专利名称：新的硫辛酸衍生物、其制备方法、其作为药物的应用和含有这些衍生物的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明的目的是新的硫辛酸衍生物，它们对产生一氧化氮NO的NO-合酶具有抑制活性和/或是抗氧化剂再生的试剂或捕集活性氧物质(ROS)并以更通常的方式参与硫羟基氧化还原反应的物质。这些捕集活性氧物质的抗氧化剂或物质可以是天然来源的例如维生素E或谷胱甘肽，或者是合成的例如某些捕集活性氧物质的产物或者既对NO-合酶具有抑制活性、又具有捕集ROS活性的产物。合成产物的实例尤其可见于PCT专利申请WO 96/09653、WO 98/42696和WO 98/58934中。
因此，本发明尤其涉及与下面定义的通式(I)相应的衍生物、其制备方法、含有这些衍生物的药物制剂及其治疗目的的应用，特别是作为NO合酶抑制剂和/或使抗氧化剂再生的试剂或捕集ROS并以更通常的方式参与硫羟基氧化还原反应的物质的应用。
由于NO和ROS以及谷胱甘肽的代谢在病理生理学中的潜在作用，因此，该新的与通式(I)相应的所述衍生物可以在有一氧化氮和谷胱甘肽代谢以及硫羟基氧化还原反应参与的疾病治疗中产生有益作用。尤其是·心血管和脑血管疾病，包括例如动脉粥样硬化、偏头痛、高动脉压、脓毒性休克、局部缺血性或出血性心或脑梗塞、局部缺血和血栓形成。·中枢或外周神经系统疾病例如神经退化疾病，其中尤其可以提及脑梗塞，蛛网膜下出血，老化，老年性痴呆包括阿尔茨海默氏症、亨廷顿氏舞蹈病、帕金森氏病、Creutzfeld Jacob病和朊病毒病，肌萎缩性侧索硬化，以及疼痛，脑和骨髓损伤，对鸦片类物质、酒精和成瘾物质成瘾，勃起和生殖障碍，认知障碍，脑病，病毒或毒物导致的脑病，抑郁，焦虑，精神分裂症，癫痫症，昏睡病，进食障碍(厌食、食欲过盛等)；·骨骼肌和神经肌肉关节疾病(肌病、肌炎)以及皮肤病；·增殖炎性疾病例如动脉粥样硬化、肺动脉高血压、呼吸窘迫、肾小球性肾炎、白内障、门静脉高血压、关节病和类风湿性关节炎、纤维组织形成、淀粉样变性、胃肠系统炎症(结肠炎、节段性回肠炎)或肺及呼吸系统炎症(哮喘、窦炎、鼻炎)以及接触和延迟过敏；·器官移植；·自免疫和病毒疾病例如狼疮、AIDS、寄生虫和病毒感染、糖尿病及其并发症包括视网膜病、肾病和多神经病、多发性硬化、肌病；·癌症；·常染色体遗传疾病例如Unverricht-Lunborg病；·与中毒(镉中毒、吸入正己烷、农药、除草剂)有关的神经疾病、与治疗(放射治疗)或遗传起源的疾病(Wilson病)有关的神经疾病；·与糖尿病有关的阳萎；·所有以一氧化氮过多产生或机能障碍和/或谷胱甘肽代谢和硫羟基氧化还原反应为特征的疾病。
在所有这些疾病中，有实验证据表明其中涉及一氧化氮或谷胱甘肽代谢机能障碍(Kerwin等，氧化氮一种新型的第二信使(Nitricoxidea new paradigm for second messengers)，J.Med Chem.38，4343-4362，1995；Packer等，α-硫辛酸作为生物抗氧化剂(Alpha-lipoic acid as biological antioxidant)，Free RadicalBiology & Medicine 19，227-250，1995)。这种情况、特别是帕金森氏病说明了本发明(Beal MF，帕金森氏病发病机理中的兴奋毒性和氧化氮(Excitotoxicity and nitric oxide in Parkison’s diseasepathogenesis)，Ann.Neurol.44[Suppl 1]，S110-S114，1998；Donato A等，帕金森氏病中的谷胱甘肽氧化应激反应与线粒体损害之间的联系(Gluthathion in Parkinson’s diseasea link betweenoxidative stress and mitochondrial damage)，Ann.Neurol.32，S111-S115，1992)。在本文中，可以抑制一氧化氮形成或使硫羟基或谷胱甘肽生物功能重建的药物可以产生有益的作用。
此外，在早期专利中，本发明人已经描述了NO合酶抑制剂及其应用(US 5,081,148；US 5,360,925)，并且最近描述了这些抑制剂与具有抗氧化或抗自由基(antiradicular)性质的产物的组合物(PCT WO98/09653)。他们还在PCT专利申请WO 98/42696和WO 98/58934中描述了脒衍生物，并在PCT专利申请WO 00/02860中描述了氨基吡啶衍生物。这些脒和氨基吡啶衍生物兼具有NO合酶抑制剂和ROS抑制剂的特征。
本发明的目的是新的硫辛酸衍生物、其制备方法及其在治疗中的应用。
因此，本发明涉及通式(I)的产物或其盐，其特征在于它包括式(I)a和(I)b产物 其中R1和R2独立地表示氢原子或具有1-6个碳原子的直链或支链烷基；A表示下列基团之一-(CH2)m-NR3-CO(CH2)n-、-(CH2)m-CO-NR3-(CH2)n-、-(CH2)m-NR3-(CH2)n-、-(CH2)m-CONR3-(CH2)p-NR4-(CH2)n-、-(CH2)m-NR3-CO-NR4-(CH2)n-或-(CH2)m-，m和n是0-6的整数，p是2-6的整数，并且R3和R4独立地表示氢原子或具有1-6个碳原子的直链或支链烷基；X表示下式基团 其中与Y基团相连的基团T表示基团-(CH2)i-，其中i表示0-6的整数，并且R5表示氢原子或具有1-6个碳原子的直链或支链烷基或-(CH2)m-Q基团，其中Q表示卤素、羟基、氰基、氨基、烷氧基、烷硫基、烷氨基或二烷氨基，或者R5还表示5-6元杂环，该杂环原子选自-O-、-N(R6)-和-S-基团，R6表示氢原子、具有1-6个碳原子的直链或支链烷基或者是与X基团的苯基环相连的键；或者X还表示-(CH2)q-基团，其中q表示0-6的整数；并且最后Y表示下列基团之一 其中B表示具有1-6个碳原子的直链或支链烷基、5-6元碳环芳基或含有1-4个选自O、S、N杂原子的5-6元杂环芳基，特别是噻吩、呋喃、吡咯或噻唑基，该芳基可以任选地被一个或多个选自具有1-6个碳原子的直链或支链烷基、链烯基或烷氧基的基团取代，或者B表示NR8R9，其中R8和R9独立地表示氢原子或具有1-6个碳原子的直链或支链烷基，或者R8和R9中的一个表示硝基、而另一个表示氢原子或具有1-6个碳原子的直链或支链烷基，或者R8和R9与氮原子结合在一起表示5-6元非芳族杂环，链的组成部分选自-CH2-、-NH-、-O-或-S-，或者B还表示SR10基团，其中R10表示氢原子或具有1-6个碳原子的直链或支链烷基，并且R7表示氢原子或具有1-6个碳原子的直链或支链烷基。
优选的是，当R5表示5-6元杂环时，R5是下列杂环之一吡咯、咪唑、吡唑、三唑、噻唑烷、吡咯烷、哌啶、哌嗪、N-烷基-哌嗪、硫代吗啉、吗啉、氮杂环丁烷。
再者，本发明尤其涉及前面定义的通式(I)产物，其中独立地发现以下特征·A表示下列基团之一-(CH2)m-NR3-CO-(CH2)n-、-(CH2)m-CONR3-(CH2)n-或-(CH2)m-NR3-CO-NR4-(CH2)n，m表示0-4的整数并且n表示0-6的整数，R3和R4独立地表示氢原子或具有1-6个碳原子的直链或支链烷基；·X表示下式基团 其中与Y基团相连的基团T表示-(CH2)i-基团，其中i表示0或1，并且R5表示氢原子或具有1-6个碳原子的直链或支链烷基或-(CH2)m-Q，其中Q表示卤原子或羟基、氰基、氨基、烷氧基、烷氨基或二烷氨基，或者R5表示5-6元杂环，其中的杂环原子选自-O-、-N(R6)-和-S-基团，R6表示氢原子或具有1-6个碳原子的直链或支链烷基或与X基团的苯基环相连的键；或者·Y表示下式基团 其中B表示具有1-6个碳原子的直链或支链烷基，5-6元碳环芳基或具有1-4个选自O、S、N的杂原子的5-6元杂环芳基，尤其是噻吩、呋喃、吡咯或噻唑基，该芳基任选地被一个或多个选自具有1-6个碳原子的直链或支链烷基、链烯基或烷氧基的基团取代。
