专利名称：一种鸡传染性支气管炎抗原抗体复合物及其制备方法
技术领域：
本专利涉及一种鸡传染性支气管炎抗原抗体复合物及其制备方法，属于生物疫苗领域。背景知识鸡传染性支气管炎(IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(IBV)引起的一种高度接触传染的疾病，主要侵害鸡的呼吸系统、泌尿生殖系统和消化系统。雏鸡发病后通常表现流鼻液、呼吸困难等呼吸道症状，甚至会发生死亡；此外，该病还可导致蛋鸡产蛋量下降和蛋白品质下降，是目前严重危害世界养禽业的重大传染病之一，给家畜养殖业造成巨大的经济 损失。目前尚无特效疗法，主要采用接种疫苗方式。由于传染性支气管炎病毒血清型复杂且相互之间交叉保护力弱，而且新的血清型和变异株不断出现，如果选择的疫苗不当，不但起不到预防的效果，而且还可能给当地增添新的病毒株。所以用疫苗前必须掌握当地疾病流行的病毒血清型，并使用与当地流行毒株抗原性一致的疫苗品系，这样才能达到有效的免疫预防目的。目前市场上还是主要以弱毒苗为主，虽然有一定的治疗效果，但是，效果还不是很好，针对目前这种状况，研制出一种安全、有效、经济、稳定的疫苗就显得尤为重要。

发明内容
本发明目的在于提供一种鸡传染性支气管炎抗原抗体复合物，该复合物性能稳定、免疫作用快、免疫力强。本发明的目的还在于提供一种鸡传染性支气管炎抗原抗体复合物的制备方法，该方法操作简单，成本低。为实现上述目的，本发明通过以下技术方案实现首先按常规方法制备抗原，然后制得抗体，最后将抗原抗体按最合适的比例进行配比。具体实施方案如下I.抗原的制备(I)病毒的繁殖Massachusetts41病毒株接种鸡胚,繁殖温度为35_37°C,每天照两次蛋，收获24-60h死亡的鸡胚尿囊液；对于60h的活胚需置2-8°C过夜，然后收获尿囊液,收获尿囊液时,需弃去24h之前死亡的鸡胚；对收获的病毒尿囊液进行检验,凡菌检为阳性，毒价彡IO7EID5tlA). lmL，作为制备疫苗的部分的抗原液。(2)病毒液的浓缩、纯化用醋酸锌沉淀法浓缩病毒液，Sepharose 4FF凝胶层析柱纯化病毒液。2.抗体的制备用抗原配制油乳剂灭活疫苗免疫25日龄的SPF鸡，胸部肌肉分点注射，免疫3次，每次间隔2周，最后I次免疫是在第3周后用活毒加强免疫I次，第2周后心脏无菌采血分离血清，初步得到的IBV抗血清，首先在54-58°C的水浴锅中水浴20-40min灭活补体，在3-5°C下以4000-6000r/min离心20_40min，吸取淡黄色上清液作为制备疫苗的抗体。经检验，制备的抗体无菌，血凝抑制价大于I :28的血清经检验合格后保存备用。3.抗原抗体复合物疫苗的配制及检测用制备好的抗原和抗体按不同的体积比例进行复合，抗原与抗体的体积比分别为3:4 8，加入冻干保护剂充分混合后进行真空冻干。配制成抗原抗体复合物疫苗用HA试验检测复合物的血凝价，并按常规方法测定复合物的EID5(i。制备的抗原抗体复合物每份所含的抗原量与常规疫苗所含的抗原量一样。经试验测定，复合物的HA效价在抗原抗体的比例在3:4 8时效价最大,免疫力效果最好。本发明获得的复合物具有性能稳定、安全性好、动物免疫后产生免疫作用快、免疫力强、保护率高特点。
具体实施方式
下面结合一些具体实施方式
