专利名称：：预防和治疗肿瘤疾病的白藜芦醇和小白菊内酯复方的制作方法
技术领域：
：本发明涉及小白菊内酯或取衍生物或可药用盐和三羟基芪(白藜芦醇)或三羟基芪糖苷或取可药用盐或酯的复方组合物在抗肿瘤或辅助抗瘤方面的应用。技术背景小白菊内酯为一倍半萜内酯类化合物，分子中含有一cc-亚甲基卞内酯基团。对小白菊内酯的研究颇多，欧美用小白菊治疗偏头疼和关节疼痛，其主要成分为小白菊内酯，近年来对小白菊内酯的研究发现，小白菊内酯还具有抗肿瘤活性，如可抑制结肠癌、前列腺癌、乳腺癌、膀胱癌、白血病癌细胞的生长。PCT/US00/34469公开了用小白菊内酯来抑制癌细胞生长。白黎卢醇(Resveratrol)，化学名称为芪三酚，属于多酚类化合物。广泛存在于葡萄、花生和多种药用植物中，目前至少已经在21个科、31个属的72种植物中发现了白黎芦醇。对白黎芦醇生理功能的认识源于WHO的一项流行病学调查，流行病学调查资料显示，法国人血管疾病的发病率明显低于其他国家，这与其红葡萄酒的摄入量较高有关，进一步研究证实，白黎芦醇是红葡萄酒中发挥心血管保护作用的主要物质。白黎芦醇具有广泛的生物学活性，如抗癌、抗动脉粥样硬化、抗凝血、抗氧化、抗菌、免疫调节及神经保护等。白黎芦醇对致癌的3个主要阶段均具有化学防癌活性，它具有抗氧化性和抗突变作用，并且可以诱导第二期药代酶(抗起始活性)；它可以传递抗炎作用并有抑制环氧合酶(COX)和过氧化氢酶的功能(抗促进作用)；它还可以诱导人类早幼粒细胞白血病细胞的分化(抗发展作用)及抑制核糖核酸还原酶作用，而核糖核酸还原酶是细胞增生中DNA合成所必需的物质。
发明内容乐盈VI本发明目的在于提供一种(A)小白菊内酯或取衍生物或可药用盐和(B)三羟基芪(白藜芦醇)或三羟基芪糖苷或取可药用盐或酯的复方组合物。本发明中，组分(A)和(B)可以以混合物的形式存在于药物制剂中，也可以以分别包装的形式存在与各自的药物制剂中。本发明涉及联合应用小白菊内酯或取衍生物或可药用盐和三羟基芪或三羟基芪糖苷或取可药用盐或酯来治疗或辅助治疗肿瘤疾病，其中"联合应用"这些活性成分是指共同给药，即几乎共同给出小白菊内酯或小白菊内酯衍生物及其可药用盐和三羟基芪或三羟基芪糖苷及其可药用盐和酯，或给予包含所述活性组分混合物的组合物。以下，为使本说明书简洁，下文仅述及小白菊内酯，可以理解，本描述也适用与上述小白菊内酯衍生物及其可药用盐。同样地，下文仅述及三羟基芪(白藜芦醇)，也可以理解为，本描述也适用于三羟基贫-3-p-单-D-葡萄糖苷(白藜芦醇苷)或其可药用盐或酯。本发明中，小白菊内酯衍生物是指由小白菊内酯Qw3位双键和含氮化合物经反应所形成的衍生物，其中含氮化合物可以是二甲基氨、二乙基氨、甲基乙基氨、吡啶、哌啶。其可药用盐是至小白菊内酯含氮衍生物与酸形成的不引起不需要的毒副作用的任何盐，这些酸是药学专业人员公知的。本发明中，三羟基芪或三羟基芪-3-J3-单-D-葡萄糖苷的可药用盐是指其与碱形成的不引起不需要的毒副作用的任何盐，这些碱是药学专业人员公知的；三羟基芪或三羟基芪-3-(3-单-D-葡萄糖苷的酯是指其与有机酸或酸酐反应形成的不引起不需要的毒副作用的任何酯，这些有机酸或酸酐也是药学专业人员所公知的。本发明中，(A)小白菊内酯或取衍生物或可药用盐，和(B)三羟基芪(白藜芦醇)或三羟基芪糖苷或取可药用盐或酯；其中组分(A)和组分(B)的重量比为1:100-100:1，并且优选为1:50-50:1。本发明中，小白菊内酯为从植物小白菊或广玉兰叶中或其它含小白菊内酯的植物中提取分离得到，也可以是通过合成方式得到，小白菊内酯衍生物主要通过合成得到；白藜芦醇为从植物葡萄、虎杖或花生叶中提取分离得到或通过合成方法得到。本发明可治疗或辅助其它抗肿瘤药物治疗肿瘤疾病。已证明本发明联合应用能非常有效的抑制肝癌细胞的生长。由组分(A)和组分(B)产生的抗肿瘤协同效果可通过试验得到证实，以下通过药理试验对本发明做进一步说明。具体实施例1、体外药理作用细胞株乳腺癌细胞HBL-100、肝癌细胞BEL-7402、肝癌细胞(H22)。将处于对数生长期的乳腺癌细胞和肝癌细胞用CM-1640培养基配成2xl05/ml细胞悬液，加入96孔圆底细,培养板内，每孔0.2ml，再分别加入小白菊内酯(PNT)、白藜芦醇(Res)、小白菊内酯+白黎芦醇(l:l)，使其浓度均为1.0、2.5、5.0、10.0tig/ml，每一测试浓度5孔，置37"、5%<:02饱和湿度条件下培养72小时，用MTT法在酶联检测仪570nm波长测得吸光(A)值。