专利名称：：中药制剂中丹参的质量控制方法
技术领域：
：本发明涉及益心舒中药制剂中丹参的质量控制方法，属于药品的
技术领域：
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背景技术：
：益心舒中药制剂是以人参、丹参等七味药组成，具有益气复脉，活血化瘀，养阴生津的功效，用于气阴两虚，心悸脉结代，胸闷不舒、胸痛及冠心病心绞痛见有上述症状者，目前临床上广泛用于治疗心绞痛、心肌缺血、各型心率失常、房性早搏、胸痛及冠心病心绞痛患等。药物制剂必须要在保证产品质量稳定可控安全的基础上，才能不断的更新发展，为了更好的控制该中药制剂的质量，所以必须从源头加以控制，才能更好的保证用药的安全性。如今，在中药制剂作为最具发展潜力的药物资源已经被全世界所认知的情况下，我国政府已经建立了一系列广泛的政策来应对传统中药制剂标准化，现代化的要求。其中最重要的就是如何控制中药制剂的质量。目前我们最常用的方法就是选择中药材的主要活性成分或其指标性成份，对这些成分的鉴别和含量测定以达到控制这些中药制剂质量的目的。但是，这种只针对中药及中药制剂指标性成分进行控制的方法并不能科学而全面的确保中药的药效。丹参有较好的活血化瘀作用,能增加冠状动脉血流量，降低心肌兴奋性，对急性心肌缺血缺氧所致的心肌损伤具有明显保护作用,并具有改善微循环、抗血小板的聚集和血栓形成作用。而益心舒中药制剂是以人参、麦冬、五味子、丹参等七味药经加工制成的制剂，临床上广泛用于治疗心绞痛、心肌缺血、各型心率失常、房性早搏、胸痛及冠心病心绞痛患等。所以在益心舒制剂中丹参的质量直接关系到该制剂的疗效，对于丹参的质量控制方法的提高从而确保益心舒中药制剂的疗效显得十分必要。
发明内容本发明的目的在于提供一种益心舒中药制剂中丹参的质量控制方法，这种方法向相关的生产、检测机构提供了检测的指标、检测的手段、技术方法等等；以便更好的控制益心舒中药制剂的质量，为临床提供一种疗效确切的益心舒中药制剂，保证用药的安全和疗效，同时能够更好的指导生产，使消费者能全面认识益心舒中药制剂的品质。本发明涉及益心舒中药制剂中丹参的质量控制方法，它包括丹参的产地、采集、加工、鉴别、含测项目作为该制剂中丹参质量控制的指标。上述的益心舒中药制剂中丹参的质量控制方法，采用以下的部分或全部(1)丹参的产地为安徽、山西、河北、四川、江苏、湖北、辽宁、浙江、河南、江西、贵州、江苏等地。(2)丹参的采集时间为每年的10次年5月份采挖。(3)丹参的采集加工方法为挖取的鲜丹参，除去泥土、洗净，晾干。(4)丹参的鉴别方法为方法l:采用薄层色谱法，一般使用硅胶G或硅胶Gi^M或硅胶H为薄层板，点样量为0.530Pl之间任一体积，以丹参对照药材、丹参酮I、丹参酮IIA、丹参酮IIB、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹参素、丹参酸乙中全部或部分品种作为对照品，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲垸或正丁醇提取后再浓縮方法，展开剂可以为正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、环己烷的一种或一种以上试剂按照一定比例配制而成，检视条件包括紫外光灯下检视、氨气熏后再置紫外光灯下检视、或喷以变色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸气、10%磷钼酸乙醇溶液溶液显色的方法；方法2:采用高效液相色谱法或蒸发光散射检测器与高效液相色谱联用法，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓縮的方法，使用C8或C18类型填料的色谱柱，以乙睛、水、甲醇中的一种或一种以上品种溶剂在常规的合适比例条件下为流动相，以丹参对照药材、丹参酮I、丹参酮IIA、丹参酮IIB、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹参素、丹参酸乙中全部或部分品种作为对照品，检测波长在200600nm范围内；(6)丹参含量采用以下方法方法1.