特别优选的是，本发明涉及实施例中描述的下列产物(有时是盐的形式)-N-{4-[[(2-噻吩基)(亚氨基)甲基]氨基]苯基}-1，2-二硫杂环戊烷-3-戊酰胺；-N-{2-{4-[[(2-噻吩基)(亚氨基)甲基]氨基]苯基}乙基}-1，2-二硫杂环戊烷-3-戊酰胺；-N-{2-{4-[[(2-噻吩基)(亚氨基)甲基]氨基]苯基}乙基}-1，2-二硫杂环戊烷-3-乙酰胺；-N-[4-(6-氨基-4-甲基-2-吡啶基)丁基]-1，2-二硫杂环戊烷-3-戊酰胺；-N-[4-(6-氨基-4-甲基-2-吡啶基)丁基]-1，2-二硫杂环戊烷-3-乙酰胺；-N-(4-{[氨基(2-噻吩基)亚甲基]氨基}苯基)-2-(1，2-二硫杂环戊烷-3-基)乙酰胺；-N-(4-{[氨基(2-噻吩基)亚甲基]氨基}苄基)-5-(1，2-二硫杂环戊烷-3-基)戊酰胺；-N-(5-{[氨基(2-噻吩基)亚甲基]氨基}-2-甲氧基苯基)-5-(1，2-二硫杂环戊烷-3-基)戊酰胺；-N-[5-{[氨基(2-噻吩基)亚甲基]氨基}-2-(二甲基氨基)苄基]-5-(1，2-二硫杂环戊烷-3-基)戊酰胺；-N-[5-{[氨基(2-噻吩基)亚甲基]氨基}-2-(1H-吡咯-1-基)苄基]-5-(1，2-二硫杂环戊烷-3-基)戊酰胺；-以及这些化合物的盐。
此外，本发明提供了一些获得上述通式(I)产物的方法，在下文中将描述优选方法的条件。
因此，本发明尤其涉及如上定义的通式(I)的脒的制备方法，其特征在于将通式(II)中间体 其中A和X如上所定义，与通式(I.i)中间体反应 其中B如上所定义，并且L表示部分基团例如烷氧基、烷硫基、磺酸基、卤素、芳基醇基或甲苯磺酰基。
此外，本发明涉及通式(I)化合物的制备方法，其中A表示如上定义的-(CH2)m-CONR3-(CH2)n-基团，其特征在于将下面所示的通式(VII)a中间体 R3、X和Y如上所定义，并且A′表示-(CH2)n-基团，n如上所定义，与通式(I.vi)化合物反应 m如上所定义。
再者，本发明涉及通式(I)化合物的制备方法，其中A表示如上定义的-(CH2)m-NR3-CO-NR4-(CH2)n基团，其特征在于将如下所示的通式(VII)b中间体HN(R4)-A’-X-Y(VII)bR4、X和Y如上所定义，并且A′表示-(CH2)n-基团，n如上所定义，与通式(I.vi)化合物和二苯基磷酰基叠氮化物在碱例如三乙胺存在下反应 m如上所定义。
本发明还涉及通式(I)化合物的制备方法，其中B是胺，其特征在于将通式(II)中间体 其中A和X如上所定义，a)与通式(I.ii)中间体反应 其中L表示部分基团，例如烷氧基、烷硫基、磺酸基、卤素、芳基醇基或甲苯磺酰基，或者b)与通式(I.iii)中间体反应 其中L表示部分，例如烷氧基、烷硫基、磺酸基、卤素、芳基醇基或甲苯磺酰基，并且Gp是氨基甲酸酯类的保护基例如叔丁氧羰基，如果选择与通式(I.iii)化合物反应，则在该反应之后，在强酸例如三氟乙酸存在下进行水解，或者c)与式(I.iv)衍生物(N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍)反应 或者d)最后与式(I.v)衍生物反应，其中Gp表示保护基S＝＝N-Gp.
(I.v)
在某些情况下，本发明化合物可以包括不对称碳原子，因此具有两种可能的对映异构形式，即“R”和“S”构型。本发明包括这两种对映异构形式以及它们的组合，包括外消旋“RS”混合物。为了简化，当在结构式中没有具体指明构型时，应该理解为其表示两种对映异构形式及其混合物。
此外，在本申请中，除非另外指明，烷基是指含有1-6个碳原子的直链或支链烷基。除非另外指明，链烯基是指含有1-6个碳原子、并具有至少一个不饱和双键的直链或支链烷基。
烷硫基、烷氧基、烷氨基、二烷氨基和链烯基是指相对于具有上面所述含义烷基的烷硫基、烷氧基、烷氨基、二烷氨基和链烯基。
含有1-6个碳原子的直链或支链烷基尤其是指甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基、戊基、新戊基、异戊基、己基、异己基。卤素是指福、氯、溴或碘原子。
本发明的目的还有作为药物的上述化合物及其可药用盐。本发明还涉及含有这些化合物或其可药用盐的药物组合物，以及这些化合物或其可药用盐在制备抑制神经元NO合酶或可产生NO的合酶、使天然或合成的抗氧化剂再生的药物中的应用，或者本发明提供了NO合酶抑制和使抗氧化剂再生的双重功能。
可药用盐尤其是指无机酸的加成盐例如盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、磷酸盐、二磷酸盐和硝酸盐，或者有机酸的加成盐例如乙酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、双羟萘酸盐、草酸盐和硬脂酸盐。由碱例如氢氧化钠或氢氧化钾形成的盐也包括在本发明范围内，只要其可以使用。可药用盐的其他实例可参见″Pharmaceutical salts″，J.Pharm.Sci.661(1977)。
本发明的目的还涉及通式(I)产物或其可药用盐在制备治疗有一氧化氮和/或硫羟基的氧化还原反应参与的疾病的药物中的应用，所述疾病是例如中枢和外周神经系统疾病，尤其有代表性的是帕金森氏病、脑血管疾病、增殖和炎性疾病、呕吐、脓毒性休克、由放射活性辐射、日光照射或器官移植引起的疾病、自免疫和常染色体疾病、癌症和所有涉及一氧化氮产生或机能障碍和/或涉及硫羟基氧化还原反应的疾病。
本发明的目的还涉及通式(I)产物或其可药用盐在制备治疗脑血管疾病例如偏头痛、局部缺血或出血引起的脑梗塞、局部缺血和血栓形成的药物中的应用。
最后，本发明的目的是通式(I)产物或其可药用盐在制备治疗中枢或外周神经系统疾病的药物中的应用，所述疾病是例如神经退化疾病、疼痛、脑和骨髓损伤、对鸦片类物质、酒精和成瘾物质成瘾、勃起和生殖障碍、认知障碍、脑病、抑郁、焦虑、精神分裂症、癫痫症、昏睡病和进食障碍。
药物组合物可以是固体形式例如粉末、颗粒、片剂、胶囊、脂质体或栓剂。合适的固体载体可以是例如磷酸钙、硬脂酸镁、滑石、糖、乳糖、糊精、淀粉、明胶、纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮和蜡。
含有本发明化合物的药物组合物还可以以液体形式存在，例如溶液、乳液、悬浮液或糖浆。合适的液体载体可以是例如水、有机溶剂例如甘油或二元醇及其在水中的不同比例的混合物。
本发明的药物可以局部、经口或非肠道途径，通过肌内注射等形式给药。
根据所用的活性化合物类型，本发明药物的给药剂量为0.1mg至10g。
根据本发明，可以按照下述方法制备通式(I)化合物。制备通式(I)化合物A)制备其中Y表示下式结构的通式(I)化合物 第一种途径按照方案1，可以由通式(II)、(III)和(IV)中间体制备通式(I)化合物，其中A、B、X和Y如上所定义并且Gp是氨基甲酸酯型保护基。 反应方案1可以使通式(II)的苯胺或胺衍生物与通式(I.i)化合物缩合，其中L表示部分基团(特别是烷氧基、烷硫基、磺酸基、卤素、芳基醇基或甲苯磺酰基)，以制备最终的取代脒型通式(I)化合物(参见反应方案1)。例如，当B是噻吩时，通式(II)衍生物可以与S-甲基噻吩硫代氨基甲酰胺氢碘酸盐缩合，后者是按照文献中所述方法制备的(Ann.Chim.(1962)，7，303-337)。该缩合反应可以任选地在DMF存在下、在50-100℃优选的温度范围内、在醇(例如甲醇或异丙醇)中加热几小时或者过夜进行。
