑功能失调。
2.根据权利要求1的使用，其中用作犬尿氨酸转氨酶(KAT)抑制剂的化合物是具有通式(Ⅰ)的化合物，其单一异构体或其异构体的混合物，及其药用可接受的盐。 其中R是卤素、C1-C6烷基、C5-C7环烷基、苯基-C1-C4烷基、C1-C6烷氧基、C6-C10芳氧基、苯基C1-C4烷氧基或三氟甲基;R1是羟基、C1-C6烷氧基、氨基、单C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、羟基氨基、C1-C4烷氧基氨基或苄氧基氨基。
3.式(IA)的化合物，其单一异构体或其异构体的混合物，及其药用可接受的盐类， 其中R是卤素、C1-C6烷基、C5-C7环烷基、苯基-C1-C4烷基、C1-C6烷氧基、C6-C10芳氧基、苯基C1-C4烷氧基或三氟甲基;R1是羟基，C1-C6烷氧基、氨基、单C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、羟基氨基、C1-C4烷氧基氨基或苄氧基氨基，条件是(ⅰ)当R1是羟基且同时R是卤素时，则该卤素不是氟;(ⅱ)当R1是羟基且同时R是C1-C6烷基时，则该C1-C6烷基不是甲基。
4.根据权利要求3的通式(IA)的化合物，其单一异构体或其异构体的混合物，及其药用可接受的盐类，其中R是卤素，C1-C6烷基或C5-C7环烷基;R1是羟基，条件是(ⅰ)当R是卤素时，则该卤素是不氟;(ⅱ)当R是C1-C6烷基时，则该C1-C6烷基不是甲基。
5.选自下述的化合物，其单一异构体或其异构体的混合物，及其药用可接受的盐类2-氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸;2-氨基-4-(2-氨基-5-乙基苯基)-4-氧代-丁酸;2-氨基-4-(2-氨基-5-溴代苯基)-4-氧代-丁酸;2-氨基-4-(2-氨基-5-正丙基苯基)-4-氧代-丁酸;2-氨基-4-(2-氨基-5-异丙基苯基)-4-氧代-丁酸;2-氨基-4-(2-氨基-5-环己基苯基)-4-氧代-丁酸。
6.一种制备权利要求2所定义的式(Ⅰ)化合物或权利要求3所定义的式(IA)的化合物，或其药用可接受的盐类的方法，该方法包括1)使式(Ⅱ)的化合物与氯代乙腈反应而得到式(Ⅲ)的化合物 其中R如权利要求2中式(Ⅰ)或权利要求3中式(IA)中所定义， 其中R定义如上。2)使式(Ⅲ)的化合物与乙酰氨基丙二酸的钠盐反应，而生成式(Ⅳ)的化合物 其中R定义如上。3)使上述定义的式(Ⅳ)化合物用浓盐酸处理，生成式(Ⅰ)或(IA)的化合物，其中R定义如上，R1是羟基，并且如果需要，可以把式(Ⅰ)或(IA)的化合物转化成R1部分不是羟基的(Ⅰ)或(IA)的其它化合物;并且如果需要，可以将式(Ⅰ)或(IA)的化合物异转化成盐，并且如果需要，可以将式(Ⅰ)或(IA)化合物的异构体混合物分离成单一的异构体。
7.一种药用组合物，该组合物含有治疗有效量的权利要求2的式Ⅰ化合物或根据权利要求3的式(IA)的化合物，或其药用可接受的盐类，及其药用可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
8.根据权利要求7的药用组合物，它用于治疗衰老相关的识知障碍和产期脑功能失调。
全文摘要
本发明涉及某些化合物在治疗与大脑衰老相关的识知障碍及产期脑功能失调方面的应用。本发明还提供了式(IA)表示的作为KAT抑制剂的新化合物，及其单一异构体或异构体混合物及其可药用的盐类，其中R是卤素、C
文档编号A61K31/00GK1113386SQ94190583
公开日1995年12月13日 申请日期1994年7月15日 优先权日1993年8月6日
发明者罗伯特·施瓦茨, 马里奥·瓦拉西, 阿图罗·D-托尔, 卡梅拉·斯佩谢拉, 艾伯特·布兰切特 申请人:巴尔的摩的马里兰大学, 法马西亚公司