计算出本发明提取物对各细胞株的抑制率。抑制率气"lll^)xl00n/0。结果见表1对照组A值_本发明体外对肿瘤细胞增殖的抑制率(％)_,胸性PNT(ug/mL)Res(ug/mL)1:1的PNT+Res(ug/mL)一—lo5.010.01.02.55.010.01.02.55.0iot"HBL-100^^^^^^^^^T"BEL-7402173969821531577815437589H-22223051792127467321336982由上表可知，小白菊内酯、白藜芦醇、小白菊内酯+白藜芦醇在1.0-10.0ug/mL的浓度范围内，对乳腺癌细胞、肝癌细胞均有一定的抑制作用，并呈剂量依赖关系，在10.0ug/mL时抑制作用最强。与单独用药相比，联合用药在5.0ug/mL时即表现出明显的协同增强作用效果，与单独用药相比，差异有显著性(P0.05)。2、体内抗肿瘤实验将复苏的肝癌H22细胞加入到RPMI-1640培养液中(含100g丄"青霉素、100g丄"的链霉素及小牛血清)，于37"，50mL丄"CO4咅养箱中培养2-3d后传代，轻轻吹打细胞成单细胞悬浮液，调节计数成1.0x1091/1。将含1.0xlO、L"的肝癌细胞悬浮液0.2mL接种在6只Balb/c小鼠腹腔10d后，抽取小鼠腹水离心计数后，将1.0x1091/1的肝癌细胞悬浮液0.2mL分别注射到50只Balb/c小鼠腹股沟皮下，于接种第二天，随机分为5组，瘤旁边分别注射小白菊内酯100mg/kg、白藜芦醇100mg/kg、小白菊内酯+白藜芦醇(50mg/kg+50mg/kg)、小白菊内酯+白藜芦醇(100mg/kg+100mg/kg)及等量生理盐水，连续10d，于停药后第二天处死动物，同时摘取肿瘤，称取质量并计算抑瘤率。结果见表2表2对实验性肝细胞的抑瘤率(5±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>与阴性对照组相比，*P<0.01;与Res或PNT组相比，#P<0.05各组均能显著抑制小鼠肝癌移植瘤的生长，与对照组相比，差异显著(PO.Ol)，联合用药作用更强，PNT+Res(100+100mg/kg)组与单独用药相比，差异具有显著性(P〈0.05)。说明小白菊内酯和白藜芦醇联合用药，与单独用药相比，在剂量等同的情况下，有明显的协同增强效果。下文提到的是本发明制剂说明性而非限定性实施例(1)小白菊内酯10g白藜芦醇500g(2)小白菊内酯500g白藜戸醇10g(3)小白菊内酯200g白藜戸醇200g(4)哌啶基小白菊内酯100g白藜芦醇苷200g(5)盐酸哌啶基小白菊内酯200g白藜芦醇苷100g(6)小白菊内酯200g白藜戸醇200g5曙FU100g(7)小白菊内酯300g白藜芦醇100g紫杉醇50g上述组合物通过适宜的制剂工艺，加上一些适宜的药用辅料，可制成口服、非肠道、直肠或透皮给药的固体、半固体、液体、半液体、粉末、颗粒或脂质体形式。权利要求1.一种抗肿瘤药物组合物，由(A)小白菊内酯或小白局内酯衍生物或其可药用盐和(B)三羟基芪或三羟基芪糖苷或其可药用盐或酯组成，其中(A)与(B)以混合物形式或分别包装形式存在药物中。2、如权利要求1所述的组合物，其中所述小白菊内酯衍生物为其Cu.n位双键与含氮化合物反应所形成的小白菊内酯衍生物。3、如权利要求2所述的组合物，其中含氮化合物主要为二甲基氨、二乙基氨、甲基乙基氨、吡锭或哌啶。4、如权利要求1所述的组合物，其中组分(B)为3,4，，5-三羟基芪或3,4，,5-三羟基芪-3-P-单-D-葡萄糖苷或其可药用盐或酯。5、如权利要求1所述的组合物，其中组分(A)与(B)的重量比为1:100-100:1。6、如权利要求5所述的组合物，其中组分(A)与(B)的重量比为1:50-50:1。7、如权利要求1-6所述的组合物在制备具有抗肿瘤和肿瘤辅助治疗作用药物中的应用。全文摘要本发明涉及一种以混合物或分包装形式存在的由(A)小白菊内酯或取衍生物或可药用盐和三羟基芪或三羟基芪糖苷或取可药用盐或酯的复方组合物，该组合物可用于治疗或辅助治疗肿瘤疾病，对肝癌的抑制作用具有较强的作用。文档编号A61K31/045GK101269065SQ20071011945公开日2008年9月24日申请日期2007年7月25日优先权日2007年7月25日发明者熊国裕申请人:北京星昊医药股份有限公司