专利名称：改性蚕丝的制备方法及其在制备止血材料中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及医药领域，特别涉及一种止血高分子材料。
技术背景
在战场上、自然灾害中及各种日常突发性事故中，不可控制的过量出血往往是导致50-80%伤员死亡的主要原因。有效的控制出血成为挽救患者伤亡的关键要素。新研发的桑蚕丝蛋白具有良好的生物相容性、生物可降解性、迅速止血和促进伤口愈合等优点。
蚕丝是天然大分子聚合物，天然蚕丝主要由丝素蛋白和丝胶蛋白组成，而丝素蛋白的主要成分有甘氨酸(gly)，丙氨酸(ala)及丝氨酸(ser)。蚕丝蛋白纤维表面疏水， 血浆蛋白与丝素蛋白之间存在强的疏水相互作用，能交联血浆蛋白从而凝血；此外，凝血因子也能交联丝素蛋白形成凝块。作为止血材料，天然蚕丝可用碱性肥皂水煮将丝胶蛋白去掉(脱胶)，仅仅只保留丝素蛋白；此外，丝素蛋白应适当改变其晶体结构，增加吸水性、蛋白酶再吸收及血浆吸收，才能更好的发挥止血功能。天然蚕丝成本低廉，原材料充沛，易于操作，在潮湿环境中强度也较大、对于生长的细胞有生物适应性，药物可渗透性，生物相容性好，可降解等优点，广泛运用于生物医学、生物技术领域，是可研发的最具发展潜力的止血材料。发明内容
本发明的目的之一在于提供改性蚕丝的制备方法及所得的产品，该方法使蚕丝在二级结构发生变化，以β折叠为主，通过该方法所得产品具有较好的止血效果。
为实现上述目的，本发明的技术方案为 改性蚕丝的制备方法，具体包括以下步骤A脱胶处理取天然蚕丝，用脱胶溶液对天然蚕丝进行充分的脱胶处理，得脱胶蚕丝； B改性处理将步骤A所得脱胶蚕丝用水和/或体积分数为1-20%的有机溶剂在37-100°C条件下处理不低于4小时，得改性蚕丝；所述有机溶剂为甲醇、乙醇、甲酸和甲醛和三氟乙酸中的任一种。
进一步，将步骤B改性处理后所得的改性蚕丝用水漂洗干净，室温自然晾干或 37°C烘干，得改性蚕丝。
进一步，步骤A中的脱胶处理具体为取天然蚕丝，用脱胶溶液对天然蚕丝进行充分的脱胶处理，在蒸馏沸水煮不低于0. 5小时后，得脱胶蚕丝；所述脱胶溶液为质量分数为 0.1%-10%的阴离子表面活性剂溶液或质量分数为0. 1%-10%的碳酸钠溶液；所述天然蚕丝和阴离子表面活性剂溶液的质量体积比以g/ml计为1:10-1:1000。
进一步，步骤A中所述阴离子表面活性剂为质量分数为0. 25%的十二烷基硫酸钠或肥皂；进一步，所述碳酸钠溶液的温度为90-100°C ；进一步，步骤B中，所述处理溶液为蒸馏水、体积分数为1-20%的有机溶剂。
进一步，步骤B中，改性处理的温度为65°C。
所述的制备方法制得的改性蚕丝。
本发明的目的之二在于提供一种改性蚕丝的新应用，该应用为止血技术提供了新思路。
为实现上述目的，本发明的技术方案为 所述的改性蚕丝在制备止血材料中的应用。
进一步，所述改性蚕丝止血剂量为0. 01-lg/L。
本发明的有益效果在于本发明所涉及的改性蚕丝，主要成分为丝素蛋白，通过改造，降低了丝素蛋白的结晶度；改性蚕丝止血效果优于日本及美国学者使用二元溶液改造的蚕丝材料。丝素蛋白经处理适度改性后，蛋白二级结构主要为折叠结构，降低了无规则卷曲结构，这个结构能利于更好地结合血小板，进而迅速促进血栓形成。其所述改性蚕丝材料稳定性佳；在使用相同剂量的情况下，所述改性蚕丝材料与二元溶液处理改性蚕丝材料及云南白药相比，促凝血效果更好。


为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明作进一步的详细描述，其中图1为改造的止血蚕丝材料体外凝结实验，其中a为蚕丝直接脱胶后检测结果；b 为本发明的所述改性蚕丝材料检测结果；c为二元溶液(10%Ca(No3)2甲醇)处理检测结果。各种丝素蛋白材料均取0. 01克加入抗凝兔血中，其中b在加入后20秒就出现凝结现象，该图为加入各物质后20分钟拍摄。结果显示本发明的止血蚕丝材料在体外能迅速促进血凝结；图2为改造的止血蚕丝材料扫描电镜观察图谱，其中a为蚕丝直接脱胶后检测结果； b为所述改性蚕丝材料检测结果；c为二元溶液(10%Ca(No3)2甲醇)处理检测结果；图3为改性蚕丝材料体外凝结实验扫描电镜观察图谱，a为脱胶蚕丝；b为本发明处理的蚕丝材料；c为二元溶液(10%Ca(No3)2甲醇)处理的蚕丝； 图4为止血蚕丝材料大鼠肝脏止血。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面对本发明的优选实施例进行详细的描述。以下将参照附图，对本发明的优选实施例进行详细描述。优选实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件进行。