如果B＝SR10，例如S-CH3，则将通式(II)的胺或苯胺与其中Gp表示保护基例如苯甲酰基的异硫氰酸酯(I.v)进行缩合反应。然后通过在合适的条件下裂解保护基使其脱保护，最后用例如卤代烷处理所形成的硫脲，得到最终的通式(I)化合物。
如果B＝NR8R9，则最终的通式(I)化合物是胍。它们可以通过例如将通式(II)的胺或苯胺与通式(I.ii)或(I.iii)的衍生物缩合进行制备。按照文献中所述的方法，使其中L表示例如吡唑环的通式(I.ii)试剂与通式(II)的胺缩合(J.Org.Chem.(1992)57，2497-2502)，对于其中L表示例如吡唑环并且Gp为tBuOCO基团的通式(I.iii)试剂(Tetrahedron Lett.(1993)34(21)，3389-3392)或者其中L表示-N-SO2-CF3基团并且Gp为tBuOCO基团的通式(I.iii)试剂(J.Org.Chem.(1998)63，3804-3805)也是类似。在合成的最后阶段，在强酸例如三氟乙酸存在下使胍功能基脱保护。
如果B＝-NHNO2，则可以采用文献所述条件，通过例如通式(II)的胺或苯胺与通式(I.iv)的试剂(N-甲基-N′-亚硝基胍)缩合，制备最终的通式(I)化合物(J.Amer.Chem.Soc.(1947)，69，3028-3030)。
由其中A、X和Y如上所定义的通式(I)a化合物得到通式(I)b化合物。在醇溶剂例如甲醇中、在还原剂例如NaBH4、NaBH3CN或LiAlH4存在下，将通式(I)a的硫辛酸化合物转化为其中R1＝R2＝H的通式(I)b的二氢硫辛酸衍生物。通过将其中R1＝R2＝H的通式(I)b化合物与其中R1和R2如上所定义并且卤原子是部分基团的式R1-Hal和/或R2-Hal(Hal＝卤原子)反应，制备其中R1和R2不是氢的通式(I)b化合物。该反应例如在合适的溶剂如THF、丙酮、乙酸乙酯中，在碱如碳酸钾或三乙胺存在下进行，以制备通式(I)b中间体。制备通式(II)化合物通过使保护基(Gp)裂解或者使硝基还原，制得通式(II)中间体。
其中A和X如上所定义的通式(II)中间体可以由反应方案1中的通式(III)或(IV)中间体制备，通式(III)和(IV)中间体是分别含有例如氨基甲酸酯或硝基形式的保护的胺或苯胺(NHGp)的化合物。尤其是，在保护基为BOC的情况下，它们以标准方式用TFA或HCl脱保护，以最终产生通式(II)的伯胺或苯胺。在反应方案1中，其中A和X如上所定义的通式(IV)中间体的硝基官能团的还原通过例如在下述条件下加热产物进行在合适的溶剂例如含少量乙醇的乙酸乙酯中，在SnCl2存在下(J.Heterocyclic Chem.(1987)，24，927-930；TetrahedronLetters(1984)，25(8)，839-842)、在SnCl2/Zn存在下(Synthesis.(1996)，9，1076-1078)，使用在溶剂例如乙醇中的NaBH4-BiCl3(Synth.Com.(1995)25(23)，3799-3803)，或者然后使用其中加有水合肼的阮内镍(Monatshefte für Chemie，(1995)，126，725-732)，或者在回流条件下使用在乙醇或氯化铵混合物中的铟(Synlett(1998)9，1028)。然后在氯化铁存在下(FeCl3)(Synlett(1991)10，717-718)或者在碘存在下(Tetrahedron Letters.(1997)，38(33)，5785-5788)将双还原产物再氧化，以最终产生再含通式(II)的二硫杂环戊烷的胺和苯胺。制备通式(III)和(IV)化合物合成通式(III)和(IV)的甲酰胺在反应方案1中，通过将通式(I.vi)的酸与通式(V)的单保护的胺或苯胺或者其中A′表示-(CH2)n-基团的通式(VI)的硝基衍生物缩合，制备其中A、X、R3和m如上所定义的通式(III)和(IV)的甲酰胺。在本申请的该合成反应方案中，根据情况，Rx是指R3或R4。在标准肽合成条件下(M.Bodanszky和A.Bodanszky，The Practice of PeptideSynthesis，145(Springer-Verlag，1984))，在THF、二氯甲烷或DMF中，在偶合试剂例如二环己基碳二亚胺(DCC)、1，1′-羰基二咪唑(CDI)(J.Med.Chem.(1992)，35(23)，4464-4472)或1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC或WSCI)(John Jones，Thechemical synthesis of peptides，54(Clarendon Press，Oxford，1991))存在下，或者在氯甲酸异丁酯和N-甲基吗啉存在下(Org Prep.Proced.Int.，(1975)，35，215)形成甲酰胺键。非市售的通式(I.vi)羧酸以及通式(V)和(VI)的胺/苯胺的合成如下文所述。 反应方案2第二种途径按照反应方案3，还可以由通式(VII)、(VIII)、(IX)和(X)中间体制备通式(I)化合物，其中A、B、X和Y如上所定义，A’表示-(CH2)n-基团，根据情况，Rx是指R3或R4，并且Gp是保护基例如氨基甲酸酯型保护基。
反应方案3合成通式(I)的甲酰胺在反应方案4中，通过将通式(I.vi)的酸与通式(VII)的胺/苯胺缩合，制备其中A’、X、R3、Y和m如上所定义的通式(I)化合物。在标准肽合成条件下(M.Bodanszky和A.Bodanszky，The Practice ofPeptide Synthesis，145(Springer-Verlag，1984))，在THF、二氯甲烷或DMF中，在偶合试剂例如二环己基碳二亚胺(DCC)、1，1′-羰基二咪唑(CDI)(J.Med.Chem.(1992)，35(23)，4464-4472)或1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC或WSCI)(John Jones，The chemical synthesis of peptides，54(Clarendon Press，Oxford，1991))存在下，或者在氯甲酸异丁酯和N-甲基吗啉存在下(Org Prep.Proced.Int.，(1975)，35，215)形成甲酰胺键。非市售的通式(I.vi)羧酸的合成如下文所述。 反应方案4合成通式(I)的脲在反应方案5中，在溶剂例如甲苯中、在二苯基磷酰基叠氮化物(DPPA)和碱例如三乙胺存在下，将将通式(I.vi)的酸与通式(VII)的胺/苯胺缩合，优选2-3小时，并且优选在40-110℃、例如80℃加热。
反应方案5制备通式(VII)、(VIII)、(IX)和(X)化合物通过将保护基裂解得到通式(VII)化合物。在反应方案3中，可以由通式(VIII)化合物制备其中Rx、A’、X和Y如上所定义的通式(VII)化合物，它们是含有例如氨基甲酸酯形式的保护胺(NGp)的化合物。尤其是当保护基为BOC时，这些化合物以标准的方式，用三氟乙酸(TFA)或HCl脱保护，以最终制备通式(VII)的胺。
按照反应方案3，可以由通式(IX)和(X)中间体制备通式(VIII)化合物，其中B、A’、X、Y和Rx如上所定义并且Gp是例如氨基甲酸酯型保护基。
