专利名称：4－(硫代或硒代呫吨－9－亚基)－哌啶或吖啶的衍生物及其作为选择性5－ht的制作方法
技术领域：
本发明涉及4-(硫代或硒代呫吨-9-亚基)-哌啶和吖啶的衍生物及其药物学上可接受的盐，这些化合物具有有用的药理学性质，包括作为选择性5-HT2B受体拮抗剂的用途，可用于治疗通过5-HT2B受体拮抗剂治疗而得到缓解的疾病。
背景技术：
血清素是一种具有混合且复杂的药理学特性的神经递质，是在1948年被首次发现的，并随后成为广泛研究的目标。血清素也被成为5-羟色胺(5-HT)，对不同的5-HT受体同时具有中枢神经和周围神经性作用。目前，已识别出14个亚型的血清素受体并细分为7个族5-HT1至5-HT7。在5-HT2族内，已知存在5-HT2A、5-HT2B和5-HT2C亚型。这些亚型具有序列同源性而且在它们对宽范围的配体具有特异性方面显示出相似性。已有人综述了5-HT受体的命名和分类(参见Martin和Humphrey，Neuropharm.1994，33，261-273，以及Hoyer等人，Pharm.Rev.1994，46，157-203)。
5-HT2B受体最初被定义为5-HT2F或者血清素受体样受体(SRL)，首次是在大鼠的分离胃底中表征的(参见Clineschmidt等人，J.Pharmacol.Exp.Ther.1985，235，696-708；以及Cohen和Wittenauer，J.Cardiovasc.Pharmacol.1987，10，176-181)，并初始由大鼠中克隆(参见Foguet等人，EMBO 1992，11，3481-3487)，然后克隆了人5-HT2B受体(参见Schmuck等人，FEBS Lett.1994，342，85-90；以及Kursar等人，Mol.Pharmacol.1994，46，227-234)。紧密相关的5-HT2C受体广泛分布在人脑中，首次被表征为5-HT1C亚型(参见Pazos等人，Eur.J.Pharmacol.1984，106，539-546)，但随后认识到应属于5-HT2受体族系(参见Pritchett等人，EMBO J.1988，7，4135-4.140)。
由于在5-HT2B和5-HT2C受体处的配体相互作用的药理学上的相似性，许多已提议为5-HT2C受体拮抗剂的治疗目标也是5-HT2B受体拮抗剂的目标。目前的证据强烈支持5-HT2B/2C受体拮抗剂在治疗焦虑(例如总概念的焦虑性疾病、惊恐性疾病和过度强迫性疾病)、酒精中毒以及对其他滥用药物的成瘾性、抑郁、偏头痛、睡眠疾病、饮食疾病(例如神经性厌食症)和阴茎异常勃起中的治疗作用。另外，目前的证据还强烈支持选择性5-HT2B受体拮抗剂的治疗作用，该拮抗剂可在效力、启动的快速性以及无副作用方面一并提供不同的治疗优势。此等拮抗剂预期可用于治疗高血压、胃肠道疾病(如过敏性大肠综合症、高渗性下部食管sphinter、能动性疾病)、再狭窄、哮喘和阻塞性气道疾病、以及前列腺增生(如良性前列腺增生)。
US-A-3,275,640描述了通常取代的1-烃基-4-(9H-硫代呫吨-9-亚基)-哌啶及其制备方法。该文献还公开了所述化合物可用作治疗剂，这是由于它们具有抗组胺和/或抗血清素性质。
US-A-3,557,287涉及用于治疗血管性头痛的组合制剂，其包含以下活性成分(a)选自于以下组中的血管紧张性麦角酸ergostine、麦角胺、dihydroergostine、二氢麦角胺、ergovaline、5′-甲基ergoalanine；(b)咖啡因；以及(c)9-(1-甲基-4-哌啶亚基)硫代呫吨(＝1-甲基-4-(9H-硫代呫吨-9-亚基)-哌啶)。
DE-A-22 56 392披露了4-(9H-硫代呫吨-9-亚基)-哌啶衍生物，其中哌啶环的氮原子连接在被氰基、-COR或-COOR取代的烷基上。诱发睡眠的性质归因于这些衍生物。
JP-A-61106573公开了取代的4-(9H-硫代呫吨-9-亚基)-哌啶作为杀虫剂的用途。

发明内容
本发明的目的是提供一种作为选择性5-HT2B受体拮抗剂的化合物。
该目的是通过以下式的化合物或其药物学上可接受的盐实现的 其中R1是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、戊基(直链或支链)、己基(直链或支链)、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、苯氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、氨基、二甲氨基、氟、氯、溴、-CON(CH3)2或-CON(C2H5)2，R2是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、戊基、己基、羟基或氢，或者R1和R2形成杂环，R3是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、戊基、己基、羟基或氢，R4是羟基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、三氟甲基、氨基、二甲氨基、二乙氨基、氟、氯或溴、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基或氢，R5是甲基或氢，R6是甲基或乙基，以及X是S、N或Se，其条件是如果R1是乙氧基而X是S，则R2、R3、R4和R5中至少一个不是氢。
取代基R1和R4在本发明中是特别重要的。R1涉及介导化合物对5-HT2B受体的选择性。然而，R4涉及介导对H1受体的亲和性。R1优选是低级烷基或烷氧基、或者卤代烷基或烷氧基，立体促进但不阻碍受体结合。R4优选是极性基团，特别是小的极性基团，但每个降低H1亲和性的基团也适合此相应的用途。R2、R3和R5独立地可以是任何基团，只要不妨碍对5-HT2B受体的结合即可。
本发明还涉及此等化合物在制备用于治疗通过5-HT2B受体拮抗剂治疗而得到缓解的疾病的药物中的应用。
本发明进一步涉及包含所述化合物或其药物学上可接受的盐并混合一种或多种药物学上可接受的载体的药物组合物。
另外，本发明还涉及该化合物的制备。
具体实施例方式
“药物学上可接受的盐”是指与无机酸或有机酸形成的并保留游离碱的生物学有效性以及性质的那些盐，而且这些盐在生物学或者其他方面不具有副作用，所述无机酸例如是盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等，而所述有机酸例如是乙酸、丙酸、甘醇酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸、抗坏血酸等。
在此所用术语“治疗”覆盖哺乳动物、特别是人的任何疾病治疗，并包括(i)预防宿主中疾病的发生，该宿主有患病倾向但尚未诊断出患有该疾病，(ii)抑制疾病，例如使其停止发展，或者(iii)缓解疾病，例如使疾病消退。
在此所用术语“通过5-HT2B受体拮抗剂治疗而得到缓解的疾病”意欲覆盖在本领域中已知的可用通常对于5-HT2B受体具有亲和性的化合物治疗的所有疾病，而且已发现这些疾病可用本发明的化合物之一治疗。此等疾病包括但不限于偏头痛、疼痛(如急性、慢性、神经性、炎性和癌症疼痛)、高血压、胃肠道疾病(如过敏性大肠综合症、高渗性下部食管sphinter、能动性疾病)、再狭窄、哮喘和阻塞性气道疾病、前列腺增生(如良性前列腺增生)、以及阴茎异常勃起。
在本发明的优选实施方案中，上述通式中的各取代基如下R1是异丙基、二甲氨基、甲氧基或乙氧基，R2是甲基、乙基或氢，或者R1和R2形成杂环，R3是乙基或氢，R4是甲氧基、羟基、乙基、甲基或氢，R5是甲基或氢，R6是甲基，而X是S、N或Se，或者该化合物之药物学上可接受的盐，其条件是如果R1是乙氧基且X是S，则R2、R3、R4和R5中至少一个不是氢。
