专利名称：泽泻活性成分组合物及其在医药上应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种泽泻活性成分组合物及其在医药上的应用。该组合物含有泽泻醇A24-乙酸酯和泽泻醇B23-乙酸酯，且两个活性成分总含量大于90％。该组合物可用于制成口服制剂，用于治疗高血脂症和由高血脂症引发的脂肪肝、动脉粥样硬化和冠心病。
背景技术：
伴随着物质生活的提高，高血脂症的发病率也越来越高。由此引发的各种心、脑血管病已成为威胁中老年人生命的主要祸首。据统计，我国约有9000万人患高血脂症。高血脂症的病因和发病机制复杂，牵涉多种因素和机制。针对不同发病机制而开发的各种降血脂药种类较多，各有特点。主要分为二种，一种以降低总胆固醇、低密度脂蛋白为主，但对降甘油三脂和升高高密度脂蛋白略差，如他汀类药物；另一种以降甘油三脂为主，如立平脂。但迄今没有一种对所有脂质紊乱均有效的药物。
泽泻主要产于福建、四川、江西等省，为多年生沼泽植物，现多系栽培。泽泻的主要功效用于小便不利，水肿胀满，泄泻尿少，痰饮眩晕，热淋涩痛。
实验性动脉粥样硬化家兔每只口服泽泻生药，结果表明泽泻降低血清总胆固醇和甘油三酯作用显著，促进血清HDL-C水平升高，明显地抑制主动脉内膜斑块的生成。实验性高血脂大鼠口服泽泻液，结果表明泽泻降低血清总胆固醇和LDL-C作用非常显著，且具有抗血小板聚集、抗血栓形成及促进纤溶酶活性等作用。泽泻醇提取物动物试验表明，对家兔试验性高血脂症有治疗作用及抗脂肪肝作用，其效果比山楂、地骨皮更好。
泽泻的化学成分主要为含有多种四环三萜化合物，包括泽泻醇(Alisol)A、B、C及泽泻醇A24-乙酸酯(Alisol A monoacetate)、泽泻醇B23-乙酸酯(Alisol B monoacetate)，泽泻醇C乙酸酯(Alisol Cmonoacetate)、表泽泻醇A(Epi-alisol A)，还含有少量的胆碱、卵磷脂、挥发油等。
经药理实验证明，泽泻中降血脂的活性成分为四环三萜。而中药的化学成分及其复杂，为了保证泽泻提取物的疗效，必须明确泽泻提取物中有效成分的含量。

发明内容
本发明的目的在于运用现代医药理论，经降血脂动物模型试验，提供一种成分明确、质量可控、疗效确切的泽泻活性成分组合物。
本发明的另一目的在于该组合物可用于制成口服制剂。
本发明的又一目的在于该组合物可用于制备治疗高血脂药物中的应用。
本发明的目的还在于该组合物可用于制备治疗由高血脂症引发的脂肪肝、动脉粥样硬化和冠心病药物中的应用。
本发明的目的可以通过以下措施来达到本发明是含泽泻醇A24-乙酸酯和泽泻醇B23-乙酸酯活性提取物，二者总含量大于90％，其重量比值为1∶0.05～20，优选重量比值为1∶0.5～5，其最佳重量比值为1∶1。
本发明含有上述泽泻活性提取组合物和一种或多种药用赋形剂制成的药用组合物。
本发明中泽泻醇A24-乙酸酯和泽泻醇B23-乙酸酯的提取来源可以是泽泻属植物，本属植物在中国有6种(《中国植物志第八卷》)，优选为泽泻科植物泽泻Alisma orientalis(Sam.)Juzep.更优选为泽泻科植物泽泻Alisma orientalis(Sam.)Juzep.的干燥块茎。
本发明具有合理利用泽泻资源、明确有效成分及含量，可用于制成片剂、胶囊剂，可用于制成治疗高血脂的药物，以及制成治疗由高血脂症引发的脂肪肝、动脉粥样硬化和冠心病药物中的应用。
本发明的药效学研究如下取体重150-180g的SD雄性大鼠，70只，随机分为7组，空白对照组、模型对照组、阳性对照组(洛伐他仃8mg/kg)、A组(泽泻醇A24-乙酸酯，24mg/kg)，B组(泽泻醇B23-乙酸酯，24mg/kg)、C组(泽泻醇A24-乙酸酯+泽泻醇B23-乙酸酯，1∶1，24mg/kg)、D组(泽泻醇A24-乙酸酯+泽泻醇B23-乙酸酯，1∶2，24mg/kg)。空白对照组给予常规饲料，其余六组给予高脂饲料(胆固醇2％，牛胆盐0.5％，丙硫氧嘧啶0.2％，猪油10％，基础饲料87.3％)，15天后正常饲料组于高脂饲料组各取10只，眼眶取血(取血前动物禁食16小时)，静置凝固，离心，分离血清，以酶法经紫外分光光度计测定总胆固醇(TC)、血清甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)。
