专利名称：雪莲培养物提取物及其新用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及雪莲培养物提取物的制备方法及其应用，特别涉及雪莲培养物提取物在制备用于预防和治疗痛经的药物中的新用途。
背景技术：
原发性痛经指女性在行经前或后、行经期出现腹痛、腰痛、下腹坠胀或其他不适， 影响生活和工作者，多见于未婚未孕女性。在发展中国家约25% 50%成年女性和75%的青少年发生痛经，其中5% -20%为严重痛经。痛经的常规治疗主要用前列腺素拮抗剂、激素或水杨酸等，但止痛、解痉药物疗效不满意。因此寻找有效的药物预防及治疗痛经是非常重要的。雪莲培养物是选取雪莲愈伤组织做为继代种子，通过细胞培养技术继代培养获得的，即中国专利ZL200510115902. 0说明了雪莲培养物大规模培养的方法，雪莲培养物含有黄酮、多糖、绿原酸、紫丁香苷、微量元素及萜类等多种有效成份，雪莲培养物提取液采用醇提的方法获得纯度较高的雪莲黄酮，具有温肾助阳，祛风胜湿，通经活血的作用。现有文献和专利都没有其在治疗痛经方面的报道。

发明内容
本发明目的就是为了解决以上问题，提供一种雪莲培养物提取物及其制备方法， 本发明另一目的在于提供雪莲培养物提取物用于制备预防和治疗原发性痛经的药物的新用途。雪莲培养物是按照专利号ZL200510115902. 0，CN1961650上记载的工艺制备，选取雪莲离体组织，经脱分化形成的愈伤组织作为继代种，给与一定条件进行大规模继代培养获得的紫红色团块状颗粒，或该颗粒经干燥粉碎得到的粉末。本发明中雪莲培养物提取物是指经过提取、浓缩、灭菌、喷干等工艺得到的雪莲培养物提取液、雪莲培养物提取液喷干粉等。本发明雪莲培养物提取液制备工艺为在雪莲培养物中加入30-95 %乙醇溶液，雪莲培养物与乙醇的体积比为 1 10-1 40，超声提取，温度为30-95°C，每次提取30-180min，连续提取2-3次，所得液体采用50-70°C减压浓缩，浓缩至目标成分总黄酮含量-60% ；再在100-130°C下，高温瞬时灭菌，冷却至室温，包装检验，即得雪莲培养物提取液。本发明雪莲培养物提取液制备工艺可以优选为在雪莲培养物中加入30%乙醇溶液，雪莲培养物与乙醇的体积比为1 15，超声提取，温度为85°C，每次提取60min，连续提取2次，两次所得液体采用60°C减压浓缩，浓缩至目标成分总黄酮含量_60%，120°C高温瞬时灭菌，冷却至室温，包装检验，即得雪莲培养物提取液。雪莲培养物提取液的制备工艺可以优选为
在雪莲培养物中加入30%乙醇溶液，雪莲培养物与乙醇的体积比为1 15，超声提取，温度为45°C，每次提取60min，连续提取2次，两次所得液体采用60°C减压浓缩，浓缩至目标成分总黄酮含量-60%;110°C高温瞬时灭菌，冷却至室温，包装检验，即得雪莲培养物提取液。雪莲培养物提取液的制备工艺可以优选为在雪莲培养物中加入30%乙醇溶液，雪莲培养物与乙醇的体积比为1 15，超声提取，温度为45°C，每次提取60min，连续提取3次，三次所得液体采用60°C减压浓缩，浓缩至目标成分总黄酮含量-60%;110°C高温瞬时灭菌，冷却至室温，包装检验，即得雪莲培养物提取液。将雪莲培养物提取液在温度40-50°C，-0. 05-0. IOMPa条件下浓缩，浓缩至固形物含量25% -35%,喷干，真空度2500Pa，60-130°C，冷却至室温包装检验，按照常规工艺制成口服液、胶囊、片剂。雪莲培养物提取液喷干粉经检测含有总黄酮大于30%，多糖大于20%、绿原酸大于1%，具有温肾助阳，祛风胜湿，通经活血。本发明提供了雪莲培养物提取液及其新用途，治疗痛经，疗效好，治愈率较高，且未发现明显毒副作用。下面实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。