在本发明特别优选的实施方案中，所述化合物选自于以下组中4-(6-异丙基-1-甲氧基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(6-乙氧基-1-乙基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(6-乙氧基-1-甲氧基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(6-甲氧基-1-甲氧基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(6-二甲氨基-1-甲氧基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(6-二甲氨基-1-羟基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(3-乙氧基-硒代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(3-乙氧基-1-甲氧基-硒代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(3-乙氧基-1-羟基-硒代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、3-乙氧基-9-(1-甲基-哌啶-4-亚基)-9，10-二氢-吖啶、6-乙氧基-1-甲氧基-9-(1-甲基-哌啶-4-亚基)-9，10-二氢-吖啶、6-乙氧基-1-羟基-9-(1-甲基-哌啶-4-亚基)-9，10-二氢-吖啶、4-(3-乙氧基-5-乙基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(3-乙氧基-4-甲基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(3-乙氧基-4-乙基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(3-乙氧基-硫代呫吨-9-亚基)-1，3-二甲基-哌啶、4-(3，4-(环戊-3′-氧基-1′-烯并)-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(3，4-(环戊-4′-氧基-1′-烯并)-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶以及4-(3，4-(环戊-5′-氧基-1′-烯并)-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶。
在本发明特别优选的实施方案中，用作药物以及用于制备药物组合物的化合物选自于以下组中4-(6-异丙基-1-甲氧基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(6-异丙基-1-羟基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(6-乙氧基-1-乙基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(6-乙氧基-1-甲氧基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(6-乙氧基-1-羟基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(6-甲氧基-1-甲氧基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(6-二甲氨基-1-甲氧基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(6-二甲氨基-1-羟基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(3-乙氧基-硒代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(3-乙氧基-1-甲氧基-硒代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(3-乙氧基-1-羟基-硒代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、3-乙氧基-9-(1-甲基-哌啶-4-亚基)-9，10-二氢-吖啶、6-乙氧基-1-甲氧基-9-(1-甲基-哌啶-4-亚基)-9，10-二氢-吖啶、6-乙氧基-1-羟基-9-(1-甲基-哌啶-4-亚基)-9，10-二氢-吖啶、4-(3-乙氧基-5-乙基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(3-乙氧基-4-甲基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(3-乙氧基-4-乙基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(3-乙氧基-硫代呫吨-9-亚基)-1，3-二甲基-哌啶、4-(3，4-(环戊-3′-氧基-1′-烯并)-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(3，4-(环戊-4′-氧基-1′-烯并)-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶以及4-(3，4-(环戊-5′-氧基-1′-烯并)-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶。
虽然US-A-3,275,640描述了取代的1-烃基-4-(9H-硫代呫吨-9-亚基)-哌啶类化合物通常具有抗组胺和/或抗血清素性质，但其既没有描述本发明的4-(硫代或硒代呫吨-9-亚基)-哌啶或吖啶衍生物，也没有说明所选择的衍生物与特殊的抗组胺和/或抗血清素性质的相关关系。术语“抗血清素性质”的确是-个非常宽的术语，并涉及14种不同的受体亚型。另外，US-A-3,275,640没有提示取代的1-烃基-4-(9H-硫代呫吨-9-亚基)-哌啶类化合物中的-员对于各种5-HT受体亚型之-、即、人5-HT2B受体具有选择性的亲和性。
新的4-(硫代或硒代呫吨-9-亚基)-哌啶或吖啶衍生物作为5-HT2B受体拮抗剂的性质为更特异性地治疗上述疾病并同时降低非所希望的副作用提供了可能性。
为获得对5-HT2B受体的选择性，可通过R1处的取代来完成。因此，根据本发明R1应被上述基团中的任意一个取代，以作为对5-HT2B受体具有选择性的亲和性的药物化合物。优选地，在R1上的取代是低级烷基或烷氧基、或者卤代烷基或烷氧基。所述基团似乎可特别地促进化合物与5-HT2B受体的结合。通过R4处的取代可降低化合物对人H1受体的剩余亲和性。无R4取代的4-(硫代或硒代呫吨-9-亚基)-哌啶或吖啶衍生物的抗组胺能(anti-histaminergic)作用将有可能导致镇静。为降低这些非所希望的副作用，根据本发明优选R4包括取代基，而该取代基优选选自于小的侧链基团，特别优选是小的极性侧链基团。然而，还可包括能够降低化合物对H1受体的亲和性的任意基团。
US-A-3,275,640描述了一种制备取代的1-烃基-4-(10-亚硫代呫吨基)-哌啶的总方法，但这些化合物不包括本发明的新化合物。
用于合成新化合物的方法如下所示“顶部”酮1与“底部”的格氏试剂2反应，生成偶联醇3。该醇3用甲酸或其他酸脱水，形成所希望的烯4。
合成路线I 合成反应物1，即、3-乙氧基硫代呫吨酮的方法是由3-甲氧基硫代呫吨酮8a起始，而后者可通过以下文献中描述的方法来制备I.Cervena，J.Metysova，E.Svatek，B.Kakac，J.Holubek，M.Hrubantova和M.Protiva，Coll.Czech.Chem.Comm.41，881-904(1978)(合成路线II)。在铜存在下使3-甲氧基苯硫酚5与2-碘苯甲酸6在沸腾的KOH溶液中反应。添加盐酸后，得到偶联酸7。该酸7用多聚磷酸环化，形成3-甲氧基硫代呫吨酮8a和1-甲氧基硫代呫吨酮8b之异构体混合物，其可通过色谱法、优选柱色谱分离。其他分离技术可大规模地使用，以制造和分离产物，其中包括但不限于模拟流动床分离、毛细电泳、使用手性或者非手性载体及分离介质的高输出高压多柱或单柱分离法。还可组合使用酶促脱水法以及上述技术之一，或者单独使用酶富集分离或与任意一种上述方法组合使用。
合成路线II 为改变硫代呫吨的侧链，所分离的3-甲氧基硫代呫吨8a可例如通过氢溴酸和乙酸被转化为3-羟基硫代呫吨9。然后，根据合成路线III，可在碱、优选K2CO3存在下使3-羟基硫代呫吨9与碘乙烷反应，形成3-乙氧基呫吨酮1。