对本发明进一步详细介绍。实施例I(I)病毒的繁殖Massachusetts41病毒株接种鸡胚,繁殖温度为35°C,每天照两次蛋，收获24_60h死亡的鸡胚尿囊液；对于60h的活胚需置5°C过夜，然后收获尿囊液，收获尿囊液时，需弃去24h之前死亡的鸡胚；对收获的病毒尿囊液进行检验，凡菌检为阴性，毒价> IO7EID5tlA). lmL，作为制备疫苗的部分的抗原液。(2)病毒液的浓缩、纯化用醋酸锌沉淀法浓缩病毒液，Sepharose 4FF凝胶层析柱纯化病毒液。(3)用抗原配制油乳剂灭活疫苗免疫25日龄的SPF鸡，胸部肌肉分点注射，免疫3次，每次间隔2周，最后I次免疫3周后用活毒加强免疫I次，2周后心脏无菌采血分离血清，初步得到鸡传染性支气管炎病毒IBV血清；(4)56°C水浴30min灭活补体，在4°C以5000r/min离心30min，淡黄色上清液作为制备疫苗的抗体；(5)用制备好的抗原和抗体按体积比3:8进行混合，加入冻干保护剂进行真空冻干，得到抗原抗体复合物。实施例2(I)病毒的繁殖Massachusetts41病毒株接种鸡胚,繁殖温度为37°C,每天照两次蛋，收获24_60h死亡的鸡胚尿囊液；对于60h的活胚需置2°C过夜，然后收获尿囊液，收获尿囊液时，需弃去24h之前死亡的鸡胚；对收获的病毒尿囊液进行检验，凡菌检为阴性，毒价> IO7EID5tlA). lmL，作为制备疫苗的部分的抗原液。(2)病毒液的浓缩、纯化用醋酸锌沉淀法浓缩病毒液，Sepharose 4FF凝胶层析柱纯化病毒液。(3)用抗原配制油乳剂灭活疫苗免疫25日龄的SPF鸡，胸部肌肉分点注射，免疫3次，每次间隔2周，最后I次免疫3周后用活毒加强免疫I次，2周后心脏无菌采血分离血清，初步得到鸡传染性支气管炎病毒IBV血清；(4)54°C水浴40min灭活补体，在3°C下以4000r/min离心40min,淡黄色上清液作为制备疫苗的抗体；(5)用制备好的抗原和抗体按体积比3:5进行混合，加入冻干保护剂进行真空冻干，得到抗原抗体复合物。实施例3(I)病毒的繁殖Massachusetts41病毒株接种鸡胚,繁殖温度为36°C,每天照两次蛋，收获24-60h死亡的鸡胚尿囊液；对于60h的活胚需置8°C过夜，然后收获尿囊液，收获尿囊液时，需弃去24h之前死亡的鸡胚；对收获的病毒尿囊液进行检验，凡菌检为阴性，毒价> IO7EID5tlA). lmL，作为制备疫苗的部分的抗原液。(2)病毒液的浓缩、纯化用醋酸锌沉淀法浓缩病毒液，Sepharose 4FF凝胶层析柱纯化病毒液。(3)用抗原配制油乳剂灭活疫苗免疫25日龄的SPF鸡，胸部肌肉分点注射，免疫3次，每次间隔2周，最后I次免疫3周后用活毒加强免疫I次，2周后心脏无菌采血分离血清，初步得到鸡传染性支气管炎病毒IBV血清； (4)58°C水浴20min灭活补体，在5°C下以6000r/min离心20min,淡黄色上清液作为制备疫苗的抗体；(5)用制备好的抗原和抗体按体积比3:4进行混合，加入冻干保护剂进行真空冻干，得到抗原抗体复合物。免疫效力试验I日龄SPF雏鸡200只分成10组，每组20只，分别饲养于隔离器内。第I组至第8组分别经颈部皮下接种复合物疫苗I 8 (I 3组接种实施例I的复合物疫苗，4 6组接种实施例2的复合疫苗，7 8接种实施例3的复合物疫苗)；第9组免疫鸡传染性支气管炎常规活疫苗;第10组是空白对照组。