*采用高效液相色谱法测定本品中丹参酮I、丹参酮IIA、丹参酮IIB、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹参素、丹参酸乙中全部或部分品种，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓縮方法，使用C8或C18类型填料的色谱柱，以甲醇、水、乙睛、冰醋酸、四氢呋喃、磷酸溶液中的一种或一种以上品种溶剂在常规的合适比例条件下为流动相，检测波长在200600nm范围内；方法2:采用薄层色谱扫描法，一般使用硅胶G或硅胶6^54或硅胶H为薄层板，点样量为0.530W之间任一体积，以丹参对照药材、丹参酮I、丹参酮IIA、丹参酮IIB、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹参素、丹参酸乙中全部或部分品种作为对照品，样品前处理包括直接取样或者是以水或醋酸乙酯或三氯甲垸或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓縮方法，展开剂可以为正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、环己垸的一种或一种以上试气熏后再置紫外光灯下或喷以变色酸硫酸溶液或茴香醛硫酸溶液或碘蒸气或10%磷钼酸乙醇溶液显色的方法，斑点在薄层扫描仪上采用单波长或双波长进行扫描，扫描波长为400750nm;上述的益心舒中药制剂中丹参的质量控制方法，采用以下方法(1)丹参的产地为四川、山东、河南、江苏、安徽地区。(2)丹参的采集时间为每年的11月上旬至次年3上旬月份采挖。(3)丹参的采集加工方法为挖取的鲜丹参，除去泥土、洗净，切片，晾干，放入锅内，以文火炒至有焦斑即可。(4)丹参的鉴别方法为采用薄层色谱法，使用硅胶G薄层板，点样量为0.5W30W之间某一体积，以丹参对照药材、丹参素、丹酚酸B、丹参酮IIA中全部或部分品种作为对照品，样品前处理是以三氯甲烷、乙醚、石油醚单独使用或者是按一定的比例混合溶剂提取杂质，然后用乙醇、甲醇、醋酸乙酯、水中的一种或者是它们任意混合溶剂溶解的方法，展开剂为苯、甲苯、醋酸乙酯，检视条件为日光下检视。(5)丹参含量采用以下方法采用高效液相色谱法测定本品中丹参酮nA或/和丹酚酸B的含量，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓縮方法，使用C8或C18类型填料的色谱柱，以甲醇、水、乙睛、冰醋酸、四氢呋喃、磷酸溶液中的一种或一种以上品种溶剂在常规的合适比例条件下为流动相，检测波长在200600nm范围内；上述的益心舒中药制剂中丹参的质量控制方法，采用以下方法(1)丹参的产地为四川、山东、河南地区。(2)丹参的采集期为每年ll月份上旬。(3)丹参的釆集加工方法为挖取的鲜丹参，除去泥土、洗净，切片，晾干，放入锅内，以文火炒至有焦斑即可。(4)丹参的鉴别方法为取本品内容物2g，加乙醚20ml，超声处理40分钟，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯lml使溶解，作为供试品溶液。另取丹参对照药材lg，同法制成对照药材溶液。再取丹参酮IIA对照品，加醋酸乙酯制成每lml含2mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述三种溶液各5ii1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯一醋酸乙酯(19:1)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗红色斑点。(5)丹参的含测方法为采用高效液相色谱法同时测定丹参酮IU和丹酚酸B的含量。色谱条件与系统适应性试验用十八垸基硅垸键合硅胶为填充剂；流动相甲醇-乙腈-O.5%甲酸水溶液(28:8:64);流速lml/min;检测波长:286mn。理论踏板数以丹酚酸B峰计算不低于2000。