实验例1:本实验以总黄酮含量为考察指标，采用正交实验的方法对超声波提取雪莲培养物总黄酮的工艺条件进行了研究。雪莲培养物提取液中总黄酮的测定以槲皮素为标准对照品、硝酸铝为显色剂，进总黄酮的测定。1、溶液的配制对照品溶液的制备精密称取经120°C干燥至恒重的芦丁对照品10mg，置50mL量瓶中，加甲醇使溶解， 并稀释至刻度，摇勻。2、标准曲线的制备精密吸取对照品溶液1、2、3、4、5与6mL，分别置25mL量瓶中，各加水至6mL，加入 5%亚硝酸钠溶液lmL，摇勻，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液lmL，摇勻，放置6分钟，加4% 氢氧化钠试液IOmL加水至刻度，摇勻，放置15min，以相应试剂为空白，照分光光度法(中国药典2005版二部附录VB)，在500nm的波长处测定吸收度，以吸收度与其对应的浓度计算线性回归方程。得方程y = kx+b3、供试品溶液的制备取本发明约2克，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇适量，加热回流至提取液无色，放冷，提取液定量移入IOOmL量瓶中，并用甲醇少量洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻。4、测定法精密吸取供试品溶液3mL，置25mL量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至6mL”起，依法操作；另取相应试剂为空白，在500nm的波长处测定吸收度，从线性回归方程计算总黄酮含量以芦丁计含量计算公式
X= (A 样-b) XV 样/(kXM 样)Χ100%................................. (Α. 1)式中X——样品中含有雪莲总黄酮的百分含量A样——样品测定的吸收度值k、b——标准曲线中斜率及截距V样——样品提取过程中稀释的倍数M样——样品测定时样品的取样量单因素实验由于乙醇作为提取溶剂具有选择性好，渗透性强，浸出率较高的优点， 因此本实验选择一定浓度的乙醇溶液作为提取剂，并分别考察了雪莲培养物与乙醇的体积比、萃取温度、超声波萃取时间及萃取次数等因素对提取率的影响。(1)提取溶剂的影响提取溶剂95%乙醇、70%乙醇、30%乙醇，水提，Ph2. 7提取，Phl2提取。雪莲培养物与乙醇的体积比1 15原料粉碎，每份30g(总黄酮含量12% )提取温度85°C提取时间Ih提取液过滤后定容到500ml评价指标固形物得率、总黄酮含量
权利要求
1.一种雪莲培养物提取液，其特征在于该雪莲培养物提取液由如下方法制成在雪莲培养物中加入30-95%乙醇溶液，雪莲培养物与乙醇的体积比为1 10-1 40，超声提取，温度为30-95°C，每次提取30-180min，连续提取2_3次，所得液体采用50-70°C减压浓缩，浓缩至目标成分总黄酮含量-60% ；再在100-130°C下，高温瞬时灭菌，冷却至室温， 包装检验，即得雪莲培养物提取液；所述雪莲培养物是按照专利号ZL200510115902. 0， CN1961650上记载的工艺制备。
2.如权利要求1所述的雪莲培养物提取液，其特征在于该雪莲培养物提取液由如下方法制成在雪莲培养物中加入30%乙醇溶液，雪莲培养物与乙醇的体积比为1 15，超声提取，温度为85°C，每次提取60min，连续提取2次，两次所得液体采用60°C减压浓缩，浓缩至目标成分总黄酮含量1 % -60 %，1200C高温瞬时灭菌，冷却至室温，包装检验，即得雪莲培养物提取液。
3.如权利要求1所述的雪莲培养物提取液，其特征在于该雪莲培养物提取液由如下方法制成在雪莲培养物中加入30%乙醇溶液，雪莲培养物与乙醇的体积比为1 15，超声提取，温度为45°C，每次提取60min，连续提取2次，两次所得液体采用60°C减压浓缩，浓缩至目标成分总黄酮含量1 %-60% ； 110°C高温瞬时灭菌，冷却至室温，包装检验，即得雪莲培养物提取液。