合成路线III 基于Cervená，I.等人描述的方法(Collection Czechoslov.Chem.Cumm.41(1978)，881-904)或者Watanabe，M.等人的方法之一(Chem.Pharm.Bull 32(1984)，1264-1267，Chem.Pharm.Bull 34(1986)，2810-2820以及Chem.Pharm.Bull 37(1989)，36-41)，可制备以下的其他衍生物4-(6-异丙基-1-甲氧基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(6-异丙基-1-羟基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(6-乙氧基-1-乙基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(6-乙氧基-1-甲氧基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(6-乙氧基-1-羟基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(6-二甲氨基-1-甲氧基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(6-二甲氨基-1-羟基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(3-乙氧基-硒代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(3-乙氧基-1-甲氧基-硒代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(3-乙氧基-1-羟基-硒代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、3-乙氧基-9-(1-甲基-哌啶-4-亚基)-9，10-二氢-吖啶、6-乙氧基-1-甲氧基-9-(1-甲基-哌啶-4-亚基)-9，10-二氢-吖啶、6-乙氧基-1-羟基-9-(1-甲基-哌啶-4-亚基)-9，10-二氢-吖啶、4-(3-乙氧基-5-乙基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(3-乙氧基-4-甲基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(3-乙氧基-4-乙基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶和4-(3-乙氧基-硫代呫吨-9-亚基)-1，3-二甲基-哌啶、4-(3，4-(环戊-3′-氧基-1′-烯并)-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(3，4-(环戊-4′-氧基-1′-烯并)-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶以及4-(3，4-(环戊-5′-氧基-1′-烯并)-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶。
本发明的化物是人5-HT2B受体拮抗剂。如实施例中所述，对5-HT2B受体的亲和性是通过使用经[3H]-5HT放射标记的克隆人5-HT2B受体的体外结合试验来证实的。对人5-HT2B受体的选择性是通过人5-HT2A和5-HT2C受体处的逆向筛选来证实的。对HT2B的拮抗剂性质是在大鼠胃底纵肌中测定的。如实施例中所述，对人H1受体的亲和性是通过使用经[3H]-美吡拉敏放射标记的克隆人H1受体的体外结合试验来测定的。拮抗剂性质是通过在瞬时转染的HEK-293细胞中[3H]肌醇磷酸酯的产生来测定的。
因此，本发明的化合物可用于治疗那些通过阻断5-HT2B受体而得到缓解的疾病。因为在5-HT2B和5-HT2C受体处的配体相互作用的药理学的相似性，许多已提议为5-HT2C受体拮抗剂的治疗目标也是5-HT2B受体拮抗剂的目标。具体而言，数个临床观察结果暗示了5-HT2B受体拮抗剂在预防偏头痛中的治疗作用，其中认为5-HT向血浆中的移动是偏头痛的-个促进因素。另外，非选择性的5-HT2B受体激动剂激发易感个体中的偏头痛发作，而非选择性的5-HT2B受体拮抗剂可有效地预防偏头痛的启动(参见Kalkman，Life Sciences 1994，54，641-644)。据推测，激活脑膜血管之内皮细胞处的5-HT2B受体会通过形成氮氧化物引发偏头痛发作(参见Schmuck等人，Eur.J.Neurosci.1996，8，959-967)。
试验证据表明，本发明的化合物可用于治疗疼痛，包括急性、慢性、神经性、炎性和癌症疼痛，特别是炎性疼痛。5-HT(血清素)在调节周围神经系统和中枢神经系统之各种水平的伤害感受形成传递方面扮演着重要的角色(参见Richardson，B.P.，″Serotonin and Pain″，Ann.N.Y.Acad.Sci.，1990，600，511-520)。另外，包含5-HT的神经元系统不仅参与调节脊柱和脊柱上水平的伤害感受输出，而且还介导包括鸦片剂的其他镇痛药的伤害感受作用。5-HT是增敏神经末端伤害感受器的递质，而所述伤害感受器有可能是在与炎症有关的疼痛形成中出现的。5-HT2B受体对于5-HT的活化作用高度敏感，而用选择性5-HT2B拮抗剂进行特异性阻断有可能为镇痛治疗提供了一个新的道路。
试验证据支持5-HT2B受体拮抗剂在治疗高血压中的治疗作用。在高血压中，观察到在血管应答中增加最多的一种是血清素。两个系列的证据暗示这是由于在受体介导的血管紧张中由主要5-HT2A转向主要5-HT2B。首先，血清素诱发的由高血压动物中分离的血管的收缩作用耐受选择性5-HT2A受体拮抗剂的阻断，但对于非选择性5-HT2B受体拮抗剂仍保持敏感性。其次，高血压动物的血管中5-HT2B受体mRNA增加(参见Watts等人，J.Pharmacol.Exp.Ther.1996，277，1103-13，以及Watts等人，Hypertension 1995，26，1056-1059)。在人群中这种由高血压诱发的受体亚型介导的收缩剂应答向5-HT移动提示选择性阻断血管收缩剂5-HT2B受体在治疗高血压方面具有治疗价值。
临床和试验证据支持5-HT2B受体拮抗剂在治疗胃肠道疾病、特别是过敏性大肠综合症(IBS)中的治疗作用。虽然IBS中涉及的病理学尚未清楚，但其中涉及血清素却已是明确的。因此，具有高血清素含量的饮食可加重一些患者中的症状(参见Lessorf，Scand.J.Gastroenterology1985，109，117-121)，而在临床前研究中，已表明血清素直接增敏内脏感觉神经元，导致类似于IBS中所观察到的增强的疼痛应答(参见Christian等人，J.Applied Physiol.1989，67，584-591，以及Sanger等人，Neurogastro-enterology and Motility 1996，8，319-331)。已有多个证据提示5-HT2B受体在血清素的增敏作用中有可能起着关键作用。首先，5-HT2B受体存在于人肠道中(参见Borman等人，Brit.J.Pharmacol.1995，114，1525-1527，以及Borman等人，Ann.of the New York Acad.of Sciences1997，812，222-223)。其次，5-HT2B受体的活化可导致氮氧化物的产生，而后者是一种能够增敏感觉神经纤维的物质(参见Glusa等人，Naunyn-Schmied.Arch.Pharmacol.1993，347，471-477，以及Glusa等人，Brit.J.Pharmacol.1996，119，330-334)。第三，与5-HT2B受体具有高度亲和性但选择性差的药物在临床上可有效地减少与IBS以及相关疾病有关的疼痛(参见Symon等人，Arch.Disease in Childhood 1995，72，48-50，以及Tanum等人，Scand.J.Gastroenterol.1996，31，318-325)。这些发现组合在一起说明选择性的5-HT2B受体拮抗剂可减弱胃肠道疼痛以及与IBS有关的异常能动性。
临床和试验证据支持5-HT2B受体拮抗剂在治疗再狭窄中的治疗作用。血管成形术和分流移植(bypass-grafting)都涉及再狭窄，其限制了这些方法的效力。富血小板的血栓形成是急性栓塞的主要诱因，而在其他血小板衍生的递质中，血清素被认为有助于晚期再狭窄的形成(参见Barradas等人，Clinica Chim.Acta 1994，230，157-167)。该晚期再狭窄涉及血管平滑肌的增殖。两个系列的证据提示了5-HT2B受体在该过程中的作用。首先，血清素在经培养的平滑肌和内皮细胞中通过活化5-HT2受体起到了强的促有丝分裂活性(参见Pakala等人，Circulation 1994，90，1919-1926)。其次，该促有丝分裂活性似乎是由酪氨酸激酶辅助信使通道的活化介导的，而所述通道涉及有丝分裂活化蛋白激酶(MAPK)(参见Lee等人，Am.J.Physiol.1997，272(1pt1)，C223-230 and Kelleher等人，Am.J.Physiol.1995，268(6pt1)，L894-901)。最近证实了5-HT2B受体偶联至MAPK(参见Nebigil等人，Proc.Natl.Acad Sci.U.S.A.2000，97，22591-2596)，血清素对该受体亚型具有高亲和性地偶联，这表明选择性5-HT2B受体拮抗剂可防止自体移植的血管或者血管形成术后的血管发生再狭窄。
