专利名称：通过阻断il-20受体活性治疗与il-20受体介导的信号通路相关的病症的制作方法
通过阻断IL-20受体活性治疗与IL-20受体介导的信号通路相关的病症相关申请本申请依据35U.S.C. § 119要求于2010年4月16日提交的美国临时申请号61/324,820的权益，该临时申请的全部内容通过引用并入本文。
背景技术：
炎症是由组织损伤引发的一组局部的非特异性免疫反应。一方面，炎症反应是保护性的，因为它们起到破坏、稀释或隔绝损伤原和被损伤的组织的作用。另一方面，它们或者作为影响因素、或者作为疾病综合征几乎在所有疾病/病症中被观察到。骨质疏松症是特征为低骨量和骨组织流失的疾病，导致了骨骼脆弱和易碎。肾衰竭是肾脏不能正常发挥功能的病症。糖尿病肾病是与长时间的糖尿病相关的进行性肾脏疾病。在所有这三种疾病中都已经观察到了炎症反应。IL-20受体为二聚体复合物，包含亚单位Rl和R2 (也被称为RA和RB)。它是三种功能不同的细胞因子即IL-19、IL-20和IL-24的共同受体。这表明，IL-20受体被不同细胞因子激活时能够触发不同的信号通路。发明概述本公开内容基于以下意想不到的发现IL_20R1敲除的小鼠(即无IL-20受体小鼠(IL-20receptor-null mice))发生的骨质疏松症、肾衰竭和糖尿病肾病远不如它们的野生对应物严重，以及两种单克隆抗-1L-20R1抗体成功地抑制了破骨细胞的分化和IL-19诱导的CE81T细胞的增殖。 因此，该公开内容提供了通过向需要治疗的对象施用有效量的阻抑IL-20受体活性的物质从而治疗与由IL-20受体介导的信号通路相关的病症(例如，骨质疏松症、肾衰竭、糖尿病肾病、类风湿性关节炎、癌症如口腔癌、乳腺癌和食道癌、癌症诱发的骨质溶解以及缺血性再关注或中风)的方法。该物质可以是结合并中和IL-20受体的抗体，IL-20受体的反义核酸，IL_19、IL_20或IL-24的显性负突变体(dominant negative mutant),或者是抑制IL-20受体活性的小分子。能够中和IL-20受体(即结合IL-20受体并阻断该受体介导的信号转导)的抗体可以是抗-1L-20R1抗体。它可以是完整的免疫球蛋白、其抗原结合片段、或者基因工程抗体(例如，人源化抗体、嵌合抗体或单链抗体)。在一些实施方案中，用于本文公开的治疗的抗-1L-20R1抗体是单克隆抗体mAb7GW、单克隆抗体mAb51D、其抗原结合片段、或其功能等同物。抗IL-20R1抗体可以具有(a)包含与在单克隆抗体mAb7GW或mAb51D的重链可变区中的互补决定区相同的互补决定区(CDR)的重链可变区、以及(b)包含与在mAb7GW或mAb51D的轻链可变区中⑶R相同的CDR的轻链可变区。在一个实例中，它包含与mAb7GW或mAb51D相同的重链可变区和相同的轻链可变区。mAb7GW和mAb51D抗体、它们的抗原结合片段和功能等同物也在本公开内容的范围内。mAb7GW和mAb51D的功能等同物包括具有与mAb7GW或mAb51D相同的重链和轻链⑶R的抗体。在一些实施方案中，这些功能等同物是mAb7GW或mAb51D衍生的基因工程抗体，例如嵌合抗体、单链抗体或人源化抗体。反义核酸可以是靶向IL-20R1的反义RNA，例如通过RNA干扰阻抑IL-20R1表达的siRNA 或微 RNA。如本文所用的，术语“治疗”指将包括一种或多种活性物质在内的组合物应用于或施用给具有与IL-20受体介导的信号通路相关的病症/疾病、具有该疾病/病症的症状、或具有患该疾病/病症倾向性的对象，目的是治疗、治愈、减轻、缓解、改变、补救、改善、改进或影响该疾病/病症、该疾病/病症的症状、或者患该疾病/病症的倾向性。还在本公开内容范围内的有(a)包含阻抑IL-20受体活性的一种或多种物质的药物组合物，其用于治疗IL-20受体介导的病症(例如，骨质疏松症、肾衰竭、糖尿病肾病、癌症如口腔癌和乳腺癌、类风湿性关节炎和癌症诱发的骨质溶解)，以及(b)该药物组合物在制备用于上述治疗的药物中的用途。本公开内容的一个或多个实施方案的细节在下面的说明中进行阐述。通过下文的附图和几个实施例的详细描述，以及还通过所附的权利要求书，本公开内容的其他特征和优点是显而易见的。附图简述首先描述附图。