对照品溶液制备精密称取丹酚酸B对照品适量，加甲醇制成每lml含0.14mg的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品内容物lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75。/。甲醇50ml。称定重量，加热回流l小时，取出，放冷，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取上述对照液与供试品溶液10ul，注入高效液相色谱仪，测定，即得。与现有技术相比，本发明提供的质量控制方法能更好的、更进一步的控制一种益心舒中药制剂的产品质量，保证用药的安全性，使用本发明后，使生产该产品的单位或检测机构从源头原料丹参来控制，确保该益心舒的疗效，能够保证药物制成品的质量；我们在进行试验时发现为了达到益心舒中药制剂的确切疗效，就必须从源头开始控制，包括丹参的产地、采集、加工、鉴别、含测项目。这样更有利于指导生产，让消费者全面认识产品品质、放心使用这类药品。对于丹参高效液相色谱的研究也渐有报道，但都是单一研究脂溶性成分或水溶性成分，对脂溶性和水溶性同时研究的高效液相色谱法还未见报道。根据在05版《药典》记载，HPLC法测定丹参中丹参酮IIA和丹酚酸B的含量是分别制样、分别采用不同的测定条件，在两张色谱图上反映出丹参酮IIA及丹酚酸B的含量。为了简化实验操作、更直观的反映出丹参酮nA及丹酚酸B的含量、更加全面有效地控制药材的质量，本实验用同一种提取溶剂，在相同的测定条件下，在一张色谱图上同时反映丹参中丹参酮IIA和丹酚酸B的含量。本发明选取脂溶性代表成分丹参酮IIA和水溶性代表成分丹酚酸B，建立同一的HPLC测定方法，为简便而全面地控制丹参药材的质量提供更为有效的分析方法。为证明利用本发明提供的丹参质量控制方法能更好的控制益心舒中药制剂的产品质量，得到的药物具有有效的效果，申请人进行了一系列实验；试验例1益心舒中药制剂中丹参产地的考察本实验通过对相同采集时期以及相同加工方法的四川丹参和安徽丹参中的丹参酮IIA和丹酚酸B的含量测定来考察不同产地的丹参的品质。l.l仪器与材料高效液相色谱仪(日本岛津公司)，丹参酮IIA，丹酚酸B(中国药品生物制品检定所提供)，甲醇(上海正兴化工一厂,色谱纯)，乙腈(上海正兴化工一厂，色谱纯)，其他试剂为分析纯。丹参(采于四川和安徽)。1.2试验方法1.2.1色谱条件色谱柱为LichrosorbC18。流动相A泵甲醇乙腈(3:1):B泵含10ml/L甲酸的水。两泵同时进行梯度洗脱，洗脱时间为60min。流速为1ml/min;检测波长丹参酮IIA为270nm，丹酚酸B为286nm。1.2.2对照品溶液的制备精密称取丹参酮IIA对照品O.lmh，丹酚酸B对照品1.52mg,同时置5ml棕色容量瓶中，加850ml/L甲醇至刻度，摇匀即得高浓度对照品溶液，根据以下实验的需要稀释成不同浓度的对照品溶液。1.2.3供试品溶液的制备取丹参粉末(过3号筛)约O.3g，精密称定,置具塞锥形瓶中，加850ml/L甲醇超声提取15min,超声频率为30kHz，功率为30W,取续滤液，即得。1.2.4测定法分别精密吸取上述对照液与供试品溶液10ul，注入高效液相色谱仪，测定，即得。1.3结果和讨论1.3.1样品测定结果不同产地丹参药材样品，单位(％),结果见表l一l样品_丹参酮IIA_丹酚酸B四川丹参0.27705.6122山东丹参0.25815.7270河南丹参0.27215.5662湖北丹参0.20573.98531.3.2讨论研究结果表明，不同产地丹参中的丹参酮IIA和丹酚酸B的成分含量差异较大，说明不同产地药材的种内变异造成药材品质的差异。其中以四川、山东、河南的丹参为佳，其中四川丹参中丹参酮IIA的含量最高，而山东丹参中丹酚酸B的含量最高，而以河南丹参中两者中的总含量最高。故综合评价其品质优良。试验例2益心舒中药制剂中丹参采集时期的考察本实验通过对不同采集期四川丹参中丹酚酸B和丹参酮IIA的含量测定来考察的丹参品质。2.1仪器与材料高效液相色谱仪(日本岛津公司)，丹参酮IIA，丹酚酸B(中国药品生物制品检定所提供)，甲醇(上海正兴化工一厂，色谱纯)，乙腈(上海正兴化工一厂，色谱纯)，其他试剂为分析纯。