实施例1改性蚕丝的制备 1脱胶处理天然蚕丝中主要包括两种蛋白质大约70-80%的丝素蛋白和大约20-28%的丝胶蛋白。 此外还有少量(1-2%)由天然脂肪、盐和丝蛋白灰组成的“杂质”。脱胶的目的就是使丝胶溶解。脱胶的方法可具体参照《张雨青.蚕丝脱胶方法的比较分析》。也可以采用质量分数为 0.1%-10%的阴离子表面活性剂溶液或质量分数为0. 1%-10%的碳酸钠溶液，其中，阴离子表面活性包括十二烷基硫酸钠、肥皂等。当使用质量分数为0.1%-10%的碳酸钠溶液作为脱胶溶液时，最好使用沸水。总之，目的在于使丝胶充分溶解。并用蒸馏去洗涤去除丝胶。
2改性处理将脱胶处理后的蚕丝用蒸馏水和/或有机溶液进行改性处理，具体为在37°C条件下处理不小于4小时，其目的在于改变丝素蛋白的二级结构。无论是蒸馏水与有机溶液混合后在37°C条件下处理4小时，还是蒸馏水或有机溶液混合后在37°C条件下处理4小时，或用蒸馏水及有机溶液分别在37°C条件下处理共计4小时，均可实现增加β折叠的目的。本实施例采用的是蒸馏水与有机溶液混合后在37°C条件下处理4小时的方案。
蒸馏水、有机溶剂处理工艺参数详见表1。
权利要求
1.改性蚕丝的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤 A脱胶处理取天然蚕丝，用脱胶溶液对天然蚕丝进行充分的脱胶处理，得脱胶蚕丝； B改性处理将步骤A所得脱胶蚕丝用水和/或体积分数为1-20%的有机溶剂在37-100°C条件下处理不低于4小时，得改性蚕丝；所述有机溶剂为甲醇、乙醇、甲酸和甲醛和三氟乙酸中的任一种。
2.根据权利要求1所述的改性蚕丝的制备方法，其特征在于，将步骤B改性处理后所得的改性蚕丝用水漂洗干净，室温自然晾干或37°C烘干，得改性蚕丝。
3.根据权利要求1所述的改性蚕丝的制备方法，其特征在于，步骤A中的脱胶处理具体为取天然蚕丝，用脱胶溶液对天然蚕丝进行充分的脱胶处理，在蒸馏沸水煮不低于0. 5小时后，得脱胶蚕丝；所述脱胶溶液为质量分数为0. 1%-10%的阴离子表面活性剂溶液或质量分数为0. 1%-10%的碳酸钠溶液；所述天然蚕丝和阴离子表面活性剂溶液的质量体积比以 g/ml 计为 1:10-1:1000。
4.根据权利要求3所述的改性蚕丝的制备方法，其特征在于，步骤A中所述阴离子表面活性剂为质量分数为0. 25%的十二烷基硫酸钠或肥皂。
5.根据权利要求3所述的改性蚕丝的制备方法，其特征在于，所述碳酸钠溶液的温度为 90-100°C。
6.根据权利要求3所述的改性蚕丝的制备方法，其特征在于，步骤B中，所述溶液为蒸馏水、体积分数为10%的有机溶剂。
7.根据权利要求1所述的改性蚕丝的制备方法，其特征在于，步骤B中，改性处理的温度为650C 0
8.权利要求1-7任一项所述的制备方法制得的改性蚕丝。
9.权利要求1所述的改性蚕丝在制备止血材料中的应用。
10.根据权利要求7所述的应用，其特征在于所述改性蚕丝止血剂量为0.01-lg/L。
全文摘要
本发明涉及一种止血高分子材料，为改性蚕丝，其制备方法，具体包括以下步骤取天然蚕丝，用脱胶溶液对天然蚕丝进行充分的脱胶处理，得脱胶蚕丝；将所得脱胶蚕丝用蒸馏水和/或体积分数为1-20%的甲醇、乙醇、甲酸和甲醛和三氟乙酸任一种在37-100℃条件下处理不低于4小时，得改性蚕丝；其通过改性，降低了丝素蛋白的结晶度，蛋白二级结构主要为β-折叠结构，降低了无规则卷曲结构，这个结构能利于更好地结合血小板，进而迅速促进血栓形成，改性蚕丝材料稳定性佳，促凝血效果更好。
文档编号A61L15/42GK102505453SQ201110336690
公开日2012年6月20日 申请日期2011年10月31日 优先权日2011年10月31日
发明者吴玉章, 杨霞 申请人:中国人民解放军第三军医大学