如上面反应方案1中对通式(I)化合物所述，可以将通式(IX)的胺/苯胺衍生物与其中L表示部分基团的通式(I.i)、(I.ii)和(I.iii)化合物缩合，或者与通式(I.iv)和(I.v)化合物缩合，以最终制备反应方案中的通式(VIII)化合物。如果R3表示2-羟基-4，6-二甲氧基苄基并且Gp表示叔丁氧羰基(BOC)，这些条件则使得其就地N-脱苄基化，从而直接制得反应方案6中的通式(VIII)化合物。 反应方案6通过将通式(X)化合物的硝基还原，制备通式(IX)化合物。在反应方案3中，其中Rx、A′和X如上所定义的通式(X)化合物的硝基官能团的还原通过例如在下述条件下加热产物进行在合适的溶剂例如含少量乙醇的乙酸乙酯中，在SnCl2存在下(J.Heterocyclic Chem.(1987)，24，927-930；Tetrahedron Letters(1984)，25(8)，839-842)、在SnCl2/Zn存在下(Synthesis.(1996)，9，1076-1078)，或者使用在溶剂例如乙醇中的NaBH4-BiCl3(Synth.Com.(1995)25(23)，3799-3803)，或者然后使用其中加有水合肼的阮内镍(Monatsheftefür Chemie，(1995)，126，725-732)，或者在回流条件下使用在乙醇或氯化铵混合物中的铟(Synlett(1998)9，1028)，以最终产生通式(IX)的伯胺和苯胺。
非市售的通式(X)化合物的制备如下文所述。B)制备其中Y表示下式结构的通式(I)化合物 按照反应方案7所述的方法，可以由通式(II)中间体制备其中A、X、Y和R7如上所定义的通式(I)化合物。 反应方案7按照J.Chem.Soc.Perkin Trans.(1984)，12，2801-2807中所述的实验方案，通过在60-100℃的温度范围内、在羟胺盐酸盐存在下、在溶剂例如乙醇中进行加热，使通式(II)化合物的2，5-二甲基吡咯保护基裂解，制得最终的通式(I)分子。制备通式(II)化合物可以按照下列合成反应方案制备通式(II)化合物1)通式(II.x)的取代2-(2，5-二甲基吡咯-1-基)吡啶的制备方法1.1)在反应方案8中，由通式(II.1)化合物例如2-(2，5-二甲基吡咯-1-基)吡啶制备用获得通式(II)中间体的合成前体。这是按照J.Chem.Soc.Perkin Trans.，(1984)，12，2801-2807中所述实验方案，由市售的6-氨基-2，4-二甲基吡啶制得的。在-50℃至-30℃的温度范围内，在无水溶剂例如乙醚中，在惰性气氛下并且任选地在N，N，N’，N’-四甲基乙二胺存在下，用强碱例如n-BuLi处理通式(II.1)化合物，使得衍生物锂化形成中间体(II.2)，后者在亲电子试剂E+存在下形成通式(II.x)加成物。 反应方案81.2)可以与通式(II.2)的锂化衍生物反应的亲电子试剂E+是例如保护的卤化胺。通式(II.3)的胺由中间体(II.2)制备，后者是例如在上述条件下、在保护的卤化胺上(例如以甲硅烷基化的衍生物或邻苯二甲酰亚胺形式)缩合的。在文献所述的条件下进行脱保护后，最终得到通式(II.4)的胺(T.W.Greene和P.G.M.Wuts，Protective Groupsin Organic Synthesis，Second edition(Wiley-Interscience，1991))。 反应方案92)通式(II)化合物的制备方法制备通式(II)的甲酰胺
在反应方案10中，还可以在上述条件下，通过将通式(I.vi)的羧酸与通式(II.4)的胺缩合，制备其中m、R3、A’和R7如上所定义的通式(II)的甲酰胺。非市售的通式(I.vi)羧酸的合成如下所述。 反应方案103)制备某些非市售的中间体按照文献所述方法制备其中m如上所定义的非市售通式(I.vi)的酸。例如，按照Tetrahedron Letters(1997)，38(33)，5785-5788所述实验方案，在步骤5中得到trisnorlipoic acid。
当X表示-(CH2)q-基团时，按照文献所述方法制得其中R3表示H的选择性单保护的通式(V)和(IX)的伯胺，(例如Synthesis(1984)，12，1032-1033；Synth.Commun.(1990)，20(16)，2559-2564；J.Amer.Chem.Soc.(1993)，115(9)，3548-3557；J.Med.Chem.(1989)，32(2)，391-396).JAmer.Chem.Soc.(1995)，117(11)，3308-3309)。按照文献所述方法制备其中R3表示H的通式(VI)的伯硝基-胺(例如J.Chem.Soc.(1947)，1487)。
当X表示亚苯基并且n和R5如上所定义时，按照下文反应方案2.1中说明的方法，制备其中R3表示H的通式(V)的胺/苯胺。 反应方案2.1在反应方案2.1中，由通式(VI.1)的胺或硝基苯胺制备通式(V)化合物。例如，在合适的溶剂如二噁烷或二氯甲烷或乙腈中，在Fmoc-C1(Tetrahedron Lettes.(1989)，30(11)，1401-1404)或(Boc)2或本领域专业人员已知的其他保护基的前体(Gp)存在下，将胺或苯胺官能团进行保护，以制备通式(V.2)化合物(或通式(X)化合物)。通常，在乙醇中、在10％Pd/C存在下进行催化氢化，或者采用前面描述的其他方法使通式(V.2)中间体的硝基官能团还原，以制备苯胺(V.3)(或通式(IX)化合物)。例如，在Fmoc-Cl或(Boc)2或本领域专业人员已知的其他保护基的前体(Gp)存在下，将通式(V.3)的苯胺官能团进行保护，应该理解在反应方案2.1中Gp1≠Gp2。合成的最后阶段是通过单脱保护使伯胺再生，例如，当Gp1＝Fmoc时，例如在合适的溶剂如DMF或二噁烷中，在碱例如哌啶、吗啉、DMAP或二异丙基乙胺存在下进行脱保护(Tetrahedron Letters.(1989)，30(11)，1401-1404)。当Gp2＝Boc时，以标准方式，使用三氟乙酸或HCl进行脱保护，以最终制备通式(V)的单保护苯胺。
在反应方案6.1中，由通式(VI.1)的硝基胺或硝基苯胺制备其中R3表示2-羟基-4，6-二甲氧基酚基团、Gp表示Boc并且n和R5如上所定义的通式(IX)和(X)化合物。 反应方案6.1在反应方案6.1中，在还原介质中，通过将2-羟基-4，6-二甲氧基苯甲醛与通式(VI.1)的胺/苯胺缩合，制备通式(IX)和(X)化合物。该反应在醇性溶剂例如甲醇中、在还原剂例如NaBH4或NaBH3CN存在下进行。采用标准方法，在二氯甲烷中，用(Boc)2对所形成的仲胺进行保护，以制备通式(X)化合物。在乙醇中、在10％Pd/C存在下，通过催化氢化使通式(X)化合物的硝基官能团还原，以制备苯胺(IX)。
在反应方案3.1和3.2中，当X表示亚苯基并且R5表示含氮原子的5-6元杂环(het)或者含杂原子W的基团(所述基团是指Wαβ，其中W＝O、N或S，当W＝O或S时，α表示烷基并且β不存在，或者当W＝N时，β表示H或烷基)时，按照文献所述方法制备其中R3表示H的非市售通式(X)的胺/苯胺(例如J.Med.Chem.(1980)，23，973-975；J.Med.Chem.(1990)，33，633-641；Chem.Heterocycl.Compd.(EN).(1969)，5，683-687；J.Org.Chem.USSR.(EN)(1989)，3，599-600；J.Med.Chem.(1994)，37，467-475；J.Med.Chem.(1999)，42，4362-4379)。例如可以按照反应方案3.1所述的方法制备通式(X)化合物。 反应方案3.1在反应方案3.1中，由通式(X.2)的卤代硝基苯甲腈制备其中n、het和Wap如上所定义的通式(X)化合物。在反应方案3.1中，例如在合适的溶剂如乙醚或THF中，在乙硼烷或LAH存在下，将通式(X.2)中间体的腈官能团还原。然后以Boc的形式(X.4)或本领域专业人员已知的其他保护基(Gp)的形式将卤代硝基苯胺/胺(X.3)保护，然后在溶剂例如DMSO或DMF中，在碱例如碳酸钾、氢氧化钾或氢氧化钠存在下，用杂环基(het)将通式(X.4)化合物亲核取代，以制备通式(X)中间体。