丹参采集期为ll月、12月、次年3月2.2试验方法2.2.1色谱条件色谱柱为LichrosorbC18。流动相A泵甲醇乙腈(3:1);B泵含10ml/L甲酸的水。两泵同时进行梯度洗脱,洗脱时间为60min。流速为1ml/min;检测波长丹参酮IIA为270nm，丹酚酸B为286nm。2.2.2对照品溶液的制备精密称取丹参酮IIA对照品O.lmh，丹酚酸B对照品1.52mg，同时置5ml棕色容量瓶中，加850ml/L甲醇至刻度，摇匀即得高浓度对照品溶液,根据以下实验的需要稀释成不同浓度的对照品溶液。2.2.3供试品溶液的制备取丹参粉末(过3号筛)约O.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加850ml/L甲醇超声提取15min，超声频率为30kHz,功率为30W，取续滤液，即得。2.2.4测定法分别精密吸取上述对照液与供试品溶液10ul，注入高效液相色谱仪，测定，即得。2.3结果及讨论2.3.1结果不同采集期丹参药材样品，单位(％),结果见表2—1样品丹参酮IIA丹酚酸B11月上旬0.28705.712212月上旬0.26855.4272次年3月0.21214.9662次年4月0.18573.98512.3.2讨论研究结果表明，不同采集期丹参中的丹参酮IIA和丹酚酸B成分含量差异较大，说明不同采集期采集的药材的种内变异造成药材品质的差异。其中以ll月份至次年3月份变化较小，并且含量呈逐渐减少的状况，但是减少量并不明显，同时以ll月份采集的含量最高为佳。试验例3益心舒中药制剂中丹参的加工方法考察本实验通过对河南丹参不同的加工方法，依其丹酚酸B和参酮IIA的含量为指标来评价麦冬加工方法的考察。3.l仪器与材料高效液相色谱仪(日本岛津公司)，丹酚酸B(中国药品生物制品检定所提供)，甲醇(上海正兴化工一厂,色谱纯)，乙腈(上海正兴化工一厂，色谱纯)，其他试剂为分析纯。样品A:挖取的鲜丹参，除去泥土、洗净，切片，晾干，放入锅内，以文火炒至有焦斑即可。样品B:挖取的鲜丹参，除去泥土、洗净，切片，晒干即可。3.2试验方法3.2.1色谱条件色谱柱为LichrosorbC18。流动相A泵甲醇乙腈(3:1);B泵含10ml/L甲酸的水。两泵同时进行梯度洗脱，洗脱时间为60min。流速为1ml/min;检测波长丹参酮IIA为270nm，丹酚酸B为286nm。3.2.2对照品溶液的制备精密称取丹参酮IIA对照品O.lmh,丹酚酸B对照品1.52mg，同时置5ml棕色容量瓶中，加850ml/L甲醇至刻度，摇匀即得高浓度对照品溶液，根据以下实验的需要稀释成不同浓度的对照品溶液。3.2.3供试品溶液的制备取丹参粉末(过3号筛)约O.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加850ml/L甲醇超声提取15min，超声频率为30kHz，功率为30W，取续滤液，即得。3.2.4测定法分别精密吸取上述对照液与供试品溶液10ul，注入高效液相色谱仪，测定，即得。3.3结果及讨论3.3.1结果不同加工方法丹参药材样品，单位(％)，结果见表3—1样品丹酚酸B丹参酮IIA样品A0.27465.5634样品B0.20144.38073.3.2讨论研究结果表明，依照样品A采集加工的丹参以及依照样品B采集加工的丹参中的丹酚酸B和丹参酮IIA成分含量差异较大，说明不同的样品加工方法对丹参中的成分影响较大，其中样品A的加工方法为佳。可以保证丹参中有效成分的含量，所以以样品A加工方法的丹参为佳。试验例4益心舒中药制剂中丹参鉴别的稳定性考察本实验通过对5批丹参进行鉴别方法学考察，以确定该方法的稳定性。4.1标准溶液的制备4.1.1取丹参5g，加乙醚20ml，超声处理40分钟，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯lml使溶解，作为供试品溶液。4.1.2取丹参对照药材lg,加乙醚20ml，超声处理40分钟，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯lml使溶解，制成对照药材溶液；再取丹参酮IIA对照品，加醋酸乙酯制成每lml含2mg的溶液，作为对照品溶液。