免疫后观察记录鸡的疫苗反应情况，3周后采血检测鸡传染性支气管炎HI抗体水平。结果疫苗免疫后鸡群的临床症状I组 8组鸡接种复合物疫苗后均无任何反应，采食饮水正常；第9组鸡接种疫苗后，有3只鸡出现鸡传染性支气管炎症状，表现有精神萎顿，羽毛松乱，轻微喘气甚至张口呼吸，3d 4d后症状消失;第10组鸡一直保持健康，说明隔离器运转正常。免疫组的抗体水平比常规苗的抗体水平要高。攻毒试验免疫接种28d后，即28日龄时，用鸡传染性支气管炎病种(M41)进行攻毒试验，攻毒剂量为每只鸡108_°EID5(I,肌肉注射0. 2mL。攻毒后观察14d,记录鸡群的发病症状和死亡情况，并剖检观察病死鸡的病理变化，计算发病率和死亡率。其结果显示攻毒后各组鸡发病和死亡情况试验I 9组在攻毒后第3天和第4天，鸡出现轻微的鸡传染性支气管炎发病症状，在观察期内，第9组发病I只；第10组为空白对照组，攻毒后7d内全部发病死亡，剖检死鸡，病程急发病快的多无典型鸡传染性支气管炎病变。100%和89%。
权利要求
1.一种鸡传染性支气管炎抗原抗体复合物，其特征在于抗原与抗体按体积比3:4 8进行混合后成为保护机体的复合物。
2.如权利要求I所述的一种鸡传染性支气管炎抗原抗体复合物，其特征在于抗原毒价彡 IO7EID50A). ImL0
3.如权利要求I所述的一种鸡传染性支气管炎抗原抗体复合物，其特征在于抗体血凝抑制价HA大于I :28。
4.一种如权利要求I所述的鸡传染性支气管炎抗原抗体复合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤 (1)病毒的繁殖Massachusetts41病毒株接种鸡胚,繁殖温度为35_37°C,每天照两次蛋，收获24-60h死亡的鸡胚尿囊液；对于60h的活胚需置2-8°C过夜，然后收获尿囊液，收获尿囊液时，需弃去24h之前死亡的鸡胚；对收获的病毒尿囊液进行检验，凡菌检为阴性，毒价> IO7EID5tlA). lmL，作为制备疫苗的部分的抗原液。
(2)病毒液的浓缩、纯化用醋酸锌沉淀法浓缩病毒液，Sepharose4FF凝胶层析柱纯化病毒液。
(3)用抗原配制油乳剂灭活疫苗免疫25日龄的SPF鸡，胸部肌肉分点注射，免疫3次，每次间隔2周，最后I次免疫3周后用活毒加强免疫I次，2周后心脏无菌采血分离血清，初步得到鸡传染性支气管炎病毒IBV血清； (4)54-58°C水浴 20-40min 灭活补体，在 3_5°C下以 4000_6000r/min 离心 20_40min，淡黄色上清液作为制备疫苗的抗体； (5)用制备好的抗原和抗体按体积比3:4 8进行混合，加入冻干保护剂进行真空冻干，得到抗原抗体复合物。
全文摘要
本发明公开了一种鸡传染性支气管炎复合物，具体是将纯化好的抗原的和血凝抑制效价大于128的抗体按体积比3:4～8时进行配比，制得鸡传染性支气管炎抗原抗体复合物，该复合物稳定性好，副作用少，免疫效果好。
文档编号A61K39/395GK102973938SQ20121030285
公开日2013年3月20日 申请日期2012年8月23日 优先权日2012年8月23日
发明者吴红云, 徐进, 韩改会 申请人:郑州后羿制药有限公司