图1是显示在来自L-20Rr/+、IL-20Rl+/-和IL-20R1+小鼠的外周血单个核细胞中诱导IL-10的图。图2是显示在IL-20R1+/+、IL-20R1+/-和IL-20R1+小鼠中OVX-诱发的骨质疏松骨流失的图。图面a:0VX 小鼠胫骨中的骨矿物质密度(对每一类型的小鼠，n=5)。图面b:TRAP-染色的切片中每一骨表面的破骨细胞数目。(对每一类型的小鼠，n=5)。值为平均值土标准偏差。数据是3次独立实验的代表。图3是显示在IL-20R1+/+、IL_20R1+/-和IL-20R1+小鼠中肾衰竭严重度的图。图面 A:在第 3 天分析了 HgCl2-处理的 IL-20R1+/+ (n=5)、IL-20Rl+/_(n=5)和 IL_20Rl+(n=5)小鼠中血清BUN水平。值为平均值土标准误差均值。与IL-20R1+/+小鼠比较，P〈0. 01。图面 B:4 天后，来自用 HgCl2 处理的 IL-20Rl+/+(n=5)、IL-20R1—(n=5)和 IL-20R1+(n=5)小鼠的损伤的肾小管细胞面积的定量分析。值为平均值土标准误差均值。与IL-20R1V+小鼠比较，*P〈0. 05。图4 是显示在 IL-20Rr/+、IL-20Rl+/-和STZ-诱发的糖尿病肾病严重度的图。图面A:血液葡萄糖水平。图面B:存活率。图面C:STZ-处理后第49天时，血清 BUN 水平。图面 D:1L-20RlvMhH (n=7)、IL-20R1+小鼠(n=7)和 IL_20Rl+(n=5)小鼠中STZ-处理后第6天和第49天确定的肾小球面积。值为平均值土标准误差均值。与IL-20R1+/+小鼠比较，*P〈0. 05。用盐水缓冲液处理的小鼠作为对照。图5是显示通过单克隆抗体mAb7GW和mAb51D抑制破骨细胞分化的图。图6是显示通过单克隆抗体mAb7GW和mAb51D抑制IL-19诱发的人食道癌细胞(CE81T细胞)增殖的图。发明详述本文描述了利用阻抑IL-20受体活性的物质来治疗对象与IL-20受体介导的信号通路相关的病症的方法。在一些实施方案中，病症与过度的IL-20受体介导的信号有关。这种病症包括但不限于骨质疏松症(包括由雌激素缺乏、更年期、或炎症诱发的骨质疏松)、肾衰竭(例如急性肾衰竭或慢性肾疾病)、糖尿病肾病、癌症(例如，口腔癌、食道癌和乳腺癌)、类风湿性关节炎、由癌症(例如，乳腺癌、前列腺癌、肺癌、肾细胞癌、骨巨细胞瘤或伴有骨转移的骨髓瘤)诱发的骨质溶解、以及缺血性再灌注(中风)。用于本文的术语“IL-20受体”指由IL-20R1和IL-20R2亚单位形成的二聚体复合物。人IL-20R1和IL-20R2亚单位分别以 GenBank 登录号 NP_055247 (蛋白)/NM_014432. 2 (mRNA)和 NP_653318 (蛋白)/NM_144717(mRNA)公开。阻抑IL-20受体活性的物质可以是(i)通过例如结合IL-20R1中和IL-20受体活性的抗体，(ii) IL-20受体亚单位之一的反义核酸，(iii) IL-19、IL-20或IL-24的显性负突变体、或者(iv)抑制IL-20受体的小分子。(i) IL-20受体中和抗体中和IL-20受体活性的抗体能够结合受体(即结合Rl或R2亚单位)，并阻抑由受体介导的信号转导(例如，降低IL-20受体介导的信号至少20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%或更多)。本文使用的术语“抗体”包括完整免疫球蛋白分子例如IgG、IgA和IgM，其抗原结合片段例如Fab、和Fv，以及基因工程抗体分子例如嵌合抗体、人源化抗体、scFv (单链抗体)、dAb (域抗体；参见Ward, et. al. (1989)Nature, 341:544)和双特异性抗体。用于本文描述的治疗中的抗体可以是单克隆的或多克隆的。“单克隆抗体”指同源抗体群，以及“多克隆抗体”指异源抗体群。这两个术语并不限制抗体来源或其制备的方式。在一个实例中，IL-20受体中和抗体是人源化抗体。人源化抗体包含人免疫球蛋白(即，受体抗体)，其中负责抗原结合的区域/残基(例如，互补确定区，特别是其中的特异性决定残基)用 来自非-人免疫球蛋白(即，供体抗体)的区域/残基替代。鉴定抗体重链和轻链中的区域/残基的方法是本领域熟知的。参见,例如，Almagro, J. Mol.Recognit. 17:132-143 (2004);和 Chothia et al.，J. Mol. Biol. 227:799-817 (1987)。在一些情况下，受体抗体的框架区内一个或多个残基也由来自供体抗体的残基替代。人源化抗体还可以包含既不是来自受体抗体也不是来自供体抗体的残基。这些残基被包括以进一步改善和优化抗体性能。在一些实施方案中，IL-20受体中和抗体是单克隆抗体mAb7GW或mAb51D、其抗原结合片段、或者mAb7GW或mAb51D的功能等同物。下面显示的是mAb7GW和mAb51D的重链和轻链的氨基酸序列，以及它们的编码核苷酸序列。mAb7Gff 的重链氨基酸序列(SEQID NO:1)MRVLILLffLFTAFPGILS VVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSI信号肽T SDYAffN WIRQFPGNRLEffM GYIDYSGSTKYNPSLKS R I S V T RD