4.2鉴别吸取上述三种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯一醋酸乙酯(19:1)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗红色斑点。4.3结果供试品与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；同时5批样品均比较稳定，说明此方法可以作为丹参药材的鉴别方法来进行丹参药材的鉴别。试验例5益心舒中药制剂中丹参含测的方法学考察采用高效液相色谱法，以梯度洗脱的方式，60min内在同一谱中完成脂溶性成分丹参酮IIA和水溶性成分丹酚酸B的含量测定。5.1仪器高效液相色谱仪(日本岛津公司，型号LC220AB)，岛津Solution液相工作站。5.2色谱条件色谱柱为LichrosorbC18。流动相A泵甲醇乙腈(3:1)B泵含10ml/L甲酸的水。两泵同时进行梯度洗脱,洗脱时间为60min，洗脱程序见表5.1。流速为lml/min;检测波长丹参酮IIA为270nm,丹酚酸B为286nm.表5.1洗脱程序洗脱时间(min)A泵(y。)B泵(呢)020356516<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>5.3测定法5.3.1对照品溶液的制备精密称取丹参酮IIA对照品O.10mg，丹酚酸B对照品1.52mg,同时置5ml棕色容量瓶中，加850ml/L甲醇至刻度，摇匀即得高浓度对照品溶液，根据以下实验的需要稀释成不同浓度的对照品溶液。5.3.2供试品溶液的制备取丹参粉末(过3号筛)约0.3g,精密称定，置具塞锥形瓶中，加850ml/L甲醇超声提取15min,超声频率为30kHz,功率为30W,取续滤液，即得。5.4线性关系5.4.1丹参酮IIA的线性关系考察:从上述配好的高浓度对照品溶液中精密移取O.3，0.4，0.5,0.6，0.7ml配成浓度分别为O.006，0.008，0.010，0.012，0.014mg/ml的溶液，分别取样20ul进样，按上文中色谱条件测定，以峰面积为横坐标，以浓度为纵坐标，绘制标准曲线。回归方程为尸lX10、+96922，r=0.999,丹参酮IIA在浓度为O.0060.014mg/ml范围内，呈良好的线性关系。5.4.2丹酚酸B的线性关系考察:从上述配好的高浓度对照品溶液中精密移取0.3，0.4，0.5，0.6,0.7ml配成浓度分别为O.0912，0.1216，0.1520，0.1824，0.2128mg/ml的溶液，分别取样20ul进样,按上述色谱条件测定，以峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标，绘制标准曲线。其回归方程为/=3X10V—83361，_r=0.9998，丹酚酸B在O.09120.2128mg/ml范围内，呈良好的线性关系。5.5精密度试验精密吸取对照品溶液20ul，按上述色谱条件，连续进样5次，测定峰面积，丹参酮IIA:RSD=0.579&，丹酚酸B:RSD=0.43%。两份样品的RSD值均小于2y。，表明此仪器精密度良好。5.6稳定性试验精密吸取对照品溶液20ul，按上述色谱条件，分别于0,2,4，6，8，10，12，24h进样，测定峰面积，24h内丹参酮IIA峰面积基本不变，RSD为1.95Q/。;丹酚酸B峰面积基本不变，RSD为l.73%,说明样品闭光保存在24h内稳定性良好。5.7重现性试验取同一样品6份，按供试品的提取方法制备，精密吸取上述6份溶液各20u1，按上述色谱条件测定，结果丹参酮IIA的RSD值为O.997%，丹酚酸B的RSD值为O.585%，表明试验方法重现性良好。5.8加样回收率考察准确称取同一丹参样品6份，分别加入丹参酮IIA、丹酚酸B对照品，按上述色谱条件测定，计算回收率。丹参酮IIA回收率为99.41%,RSD为O.92%;丹酚酸B回收率为99.30%，RSD为O.89%。5.9样品测定取丹参药材供试品的制备方法处理后，进样分析测定含量。结果用药典法测得的丹参酮IIA和丹酚酸B分别为O.227%和5.612%,而用改良法测得上述两种成分分别为O.239%和5.603%。