4.如权利要求1所述的雪莲培养物提取液，其特征在于该雪莲培养物提取液由如下方法制成在雪莲培养物中加入30%乙醇溶液，雪莲培养物与乙醇的体积比为1 15，超声提取，温度为45°C，每次提取60min，连续提取3次，三次所得液体采用60°C减压浓缩，浓缩至目标成分总黄酮含量1%-60%;110°C高温瞬时灭菌，冷却至室温，包装检验，即得雪莲培养物提取液。
5.如权利要求1-4任一所述的雪莲培养物提取液，其特征在于在温度 40-50 °C, -0. 05—0. IOMPa条件下浓缩，浓缩至固形物含量25% -35%,喷干，真空度 2500Pa，60-130°C，冷却至室温包装检验，按照常规工艺制成口服液、胶囊、片剂。
6.一种雪莲培养物提取液的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤在雪莲培养物中加入30-95%乙醇溶液，雪莲培养物与乙醇的体积比为1 10-1 40，超声提取，温度为30-95°C，每次提取30-180min，连续提取2_3次，所得液体采用50_70°C减压浓缩，浓缩至目标成分总黄酮含量"60% ；再在100-130°C下，高温瞬时灭菌，冷却至室温，包装检验， 即得雪莲培养物提取液。
7.如权利要求6所述的雪莲培养物提取液的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤在雪莲培养物中加入30%乙醇溶液，雪莲培养物与乙醇的体积比为1 15，超声提取， 温度为85°C，每次提取60min，连续提取2次，两次所得液体采用60°C减压浓缩，浓缩至目标成分总黄酮含量-60%，120°C高温瞬时灭菌，冷却至室温，包装检验，即得雪莲培养物提取液。
8.如权利要求6所述的雪莲培养物提取液的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤在雪莲培养物中加入30%乙醇溶液，雪莲培养物与乙醇的体积比为1 15，超声提取， 温度为45°C，每次提取60min，连续提取2次，两次所得液体采用60°C减压浓缩，浓缩至目标成分总黄酮含量1 %-60% ； 110°C高温瞬时灭菌，冷却至室温，包装检验，即得雪莲培养物提取液。
9.如权利要求6所述的雪莲培养物提取液的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤在雪莲培养物中加入30%乙醇溶液，雪莲培养物与乙醇的体积比为1 15，超声提取， 温度为45°C，每次提取60min，连续提取3次，三次所得液体采用60°C减压浓缩，浓缩至目标成分总黄酮含量-60%; 110°C高温瞬时灭菌，冷却至室温，包装检验，即得雪莲培养物提取液。
10.如权利要求1-4任一所述的雪莲培养物提取液在制备预防和治疗痛经的药物中的应用。
11.如权利要求5所述的雪莲培养物提取液在制备预防和治疗痛经的药物中的应用。
12.如权利要求10所述的应用，其特征在于所述痛经指原发性痛经。
13.如权利要求11所述的应用，其特征在于所述痛经指原发性痛经。
全文摘要
本发明提供了雪莲培养物提取物及其新用途，治疗痛经，疗效好，治愈率较高，且未发现明显毒副作用。雪莲培养物具有温肾助阳，祛风胜湿，通经活血。用于风寒湿痹痛、类风湿性关节炎，小腹冷痛，月经不调等病的治疗。本发明雪莲培养物提取物采用醇提、浓缩、喷干的方法获得纯度较高的雪莲黄酮、雪莲多糖，通过临床观察发现，对治疗原发痛经疗效确切，值得临床参考和推广使用。
文档编号A61K36/285GK102366432SQ201110340779
公开日2012年3月7日 申请日期2011年11月2日 优先权日2011年11月2日
发明者刘汉石 申请人:大连普瑞康生物技术有限公司