临床和试验证据支持5-HT2B受体拮抗剂在治疗哮喘和阻塞性气道疾病中的治疗作用。气道平滑肌的异常增殖以及平滑肌对包括血清素在内的收缩刺激具有高反应性，在诸如哮喘和支气管肺发育异常等人气道疾病的形成方面共同起着显著的作用(参见James等人，Am.Review ofRespiratory Disease 1989，139，242-246，以及Margraf等人，Am.Review ofRespiratory Disease 1991，143，391-400)除了血清素受体的其他亚型，5-HT2B受体也存在于支气管平滑肌中(参见Choi等人，Febs Letters 1996，391，45-51)，而且已表明可刺激气道平滑肌中的平滑肌有丝分裂(参见Lee等人，Am.J.Physiol.1994，266，L46-52)。因为循环游离血清素浓度的增加与症状性哮喘的临床严重程度和肺功能密切相关，血清素在急性发作的病理学中扮演着重要的角色(参见Lechin等人，Ann.Allergy，Asthma，Immunol.1996，77，245-253)。这些数据表明气道平滑肌中5-HT2B受体的拮抗剂因此可用于防止由于循环血清素浓度升高而导致的气道收缩，还可防止气道平滑肌增殖，该增殖作用是此等疾病的长期病理学原因。
试验证据支持5-HT2B受体拮抗剂在前列腺增生中的治疗作用。尿道中前列腺增生和过度前列腺收缩都可导致尿道堵塞的出现。该现象又可导致尿道流速减小并增加排尿的紧急情况和频率。5-HT2B受体存在于人前列腺中(参见Kursar等人，Mol.Pharmacol.1994，46，227-234)，而对该受体亚型具有药理学特性的受体介导该组织的收缩(参见Killam等人，Eur.J.Pharmacol.1995，273，7-14)。一些可有效治疗良性前列腺增生的药物阻断5-HT介导的前列腺收缩(参见Noble等人，Brit.J.Pharmacol.1997，120，231-238)。5-HT2B受体介导平滑肌和纤维变形增生(参见Launay等人，J.Biol.Chem.1996，271，3141-3147)，而血清素在前列腺中是促有丝分裂的(参见Cockett等人，Urology 1993，43，512-519)，因此选择性的5-HT2B受体拮抗剂不仅可缓解过度的前列腺收缩，而且还可以防止组织增生的发展。
试验证据支持5-HT2C受体拮抗剂在阴茎异常勃起中的治疗作用(参见Kennett，Curr.Opin.Invest.Drugs 1993，2，317-362)。MCPP在大鼠中产生阴茎勃起作用，而该作用不仅可被非选择性的5-HT2C/2A/2B受体拮抗剂阻断，而且还可被选择性的5-HT2A受体拮抗剂阻断(参见Hoyer，Peripheral actions of 5-HT 1989，Fozard J.编辑，Oxford UniversityPress，Oxford，72-99)。该5-HT2C受体拮抗剂的治疗目标同样也是5-HT2B受体拮抗剂的治疗目标。
在施用本发明的化合物治疗上述疾病时，活性化合物以及在此所述盐的给药可通过任意可以接受的方式来进行，包括口服、胃肠道以及全身性给药途径。可以使用任意药物学上可接受的给药方式，包括固体、半固体或液体剂型，例如片剂、栓剂、丸剂、胶囊剂、粉末剂、液体、混悬剂等，优选在用于单次给药精确剂量的单元剂量剂型中，或者在用于长时间以预定速率给药化合物的缓释或空释剂型中。组合物通常包括常规药物学上可接受的载体或赋形剂以及至少一种本发明的化合物或其药物学上可接受的盐，另外还可包含其他药物、治疗剂、载体、辅剂等。
本发明衍生物的给药量当然取决于所治疗的患者、疾病的严重程度、给药方式以及临床医生的判断。但是，口服、非胃肠道和其他全身给药途径时的有效剂量在0.01-20mg/kg/天的范围内，优选在0.1-10mg/kg/天的范围内。对于平均70kg重的人，上述剂量相当于每天0.7-1400mg，或者优选7-700mg/天。
无需过多的试验并依靠本人所掌握的知识以及本发明专利申请的公开内容，本领域技术人员在治疗所述疾病时完全能够确定对于某种特定的疾病而言治疗有效量的本发明哌啶化合物。
对于固体组合物，常规的非毒性固体载体包括例如药物级的甘露醇、乳糖、纤维素、纤维素衍生物、交联羧甲基纤维素钠、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石、葡萄糖、蔗糖、碳酸镁等。如上所述的活性化合物可配制成栓剂，其中使用例如聚亚烷基二醇如PEG(聚乙二醇)或PEG衍生物、乙酰基化甘油三酯等作为载体。液体药物组合物例如可如下制备将如上所述的活性化合物以及任选的药物辅剂溶解、分散在载体中，例如水、盐水、葡萄糖水、甘油、乙醇等，由此形成溶液或混悬液。如果需要，待给药的药物组合物还可包含少量的非毒性辅助物质如湿润剂或乳化剂、pH缓冲剂等，例如醋酸钠、脱水山梨醇单月桂酸酯、三乙醇胺醋酸钠、脱水山梨醇单月桂酸酯、油酸三乙醇胺等。该给药的组合物或制剂在任何情况下都将包含可有效缓解所治疗患者之病症的量的活性化合物。
可制备包含0.25-95重量％的本发明哌啶化合物的剂型或组合物，其余成分为非毒性载体。
在口服给药时，药物学上可接受的非毒性组合物是通过掺入任意正常使用的赋形剂来形成的，所述赋形剂例如药物级的甘露醇、乳糖、纤维素、纤维素衍生物、交联羧甲基纤维素钠、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石、葡萄糖、蔗糖、碳酸镁等。此等组合物可为溶液、混悬液、片剂、丸剂、胶囊剂、粉末剂、缓释制剂的形式。该组合物可包含1-95重量％、优选2-50重量％、最优选5-8重量％的本发明化合物。
非胃肠道给药通常是通过皮下、肌肉内或静脉注射来完成的。注射物可制成常规形式，例如液体溶液或混悬液，还可制成在注射前适合于在液体中形成溶液或混悬液的固体形式，或者是乳剂。合适的赋形剂例如是水、盐水、葡萄糖、甘油、乙醇等。另外，如果需要，待给药的药物组合物还可包含少量的非毒性辅助物质，例如湿润剂或乳化剂、pH缓冲剂等，如醋酸钠、脱水山梨醇单月桂酸酯、油酸三乙醇胺、三乙醇胺醋酸钠等。
透皮或“脉冲式”透皮给药可通过乳膏、凝胶、分散液等来实现。
新近设计的用于非胃肠道给药的方法是使用缓释或者控释系统的植入剂，使得能够维持恒定的剂量水平(参见例如US-A-3,710,795)。
此等非胃肠道组合物中所含活性化合物的百分比主要是取决于其特殊的性质、以及化合物的活性及患者的需要。但是，本发明的哌啶化合物在溶液中的百分比可以是0.1-10重量％，而如果组合物是固体并且随后稀释为上述百分比，则百分含量应更高。优选的是，组合物在溶液中包含0.2-2重量％的哌啶化合物。
在使用本发明的化合物治疗与眼内异常高压有关的眼疾病或病症时，可用药物学上可接受的给药方式来实现，该方式应能够提供足够的局部浓度以提供所希望的反应。这些方式包括通过滴剂以及空释插片或植入剂直接给药于眼睛，以及如上所述的全身给药方式。
直接施用于眼睛的滴剂和溶液通常是包含0.1-10重量％、更优选0.5-1重量％的本发明新哌啶化合物以及合适的缓冲剂、稳定剂和防腐剂的灭菌水溶液。溶质的总浓度有可能的话应使所得的溶液与泪液是等渗的(但这不是必须的)，并具有范围在6-8内的相同pH。典型的防腐剂是乙酸苯汞、硫柳汞、氯丁醇和苯扎氯胺。典型的缓冲剂系统和盐例如是柠檬酸盐、硼酸盐或磷酸盐；合适的稳定剂包括甘油和聚山梨酯80。水溶液可简单地通过以下方法进行配制将溶质溶解在合适量的水中，调节pH为约6.8-8.0，用另外的水调节最终体积，然后用本领域技术人员已知的方法对制剂进行灭菌。
所得组合物的剂量水平当然取决于滴剂的浓度、患者的情况以及个体对治疗的反应大小。但是，对于每个眼睛，典型的眼用组合物可以每天2-10滴含0.5重量％本发明哌啶化合物的溶液的量给药。
本发明的组合物还可配制成以常规方式给药并且类似于其他用于哺乳动物之局部用组合物的制剂。这些组合物可借助于各种药物载体或赋形剂以任意常规方式配制成制剂。对于局部给药，药物学上可接受的非毒性制剂可为半固体、液体、或固体的形式，例如凝胶、乳膏、洗液、溶液、混悬液、软膏、粉末等。例如，活性成分可使用乙醇、丙二醇、碳酸丙烯酯、聚乙二醇、己二酸二异丙基酯、甘油、水等以及合适的凝胶剂配制成糖浆口服凝胶(syrup orgel)，所述凝胶剂例如是Carbomers、Klucels等。如果需要，制剂还可包含少量的非毒性辅助物质，如防腐剂、抗氧剂、pH缓冲剂、表面活性剂等。制备此等剂型的实际方法是已知的，或者对于本领域技术人员是显而易见的，例如可参见Remington′sPharmaceutical Sciences，Mack Publishing Company，Easton，Pa.，第19版，1995。