5.IO结果和讨论由于丹参酮IIA和丹酚酸B存在于同种中药中，且两种成分相互间不发生化学反应，所以在标准品的制备过程中笔者将丹参酮IIA和丹酚酸B标准品放入同一容量瓶中进行配制，按方法学考察方法对各考察指标测定，这样较分别配制丹参酮IIA和丹酚酸B标准品进行方法学考察更加简便。试验例6不同产地的丹参在益心舒中药制剂中丹酚酸B的影响本实验通过对四川丹参、山东丹参、江苏丹参、安徽丹参在益心舒中药制剂中丹参酮IIA和丹酚酸B的含量为指标来评价丹参对益心舒制剂的影响。6.l仪器与材料高效液相色谱仪(日本岛津公司)，丹参酮IIA，丹酚酸B(中国药品生物制品检定所提供)，甲醇(上海正兴化工一厂，色谱纯)，乙腈(上海正兴化工一厂，色谱纯)，其他试剂为分析纯。四川丹参的益心舒制剂(川制)、山东丹参的益心舒制剂(山制)、江苏丹参的益心舒制剂(江制)、安徽丹参的益心舒制剂(安制)。6.2试验方法6.2.1色谱条件色谱柱为LichrosorbC18。流动相A泵甲醇乙腈(3:1);B泵含10ml/L甲酸的水。两泵同时进行梯度洗脱，洗脱时间为60min。流速为lml/min;检测波长丹参酮IIA为270nm，丹酚酸B为286nm。6.2.2对照品溶液的制备精密称取丹参酮IIA对照品O.lmh，丹酚酸B对照品1.52mg，同时置5ml棕色容量瓶中，加850ml/L甲醇至刻度，摇匀即得高浓度对照品溶液，根据以下实验的需要稀释成不同浓度的对照品溶液。6.2.3供试品溶液的制备取丹参粉末(过3号筛)约O.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加850ml/L甲醇超声提取15min，超声频率为30kHz，功率为30W，取续滤液，即得。6.2.4测定法分别精密吸取上述对照液与供试品溶液10ul，注入高效液相色谱仪，测定，即得。6.3结果及讨论2.3.1结果不同产地丹参制剂的含量比较，单位(mg/g)，结果见表2—1样品丹参酮IIA丹酚酸B<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>2.3.2讨论研究结果表明，不同产地丹参的益心舒制剂中的丹参酮IIA和丹酚酸B成分含量差异较大，说明不同产地丹参对益心舒制剂有较大的影响，其中，以四川和山东的丹参药材较好。7具体实施例益心舒中药制剂中丹参的质量控制方法丹参的产地为四川、山东、河南地区。丹参的采集期为每年ll月份上旬。丹参的采集加工方法为挖取的鲜丹参，除去泥土、洗净，切片，晾干，放入锅内，以文火炒至有焦斑即可。丹参的鉴别方法为取本品内容物2g，加乙醚20ml，超声处理40分钟，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯lml使溶解，作为供试品溶液。另取丹参对照药材lg，同法制成对照药材溶液。再取丹参酮IIA对照品，加醋酸乙酯制成每lml含2mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述三种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯一醋酸乙酯(19:1)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗红色斑点。益心舒中药制剂中丹参的含测方法为采用高效液相色谱法同时测定丹参酮IIA和丹酚酸B的含量色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅垸键合硅胶为填充剂；流动相甲醇-乙腈-0.5%甲酸水溶液(28:8:64);流速lml/min;检测波长:286nm。理论踏板数以丹酚酸B峰计算不低于2000。对照品溶液制备精密称取丹酚酸B对照品适量，加甲醇制成每lml含0.14mg的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品内容物lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75。/o甲醇50ml。