给药方法从第16天起停止高脂饲料喂养，全部改用普通饲料。同时各组大鼠每天下午分别灌胃给予相应的药物，即阳性对照组(洛伐他仃8mg/kg)、A组(24mg/kg)、B组(24mg/kg)、C组(24mg/kg)、D组(24mg/kg)，空白对照组与模型对照组给予等量的0.5％CMC-Na。给药14天之后，禁食16小时，称体重，股动脉取血，取肝称重并制肝匀浆，测定血清TC、TG、HDL-C、LDL-C及肝TC、TG，所得数据进行统计学处理。
血脂测定血液静置凝固，离心(2000pm×20min)，分离血清，参照试剂盒说明书，以酶法经紫外分光光度计测定TC、TG、HDL-C、LDL-C，结果见表1。
表1对血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)的影响(X±S)(n＝10)

注**P＜0.01，各组均与模型对照组比较表1说明A药24mg/kg剂量组可极显著降低血清甘油三酯、血清总胆固醇、升高高密度脂蛋白，降低低密度脂蛋白不明显；B药24mg/kg剂量组可极显著降低血清总胆固醇、血清低密度脂蛋白，降低血清甘油三脂不明显，升高高密度脂蛋白不明显。C药24mg/kg剂量组可极显著降低血清甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白，极显著升高血清高密度脂蛋白；D药24mg/kg剂量组可极显著降低血清甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白，升高血清高密度脂蛋白不明显。C药比单独的A药，B药效果好。
肝脂测定每只大鼠取100mg左叶肝组织加1ml0.9％生理盐水，磨成匀浆，离心(3000pm×15min)后取上清液，再按上法测定肝TG、TC，结果见表2。
表2对肝匀浆甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)的影响(X±S)(n＝10)

注**P＜0.01，各组均与模型对照组比较表2说明A药24mg/kg剂量组可极显著降低肝匀浆甘油三酯、总胆固醇。B药效果不明显。C药24mg/kg剂量组可极显著降低肝匀浆甘油三酯、总胆固醇，升高高密度脂蛋白；D药24mg/kg剂量组效果不明显。A药和C药效果相当。B药和D药效果不明显。
结论有本次实验可得出结论，A药和B药各有特点，A药以降低甘油三酯、总胆固醇，升高高密度脂蛋白为主，降低低密度脂蛋白较差；B药以降低低密度脂蛋白为主，降低甘油三酯和升高高密度脂蛋白不明显。而A药和B药的组合C药起到了互补的作用，在六个指标方面都有很好的疗效，比单用A药或B药效果好。所以，C药对大鼠高血脂模型有明显的治疗作用。
具体实施例方式
实施例1药材浸膏的制备方法a取泽泻科植物泽泻Alisma orientalis(Sam.)Juzep.的干燥块茎2公斤粉碎，用4升氯仿回流提取2次，每次3小时。合并提取液，回收溶剂得到油状浸膏87克。
方法b取泽泻科植物泽泻Alisma orientalis(Sam.)Juzep.的干燥块茎2公斤粉碎，用80％的乙醇渗漉，回收乙醇，得到的油状物94克。
方法c取泽泻科植物泽泻Alisma orientalis(Sam.)Juzep.的干燥块茎粉碎，过20目筛，称取药粉4公斤，置二氧化碳超临界萃取10L提取桶中，萃取条件二氧化碳压力为20～45MPa，萃取温度46～49℃，萃取时间2.5小时，得到油状物150克。
方法d取泽泻科植物泽泻Alisma orientalis(Sam.)Juzep.的干燥块茎1公斤饮片，使用甲醇回流提取，甲醇用量3000ml，提取3次，每次3小时，得到油状物45克。
方法e取泽泻科植物泽泻Alisma orientalis(Sam.)Juzep.的干燥块茎1公斤饮片，使用90％乙醇醇回流提取，甲醇用量3000ml，提取3次，每次3小时，得到油状物50克。
