专利名称：一种从蟾酥中提取华蟾酥毒基和蟾毒灵混合物的方法
技术领域：
本发明涉及一种从中药蟾酥中提取高纯度华蟾酥毒基和蟾毒灵混合物的方法，属于中药技术领域。
背景技术：
中药蟾酥来源于蟾蜍科动物中华大蟾蜍Bufo bufo gar gar i z an s Cantor或黑眶蟾蜍Bufo melanostictus Schneider的干燥分泌物。辛,温；有毒。归心经，具有解毒，止痛，开窍醒神功能，有毒。用于痈疽疔疮，咽喉肿痛，中暑神昏，痧胀腹痛吐泻。蟾酥因现代药理研究表明其具有抗肿瘤、抗病原微生物和强心等作用而受到了国内外的重视，其所含的华蟾酥毒基和蟾毒灵混合物即是其活性成分之一，且是蟾酥中含量较高的活性成分。蟾酥因产地不同、加工方法不同和采收季节和时间的差异，蟾酥中华蟾酥毒基和蟾毒灵混合物的含量差异较大，不利于较好的控制其药效，因此提纯蟾酥中的活性成分是较好的保证其安全性和有效性的手段。但现有技术中这两种成分的提取物，纯度一般都很低。

发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种从中药蟾酥中提取高纯度华蟾酥毒基和蟾毒灵混合物的方法，华蟾酥毒基和蟾毒灵混合物的含量大于80%。其提取方法如下:
(1)蟾酥粉碎成通过40目筛的粗粉，加入20 40倍蟾酥量的70 95%乙醇，加热回流提取2 3次，每次提取2 4小时，提取液滤过，滤液回收乙醇至无乙醇味，得乙醇提取液A ；
(2)提取液A中，加入5倍蟾酥量，粒度为100 200目的硅胶，蒸干，加入已装有硅胶的层析柱的顶端(硅胶柱的径高比为1:3 10，装量为提取液A中蟾酥量的20 30倍)，先以石油醚-丙酮(9:1)混合溶剂为洗脱剂，洗脱，弃去洗脱液，继以石油醚-丙酮(8.5:1.5)混合溶剂为洗脱剂，洗脱至华蟾酥毒基和蟾毒灵混合物成分洗脱完全，得洗脱液B ；
(3)洗脱液B加热回收溶剂至无溶剂味，减压干燥器内干燥48h，得高纯度的华蟾酥毒基和膽毒灵混合物提取物；
(4)测定华蟾酥毒基和蟾毒灵的含量。下面为本发明的实验内容及结果
1.提取方法: 根据蟾酥药材的性质，药材的粒度选择为40目。根据影响提取的因素，用正交试验法考察提乙醇浓度(A)、提取时间(B)、料液比(C)对提取效果的影响，考察的因素及水平见表1，考察指标为提取的华蟾酥毒基和蟾毒灵混合物的量和提取浸膏量。考察因素及水平见表I。表I蟾酥提取条件考察L9 (33)正交水平设计表
权利要求
1.一种从蟾酥中提取华蟾酥毒基和蟾毒灵混合物的制备方法，其特征是，蟾酥粉碎成中粗粉后，加入70 95%乙醇提取，提取液经过硅胶柱层析分离，得到高纯度的华蟾酥毒基和蟾毒灵混合物，华蟾酥毒基和蟾毒灵混合物的含量达到80%以上。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是，包括以下步骤: (1)蟾酥粉碎成通过40目筛的粗粉，每次加入20 40倍蟾酥量的70 95%乙醇，力口热回流提取2 3次，每次提取2 4小时，提取液滤过，滤液回收乙醇至无乙醇味，得乙醇提取液A ； (2)提取液A中，加入5倍蟾酥量，粒度为100 200目的硅胶，蒸干，得上样硅胶，加入已装有硅胶的层析柱的顶端，先以体积比为9:1的石油醚-丙酮混合溶剂为洗脱剂，洗脱，弃去洗脱液，继以体积比为8.5:1.5的石油醚-丙酮混合溶剂为洗脱剂，洗脱至华蟾酥毒基和蟾毒灵混合物成分洗脱完全，得洗脱液B ； (3)洗脱液B加热回收溶剂至无溶剂味，减压干燥器内干燥48h，得高纯度的华蟾酥毒基和膽毒灵混合物提取物； (4)高纯度华蟾酥毒基和蟾毒灵混合物提取物的含量测定； 所述硅胶柱的径高比为1:3 10，装量为提取液A中蟾酥量的10 30倍。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，提取用乙醇的浓度为95%。
4.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述硅胶柱的径高比为·2.5:13.5。
全文摘要
本发明一种从蟾酥中提取华蟾酥毒基和蟾毒灵混合物的制备方法，其特征是，蟾酥粉碎成中粗粉后，加入70～95%乙醇提取，提取液经过硅胶柱层析分离，得到高纯度的华蟾酥毒基和蟾毒灵混合物，华蟾酥毒基和蟾毒灵混合物的含量达到80%以上。用本发明的制备方法提取的华蟾酥毒基和蟾毒灵混合物的总含量达80%以上。
文档编号A61K31/585GK103191133SQ20131014235
公开日2013年7月10日 申请日期2013年4月23日 优先权日2013年4月23日
发明者林桂涛, 张超, 邓华亮 申请人:山东中医药大学