称定重量，加热回流l小时，取出，放冷，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取上述对照液与供试品溶液10ul，注入高效液相色谱仪，测定，即得。本品丹酚酸B含量不得少于l.Omg/g及参酮IIA不得少于0.3mg/g。权利要求1、益心舒中药制剂中丹参的质量控制方法，其特征在于它是将丹参的产地、采集、加工、鉴别、含测项目一项或多项作为该制剂中丹参质量控制的指标。2、根据权利要求1所述的益心舒中药制剂中丹参的质量控制方法，其特征在于采用以下方法的部分或全部(1)丹参的产地为安徽、山西、河北、四川、江苏、湖北、辽宁、浙江、河南、江西、贵州、江苏等地。(2)丹参的采集时间为每年的10次年5月份采挖。(3)丹参的采集加工方法为挖取的鲜丹参，除去泥土、洗净，晾干。(4)丹参的鉴别方法为-方法l:采用薄层色谱法，一般使用硅胶G或硅胶GF2^或硅胶H为薄层板，点样量为0.530W之间任一体积，以丹参对照药材、丹参酮I、丹参酮IIA、丹参酮IIB、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹参素、丹参酸乙中全部或部分品种作为对照品，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲垸或二氯甲垸或正丁醇提取后再浓縮方法，展开剂可以为正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、环己烷的一种或一种以上试剂按照一定比例配制而成，检视条件包括紫外光灯下检视、氨气熏后再置紫外光灯下检视、或喷以变色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸气、10%磷钼酸乙醇溶液溶液显色的方法；方法2:采用高效液相色谱法或蒸发光散射检测器与高效液相色谱联用法，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲垸或正丁醇提取后再浓縮的方法，使用C8或C18类型填料的色谱柱，以乙睛、水、甲醇中的一种或一种以上品种溶剂在常规的合适比例条件下为流动相，以丹参对照药材、丹参酮I、丹参酮IIA、丹参酮IIB、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹参素、丹参酸乙中全部或部分品种作为对照品，检测波长在200600nm范围内；(6)丹参含量采用以下方法方法l:采用高效液相色谱法测定本品中丹参酮I、丹参酮IIA、丹参酮IIB、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹参素、丹参酸乙中全部或部分品种，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲垸或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓縮方法，使用C8或C18类型填料的色谱柱，以甲醇、水、乙睛、冰醋酸、四氢呋喃、磷酸溶液中的一种或一种以上品种溶剂在常规的合适比例条件下为流动相，检测波长在200600nm范围内；方法2:采用薄层色谱扫描法，一般使用硅胶G或硅胶G&54或硅胶H为薄层板，点样量为0.530W之间任一体积，以丹参对照药材、丹参酮I、丹参酮IIA、丹参酮IIB、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹参素、丹参酸乙中全部或部分品种作为对照品，样品前处理包括直接取样或者是以水或醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓縮方法，展开剂可以为正己垸、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、环己烷的一种或一种以上试剂按照一定比例配制而成，置紫外光灯下或采用氨气熏后再置紫外光灯下或喷以变色酸硫酸溶液或茴香醛硫酸溶液或碘蒸气或10%磷钼酸乙醇溶液显色的方法，斑点在薄层扫描仪上采用单波长或双波长进行扫描，扫描波长为400750nm;3、根据权利要求1或2所述的益心舒中药制剂中丹参的质量控制方法，其特征在于(1)丹参的产地为四川、山东、河南、江苏、安徽地区。