实施例2泽泻醇B23-乙酸酯的制备方法a称取实施例1油状浸膏100克，上硅胶柱(500克)以石油醚、乙酸乙酯(10∶1)洗脱后，再以石油醚、乙酸乙酯(10∶3)洗脱，200mL为一个流份，以TLC检测，收集目标流分，得结晶0.8g。用石油醚-乙酸乙酯重结晶得到0.5克结晶。鉴定为泽泻醇B23-乙酸酯。
方法b称取实施例1油状浸膏100克，上三氧化二铝(500克)柱以石油醚、氯仿(20∶1)洗脱后，再以石油醚、氯仿(10∶1)洗脱，200mL为一个流份，以TLC检测，收集目标流分，得结晶0.7g。用甲醇重结晶后，得到0.5克结晶，鉴定为泽泻醇B23-乙酸酯。
实施例3泽泻醇A24-乙酸酯的制备
方法a按实施例2方法a中将石油醚、乙酸乙酯(10∶3)洗脱完毕后，再在以石油醚、乙酸乙酯(10∶5)洗脱，以TLC检测，收集目标流分，得结晶0.4g，石油醚-乙酸乙酯重结晶得0.3克。鉴定为泽泻醇A24-乙酸酯。
方法b按实施例2方法b中将石油醚、氯仿(10∶1)洗脱完毕后，再以石油醚、氯仿(10∶3)洗脱，以TLC检测，收集目标流分，得结晶0.4g，用甲醇重结晶后得到0.3克结晶。鉴定为泽泻醇A24-乙酸酯。
实施例4泽泻醇B23-乙酸酯+泽泻醇A24-乙酸酯组合物制备方法a将实施例2和实施例3拿到的产品按照1∶1混合，得到泽泻提取组合物。
方法b将实施例2和实施例3拿到的产品按照1∶2混合，得到泽泻提取组合物。
方法c称取实施例1油状浸膏100克，上硅胶柱(500克)以石油醚、乙酸乙酯(10∶1)洗脱后，再以石油醚、乙酸乙酯(10∶5)洗脱，以TLC检测，收集目标组分，得到油状物5克，再用石油醚-乙酸乙酯反复重结晶，得到固体2克。HPLC检测，含泽泻醇B23-乙酸酯+泽泻醇A24-乙酸酯＞90％，比例为1.2∶1。
方法d称取实施例1油状浸膏100克，上三氧化二铝(500克)柱以石油醚、氯仿(20∶1)洗脱后，再以石油醚、氯仿(10∶3)洗脱，以TLC检测，收集目标组分，得到油状物5.5克，再用石油醚-乙酸乙酯反复重结晶，得到固体1.8克。HPLC检测，含泽泻醇B23-乙酸酯+泽泻醇A24＞90％，比例为1.1∶1。
实施例5泽泻活性成分组合物的制剂将实施例4拿到的组合物50克，加淀粉50g，混合均匀，制粒后填充胶囊或制成片剂。
实施例6泽泻活性成分组合物的制剂将实施例4拿到的组合物40克，加淀粉60g制粒后填充胶囊或制成片剂。
权利要求
1.一种泽泻活性提取组合物，其特征是该组合物含有泽泻醇A24-乙酸酯和泽泻醇B23-乙酸酯，且两个活性成分总含量大于90％，该组合物中泽泻醇A24-乙酸酯和泽泻醇B23-乙酸酯的重量比值为1∶0.05～20。
2.根据权利要求1所述的泽泻活性提取组合物，其特征是该组合物中泽泻醇A24-乙酸酯和泽泻醇B23-乙酸酯的重量比值为1∶0.5～5。
3.根据权利要求2所述的泽泻活性提取组合物，其特征是该组合物中泽泻醇A24-乙酸酯和泽泻醇B23-乙酸酯的重量比值为1∶1。
4.一种药物组合物，它含有权利要求1所定义的泽泻活性提取组合物和一种或多种药用赋形剂。
5.根据权利要求4所述的泽泻活性提取组合物，其特征是所述的药用组合物为口服制剂。
6.根据权利要求5所述的泽泻活性提取组合物，其特征是所述的药用组合物为片剂、胶囊。
7.泽泻的活性提取组合物在制备治疗高血脂症药物中的应用。
8.泽泻的活性提取组合物在制备治疗由高血脂症引发的脂肪肝、动脉粥样硬化和冠心病药物中的应用。
全文摘要
本发明运用现代医药理论，经降血脂动物模型试验，提供一种成分明确、质量可控、疗效确切的泽泻活性成分组合物及其在医药上应用，可用于治疗高血脂症和由高血脂症引发的脂肪肝、动脉粥样硬化和冠心病。该活性提取物含泽泻醇A24－乙酸酯和泽泻醇B23－乙酸酯，二者总含量大于90％，二者重量比为1∶0.05～20。
文档编号A61K9/48GK1872252SQ20051004038
公开日2006年12月6日 申请日期2005年6月3日 优先权日2005年6月3日
发明者吴永平, 苏国强, 陆步实, 曹园, 边军 申请人:江苏省药物研究所