或者，可以按照下文反应方案3.2中所给出的方法制备如上所定义的通式(X)化合物
反应方案3.2在反应方案3.2中，由通式(X.2)的卤代硝基苯甲腈制备其中R5表示含氮原子的5-6元杂环(het)或含杂原子W的基团(Wαβ如上所定义)的通式(X)化合物。在溶剂例如DMSO或DMF中，在碱例如碳酸钾、氢氧化钾或氢氧化钠存在下，用合适的试剂将通式(X.2)化合物亲核取代，以制备通式(X.5)中间体。
在反应方案3.2中，例如在在合适的溶剂如乙醚或THF中，在乙硼烷或LAH存在下，将通式(X.5)中间体的腈官能团还原。然后以Boc的形式或本领域专业人员已知的其他保护基(Gp)的形式将卤代硝基苯胺/胺(X.6)保护，以最终制备反应方案3.2中的通式(X)中间体。
下面的实施例用于说明上述方法，而不是意在限制本发明的范围。
采用与中间体7.B.1的方案相同的实验方案，但用中间体2.B.1代替对硝基苄胺。得到白色固体，产率60％。熔点133.5-134.4℃2.B.3)2-(4-氨基苯基)乙基(2-羟基-4，6-二甲氧基苄基)氨基甲酸叔丁基酯采用与中间体7.B.1的方案相同的实验方案，但用中间体2.B.2代替中间体7.1。得到浅黄色油状物，产率90％。2.B.4)2-(4-{[(氨基(2-噻吩基)亚甲基}氨基}苯基)乙基氨基甲酸叔丁基酯采用与中间体1.3的方案相同的实验方案，但用中间体2.B.3代替中间体1.2。这些条件下，发生了N-脱苄基化，从而得到了以Boc保护的单保护的伯胺。得到黄色固体，产率79％。熔点144℃2.B.5)N’-[4-(2-氨基乙基)苯基]-2-噻吩甲亚胺酰胺(thiophenecarboximidamide)采用与中间体1.2的方案相同的实验方案，但用中间体2.B.4代替中间体1.1。得到白色固体，产率79％。熔点169.2-170.5℃。2.B.6)N-{2-{4[[(2-噻吩基)(亚氨基)甲基]氨基]苯基}乙基}-1，2-二硫杂环戊烷-3戊酰胺采用与中间体1.1的方案相同的实验方案，但用中间体2.B.5代替N-BOC-1，4-亚苯基二胺。得到黄色固体，产率79％。熔点146-148℃。NMR1H(DMSOd6，400MHz，δ)1.32(m，2H，CH2)；1.60(m，4H，CH2)；1.88(m，1H，CH2)；2.07(t，2H，CH2，J＝7.36Hz)；2.41(m，1H，CH2)；2.65(m，2H，CH2)；3.10-3.30(m，4H，CH2)；3.60(m，1H，-S-CH-)；6.33(宽峰，2H，NH，脒)；6.78(d，2H，芳香性，J＝8,04Hz)；7.08(m，1H，噻吩)；7.12(d，2H，芳香性，J＝8.16Hz)；7.60-7.80(m，2H，噻吩)；7.81(t，1H，CONH J＝5.56Hz).IRνC＝N(脒)1590cm-1；νC＝O(酰胺)1629cm-1.2.C.第二种途径的另一种方法也可采用方案3所示的另一种合成方法，其中Gp＝Boc。在这种情况下，实验方案类似于之后7.B方法所述，但用4-硝基苯乙胺代替对硝基苄胺。实施例3N-{2-{4[[(2-噻吩基)(亚氨基)甲基]氨基]苯基}乙基}-1，2-二硫杂环戊烷-3-乙酰胺盐酸盐3.A.第一种途径的方法采用与化合物1所述方法相同的实验方案，但用trisnorlipoicacid[2-(1，2-二硫杂环戊烷-3-基)乙酸](按照Tetrhetron Letters，(1997)，38，33，5785制备)代替硫辛酸。黄色固体。NMR1H(DMSOd6，400MHz，δ)1.91(m，1H，CH2)；2.30-2.60(m，3H，CH2)；2.70-2.90(m，2H，CH2)；3.17(m，2H，CH2)；3.40(m，2H，CH2)；3.93(m，1H，-S-CH-)；7.30-7.50(m，5H，芳香性)；8.10-8.30(m，3H，芳香性+CONH)；8.86(宽峰，1H，NH+)；9，80(宽峰，1H，NH+)；11.50(宽峰，1H，NH+).MSMH+＝392.1.3.B.第二种途径的方案或者，按照方案3(其中Gp＝Boc并且R3＝2-羟基-4，6-二甲氧基苄基)和6所示方法合成实施例3的化合物。采用与方法2.B所述方案相同的实验方案，但用trisnorlipoic acid[2-(1，2-二硫杂环戊烷-3-基)乙酸](按照Tetrhetron Letters，(1997)，38，33，5785制备)代替硫辛酸。黄色固体。3.C.第二种途径的另一种方法也可采用方案3所示的另一种合成方法，其中Gp＝Boc。采用与之后的方法7.B所述方案相同的实验方案，但用硝基苯乙胺代替对硝基苄胺并且用trisnorlipoic acid[2-(1，2-二硫杂环戊烷-3-基)乙酸](按照Tetrhetron Letters，(1997)，38，33，5785制备)代替硫辛酸。实施例4N-[4-(6-氨基-4-甲基-2-吡啶基)丁基]-1，2-二硫杂环戊烷-3-戊酰胺4.1)6-(2，5-二甲基-1H-吡咯-1-基)-4-甲基-2-吡啶丁酰胺在氮气氛下，将1g(5mmol)2-(2，5-二甲基-1H-吡咯-1-基)-4，6-二甲基吡啶(按照J.Chem.Soc.，Perkin Trans.，1984，12，2801的方法，由6-氨基-2，4-二甲基吡啶制备)溶于10ml无水乙醚和1.132ml(7.5mmol)N，N，N，N-四甲基二乙胺(TMEDA)中。将该反应混合物冷却到-20℃后，滴加2,4ml(6mmol)2.5M BuLi的己烷溶液。在-20℃保持5小时后，将反应混合物冷却到-45℃，加入1.68g(6mmol)1-(3-溴丙基)-2，2，5，5-四甲基-1-氮杂-2，5-二disila环戊烷并使温度回升至室温过夜。加入50ml饱和氯化铵溶液并将该混合物在25℃搅拌2小时。滗析有机相并顺序用40ml水和40ml盐水洗涤，经硫酸镁洗涤，过滤并真空浓缩。所得残余物经二氧化硅柱纯化(洗脱剂＝含5％乙醇的二氯甲烷)，得到黄色油状物，产率62％。NMR1H(CDCl3，400MHz，δ)1.52(m，2H，CH2)；1.78(m，2H，CH2)；2.11(s，6H，2x CH3吡咯)；2.39(s，3H，CH3吡啶)；2.72(t，2H，CH2J＝7.02Hz)；2.79(t，2H，CH2J＝7.62Hz)；5.87(s，2H，吡咯)；6.85(s，1H，吡啶)；6.98(s，1H，吡啶).4.2)N-{4-[6-(2，5-二甲基-1H-吡咯-1-基)-4-甲基-2-吡啶基]丁基}-1，2-二硫杂环戊烷-3-戊酰胺采用与如中间体1.1所述方案的相同的方法，但用中间体4.1代替N-BOC-1，4-亚苯基二胺。获得黄色油状物。