(2)丹参的采集时间为每年的11月上旬至次年3月份上旬采挖。(3)丹参的采集加工方法为挖取的鲜丹参，除去泥土、洗净，切片，晾干，放入锅内，以文火炒至有焦斑即可。(4)丹参的鉴别方法为采用薄层色谱法，使用硅胶G薄层板，点样量为0.5W30lil之间某一体积，以丹参对照药材、丹参素、丹酚酸B、丹参酮IIA中全部或部分品种作为对照品，样品前处理是以三氯甲烷、乙醚、石油醚单独使用或者是按一定的比例混合溶剂提取杂质,然后用乙醇、甲醇、醋酸乙酯、水中的一种或者是它们任意混合溶剂溶解的方法，展开剂为苯、甲苯、醋酸乙酯，检视条件为日光下检视。(5)丹参含量采用以下方法采用高效液相色谱法测定本品中丹参酮IIA或/和丹酚酸B的含量，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲垸或二氯甲垸或正丁醇提取后再浓縮方法，使用C8或C18类型填料的色谱柱，以甲醇、水、乙睛、冰醋酸、四氢呋喃、磷酸溶液中的一种或一种以上品种溶剂在常规的合适比例条件下为流动相，检测波长在200600nm范围内；4、根据权利要求l3所述的益心舒中药制剂中丹参的质量控制方法，其特征在于(1)丹参的产地为四川、山东、河南地区。(2)丹参的采集期为每年ll月份上旬。(3)丹参的采集加工方法为挖取的鲜丹参，除去泥土、洗净，切片，晾干，放入锅内，以文火炒至有焦斑即可。(4)丹参的鉴别方法为取本品内容物2g，加乙醚20ml，超声处理40分钟，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯lml使溶解，作为供试品溶液。另取丹参对照药材lg，同法制成对照药材溶液。再取丹参酮IIA对照品，加醋酸乙酯制成每lml含2mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述三种溶液各5it1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯一醋酸乙酯(19:1)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗红色斑占。j、、、o(5)丹参的含测方法为采用高效液相色谱法同时测定丹参酮IIA和丹酚酸B的含量。色谱条件色谱柱为LichrosorbC18。流动相A泵甲醇乙腈(3:1)B泵含10ml/L甲酸的水。两泵同时进行梯度洗脱，洗脱时间为60min。流速为1ml/min;检测波长丹参酮IIA为270nm，丹酚酸B为286nm。对照品溶液的制备精密称取丹参酮IIA对照品O.lmh，丹酚酸B对照品1.52mg，同时置5ml棕色容量瓶中，加850ml/L甲醇至刻度，摇匀即得高浓度对照品溶液，根据以下实验的需要稀释成不同浓度的对照品溶液。供试品溶液的制备取丹参粉末(过3号筛)约O.3g，精密称定,置具塞锥形瓶中，加850ml/L甲醇超声提取15min,超声频率为30kHz,功率为30W，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取上述对照液与供试品溶液10ul，注入高效液相色谱仪，测定，即得。全文摘要本发明是一种中药制剂中丹参的质量控制方法，属于药品的
技术领域：
乐盈VI。益心舒中药制剂是以人参、黄芪、丹参、麦冬、五味子等七味药组成，具有益气复脉，活血化瘀，养阴生津的功效，目前临床上广泛用于治疗心绞痛、心肌缺血、各型心率失常、房性早搏、胸痛及冠心病心绞痛患等。本发明提供了一种益心舒中药制剂中丹参的质量控制方法，方法的提供直接向有关的生产益心舒制剂中丹参的品质提供了检测的指标、检测的手段、技术方法该等等；以便更好的控制该中药制剂的质量，保证用药的安全性和疗效，能够更好的指导生产，为消费者提供一种品质优良的产品。文档编号A61K36/8968GK101637566SQ20091010267公开日2010年2月3日申请日期2009年7月17日优先权日2009年7月17日发明者张观福申请人:贵州信邦制药股份有限公司