专利名称：：鸡马立克氏病疫苗免疫增强剂及制备工艺的制作方法
技术领域：
：本发明涉及蛋白和氨基酸非活体生物制剂及生产方法。鸡马立克氏病(MareksdiseaseVirusofchickens，MD)，是鸡的一种传染性肿瘤病，以淋巴组织的增生和肿瘤形成为物征，是马立克氏病疱疹病毒所引起的。该病对养禽业危害较大，经济损失巨大。预防该病发生的最佳方法是进行疫苗接种免疫。目前国内外仍以火鸡疱疹病毒(Herpesvirusofturkey，HVT)冻干疫苗预防MD应用最为广泛。HVT疫苗在该病的免疫中起到了不可估量的作用。但是HVT冻干疫苗在接种稀释病毒的同时，由于环境温差变化较大，疫苗脆弱，对温度的耐受力很差，往往使大量的病毒抗原失去活力。据我们的研究测定在HVT冻干疫苗于28-29℃时稀释1小时后病毒抗原丢失53.4％。因此，致使疫苗病毒含量下降。由于抗原量的不足严重影响了HVT疫苗免疫应答反应，使得HVT的疫苗免疫效果不够确切。可是国内外专利文献中可见的都是关于活疫苗的制备如中国专利CN1006208″制备活的纯化的MARK氏病疫苗的方法″、CN1052896″重组火鸡疱疹病毒及其衍生物的活载体疫苗″、意大利专利″鸡马立克氏病免疫疫苗″(IT1209492VaaainforImmunisiationofChickensagainstMAREKSDisease)、美国专利″用于鸡免疫马立克氏病的活病毒疫苗的制备(US4160024Prodn.ofLiveVirusVaccine-ForImmunisingCHickensagainstMAREKSDisease)。国内外关于免疫增强剂都未见报道。广告报道美国苏威公司把乙酰甘露聚糖与马立克氏病疫苗合用，并获产品证书。本发明的目的是为提高疫苗自身免疫抗原含量和增强鸡的机体T、B淋巴细胞免疫功能，提供一种鸡马立克氏病疫苗免疫增强剂及制备工艺。一种鸡马立克氏病疫苗免疫增强剂，采用蛋白及氨基酸物质，其特征是成分配比为牛肉精提物溶液1000ml蛋白胨5-10g氯化钠5g脱脂牛奶500-1000ml蔗糖25-50g犊牛血清500-1000ml左旋咪唑50-100mg一种鸡马立克氏病疫苗免疫增强剂的制备方法，是取新鲜去脂牛肉捣碎成肉泥状，水煮沸后精提得溶液1000ml，放置至室温；蛋白胨、氯化钠、脱脂牛奶和蔗糖分别加入待全部溶解后，经高压灭菌处理；犊牛血清和左旋咪唑经过滤除菌处理，按上述各组分的比例配料混匀、分装每瓶2-3ml，冻干为成品。表1免疫增强剂与SPG对HVT蚀斑保护率试验结果</tables>上表结果表明，在不同温度条件下，I、II组加增强剂比不加增强剂的蚀斑保护率分别提高了31.8％和21.2％，证明免疫增强剂能显著提高HVT的保护率，减少了疫苗在稀释过程中病毒抗原的丢失，提高了疫苗的使用效果。表2该免疫增强剂安全试验结果</tables>试验结果表明，该增强剂注射机体后无不良反应，安全可靠。鸡马立克氏病免疫增强剂使用效果观察某大型集约化养鸡场在1995-96年间应用该免疫增强剂与HVT冻干苗合用(2000PFU/羽)共免疫101,700只；按常规用苗方法免疫国产HVT450,000只；国产进口HVT免疫212,000只，鸡群免疫后观察到200日龄，在此期间死鸡逐剖检，按肉眼病变结合琼扩试验，计算MD发病率。表3免疫增强剂+HVT与HVT免疫效果比较</tables>表中结果证明，单一使用HVT冻干苗，无论是国产的还是进口的，其MD的发病率平均在1.35％，而用增强剂+HVT冻干苗使MD的发病率降至0.07％，说明了增强剂确实显著提高了HVT苗的免疫效果，降低了MD的发病率。