NMR1H(CDCl3，400MHz，δ)1.30-2.00(m，11H，CH2)；2.07(m，2H，CH2)；2.11(s，6H，2x CH3吡咯)；2.40(s，3H，CH3吡啶)；2.45(m，1H，CH2)；2.82(m，2H，CH2)；3.10-3.30(m，4H，CH2)；3.57(m，1H，-S-CH-)；5.87(s，2H，吡咯)；5.94(宽峰，1H，CONH)；6.87(s，1H，吡啶)；6.99(s，1H，吡啶).MSMN+＝446.24.3)N-[4-(6-氨基-4-甲基-2-吡啶基)丁基]-1，2-二硫杂环戊烷-3-戊酰胺将中间体4.2(1.53g；3,43mmol)溶于加有18ml水的55ml乙醇中并加入1.2g(17.2mmoles)盐酸羟胺。将该反应混合物加热回流24小时。温度回落到25℃后，该混合物用20ml饱和碳酸氢钠溶液稀释并用100ml二氯甲烷萃取产物。滗析后，有机溶液用40ml饱和碳酸氢钠溶液和40ml盐水顺序洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。蒸发得到的残余物经二氧化硅柱纯化(洗脱剂＝含2.5％乙醇的二氯甲烷)，得到黄色油状物，产率76％。NMR1H(CDCl3，400MHz，δ)1.30-1.80(m，10H，CH2)；1.89(m，1H，CH2)；2.16(m，2H，CH2)；2.19(s，3H，CH3吡啶)；2.40(m，1H，CH2)；2.58(m，2H，CH2)；3.05-3.30(m，4H，CH2)；3.56(m，1H，-S-CH-)；4.35(宽峰，2H，NH2)；5.80(宽峰，1H，CONH)；6.17(s，1H，吡啶)；6.35(s，1H，吡啶).IRνC＝O(酰胺)1637cm-1.实施例5N-[4-(6-氨基-4-甲基-2-吡啶基)丁基]-1，2-二硫杂环戊烷-3-乙酰胺富马酸盐采用与化合物4所述方案相同的试验方案，但trisnorlipoicacid[或2-(1，2-二硫杂环戊烷-3-基)乙酸](按照TetrhetronLetters，(1997)，38，33，5785制备)代替硫辛酸。然后在丙酮/甲基乙基酮(50/50)混合溶剂中，将该游离碱用富马酸盐化。得到乳白色粉末的富马酸盐，产率14.8％。NMR1H(DMSOd6，400MHz，δ)1.40(m，2H，CH2)；1.57(m，2H，CH2)；1.92(m，1H，CH2)；2.15(s，3H，CH3吡啶)；2.30-2.70(m，5H，CH2)；3.03-3.18(m，4H，(m，1H，-S-CH-)；6.17(s，1H，吡啶)；6.26(s，1H，吡啶)；6.00-6.60(宽峰，2H，-CO2H富马酸)；6.60(s，2H，CH＝CH，富马酸)；7.90(宽峰，1H，CONH).IRνC＝O(酰胺)1649cm-1MSMH+＝326.2实施例6N-(4-{[氨基(2-噻吩基)亚甲基}氨基}苯基)-2-(1，2-二硫杂环戊烷-3-基)乙酰胺采用与化合物1所述方案相同的试验方案，但trisnorlipoicacid[或2-(1，2-二硫杂环戊烷-3-基)乙酸](按照TetrhetronLetters，(1997)，38，33，5785制备)代替硫辛酸。得到黄色泡沫。NMR1H(DMSOd6，400MHz，δ)2.00(m，1H，CH2)；2.40-2.80(m，3H，CH2)；3.00-3.30(m，2H，CH2)；4.10(m，1H，-S-CH-)；6.50-6.80(宽峰，2H，NH+)；6.80-7.10(m，3H，芳香性)；7.50-7.80(m，4H，芳香性)；9.93(s，1H，CONH).MH+＝364.1实施例7N-(4-{[氨基(2-噻吩基)亚甲基]氨基}苄基)-5-(1，2-二硫杂环戊烷-3-基)戊酰胺7.A.第一种途径的方法采用与化合物1所述方案相同的试验方案，但用1-叔丁基4-(氨甲基)苯基氨基甲酸酯代替N-BOC-1，4-亚苯基二胺。白色固体。熔点151.9-152.1℃7.B.1. 4-硝基苄基氨基甲酸叔丁基酯将5.66g(30.0mmol)对硝基苄胺盐酸盐溶于100ml二氯甲烷和9.2ml三乙胺。用冰浴冷却该混合物后，分数次加入7.2g(33.0mmol)(Boc)20。该反应混合物在23℃搅拌12小时后，倾入冰水混合物中。滗析有机层并顺序用20ml水和20ml盐水洗涤。经硫酸钠干燥后，过滤并真空浓缩，用异丙基醚研制，得到白色固体，产率67.4％。熔点107.8℃7.B.2. 4-氨基苄基氨基甲酸叔丁基酯
将7.B.1(5.1g；20.2mmol)在66ml二氯甲烷、乙酸乙酯和THF(1ml/60ml/5ml)混合液中的溶液以及1.0g 10％Pd/C加到安装有磁力搅拌器的不锈钢高压釜中。将该混合物在氢气压(1.5巴)和20℃下搅拌20小时。过滤除去Pd/C，滤液真空浓缩。蒸发的残余物用异丙基醚研制纯化，得到灰白色粉末，产率42％。熔点74.4℃7.B.3. 4-{[氨基(2-噻吩基)亚甲基}氨基}苄基氨基甲酸叔丁基酯采用与中间体1.3所述方案相同的试验方案，但用中间体7.B.2代替中间体1.2。获得橙色油状物，产率99％。NMR1H(DMSOd6，400MHz，δ)1.40(s，9H，3xCH3)；4,19(d，2H，CH2，J＝6.00 Hz)；7.30-7.40(m，5H，芳香性)；7.46(t，1H，CONH，J＝6.00Hz)；8.10-8.20(m，2H，噻吩)；9,00-10,00(宽峰，2H，NH2脒)；11.10-11.40(宽峰，1H，HI).MH+＝332.27.B.4.N’-[4-(氨甲基)苯基]-2-噻吩甲亚胺酰胺采用与中间体1.2所述方案相同的试验方案，但用中间体7.B.3代替中间体1.1。获得白色固体，产率92％。熔点241.1-241.6℃。7.B.5.N-(4-{[氨基(2-噻吩基)亚甲基}氨基}苄基)-5-(1，2-二硫杂环戊烷-3-基)戊酰胺采用与中间体1.2所述方案相同的试验方案，但用中间体7.B.4代替N-BOC-1，4-亚苯基二胺。获得白色固体，产率40％。熔点151.9-152.1℃实施例8N-(5-{[氨基(2-噻吩基)亚甲基]氨基}-2-甲氧基苯基)-5-(1，2-二硫杂环戊烷-3-基)戊酰胺(采用第一种方案的方法制备)8.1. 5-(1，2-二硫杂环戊烷-3-基)-N-(2-甲氧基-5-硝基苯基)戊酰胺将3.36g(21.0mmol)2-甲氧基-5-硝基苯胺、三乙胺(6.0ml)、3.0g(22.0mmol)羟基苯并三唑和4.21g(22.0mmol)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳二亚胺盐酸盐顺序加到4.12g(21.0mmol)(DL)-硫辛酸在50ml DMF中的溶液中。该反应混合物在80℃搅拌18小时后，用400ml水稀释并继续搅拌30分钟。产物用200ml二氯甲烷萃取三次。有机溶液经硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。过滤获得的固体并用乙醚洗涤，干燥后得到2.6g黄色固体产物，产率37％。熔点116.7-117.1℃。8.2.N-(5-氨基-2-甲氧基苯基)-5-(1，2-二硫杂环戊烷-3-基)戊酰胺将10ml饱和氯化铵水溶液和12.0g(0.183mol)碘粉顺序加到2.6g(13.20mmol)中间体8.1在40ml乙醇中的溶液中。将该反应混合物加热回流4.5小时(Synlett(1988)，9，1028)。该混合物冷却到室温后，滤过硅藻土。滤液用50％氢氧化钠溶液碱化到pH 10。还原产物用150ml二氯甲烷萃取4次。有机溶液经硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，得到棕色油状物。将该油状物溶于50ml乙酸乙酯中并用冰浴将该混合物冷却到0℃。