优选地，药物组合物以单元剂量剂型给药用于连续治疗，在特定地需要缓解症状时随意地以单元剂量剂型给药。
实施例实施例1根据合成路线I，6-乙氧基-1-甲氧基硫代呫吨酮1与由1-甲基-4-卤哌啶、优选1-甲基-4-氯哌啶制得的格氏试剂2反应。分离醇3，然后用酸、优选盐酸或甲酸使其脱水，形成1-甲基-4-(3-乙氧基-9H-硫代呫吨-9-亚基)-哌啶(4)。
合成路线I 合成6-乙氧基-1-甲氧基硫代呫吨酮1的一个方法描述在以下文献中I.Cervena，J.Metysova，E.Svatek，B.Kakac，J.Holubek，M.Hrubantova和M.Protiva，in Coll.Czech.Chem.Comm.41，881-904(1978)(合成路线II)。在铜存在下使3-乙氧基硫醇5与2-碘-4-甲氧基苯甲酸6在沸腾的KOH水溶液中反应。添加盐酸后，得到偶联酸7。用多聚磷酸使该酸7环化，制得1-甲氧基-6-乙氧基硫代呫吨酮8a和1-甲氧基-8-乙氧基硫代呫吨酮8b的异构体混合物，该混合物可通过色谱法、优选柱色谱法分离。
合成路线II 制备“顶部”酮的第二种方法基于M.Watanabe等人的方法(Chem.Pharm Bull.37，36-41(1989))。由4-异丙基苯甲酸10起始，转化为酰胺11，然后再用强碱处理，以脱除邻近酰胺基的质子，并在引入分子硫并用酸处理后，如12那样引入硫醇基。用强碱处理溴代茴香醚13，将其转化为苯炔，再与12反应制成所希望的酮14。
何种方法适合于本发明的不同化合物具体地取决于起始物的易得性。
实施例2制备以下5种化合物4-(6-乙氧基-1-甲氧基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(6-异丙基-1-甲氧基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(6-乙氧基-1-乙基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(3-乙氧基-硒代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、3-乙氧基-9-(1-甲基-哌啶-4-亚基)-9，10-二氢-吖啶。
所有以下描述的反应都必须在保护气氛(无水氩气或无水氮气)中进行。用HPLC-MS联合(214nm，ESI正方式，+30V)进行分析。硫醇的萃取步骤应使用经过脱气或吹入氩气的溶剂来实施，以避免被重新氧化为二硫化物。
2.1合成硫代呫吨/硒代呫吨2.1.1合成4-乙氧基-苯甲酸-二乙基酰胺将4-乙氧基苯甲酸(20.0g，120mmol)溶解在亚硫酰氯(14ml)中，然后回流3小时。将反应混合物冷却至室温后，蒸发过量的亚硫酰氯。所得的粗酰氯立即溶解在无水DCM(125ml)中，并用冰水冷却该溶液。滴加125ml的二乙基胺。添加胺后，使反应混合物温热至室温。在室温下搅拌混合物过夜(16h)后，溶液用1.0N盐酸(3×100ml)、饱和NaHCO3溶液(3×100ml)和盐水(3×100ml)洗涤。有机层用Na2SO4干燥，然后过滤并蒸发至干。
纯度98％产率25g，94％2.1.2合成4-异丙基-苯甲酸-二乙基酰胺将4-异丙基苯甲酸(5g，30.5mmol)溶解在亚硫酰氯(10ml)中，然后回流3小时。将反应混合物冷却至室温后，蒸发过量的亚硫酰氯。所得的粗酰氯立即溶解在无水DCM(50ml)中，并用冰水冷却该溶液。滴加二乙基胺(32ml，0.3mol)。添加胺后，使反应混合物温热至室温。在室温下搅拌混合物过夜(12-14h)后，溶液用1.0N盐酸(3×50ml)、饱和NaHCO3溶液(3×50ml)和盐水(3×50ml)洗涤。有机层用Na2SO4干燥，然后过滤并蒸发至干。
纯度96％产率6.0g，90％
2.1.3合成4-乙氧基-2-硫代苯甲酸-二乙基酰胺将4-乙氧基-苯甲酸-二乙基酰胺(4.43g，20mmol)和N，N，N，N-四甲基亚乙基二胺(5.1ml，23.8mmol)溶解在无水THF(100ml)中。将该溶液冷却至-78℃。接着滴加仲丁基锂(1.3M的正己烷/THF溶液，13.73ml，23.8mmol)，但温度不超过-70℃。在-78℃下搅拌该溶1小时，然后一次性添加粉末硫(1.36g，40mmol)。
撤除冷却浴，并使溶液温热至室温，然后搅拌过夜(16h)。添加饱和NH4Cl溶液(100ml)，然后添加10％HCl水溶液(50ml)。将该混合物蒸发至干。残留物用二氯甲烷(100ml)萃取，用Na2SO4干燥，过滤，然后蒸发溶剂。
将粗产物溶解在乙酸中(100ml)。添加水(100ml)和锌(5g)，然后用磁搅拌器混合该混合物，并在65℃下加热24小时。溶液用二氯甲烷(1×100ml)萃取。分离有机层并用水(3×100ml)洗涤。除去溶剂。粗产物用二氯甲烷和甲醇(梯度)通过ISCO快速系统进行纯制。
纯度75％产率3.5g，70％2.1.4合成4-异丙基-2-硫代苯甲酸-二乙基酰胺将4-异丙基苯甲酸二乙基酰胺(2.19g，10mmol)和N，N，N，N-四甲基亚乙基二胺(2.6ml，11.9mmol)溶解在无水THF(33ml)中。将该溶液冷却至-78℃。接着滴加仲丁基锂(1.3M的正己烷/THF溶液，9.15ml，11.9mmol)，但温度不超过-70℃。在-78℃下搅拌该溶1小时，然后一次性添加粉末硫(0.64g，30mmol)。
撤除冷却浴，并使溶液温热至室温，然后搅拌过夜(16h)。添加饱和NH4Cl溶液(100ml)，然后添加10％HCl水溶液(50ml)。将该混合物蒸发至干。残留物用二氯甲烷(100ml)萃取，用Na2SO4干燥，过滤，然后蒸发溶剂。
粗产物溶解在乙酸(50ml)中。添加水(50ml)和锌(2.5g)，然后用磁搅拌器混合该混合物，并在65℃下加热24小时。溶液用二氯甲烷(1×100ml)萃取。分离有机层并用水(3×100ml)和盐水(1×100ml)洗涤。溶液用Na2SO4干燥，然后过滤。除去溶剂。粗产物用二氯甲烷和甲醇(梯度)通过ISCO快速系统进行纯制。
纯度76％产率950mg，38％2.1.5合成二-[4-乙氧基-N，N-二乙基-2-硒代-苯甲酰胺]将4-乙氧基苯甲酸二乙基酰胺(1.32g，6mmol)和N，N，N，N-四甲基亚乙基二胺(1.63ml，7.6mmol)溶解在无水THF(40ml)中。将该溶液冷却至-78℃。接着滴加仲丁基锂(1.3M正己烷/THF溶液，5.85ml，7.6mmol)，但温度不超过-70℃。在-78℃下搅拌该溶1小时，然后一次性添加硒(0.95g，12mmol)。
撤除冷却浴，并使溶液温热至室温，然后搅拌过夜(16h)。添加饱和NH4Cl溶液(100ml)，然后添加10％HCl水溶液(50ml)。将该混合物蒸发至干。残留物用二氯甲烷(100ml)萃取，用Na2SO4干燥，过滤，然后蒸发溶剂。
粗产物溶解在乙酸(50ml)中。添加水(25ml)和锌(2.5g)，然后用磁搅拌器混合该混合物，并在65℃下加热24小时。溶液用二氯甲烷(1×100ml)萃取。分离有机层并用水(3×100ml)和盐水(1×100ml)洗涤。溶液用Na2SO4干燥，然后过滤。除去溶剂。粗产物的纯度非常高，因此无需进行进一步的纯制。
纯度93％产率1.05g，58％
2.1.6合成6-乙氧基-1-甲氧基-硫代呫吨-9-酮将4-乙氧基-2-硫代苯甲酸-二乙基酰胺(1g，6.98mmol)溶解在无水THF(105ml)中，然后冷却至-78℃。滴加LDA(二异丙基酰胺锂，1M溶液，27.92ml，13.96mmol)。溶液在-78℃下搅拌1小时。使溶液温热至-20℃，然后向该溶液中滴加2-甲氧基溴苯(2.176ml，17.45mmol，在30ml无水THF中)。使溶液温热至室温，然后搅拌过夜(16h)。
向反应溶液中添加饱和NH4Cl溶液(50ml)，然后添加10％HCl溶液(50ml)。蒸发混合物至干，而残留物用CH2Cl2(150ml)萃取。有机溶剂用盐水(100ml)洗涤3次，用Na2SO4干燥，过滤，然后蒸发溶剂。粗产物通过快速色谱(CH2Cl2/甲醇梯度)纯制两次。
纯度(HPLC，214nm)84.4％产率0.5g(25％)2.1.7合成6-乙氧基-1-乙基-硫代呫吨-9-酮按照2.1.6的步骤进行合成，但使用2-乙基溴苯替代2-甲氧基溴苯。
粗产物的纯制通过快速色谱进行一次。
纯度86％(HPLC，214nm)，产率220mg，10％。