该疫苗增强剂的显著优点是1、本免疫增强剂与HVT疫苗联合使用，在22-29℃以上条件下稀释1小时后病毒抗原含量减少损失为30％以上，超到显著提高对HV的保护率和HVT的活动作用。2、免疫增强剂与HVT疫苗联合使用，能使鸡或家禽的机体T、B淋巴细胞免疫功能增强，有效地控制MD的发生。3、将本增强剂分别与新城疫活毒疫苗、法氏囊活疫苗、鸡传染性支气管炎活毒疫苗等家禽活毒疫苗配合使用，其效果与同HVT疫苗联合使用的效果相同。本发明解决和弥补了目前HVT疫苗免疫效果欠佳的不足，为养禽业的发展提供高效低耗的保障，创造了良好的社会效益和经济效益。实施例一种鸡马立克氏病疫苗免疫增强剂，采用蛋白及氨基酸物质，其特征是成分配比为配方1牛肉精提物溶液1000ml蛋白胨10g氯化钠5g脱脂牛奶1000ml蔗糖25g犊牛血清500ml左旋咪唑50mg配方2牛肉精提物溶液1000ml蛋白胨5g氯化钠5g脱脂牛奶500ml蔗糖50g犊牛血清500ml左旋咪唑60mg配方3牛肉精提物溶液1000ml蛋白胨8g氯化钠5g脱脂牛奶800ml蔗糖50g犊牛血清1000ml左旋咪唑80mg配方4牛肉精提物溶液1000ml蛋白胨10g氯化钠5g脱脂奶粉100g蔗糖25-50g0.1％的牛血清白蛋白1000ml左旋咪唑50-100mg一种鸡马立克氏病疫苗免疫增强剂的制备方法，其特征是取新鲜去脂牛肉捣碎成肉泥状，水煮沸后精提得溶液1000ml，放置至室温；将蛋白胨、氯化钠、脱脂牛奶和蔗糖分别经高压灭菌处理；犊牛血清和左旋咪唑经过滤除菌处理，按上述各组分的比例配料混匀、分装每瓶2-3ml，冻干为成品。使用方法用本品增强剂一瓶，2-3ml，每瓶500羽份，与鸡马立克氏病疫苗500-1000羽份配用。将增强剂启瓶后，在室温或在22-29℃条件下，放入在4℃保存的SPG稀释液中混匀，再加入疫苗，混匀，按规定羽份注射。所配制的药剂应在1小时内用完。权利要求1.一种鸡马立克氏病疫苗免疫增强剂，采用蛋白及氨基酸物质，其特征是成分配比为牛肉精提物溶液1000ml蛋白胨5-10g氯化钠5g脱脂牛奶500-1000ml蔗糖25-50g犊牛血清500-1000ml左旋咪唑50-100mg2.根据权利要求1所述的鸡马立克氏病疫苗免疫增强剂，其特征是成分配比还可以为牛肉精提物溶液1000ml蛋白胨10g氯化钠5g脱脂奶粉100g蔗糖25-50g0.1％的牛血清白蛋白1000ml左旋咪唑50-100mg3.一种鸡马立克氏病疫苗免疫增强剂的制备工艺，其特征是取新鲜去脂牛肉捣碎成肉泥状，水煮沸后精提得溶液1000ml，放置至室温；将蛋白胨、氯化钠、脱脂牛奶和蔗糖分别加入后待全部溶解，经高压灭菌处理；犊牛血清和左旋咪唑经过滤除菌处理，按上述各组分的比例配料混匀、分装每瓶2-3ml，冻干为成品。全文摘要一种鸡马立克氏病疫苗免疫增强剂及制备方法,属于生物制剂,其特征是增强剂由牛肉精提液、牛犊血清、牛奶等蛋白和氨基酸类物质,加左旋咪唑按比例配;制备方法:取鲜去脂牛肉捣碎,水煮沸后得精提液;将蛋白胨、氯化钠、脱脂牛奶和蔗糖分别加入待全部溶解后经高压灭菌处理犊牛血清和左旋咪唑经过滤除菌处理,按比例配料混匀、分装每瓶2—3ml,冻干为成品。本品既是疫苗的载体又能为其提供充足营养,使之提高接种温差变化时的病毒抗原含量达30%以上,创造了显著的社会和经济效益。文档编号A61K47/42GK1176139SQ9711137公开日1998年3月18日申请日期1997年6月10日优先权日1997年6月10日发明者卫广森,张万林申请人:卫广森,张万林