CDRjCD.R2TSKNQFFLQLNSVTTEDTATYYCAR DFGDAY WGQGTLVTVSAj^
权利要求
1.用于治疗与IL-20受体介导的信号通路相关的病症的方法，其包括向需要治疗的对象施用有效量的阻抑IL-20受体活性的物质。
2.权利要求1的方法，其中所述病症是骨质疏松症、肾衰竭、糖尿病肾病、类风湿性关节炎、口腔癌、食道癌、乳腺癌、癌症诱发的骨质溶解和缺血性中风。
3.权利要求1或2的方法，其中所述物质是结合并中和IL-20受体的抗体、IL-20受体的反义核酸、抑制IL-20受体的小分子、或者细胞因子IL-19、IL-20或IL-24的显性负突变体。
4.权利要求3的方法，其中所述病症是骨质疏松症、肾衰竭或糖尿病肾病。
5.权利要求1、2或4的方法，其中所述物质是结合IL-20R1的抗体。
6.权利要求5的方法，其中所述抗体是完整免疫球蛋白分子、其抗原结合片段、人源化抗体、嵌合抗体或scFv。
7.权利要求5的方法，其中所述抗体是既结合IL-20R1又结合IL-19或IL-20的双特异性抗体。
8.权利要求5的方法，其中所述抗体包含(i)含有与单克隆抗体mAb7GW重链可变区中的互补决定区相同的互补决定区(CDR)的重链可变区，以及含有与mAb7GW轻链可变区中的CDR相同的CDR的轻链可变区；或者(ii)含有与单克隆抗体mAb51D重链可变区中的CDR相同的CDR的重链可变区，以及含有与mAb51D轻链可变区中的CDR相同的CDR的轻链可变区。
9.权利要求5的方法，其中所述抗体包含(i)mAb7GW的重链可变区和轻链可变区；或者(ii)mAb51D的重链可变区和轻链可变区。
10.权利要求5的方法，其中所述抗体是mAb7GW或mAb51D的人源化抗体。
11.权利要求1、2或4的方法，其中所述物质是靶向IL-20R1的反义RNA。
12.权利要求11的方法，其中所述反义RNA是使IL-20R1表达沉默的siRNA。
13.权利要求1、2或4的方法，其中所述病症是骨质疏松症。
14.权利要求13的方法，其中所述物质是结合IL-20R1的抗体。
15.权利要求14的方法，其中所述抗体是完整免疫球蛋白分子、其抗原结合片段、人源化抗体、嵌合抗体或scFv。
16.权利要求14的方法，其中所述抗体包含(i)含有与单克隆抗体mAb7GW重链可变区中的互补决定区相同的互补决定区(CDR)的重链可变区，以及含有与mAb7GW轻链可变区中的CDR相同的CDR的轻链可变区；或者(ii)含有与单克隆抗体mAb51D重链可变区中的CDR相同的CDR的重链可变区，以及含有与mAb51D轻链可变区中的CDR相同的CDR的轻链可变区。
17.权利要求16的方法，其中所述抗体包含(i)mAb7GW的重链可变区和轻链可变区；或者(ii)mAb51D的重链可变区和轻链可变区。
18.权利要求14的方法，其中所述抗体是mAb7GW或mAb51D的人源化抗体。
19.结合IL-20R1的分离的抗体，其中所述抗体包含(i)含有与单克隆抗体mAb7GW重链可变区中的互补决定区相同的互补决定区(CDR)的重链可变区，以及含有与mAb7GW轻链可变区中的CDR相同的CDR的轻链可变区；或者(ii)含有与单克隆抗体mAb51D重链可变区中的CDR相同的CDR的重链可变区，以及含有与mAb51D轻链可变区中的CDR相同的CDR的轻链可变区。
20.权利要求19的分离的抗体，其中所述抗体包含(i)mAb7GW的重链可变区和轻链可变区；或者(ii)mAb51D的重链可变区和轻链可变区。
21.权利要求20的分离的抗体，其中所述抗体是mAb7GW或mAb51D、或者其抗原结合片段。
22.权利要求19的分离的抗体，其中所述抗体是嵌合抗体或单链抗体。
23.结合IL-20R1的分离的抗体，其中所述抗体是mAb7GW或mAb51D的人源化抗体。
全文摘要
用阻抑IL-20受体活性的物质治疗与IL-20受体介导的信号通路相关的病症(例如，骨质疏松症、肾衰竭或糖尿病肾病)，所述物质例如通过结合IL-20R1中和IL-20受体的抗体、抑制IL-20R1表达的反义核酸、抑制IL-20受体活性的小分子、或者IL-19、IL-20或IL-24的显性负突变体。
文档编号A61P3/10GK103052403SQ201180026884
公开日2013年4月17日 申请日期2011年4月15日 优先权日2010年4月16日
发明者M-S·张 申请人:成功大学