2.1.8合成6-异丙基-1-甲氧基-硫代呫吨-9-酮按照2.1.6的步骤进行合成，但使用4-异丙基-2-硫代苯甲酸-二乙基酰胺(0.9g，6.32mmol)作为反应物。
粗产物的纯制通过快速色谱进行一次。
纯度79％(HPLC，214nm)，产率250mg，14％。
2.1.9合成3-乙氧基硒代呫吨-9-酮按照2.1.6的步骤进行合成，但使用在步骤2.1.5中得到的二硒化物(1.0g，4.3mmol硒化物)和溴苯(1.146ml，10.9mmol)作为反应物。
粗产物的纯制通过快速色谱进行一次。
纯度86％(HPLC，214nm)，产率300mg，22％。
2.2合成最终化合物4-(6-乙氧基-1-甲氧基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶，4-(6-异丙基-1-甲氧基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶，4-(6-乙氧基-1-乙基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶，4-(3-乙氧基-硒代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶2.2.1合成格式试剂1-甲基-哌啶-4-基氯化镁通过以下方法将4-氯-1-甲基哌啶*HCl(20g)转化为游离胺将其溶解在25％NH3/H2O溶液(250ml)中，然后用醚萃取。有机层用盐水洗涤2次，用Na2SO4干燥，然后蒸发。纯胺在氩气下保存。
将2g胺(约15mmol)溶解在无水THF(7ml)中。向镁粒(0.434g，16.5mmol)和无水THF(1.4ml)中添加碘晶体和碘乙烷(60.4μl，0,75μmol)。开始Grignard反应后，向溶液中滴加胺溶液。溶液进行轻微搅拌，并且有时用加热枪加热，以保持THF沸腾。添加完胺溶液后，反应溶液回流2小时，以最终完成反应。
溶液必须在氩气中保存。
2.2.2合成4-(6-乙氧基-1-甲氧基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶将6-乙氧基-1-甲氧基-硫代呫吨-9-酮(100mg，0.349mmol)溶解在无水THF(5ml)中。滴加1-甲基-哌啶-4-基氯化镁(3当量，步骤2.2.1中得到的)。格氏试剂添加完毕后，搅拌溶液过夜。通过TCL(1％甲醇/CH2Cl2)控制反应的进程。反应完成后，首先用乙酸(5ml)、然后用水(5ml)使反应停止。蒸发溶剂，所得的醇化合物用乙酸酐进行脱水(5ml，回流，4h)。
蒸发乙酸酐，而残留物溶解在1N KOH溶液(5ml)中。游离胺用二氯甲烷(10ml)萃取1次。溶液用Na2SO4干燥，然后蒸发溶剂。
粗产物通过快速色谱纯制，然后通过在HCl水溶液(50当量HCl，5ml，4h，50℃)中加热将其转化为盐酸盐。蒸发溶剂，并将产物溶解在叔丁醇和水(2ml，4∶1，v/v)的混合物中，然后冻干。
纯度92％产率20mg，16％2.2.3合成4-(6-异丙基-1-甲氧基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶将6-异丙基-1-甲氧基-硫代呫吨-9-酮(100mg，0.35mmol)溶解在无水THF(5ml)中。滴加1-甲基-哌啶-4-基氯化镁(3当量，步骤2.2.1中得到的)。格氏试剂添加完毕后，搅拌溶液过夜。通过TCL(1％甲醇/CH2Cl2)控制反应的进程。反应完成后，首先用乙酸(5ml)、然后用水(5ml)使反应停止。蒸发溶剂，所得的醇化合物用乙酸酐进行脱水(回流，4h)。
蒸发乙酸酐，而残留物溶解在1N KOH溶液(5ml)中。游离胺用二氯甲烷萃取，用Na2SO4干燥，然后蒸发溶剂。
粗产物通过快速色谱纯制，然后通过在HCl水溶液(50当量HCl，5ml，4h，50℃)中加热将其转化为盐酸盐。蒸发溶剂，并将产物溶解在叔丁醇和水(2ml，4∶1，v/v)的混合物中，然后冻干。
纯度＞98％产率25mg，20％2.2.4合成4-(6-乙氧基-1-乙基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶将6-乙氧基-1-乙基-硫代呫吨-9-酮(50mg，0.18mmol)溶解在无水THF(5ml)中。滴加1-甲基-哌啶-4-基氯化镁(3当量，步骤2.2.1中得到的)。在第-滴后，溶液的颜色由淡黄色变为暗棕色。格氏试剂添加完毕后，搅拌溶液过夜。通过TCL(1％甲醇/CH2Cl2)控制反应的进程。反应完成后，首先用乙酸(5ml)、然后用水(5ml)使反应停止。蒸发溶剂，所得的醇化合物用乙酸酐进行脱水(回流，4h)。
蒸发乙酸酐，而残留物溶解在1N KOH溶液中。游离胺用二氯甲烷萃取，用Na2SO4干燥，然后蒸发溶剂。
粗产物通过快速色谱纯制，然后通过在HCl水溶液(50当量HCl，5ml，4h，50℃)中加热将其转化为盐酸盐。蒸发溶剂，并将产物溶解在叔丁醇和水(2ml，4∶1，v/v)的混合物中，然后冻干。
纯度＞97％产率10.8mg，16％2.2.5合成4-(4-乙氧基-硒代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶将4-乙氧基-1-硒代呫吨-9-酮(50mg，0.16mmol)溶解在无水THF(5ml)中。滴加1-甲基-哌啶-4-基氯化镁(3当量，步骤2.2.1中得到的)。在第一滴后，溶液的颜色由淡黄色变为暗棕色。格氏试剂添加完毕后，搅拌溶液过夜。通过TCL(1％甲醇/CH2Cl2)控制反应的进程。反应完成后，首先用乙酸(5ml)、然后用水(5ml)使反应停止。蒸发溶剂，所得的醇化合物用乙酸酐进行脱水(回流，4h)。
蒸发乙酸酐，而残留物溶解在1N KOH溶液中。游离胺用二氯甲烷萃取，用Na2SO4干燥，然后蒸发溶剂。
粗产物通过快速色谱纯制，然后通过在HCl水溶液(50当量HCl，5ml，4h，50℃)中加热将其转化为盐酸盐。蒸发溶剂，并将产物溶解在叔丁醇和水(2ml，4∶1，v/v)的混合物中，然后冻干。
纯度＞97％产率28mg，46％2.3合成化合物3-乙氧基-9-(1-甲基-哌啶-4-亚基)-9，10-二氢-吖啶只有步骤2.3.3必须在保护气氛(氩气)下进行。
2.3.1合成2-(3-乙氧基-苯基氨基)-苯甲酸将m-氨基苯乙醚(5ml，38.7mmol)添加至KOH(7.385g，131.6mmol)、水(77ml)和2-碘苯甲酸(9.6g，38.7mmol)的溶液中。添加粉末铜(77mg，1.22μmol)，然后混合物在搅拌下回流过夜(16h)。
溶液进行热过滤，然后用浓盐酸酸化，以使所希望的产物沉淀。粗产物用快速色谱纯制。
纯度95％产率3.0g，30％2.3.2合成3-乙氧基-10H-吖啶-9-酮向2-(3-乙氧基苯基氨基)-苯甲酸(1.5g，4.2mmol)中添加多聚磷酸(20g)，然后混合物在搅拌下加热至120℃。4小时后，将溶液倾倒在碎冰上。所得的水溶液用二氯甲烷萃取。有机层用水(2×)和盐水(1×)洗涤，用Na2SO4干燥，然后蒸发至干。
粗产物用快速色谱纯制。
纯度＞95％产率200mg，14％2.3.3合成3-乙氧基-9-(1-甲基-哌啶-4-亚基)-9，10-二氢-吖啶将3-乙氧基-10H-吖啶-9-酮(50mg，0.21mmol)溶解在无水THF(5ml)中。滴加1-甲基-哌啶-4-基氯化镁(3当量，步骤2.2.1中得到的)。格氏试剂添加完毕后，搅拌溶液过夜。通过TCL(1％甲醇/CH2Cl2)控制反应的进程。反应完成后，首先用乙酸(5ml)、然后用水(5ml)使反应停止。蒸发溶剂，所得的醇化合物用乙酸酐进行脱水(回流，4h)。
蒸发乙酸酐，而残留物溶解在1N KOH溶液中。游离胺用二氯甲烷萃取，用Na2SO4干燥，然后蒸发溶剂。
粗产物通过快速色谱纯制，然后通过在HCl水溶液(50当量HCl，5ml，4h，50℃)中加热将其转化为盐酸盐。蒸发溶剂，并将产物溶解在叔丁醇和水(2ml，4∶1，v/v)的混合物中，然后冻干。
纯度99％产率22mg，32％实施例3克隆人5-HT2B受体的结合试验以下描述了使用经[3H]-5HT标记的克隆5-HT2B受体的体外结合试验。