然后，滴加10％碳酸氢钾水溶液。该反应混合物在0℃搅拌约10分钟后，滴加碘溶液(0.8g在10ml乙酸乙酯中的溶液)直至碘颜色不再变化。产物用100ml乙酸乙酯萃取4次，有机溶液经硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。经二氧化硅柱纯化(洗脱剂＝5％乙醇的二氯甲烷溶液)，得到棕色油状物(1.0g；产率63％)。MH+＝327.208.3.N-(5-{[氨基(2-噻吩基)亚甲基}氨基}-2-甲氧基苯基)-5-(1，2-二硫杂环戊烷-3-基)戊酰胺采用与步骤1.1所述方案相同的试验方案，但用中间体8.2代替N-BOC-1，4-亚苯基二胺。得到棕色的胶状物，产率32％。MH+＝436.10实施例9N-[5-{{氨基(2-噻吩基)亚甲基]氨基}-2-(二甲基氨基)苄基]-5-(1，2-二硫杂环戊烷-3-基)戊酰胺(采用第二种方案的方法制备)9.1. 2-(二甲基氨基)-5-硝基苯甲腈在氩气氛下，将1.66g(10.0mmol)2-氟-5-硝基苄腈、1.22g(15.1mmol)盐酸二甲胺和3.46g(25.1mmol)碳酸氢钾溶于DMF(30ml)中，然后将反应物在80℃下加热18小时。将反应混合物冷却到0℃后，加入冰水。反应混合物用乙酸乙酯萃取，有机相顺序用50ml水和50ml盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。蒸发得到的残余物用异丙基醚研制纯化，过滤得到的固体并用异戊烷洗涤，干燥后得到2.0g黄色固体产物(产率100％)。熔点109-110.5℃9.2. 2-(氨甲基)-N，N-二甲基-4-硝基苯胺在氩气氛下，将中间体9.1(1.5g；7.85mmol)溶于THF(40ml)中。然后将乙硼烷溶液(16ml，1M THF溶液)加到该反应混合物中并加热回流6小时。加入甲醇(30ml)后，通入15分钟氯化氢气。将反应物蒸发至干并加到碳酸氢钠溶液中。用二氯甲烷萃取，有机相顺序用50ml水和50ml盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。蒸发得到的残余物用异丙基醚和二氯甲烷的混合液结晶纯化，得到黄色固体产物，产率82％。熔点196-200℃9.3. 2-(二甲氨基)-5-硝基苄基氨基甲酸叔丁基酯采用与实施例7的步骤7.B.1所述方案相同的试验方案，但用中间体9.2代替对硝基苄胺盐酸盐。得到黄色固体，产率100％。熔点101-102℃。9.4. 5-氨基-2-(二甲氨基)苄基氨基甲酸叔丁基酯采用与实施例7的步骤7.B.2所述方案相同的试验方案，但用中间体9.3代替中间体7.B.1。得到棕色的油状物，产率15％。MH+＝266.209.5. 5-{[氨基(2-噻吩基)亚甲基]氨基}-2-(二甲氨基)苄基氨基甲酸叔丁基酯采用与实施例1的步骤1.3所述方案相同的试验方案，但用中间体9.4代替中间体1.2。得到黄色固体，产率64％。熔点175.8-177.0℃9.6.N’-[3-(氨甲基)-4-(二甲基氨基)苯基]-2-噻吩甲亚胺酰胺采用与实施例1的步骤1.2所述方案相同的试验方案，但用中间体9.5代替中间体1.1。得到黄色固体，产率66％。熔点169.0-170.0℃。9.7.N-[5-{[氨基(2-噻吩基)亚甲基}氨基}-2-(二甲基氨基)苄基]-5-(1，2-二硫杂环戊烷-3-基)戊酰胺采用与实施例1的步骤1.1所述方案相同的试验方案，但用中间体9.6代替N-BOC-1，4-亚苯基二胺。得到白色固体，产率67％。熔点183.5-185.0℃实施例10N-[5-{[氨基(2-噻吩基)亚甲基]氨基}-2-(1H-吡咯-1-基)苄基]-5-(1，2-二硫杂环戊烷-3-基)戊酰胺采用与实施例9化合物所述方案相同的试验方案，但在第一步中用吡咯代替盐酸二甲胺。得到白色固体，产率72％。熔点156.1-157.6℃。本发明产物的药理研究对大鼠小脑神经元固有NO合酶作用的研究按照Bredt和Snyder(Proc.Natl.Acad.Sci.USA，(1990)87682-685)方法的改进方法，通过测定本发明产物对通过NO合酶的[3H]L-精氨酸向[3H]L-瓜氨酸的转化作用的影响确定其抑制活性。快速取出Sprague-Dawley大鼠(300g-Charles River)的小脑，在4℃下切碎并在一定体积的提取缓冲液(HEPES 50mM，EDTA 1mM，pH7.4，胃酶抑素A 10mg/ml，亮肽素10mg/ml)中匀化。然后于4℃将匀化物在21000g下离心15分钟。在玻璃试管中进行配制，其中装有组成如下的100μl培养缓冲液100mM HEPES(pH7.4)、2mM’EDTA、2.5mMCaCl2、2mM二硫苏糖醇、2mM还原的NADPH和10μg/ml钙调素。加入25μl含有100nM[3H]L-精氨酸(特定活性56.4Ci/mmole，Amersham)和40uM非放射性的L-精氨酸的溶液。加入50μl匀化物引发反应，终体积为200μl(减少的25μl是水或测试产物)。15分钟后，加入2ml停止反应缓冲液(20mM HEPES，pH5.5，2mM EDTA)使反应停止。使样品通过1ml DOWEX树脂柱后，用液体闪烁分光计定量测定放射性。
上述实施例1、2、3、4和5的化合物的IC50值均低于4.5μM。谷氨酸盐诱导的氧化应力(oxidation stress)对培养细胞(HT-22)影响的研究通过测定本发明产物保护小鼠海马系细胞(HT-22)免受谷氨酸盐诱导的氧化应力的能力来确定其抑制活性。谷胱甘肽是细胞清除自由基的一种必要成分，其生物合成需要将胱氨酸活化转运到细胞内部。对抗胱氨酸渗透的谷氨酸盐可降低谷光甘肽的水平，使细胞由于氧化应力的作用而死亡(Davis，J.B.和Maher，P.，Brain Res.，(1994)652169-173；Murphy，T.H.等人，Neuron，(1989)21547-1558)。于37℃，在加有10％胎牛血清的DMEM培养基中培养该细胞。在96孔平板上进行实验，每孔含5000个细胞。将谷氨酸盐(5mM)加到含有或不含测试产物的培养基中。24小时后，通过MTT方法(Hansen，M.B.等人，J Immunol.Methods(1989)，119，203-210)测定细胞的存活率。用EC50评价化合物保护细胞使其免受谷氨酸盐毒性作用的能力，以没有接受谷氨酸盐作用的细胞存活率为100％，计算相对细胞存活率EC50。
上述实施例1、2、3、4和5的化合物显示EC50均低于30μM。
权利要求
1.通式(I)的产物或其盐，其特征在于它包括式(I)a和(I)b产物 其中R1和R2独立地表示氢原子或具有1-6个碳原子的直链或支链烷基；A表示下列基团之一-(CH2)m-NR3-CO(CH2)n-、-(CH2)m-CO-NR3-(CH2)n-、-(CH2)m-NR3-(CH2)n-、-(CH2)m-CONR3-(CH2)p-NR4-(CH2)n-、-(CH2)m-NR3-CO-NR4-(CH2)n-或-(CH2)m-，m和n是0-6的整数，p是2-6的整数，并且R3和R4独立地表示氢原子或具有1-6个碳原子的直链或支链烷基；X表示下式基团 其中与Y基团相连的基团T表示基团-(CH2)i-，其中i表示0-6的整数，并且R5表示氢原子或具有1-6个碳原子的直链或支链烷基或-(CH2)m-Q基团，其中Q表示卤素、羟基、氰基、氨基、烷氧基、烷氨基或二烷氨基，或者R5还表示5-6元杂环，该杂环原子选自-O-、-N(R6)-和-S-基团，R6表示氢原子、具有1-6个碳原子的直链或支链烷基或者是与X基团的苯基环相连的键；或者X还表示-(CH2)q-基团，其中q表示0-6的整数；并且最后Y表示下列基团之一 其中B表示具有1-6个碳原子的直链或支链烷基、5-6元碳环芳基或含有1-4个选自O、S、N杂原子的5-6元杂环芳基，特别是噻吩、呋喃、吡咯或噻唑基，该芳基可以任选地被一个或多个选自具有1-6个碳原子的直链或支链烷基、链烯基或烷氧基的基团取代，或者B表示NR8R9，其中R8和R9独立地表示氢原子或具有1-6个碳原子的直链或支链烷基，或者R8和R9中的一个表示硝基、而另一个表示氢原子或具有1-6个碳原子的直链或支链烷基，或者R8和R9与氮原子结合在一起表示5-6元非芳族杂环，链的组成部分选自-CH2-、-NH-、-O-或-S-，或者B还表示SR10基团，其中R10表示氢原子或具有1-6个碳原子的直链或支链烷基，并且R7表示氢原子或具有1-6个碳原子的直链或支链烷基。