受体结合试验如前所述(Schmuck等人，Eur.J.Pharmacol.，1996，8，959-967)使用HEK 293细胞，该细胞用编码人5-HT2B受体的表达质粒pXMD1-hu2B进行瞬时转染(参见Schmuck等人，FEBS Lett.，1994，342，85-90)。转染后2天，收集细胞，在500g和4℃下使其沉淀5分钟，轻柔地使其重新悬浮在冰冷却的缓冲液1(50mM TRIS pH7.7，4mMCaCl2)中，然后使用Polytron PT 1200组织匀浆器进行均化(6档30秒)。细胞在50,000g和4℃下进行沉淀10分钟，用缓冲液1洗涤，并重新进行沉淀。将最终的沉淀物重新悬浮在培养缓冲液(50mM TRIS pH7.7，4mM CaCl2，10μM帕吉林和0.1重量％的抗坏血酸)中。结合试验包括300μl的膜悬浮液(蛋白浓度＝0.3-0.5mg/ml)、150μl的竞争药物和50μl最终浓度为4-5nM的[3H]5-HT。该混合物在37℃下培养30分钟，然后在Whatman GFB过滤器上快速过滤，并用5ml的冷20mMTris-HCl pH＝7.5和154mM NaCl两次洗涤，由此使培养终止。通过液体闪烁对滤液进行计数。在存在过量5-HT(100μM)的情况下测定非特异性结合。结合的放射配体低于游离放射配体的1％。在竞争试验中，特异性结合约为总结合的60％。以pKi值表示的结果示于表1中。
按照以上步骤进行测试，发现本发明的化合物对5-HT2B受体具有选择性的亲和性。
实施例45-HT2A、5-HT2B和5-HT2C受体结合方法以下描述了受体结合方法，其中在5-HT2A和5-HT2C受体处逆向筛选对5-HT2B受体具有高度亲和性的配体以证实选择性。
在人皮质中，在表达克隆人5-HT2A受体的HEK293细胞和表达大鼠5-HT2A受体的HEK293细胞中用[3H]酮色林标记5-HT2A受体。在竞争结合研究中，配体的浓度约为0.1nM。在饱和结合研究中，放射配体的浓度范围在0.01nM-2.0nM。在0.5ml的试验缓冲液(50mMTris-HCl，4mM氯化钙，0.1重量％的抗坏血酸)(pH7.4，4℃)中进行分析。非特异性结合用10mM未标记的酮色林定义。在32℃下培养60分钟后，在用0.1重量％聚乙烯亚胺处理过的过滤器上收集膜，并测定结合的放射活性。
如上所述，在HEK293细胞中标记人5-HT2B受体，但不同之处在于放射配体是[3H]-5HT，而且试验缓冲液包含浓度为10mM的帕吉林以及0.1重量％的抗坏血酸。在竞争结合研究中，放射配体浓度为约0.4nM，而在饱和结合研究中[3H]-5HT的浓度范围是0.05-8nM。非特异性结合是用10mM的5-HT来定义。在4℃下培养120分钟。
在脉络丛中表达人5-HT2C受体的Cos-7细胞以及在表达大鼠5-HT2A受体的NIH-3T3中标记5-HT2C受体。
如上针对5-HT2A受体所述进行试验，但放射配体是[3H]美舒麦角。在竞争研究中放射配体的浓度为约0.2nM，而在饱和结合研究中浓度范围是0.1-18nM。非特异性结合用10μM未标记的美舒麦角来定义。
竞争放射配体结合数据是使用4个参数的逻辑方程以及交互曲线拟合法来进行分析的，以得到IC50和Hill斜率。接着使用由饱和结合研究测定的Kd值来计算抑制解离常数(Ki)。
按照以上步骤进行测试，发现本发明的化合物对5-HT2B受体具有选择性的亲和性。结果如表1所示。
实施例5基于5-HT2B受体组织的功能试验以下描述了用于表征大鼠胃底纵肌中的5-HT受体(推测性5-HT2B)的体外功能试验(Baxter等人，Brit.J.Pharmacol.1994，112，323-331)。
由雄性Sprague Dawley大鼠的胃底得到纵肌条。除去粘膜，然后在37℃下于加氧(95％O2/5％CO2)的Tyrode溶液中悬挂该肌肉条，其中静息张力为1g。Tyrode溶液的组成如下(mM)NaCl 136.9；KCl 2.7；NaH2PO40.4；MgCl21.0；葡萄糖5.6；NaHCO311.9；CaCl21.8。
构建对5-HT受体激动剂的浓度-反应曲线，其中条件为用3μm吲哚美辛使环加氧酶的活性失活，用0.1mM的帕吉林使单胺氧化酶的活性失活，并用30μM的可卡因和30μM皮质酮使吸收机制失活。
药物的效果通过张力转换器监测，并记录在多种波动扫描记录器上。组织应答测定为等长张力(g)下的变化。通过标准的交互曲线拟合技术评估平均效力(EC50)和最大反应。
测量拮抗剂平衡至少1小时后右移至激动剂浓度-应答曲线，由此测定拮抗剂的作用。测量半最大反应水平时的浓度比，然后通过以下等式测定单浓度拮抗剂的亲和性KB＝拮抗剂浓度/浓度比当化合物表现出竞争性时，用多个拮抗剂浓度进行Schild回归分析。
按照以上步骤进行测试，发现本发明的化合物在5-HT2B受体处是选择性的拮抗剂。
实施例6克隆人H1、H2、和H3受体结合试验COS-7细胞用分别编码人组胺H1，H2、H3或H4受体的表达质粒pCineohH1、pCineohH2、pCineohH3和pCineohH4进行瞬时转染。48小时后收集经转染的细胞，在冰冷却的50mM Na2/磷酸钾缓冲液(pH7.4)中均化，然后用于放射配体结合研究。细胞匀浆(40-50μg的蛋白)在25℃下于50mM磷酸Na2/磷酸钾缓冲液(pH7.4)400μl中培养30分钟，所述缓冲液中含有各种浓度的分别用于表达重组人H1、H2、H3和H4受体的细胞的[3H]-美吡拉敏、[3H]-thiotidine、[3H]-R-α-甲基组胺、和[3H]-pyramilamine。非特异性结合是在1μM米胺色林存在下进行限定的。在置换研究中，经过均化的细胞与1nM[3H]-美吡拉敏、15nM[3H]-thiotidine、0.5nM[3H]-R-α-甲基组胺、或15nM[3H]-pyramilamine以及浓度增加的竞争配体一起培养。用3ml冰冷却的50mM磷酸Na2/磷酸钾缓冲液(pH7.4)快速稀释，由此终止培养。在已用0.3％聚乙烯亚胺处理过的Whatman GF/C过滤器上过滤，由此分离结合的放射活性。过滤器用3ml的缓冲液洗涤2次，然后通过液体闪烁计数来测量保留在过滤器上的放射活性。
对结合产生50％抑制作用的1-甲基-4-(3-乙氧基-9H-硫代呫吨-9-亚基)-哌啶的浓度(IC50)是用交互曲线拟合方法来确定的。
按照以上实施例的方法分析本发明的化合物，发现它们对人H1受体具有低的亲和性。
实施例7人组胺H1受体功能试验在测量[3H]-肌醇磷酸酯形成时，在24孔板上接种经过瞬时转染的HEK-293细胞，然后在生长培养基中用myo-[2-3H]-肌醇(3μCi/ml)标记额外24小时至平衡。抽出培养基，细胞用500μl HBS缓冲液(130mMNaCl，900μM NaH2PO4，800μM MgSO4，5.4mM KCl，1.8mM CaCl2，在20mM HEPES中的25mM葡萄糖pH7.4)洗涤1次。在添加20mM Li+后2分钟，通过添加在HBS缓冲液中的激动剂来刺激细胞。抽出培养基并添加冷的10mM甲酸，由此使培养停止。用阴离子交换色谱分离[3H]肌醇磷酸酯(参见Seuwen等人，1988，EMBO J.，7，161-168)。用以下式计算pKB值pKB＝log(A′/A-1)-log[B]，其中A′/A是激动剂的浓度比(存在拮抗剂时的EC50/无拮抗剂时的EC50)，而[B]是拮抗剂的浓度。
按照以上实施例的方法分析本发明的化合物，发现它们在人H1受体处是较低效力的拮抗剂。结果如表1所示。
表1受体亲和性化合物的pK值

表1中的结果表明，本发明的化合物对于5HT2B受体具有选择性的亲和性，特别是对于5HT2B受体具有比5HT2C受体高得多的亲和性。
权利要求
1.以下式的化合物或其药物学上可接受的盐 其中R1是乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、戊基(直链或支链)、己基(直链或支链)、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、苯氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、氨基、二甲氨基、溴、-CON(CH3)2或-CON(C2H5)2，R2是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、戊基、己基、羟基或氢，或者R1和R2形成杂环，R3是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、戊基、己基、羟基或氢，R4是羟基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、三氟甲基、氨基、二甲氨基、二乙氨基、氟、氯或溴、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基或氢，R5是甲基或氢，R6是甲基或乙基，以及X是S、N或Se，其条件是，如果R1是乙氧基且X是S，则R2、R3、R4和R5中至少有一个不是氢。