2.权利要求1的产物，其特征在于X表示下式基团 其中与Y基团相连的基团T表示-(CH2)i-基团，其中i表示0-6的整数，并且R5表示吡咯、咪唑、吡唑、三唑、噻唑烷、吡咯烷、哌啶、哌嗪、N-烷基-哌嗪、硫代吗啉、吗啉或氮杂环丁烷基。
3.权利要求1的产物，其特征在于为下列化合物之一-N-{4-[[(2-噻吩基)(亚氨基)甲基]氨基]苯基}-1，2-二硫杂环戊烷-3-戊酰胺；-N-{2-{4-[[(2-噻吩基)(亚氨基)甲基]氨基]苯基}乙基}-1，2-二硫杂环戊烷-3-戊酰胺；-N-{2-{4-[[(2-噻吩基)(亚氨基)甲基]氨基]苯基}乙基}-1，2-二硫杂环戊烷-3-乙酰胺；-N-[4-(6-氨基-4-甲基-2-吡啶基)丁基]-1，2-二硫杂环戊烷-3-戊酰胺；-N-[4-(6-氨基-4-甲基-2-吡啶基)丁基]-1，2-二硫杂环戊烷-3-乙酰胺；-N-(4-{[氨基(2-噻吩基)亚甲基]氨基}苯基)-2-(1，2-二硫杂环戊烷-3-基)乙酰胺；-N-(4-{[氨基(2-噻吩基)亚甲基]氨基}苄基)-5-(1，2-二硫杂环戊烷-3-基)戊酰胺；-N-(5-{[氨基(2-噻吩基)亚甲基]氨基}-2-甲氧基苯基)-5-(1，2-二硫杂环戊烷-3-基)戊酰胺；-N-[5-{[氨基(2-噻吩基)亚甲基]氨基}-2-(二甲基氨基)苄基]-5-(1，2-二硫杂环戊烷-3-基)戊酰胺；-N-[5-{[氨基(2-噻吩基)亚甲基]氨基}-2-(1H-吡咯-1-基)苄基]-5-(1，2-二硫杂环戊烷-3-基)戊酰胺；-以及这些化合物的盐。
4.权利要求1的通式(I)的脒的制备方法，其特征在于将通式(II)中间体 其中A表示-(CH2)m-CONH-(CH2)n-、-(CH2)m-NR1-(CH2)n-、-(CH2)m-CONH-(CH2)p-NR1-(CH2)n-、或-(CH2)m-基团，m和n是0-6的整数，p是2-6的整数，并且R1表示氢原子或具有1-6个碳原子的直链或支链烷基；并且X表示亚苯基或-(CH2)q-基团，其中q表示0-6的整数，与通式(I.i)中间体反应 其中B表示具有1-6个碳原子的直链或支链烷基，5-6元碳环芳基或具有1-4个选自O、S、N的杂原子的5-6元杂环芳基，尤其是噻吩、呋喃、吡咯或噻唑基，该芳基任选地被一个或多个选自具有1-6个碳原子的直链或支链烷基、链烯基或烷氧基的基团取代，并且L表示部分基团例如烷氧基、烷硫基、磺酸基、卤素、芳基醇基或甲苯磺酰基。
5.权利要求1的通式(I)产物的制备方法，其中B是胺，其特征在于将通式(II)中间体 其中A表示-(CH2)m-CONH-(CH2)n-、-(CH2)m-NR1-(CH2)n-、-(CH2)m-CONH-(CH2)p-NR1-(CH2)n-、或-(CH2)m-基团，m和n是0-6的整数，p是2-6的整数，并且R1表示氢原子或具有1-6个碳原子的直链或支链烷基；并且X表示亚苯基或-(CH2)q-基团，其中q表示0-6的整数，a)与通式(I.ii)中间体反应 其中L表示部分基团，例如烷氧基、烷硫基、磺酸基、卤素、芳基醇基或甲苯磺酰基，或者b)与通式(I.iii)中间体反应 其中L表示部分，例如烷氧基、烷硫基、磺酸基、卤素、芳基醇基或甲苯磺酰基，并且Gp是氨基甲酸酯类的保护基例如叔丁氧羰基，如果选择与通式(I.iii)化合物反应，则在该反应之后，在强酸例如三氟乙酸存在下进行水解，或者c)与式(I.iv)衍生物(N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍)反应 或者d)最后与式(I.v)衍生物反应，其中Gp表示保护基S＝＝N-Gp.(I.v)
6.权利要求1的通式(I)化合物的制备方法，其中A表示-(CH2)m-CONR3-(CH2)n-基团，其中R3表示氢原子或具有1-6个碳原子的直链或支链烷基，其特征在于将下面所示的通式(VII)a中间体HN(R3)-A’-X-Y(VII)aR3如上所定义，X和Y如权利要求1所定义，并且A′表示-(CH2)n-基团，n是0-6的整数，与通式(I.vi)化合物反应 其中m是0-6的整数。
7.权利要求1的通式(I)化合物的制备方法，其中A表示如上定义的-(CH2)m-NR3-CO-NR4-(CH2)n基团，其特征在于将如下所示的通式(VII)b中间体HN(R4)-A’-X-Y(VII)bR4如上所定义，X和Y如权利要求1所定义，并且A′表示-(CH2)n-基团，n是0-6的整数，与通式(I.vi)化合物和二苯基磷酰基叠氮化物在碱例如三乙胺存在下反应 m是0-6的整数。
8.作为药物的权利要求1-3中任一项的通式(I)产物或其可药用盐。
9.含有至少一种权利要求1-3中任一项的产物或其可药用盐作为活性成分的药物组合物。
10.权利要求1-3中任一项的通式(I)产物或其可药用盐在制备抑制NO合酶的药物中的应用。
11.权利要求1-3中任一项的通式(I)产物或其可药用盐在制备使抗氧化剂再生的药物中的应用。
12.权利要求1-3中任一项的通式(I)产物或其可药用盐在制备抑制NO合酶活性并使抗氧化剂再生的药物中的应用。
13.权利要求1-3中任一项的通式(I)产物或其可药用盐在制备治疗有一氧化氮和/或硫羟基的氧化还原反应参与的疾病的药物中的应用，所述疾病是例如中枢和外周神经系统疾病，尤其有代表性的是帕金森氏病、脑血管疾病、增殖和炎性疾病、呕吐、脓毒性休克、由放射活性辐射、日光照射或器官移植引起的疾病、自免疫和常染色体疾病、癌症和所有涉及一氧化氮产生或机能障碍和/或涉及硫羟基氧化还原反应的疾病。
14.权利要求1-3中任一项的通式(I)产物或其可药用盐在制备治疗脑血管疾病例如偏头痛、局部缺血或出血引起的脑梗塞、局部缺血和血栓形成的药物中的应用。
15.权利要求1-3中任一项的通式(I)产物或其可药用盐在制备治疗中枢或外周神经系统疾病的药物中的应用，所述疾病是例如神经退化疾病、疼痛、脑和骨髓损伤、对鸦片类物质、酒精和成瘾物质成瘾、勃起和生殖障碍、认知障碍、脑病、抑郁、焦虑、精神分裂症、癫痫症、昏睡病和进食障碍。
全文摘要
本发明的目的是新的硫辛酸衍生物,它们对产生一氧化氮NO的NO－合酶具有抑制活性和/或是抗氧化剂再生的试剂或捕集活性氧物质(ROS)并以更通常的方式参与硫羟基氧化还原反应的物质。本发明还涉及这些物质的制备方法,含有这些物质的药物组合物以及它们的治疗应用,特别是这些物质作为NO－合酶抑制剂和/或通常在硫羟基氧化还原反应中发生作用的试剂的应用。
文档编号A61P9/00GK1349523SQ0080697
公开日2002年5月15日 申请日期2000年3月31日 优先权日1999年4月2日
发明者J·哈内特, M·奥格特, P－E·查布里尔德拉索尼尔 申请人:科学研究与运用咨询公司