2.以下式的化合物或药物学上可接受的盐 其中R1是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、戊基(直链或支链)、己基(直链或支链)、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、苯氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、氨基、二甲氨基、氯、溴、-CON(CH3)2或-CON(C2H5)2，R2是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、戊基、己基、羟基或氢，或者R1和R2形成杂环，R3是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、戊基、己基、羟基或氢，R4是羟基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、三氟甲基、氨基、二甲氨基、二乙氨基、氟、氯或溴、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基或氢，R5是甲基或氢，R6是甲基或乙基，以及X是S、N或Se，其条件是，如果R1是乙氧基且X是S，则在作为药物时R2、R3、R4和R5中至少有一个不是氢。
3.如权利要求2所述的化合物在制备用于治疗通过5-HT2B拮抗剂的治疗而得到缓解的疾病的药物中的应用。
4.如权利要求3所述的应用，其中所述疾病选自于偏头痛、高血压、胃肠道疾病、再狭窄、哮喘、阻塞性气道疾病、支气管肺功能发育不良、前列腺增生和阴茎异常勃起。
5.如权利要求3或4所述的应用，其中所述疾病包括疼痛。
6.如权利要求5所述的应用，其中所述疾病包括炎性疼痛、神经性疼痛、癌疼痛、急性疼痛或慢性疼痛。
7.如权利要求4所述的应用，其中所述疾病包括过敏性哮喘、过敏性大肠综合症、高渗性下部食管sphinter、能动性疾病或良性前列腺增生。
8.一种药物组合物，其包括如权利要求1或2所述的化合物或其药物学上可接受的盐以及一种或多种药物学上可接受的载体。
9.如权利要求1或2所述的化合物，如权利要求3-7之一所述的应用，或者如权利要求8所述的组合物，其中在通式中R1是异丙基、二甲氨基、甲氧基或乙氧基，R2是乙基或氢，或者R1和R2形成杂环，R3是乙基或氢，R4是甲氧基、羟基、乙基、甲基或氢，R5是甲基或氢，R6是甲基，而X是S、N或Se，或其药物学上可接受的盐，条件是，如果R1是乙氧基且X是S，则R2、R3、R4和R5中至少有一个不是氢。
10.如权利要求9所述的应用，其中所述化合物选自于以下组中4-(6-异丙基-1-甲氧基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(6-异丙基-1-羟基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(6-乙氧基-1-乙基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(6-乙氧基-1-甲氧基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(6-乙氧基-1-羟基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(6-甲氧基-1-甲氧基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(6-二甲氨基-1-甲氧基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(6-二甲氨基-1-羟基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(3-乙氧基-硒代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(3-乙氧基-1-甲氧基-硒代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(3-乙氧基-1-羟基-硒代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、3-乙氧基-9-(1-甲基-哌啶-4-亚基)-9，10-二氢-吖啶、6-乙氧基-1-甲氧基-9-(1-甲基-哌啶-4-亚基)-9，10-二氢-吖啶、6-乙氧基-1-羟基-9-(1-甲基-哌啶-4-亚基)-9，10-二氢-吖啶、4-(3-乙氧基-5-乙基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(3-乙氧基-4-甲基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(3-乙氧基-4-乙基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(3-乙氧基-硫代呫吨-9-亚基)-1，3-二甲基-哌啶、4-(3，4-(环戊-3′-氧基-1′-烯并)-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(3，4-(环戊-4′-氧基-1′-烯并)-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶和4-(3，4-(环戊-5′-氧基-1′-烯并)-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶。
11.如权利要求9所述的化合物，其中所述化合物选自于以下组中4-(6-异丙基-1-甲氧基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(6-乙氧基-1-乙基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(6-乙氧基-1-甲氧基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(6-甲氧基-1-甲氧基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(6-二甲氨基-1-甲氧基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(6-二甲氨基-1-羟基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(3-乙氧基-硒代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(3-乙氧基-1-甲氧基-硒代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(3-乙氧基-1-羟基-硒代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、3-乙氧基-9-(1-甲基-哌啶-4-亚基)-9，10-二氢-吖啶、6-乙氧基-1-甲氧基-9-(1-甲基-哌啶-4-亚基)-9，10-二氢-吖啶、6-乙氧基-1-羟基-9-(1-甲基-哌啶-4-亚基)-9，10-二氢-吖啶、4-(3-乙氧基-5-乙基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(3-乙氧基-4-甲基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(3-乙氧基-4-乙基-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(3-乙氧基-硫代呫吨-9-亚基)-1，3-二甲基-哌啶、4-(3，4-(环戊-3′-氧基-1′-烯并)-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶、4-(3，4-(环戊-4′-氧基-1′-烯并)-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶和4-(3，4-(环戊-5′-氧基-1′-烯并)-硫代呫吨-9-亚基)-1-甲基-哌啶。
12.制备如权利要求1、2、9或11所述的化合物的方法，其包括格氏反应。
全文摘要
本发明涉及4－(硫代或硒代呫吨－9－亚基)－哌啶或吖啶的衍生物及其药物学上可接受的盐，这些化合物作为药物的应用以及在制备用于治疗通过5－HT
文档编号A61P13/08GK1575291SQ02821070
公开日2005年2月2日 申请日期2002年10月23日 优先权日2001年10月25日
发明者赫尔曼·吕贝特, 克里斯托夫·乌尔默, 埃米尔·贝洛特, 马克·弗罗伊莫维茨, 道格拉斯·戈登 申请人:拜欧弗朗特拉制药有限公司